LA ORINA

INTRODUCCION:
En la siguiente practica de laboratorio a realizarse reconoceremos los
microorganismos hallados en una prueba de orina asreconoceremos
entre clulas epiteliales bacterias y as podremos concluir si se hall
una infeccin o un desgarro. Nos apoyaremos en la identificacin de
aquellos microorganismos gracias a las coloraciones GRAM .veremos las
caractersticas de la orina mediante el examen directo ya que la orina
es La orina es un lquido acuoso transparente y amarillento, de olor
caracterstico, secretado por los riones y eliminado al exterior por el
aparato urinario. La orina puede servir para determinar la presencia de
algunas enfermedades.
Al hablar de las coloraciones GRAM nos referimos a una tcnica
diferencial comnmente empleada en el diagnstico microbiolgico, fue
descubierta por Hans Christian Gram en 1884.Las diferencias bsicas que
nos permiten ver las bacterias de distintos colores residen en la pared
bacteriana, las paredes celulares de bacterias de tipo gramnegativo
poseen una capa lipdica externa la cual se tie con cristal roscea a
diferencia de la Gram negativa que se tie de morado.

OBJETIVOS:

Identificar o diferenciar los microorganismos en la muestra de

orina
Determinar la posible infeccin presenta en aquella muestra de
orina
Reconocer los microorganismos GRAM positivos y negativos
mediante la tincin y su aplicacin

PARTE TEORICA:
LAORINA:

La orina es un lquido acuoso transparente y amarillento, de olor

caracterstico, secretado por los riones y eliminado al exterior por
el aparato urinario puede servir para determinar la presencia de algunas
enfermedades.
Composicin de la orina: En los seres humanos, la orina normal suele
ser un lquido transparente o amarillento. Se eliminan aproximadamente
1,4 litros de orina al da. La orina normal contiene un 96% de agua, un
4% de slidos en solucin y aproximadamente 20 g de urea por litro.
Cerca de la mitad de los slidos son urea, el principal producto de
degradacin del metabolismo de las protenas. El resto incluye
nitrgeno, cloruros, cetosteroides, fsforo, amonio, creatinina y cido
rico.

VALORES NORMALES EXAMEN GENERAL DE ORINA

EXAMEN FSICO
COLOR

Amarillo plido a
mbar

ASPECTO

Transparente

DENSIDAD

1.010 1.030

VOLUMEN

800-2500 ml

COLOR

Amarillo mbar

OLOR

Amoniacal

CAMBIOS FISIOLGICOS:
Fuerte, picante, vitamina b,
semejante a penicilina

Ingestin de multivitaminicos

Penetrante, como a hierba

Esprragos

Penetrante, amoniacal

Orina en descomposicin

CAMBIOS PATOLGICOS:
Dulce, fuerte, denso

Infeccin por pseudomonas

Orina rancia, amoniacal

Acidosis urmica

Olor acetona, fuerte, nauseabundo,

dulce

Cetonuria con acidosis diabtica,

ligera o sin olor, de manera usual
con presencia de cetonas en orina*.

Olor acetona, fuerte, nauseabundo,

dulce

Cetonuria con acidosis diabtica,

ligera o sin olor, de manera usual
con presencia de cetonas en orina*.

Picante, cido

Infeccin bacteriana

A ratn a caballo
Olor a hongos en el lactante

Fenilcetonuria

El mecanismo de la tincin Gram

Productos
que se
utilizan

1) violeta
2) Lugol

3) Alcohol
Cetona

4) Safranina

Reaccin y coloracin de las bacterias

GRAM +
Clulas color violeta
Se forma el complejo CV-I. Las
clulas continan teidas de color
violeta.
Se deshidratan las paredes celulares.
Se contraen los poros. Disminuye la
permeabilidad. El complejo CV-I no
sale de las clulas que continan
teidas de color violeta.

GRAM Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I.
Las clulas continan teidas
de color violeta.
Eliminacin por extraccin de
grasas de las paredes
celulares. Aumenta la
porosidad. El complejo CV-I
se separa de la clula.

