FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUIMICAS

INFORME #7 DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

TEMA: EFECTO DE LOS ANTIBIOTICOS SOBRE LAS BACTERIAS

PROFESOR: Dr. JACINTO HERVIAS, PEDRO

INTEGRANTES:
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CURSO: Microbiologa
CICLO: VIII
SECCION: 2B
GRUPO: I

LIMA PERU

2015

INTRODUCCIN
Los antibiticos son sustancias normalmente de bajo peso molecular producidas por seres
vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos
semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efectos antimicrobianos
(microbicidas o microbiostticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo
receptor.
La mayor parte de los antibiticos proceden del metabolismo secundario de
microorganismos procariotas (actinomicetos, Bacillus, etc.) o eucariotas (hongos de los
gneros Penicillium, Cephalosporium, etc.).
Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos,
pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos. Su importancia econmica se pone
de manifiesto al pensar en las 100.000 Tm. de antibiticos producidas al ao, por un valor
equivalente a 3.000 millones de euros, lo cual representa una de las industrias
biotecnolgicas ms importantes.

La mayor parte de los antibiticos comerciales se emplea para tratar enfermedades de

etiologa bacteriana, aunque algunos se usan contra hongos y levaduras, y unos pocos
presentan actividad antitumoral.
Desde el punto de vista qumico, se clasifican en grandes familias:
antibiticos que contienen carbohidratos;
lactonas macrocclicas;
quinonas y compuestos relacionados;

antibiticos peptdicos y con aminocidos;

heterociclos del N;
heterociclos del O;
aromticos;
alifticos, etc.
MARCO TERICO
La accin de la penicilina, y en general de los -lactmicos, se desarrolla principalmente
en la ltima fase de la sntesis de peptidoglicano de la pared celular, al unirse a una enzima
transpeptidasa llamada protena fijadora de penicilina, responsable de producir una serie
de enlaces cruzados entre las cadenas de los pptidos. La formacin de estos enlaces o
puentes es la que confiere la mayor rigidez a la pared bacteriana. Por lo tanto, los lactmicos como la penicilina, al inhibir la sntesis de peptidoglicano, interfieren en la
formacin de la pared celular bacteriana. Las bacterias sin su pared celular estallan o son
ms fcilmente fagocitadas por los granulocitos. Esta inhibicin produce una acumulacin
de los precursores del peptidoglicano, los cuales producen una activacin de enzimas
como las hidrolasas y autolisinas que digieren el remanente de peptidoglicano en la
bacteria. Por otra parte, la penicilina favorece la lisis osmtica de la bacteria durante el
proceso de multiplicacin.
Las quinolonas son quimioterpicos de sntesis que bloquean la ADN-girasa bacteriana,
unindose a la subunidad de tipo A. Recordemos que las bacterias poseen una clase
especial de topoisomerasas de tipo II, llamadas girasas, que introducen superenrollamiento
negativo en la doble hlice del ADN. La ADN-girasa est constituida por dos subunidades
de tipo A y dos de tipo B (A 2B2); las de tipo A producen los cortes y empalmes sucesivos en
la doble cadena, mientras que las subunidades B son ATPasas que proporcionan la
energa para la reaccin. El bloqueo de las quinolonas sobre la girasa supone que sta
queda congelada en la fase en que el ADN est unido al enzima. Ello provoca la
acumulacin de roturas de doble cadena, lo que conduce a la muerte de la bacteria.
Las tetraciclinas son antibiticos de muy amplio espectro (frente a Gram-positivas, Gramnegativas, Rickettsias y Clamidias, e incluso Micoplasmas), producidos por distintas
especies de Streptomyces. Se basan en el cudruple anillo del naftaceno. Actan
como bacteriostticos, siempre y cuando las bacterias estn en crecimiento activo. Como

