Facultad de Ciencias.

Carrera de Biotecnologa.
Asignatura de Microbiologa.

Informe N 3:

Caracterizacin bioqumica
de bacterias Gram
negativas.

Alumnos: Adolfo Hernndez

Cristin Almiray.
Profesor: Cristian Bergmann.
Fecha: 28/04/2015.

Introduccin.

La identificacin de bacterias estn previamente aisladas se puede realizar utilizando

diversos ensayos bioqumicos, lo cuales determinan la actividad de una ruta metablica a
partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo, de esta manera poder
determinar si el microorganismo al momento de crecer transforma o no transforma el
sustrato incorporado.
Estos ensayos bioqumicos son pruebas fciles que se desarrollan para demostrar una
determinada caracterstica bioqumica, como por ejemplo: presencia o ausencia de una
determinada actividad enzimtica, crecimiento a una determinada temperatura, etc.
Para poder realizar las bateras bioqumicas se pueden emplear diferentes sistemas de
trabajo (medio de cultivo, indicador, revelador) los cuales pueden variar en un ensayo si
se tratan de microorganismo distintos.
La determinacin de una especie se puede lograr segn el sistema que se est
empleando, como por ejemplo sistemas convencionales, sistemas comerciales. En el
presente informe emplearemos un sistema convencional de una batera bioqumica el cual
consta de seis tubos con medio estril. Cada tubo tiene un medio especfico, los cuales
son:
i.
ii.
iii.
iv.
v.
vi.

Agar tendido corriente: Permite observar posible pigmentacin en las colonias.

Agar Urea: Permite observar la produccin de Ureasas degradando aminocido.
Agar Citrato: Tiene una nica fuente de carbono que es el citrato, y solo bacterias
con citraro permeasa se pueden desarrollar en el medio.
Agar TSI: Permite ver el crecimiento bacteriano de acuerdo a la utilizacin de
azucares.
Agar LIA: Permite observar la accin enzimtica sobre algunos aminocidos.
Agar MIO: Permite observar la motilidad del microorganismo en estudio.

Materiales y mtodos.
1

Los materiales utilizados en este prctico fueron:

-Alcohol
-Asas.
-Mechero Bunsen.
-Pipetas Pasteur.
-Microscopio ptico.
-Aceite de inmersin.
-Agar TSI que contenga indicador de pH rojo de fenol, glucosa 0,1%, lactosa 1%,
sacarosa 1% y citrato de amonio y hierro.
-Agar Urea que contenga indicador de pH fenolftalena, triptona y urea.
-Agar Citrato que contenga indicador de pH azul de bromo timol, fosfato de amonio y
citrato de sodio
-Agar LIA que contenga indicador de pH prpura de bromocresol, aminocido lisina,
aminocidos azufrados, glucosa y citrato de hierro y amonio.
-Agar MIO.
-Reactivo de Kovacs.
-Colonias de bacterias sembradas en prctico anterior.

Resultados.
2

Anlisis de frotis realizado en prctico anterior

(A)

(B)

(C)

Figura N1: Microscopa ptica 100X con aceite de inmersin .Frotis fijado a porta
objeto a partir de muestra problema otorgado por el profesor del prctico. Presencia de
bacilos y cocaceas gram positivas/negativas. (A); Cocaceas gran positivo. (B); Cocaceas
gram negativo. (C); Residuo de tincin de gram.

Figura N2: Microscopa ptica 100X con aceite de inmersin .Frotis fijado al porta
objeto a partir de muestra problema, con observacin en otra rea de campo ptico.

Anlisis de placas con medios de cultivos, sembradas con muestra bacteriana

problema.

Figura N3: Cultivo de agar normal con crecimiento de colonias bacterianas provenientes
de la muestra problema.

Figura N4: Cultivo de agar sangre con crecimiento de colonias provenientes de muestra
problema. No hay presencia de hemolisis.

Figura N5: Prueba tcnica de siembra entre los miembros del grupo de trabajo, en medio
agar sangre, a partir de la muestra problema.

Figura N6: Medio de cultivo Mc Conkey con muestra problema. Presenta colonias de
bacterias gram negativa y lactasa positivo (gram (-) / lac (+)).

Anlisis de batera bioqumica para poder identificar bacteria otorgada como

muestra problema.
La batera fue visualizada despus de 24 horas, tiempo en el cual fue incubada a
37 C.

Figura N7: Bateras Bioqumicas para gram negativo con muestra problema despus de
24 horas. (A); Agar TSI: Desanimacin de aminocidos positiva, fermentacin de glucosa
positiva, fermentacin de lactosa y sacarosa positiva, produccin de H2S negativa. (B);
Agar MIO: Motilidad positiva, ornitina descarboxilasa positiva, indol negativo. (C); Agar
Urea: ureasa negativa. (D); Agar LIA: descarboxilacion positiva (produce enzima lisina
descarboliaxa), desanimacin negativa. (E); Agar Citrato: citrato positivo.

Figura N8: Agar MIO, ausencia de indol al adicionar reactivo Kovacs (con reactivo de
Kovacs se observa anillo amarillo)

Resumen de resultados:
TSI A/A, +/LIA K/K, +/MIO +, +, -

Discusin y Conclusin.
Los resultados en las muestras de frotis muestran la presencia de bacilos y cocaceas, se
propone que el muestra problema no se aisl correctamente o bien se contamino despus
de crear el cultivo. Al transferir en medios de cultivo de agar sangre no hay presencia de
hemolisis, es decir, gamma hemolisis. Sin embargo en medio Mc Conkey presenta
colonias (color morado) de bacterias gram negativa y lactasa positiva.
Resultados obtenidos de la batera bioqumica para gram negativo muestran que en el
agar LIA hay reaccin descarboxilacin positiva y reaccin desaminacin negativa
(K/K+,-), mientras en el agar TSI hay reaccin lactosa positiva y produccin de gas
positivo (A/A+,-), como tambin en el agar MIO hay reaccin de ornitina positiva. Se
propone que la muestra problema contiene bacteria de Escherichia coli.
En este prctico de laboratorio se logra apreciar y comprender el fundamento de la
caracterizacin bioqumica de bacterias gram negativas, por medio de distintos tipos de
cultivo agar dependiendo de la va metabolica que posee la bacteria en cuestin. Como
tambin la interpretacin de los resultados de estas bateras bioqumicas, logrando as
identificar la presencia de bacterias gram negativa Escherichia coli, S.odorifera biog.2 y
Aeromonas sp en la muestra problema segn la tabla de identificacin de enterobacterias
(1).

Bibliografa
1. Facultad de Medicina, Universidad Mayor. Anexo 1 Tablas de
identificacion de Enterobacterias. Microbiologia Clinica y Diagnostico de
Laboratorio. Santiago de Chile : s.n.
2. Dra. Annette N. Trombert y TM Cristian Bergmann. Laboratorio 3 (L3)
Caracterizacin Bioquimica de Bacterias Gram negativas. [aut. libro] Dra.
Annette N. Trombert y TM Cristian Bergmann. Gua de Laboratorio de
Microbiologa general carrera de Biotecnologia. Santiago de Chile : s.n., 2015.