Clulas no decoloradas; quedan

teidas de color violeta.

Clulas decoloradas; se tien

de color rosado.

Las diferencias estructurales y qumicas de los dos tipos de pared bacteriana:

PARED GRAM +

Capa densa y uniforme

cidoteicoico

PARED GRAM-

PARED DELGADA
Lipopolisacaridos

Protenas

Tincin Gram
La tincin de Gram es una tcnica diferencial comnmente empleada en
el diagnstico microbiolgico, fue descubierta por Hans Christian Gram
en 1884. La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando
se sospecha infeccin bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre
laminillas de vidrio, teidas y examinadas en el microscopio. Los
reactivos empleados en la tincin de Gram son el cristal violeta
(colorante bsico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y
safranina (colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a la pared
celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unin
del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y
composicin bioqumica de su pared celular retienen el complejo cristal
violeta-lugol y aun despus del tratamiento con el decolorante conserva
el colorante bsico, por lo que se observan de color prpura o violeta al
microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico
cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve
el contenido lipdico de la pared celular (lo que aumenta la
permeabilidad celular), dando como resultado la prdida del complejo
cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el

colorante de contraste, razn por la cual estas bacterias se observan de

color rojo al microscopio.
PARTE PRCTICA:

A) MATERIALES:

BIOLGICOS:
- Muestra de orina

VIDRIOS:
- Tubos de ensayo
- Cubre y porta objeto

PLASTICO:
- Pipeteros
- Gradillas
- Pomo de muestra de orina
- Frascos de reactivo

EQUIPOS:
- Microscopio
- Estufa
- Centrifuga

REACTIVOS:
Violeta de genciana
Lugol
Alcohol acetona
Fucsina bsica

B)PROCEDIMIENTOS:

ALCOHOL
ACETONA

SUFRANI
NA

 Se toma la muestra de orina

Se coloca en 2 tubo de ensayos rotulados las diferentes muestras de orina, puestos en una
gradilla.
Se observara las diferentes caractersticas fsicas de la orina :
- el color
- el aroma
- la turbidez

luego lo llevamos a centrifugar por 3000 rpm en 10

solo eran 2 tubos de ensayos, colocamos 1 en ambos

minutos, como
lados

luego eliminamos el sobrenadante

.tomando una gota del sedimento a un porta objeto y cubrimos con la lmina cubre
objetivo y luego observaremos en el microscopio con el objetivo de 40 x

.En otra lamina porta objeto realizamos un frotis con el sedimento y luego llevamos a secar a la
estufa por 5 minutos

Primeramente cogemos la lmina echamos el violeta de genciana por 5 minutos

Despus de 5 minutos agarramos la lmina y descartamos el resto de colorante
Agregamos lugol cubriendo la lmina por un minuto
luego de haber pasado 1 minuto descartas el colorante
luego coges el alcohol acetona
agarramos la pipeta ponemos en la lmina inclinada en forma vertical y comienzas a
limpiar con el alcohol acetona y dejar medio minuto
Luego lavamos con agua de cao
Luego le agregamos el colorante de contraste que es la safranina y dejar la lmina por un
minuto
Finalmente dejar secar

 observamos en el microscopio con el objetivo de 100

RESULTADOS:

al poner las muestras de tubos de ensayo contenidas la orina dentro de a centrifuga la

debemos colocar de un extremo a otro as hacemos contrapeso
al colorear la lmina con violeta de genciana se observaron bacterias Gram positivas
debido a la coloracin Gram, que da la posibilidad de una infeccin.

Al observar en el microscopio la lmina con la muestra hallamos clulas

epiteliales, grmenes

CONCLUSIONES:

Al hacer contrapeso en la centrifuga ,esta al empezar el movimiento

evitara que los contenidos del tubo de ensayo se esparzan fuera de
la mquina y evitar problemas
Podremos observar las bacterias Gram + por su coloracin violeta y
por su membrana celular que es gruesa
Al observar en el microscopio la lmina pudimos diferenciar las
formas de bacterias: cocos y bacilos