se puede ver por su espectro, son tiles incluso contra bacterias que viven como parsitos
intracelulares (como las Rickettsias), debido a que su carcter hidrofbico facilita su
difusin a travs de membranas.
Mecanismo de accin: provocan que la unin del aa-ARNt al sitio A del ribosoma sea
inestable y est distorsionada, con lo cual se evita la elongacin de la cadena. In
vitro actan tanto frente a ribosomas 70S como frente a los 80S. Entonces, por qu in
vivo slo inhiben a las bacterias? La explicacin est en el hecho de que las bacterias
transportan complejos tetraciclina-Mg de forma suicida, cosa que no ocurre en eucariotas.
Los aminoglucsidos constituyen un grupo amplio y variado de antibiticos de amplio
espectro, producidos por diversas especies de Streptomyces. Como se puede ver en las
figuras, todos tienen en comn varios rasgos qumicos: son muy polares, policatinicos;
presentan un anillo de aminociclitol (un ciclohexitol o inositol con grupo amino); uno o ms
azcares, incluyendo al menos un aminoazcar (aparte del aminociclitol).
Mecanismo de accin: se unen a los poli ribosomas que estn traduciendo el
ARNm, provocando errores en la lectura del ARNm, al distorsionar la estructura del
ribosoma. Por lo tanto, la bacteria comienza a sintetizar protenas defectuosas; con un
efecto final que es bactericida.
MUELLER HINTON CALDO
Este medio ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad de los
antimicrobianos en medio lquido.
Fundamento
Medio nutritivo adecuado para facilitar el crecimiento de numerosos microorganismos.
Al igual que su presentacin en forma de agar, el caldo Mueller Hinton muestra buena
reproducibilidad de los resultados lote a lote, tiene un bajo contenido de inhibidores
especialmente para sulfamidas, trimetoprima y tetraciclina. Puede ser suplementado para
el crecimiento de bacterias exigentes y con ciertos cationes para el antibiograma de
Pseudomonas frente a aminoglucsidos
ESCALA DE MC FARLAND
La utilidad de la escala es poder realizar suspensiones bacterianas ajustadas a un patrn,
generalmente se suele usar el 0,5 Mc Farland, para esto se toma una muestra de nuestra
bacteria y la inoculamos en un tubo con solucin salina, en el momento en que se
produzca un poco de turbidez ya estamos en el 0,5 (de forma visual).
La finalidad, es establecer una relacin entre una precipitacin qumica y una suspensin
bacteriana. Creamos 10 estndares (en la tabla aparece la composicin de estos) y por
espectrofotometra, creamos una recta patrn, de forma que vamos a poder detectar la
concentracin de nuestras diluciones bacterianas (de manera aproximada, ya que depende

de factores como el tamao de la bacteria, la formacin de agregados,...). La escala se

basa en la capacidad de precipitacin del cloruro de bario en presencia de cido sulfrico

COMPETENCIAS
Aplica mtodos para evaluar la actividad antimicrobiana in vitro.
Obtiene la concentracin mnima inhibitoria de antibiticos en estudio.
MATERIALES Y EQUIPOS

Placas con agar Mueller Hilton

Caldo con agar Mueller Hilton

Escala de Mc Farland 0.5

Tubos de ensayo

Hisopos

Pipetas estriles

Cultivo de S. Aureus
de E. Coli

Cultivo

PROCEDIMIENTO
Mtodo de difusin en agar
Preparar una dilucin de la bacteria en estudio equivalente a 0,5 de la escala de Mc
Farland.

1.- Preparacin del inoculo

Preparar suspensin bacteriana tomando una alcuota de la colonia representativa de la
cepa proporcionada por el Laboratorio. Colocar el inoculo en el caldo nutritivo e incubar
el tiempo necesario para alcanzar la turbidez requerida segn la escala Mac Farland.

El inoculo estandarizado, se puede preparar re suspendiendo colonias en solucin salina

estril hasta alcanzar la turbidez de 0.5 de Mc Farland. Esta suspensin contiene 12x108UFC/ml.

TUBO

Cl2Ba 1%

SO4H2 1%

u.f.c/ml

0,1

9,9

3,0x108

0,2

9,8

6,0x108

0,3

9,7

9,0x108

0,4

9,6

1,2x109

0,5

9,5

1,5x109

0,6

9,4

1,8x109

0,7

9,3

2,1x109

0,8

9,2

2,4x109

0,9

9,1

2.7x109

10

1,0

9,0

3,0x109

Los cultivos de caldo se dejan incubar a 35C hasta que aparece una turbidez
ligeramente visible (generalmente 2 a 5 hs). La turbidez se ajusta con suero fisiolgico
estril o caldo para obtener una turbidez visualmente comparable a la de un estndar
preparado previamente (llamado 0.5 de Mc Farland). Este estndar debe agitarse antes
de usar y ser comparado en forma visual con el inculo preparado.

Para ello se miran ambos tubos al mismo tiempo contra un fondo blanco con una lnea
negra como contraste Este mtodo es recomendado cuando el cultivo tiene ms de 24 hs
de incubacin.

Siembra en una placa de agar Muller- Hilton con un hisopo el cultivo de E. Coli.

agar MullerHilton

Hisopado con E.
Coli

Luego extender con el hisopo

sobre la superficie del Agar MllerHilton, segn mtodo de
diseminacin.

Agar divido en 4
para colocarle los
discos de
antibiticos

Colocar 4 Discos de
antibiticos amoxicilina
gentamicina
ciproffloxacino y
doxiciclina

Aplicar los discos con un

aplicar los discos con una
pinza estril cerca del
mechero para conservar
la esterilidad a pinza
estril cerca del mechero
para conservar la
esterilidad

Durante 24 horas
en una
temperatura de
37c.

Siembra en una placa de agar Muller- Hilton con un hisopo el cultivo de s. aureus
Tomar un hisopo estril y
sumergirlo en el caldo de
estafilococos ureos

Por toda la placa Petri.

Listo nuestra muestra

Colocar 4 Discos de
antibiticos amoxicilina
gentamicina ciproffloxacino
y doxiciclina.

Durante 24 horas en
una temperatura de
37c.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
A las 24 horas medir los halos de inhibicin en mm e interpretar los resultados para
clasificarlos como sensibles, intermedios o resistentes.
-

Se realiza la medida de la zona de inhibicin. Medicin de los halos. Despus de

incubar las placas del antibiograma se procede a la lectura de este para ello se usa una
regla y se mide el radio del halo de inhibicin partiendo desde donde est el disco del
antibitico hasta donde se inhibi el crecimiento.
La longitud obtenida despus se comparan con estndares que nos dirn si el
medicamento ser el efectivo o no en el tratamiento

CATEGORAS DE INTERPRETACIN:
-

SENSIBLE: el microorganismo presenta un gran rea de inhibicin causada por el

frmaco, 95% de xito.

INTERMADIO: se presenta un halo de inhibicin ms

reducido el frmaco no es tan exitoso para el
tratamiento.

RESISTENTE: presenta muy poco o casi nada de halo.

LECTURA E INTERPRETACIN DE LA CIM

La interpretacin de los resultados obtenidos permite clasificar a los microorganismos en

categoras clnicas: sensibles, intermedios o resistentes. C.I.M: concentracin mnima inhibitoria
representa la mnima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un
microorganismo. C.M.B: concentracin mnima bactericida concentracin mnima que mata el
microorganismo. Luego se debe recurrir, teniendo en cuenta el valor de CIM obtenido para esa
cepa, a las tablas para definir segn los valores de CIM que en ellas aparecen si las cepas en
estudio son sensibles o resistentes a un determinado antibitico.
.

Amoxicilina

DOXICICLINA

CONCLUSIONES.

El dimetro obtenido depender solo de la sensibilidad del microorganismo y la

carga del disco, sino tambin del espesor de la capa del agar, su pH y su composicin,

Depender tambin de la capacidad de difusin de la droga en este medio, la

temperatura, la velocidad de duplicacin bacteriana, y el tamao y fase de crecimiento.

La importancia de adquirir confianza en las pruebas, obtener una informacin rpida

y segura, lograr precisin de los resultados permite mejorar la calidad de los ensayos.

RECOMENDACIONES.

-los discos deben mantenerse en el freezer o en el refrigerador a 8c.paramantener la

actividad del antibitico. Deben ser sacados una o dos horas antes de su uso.
-Debemos fijarnos siempre en la fecha de vencimiento antes de usarlos.

-Los discos que pertenecen a la familia de los betalactamicos pierden su potencia al estar
frente al calor.

-Antes de colocar los discos deben atemperarse y evitar su desecacin