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SECRETARA DE SALUD
DRA. MERCEDES JUAN LPEZ
SECRETARIA DE SALUD
DR. EDUARDO GONZLEZ PIER
SUBSECRETARIO DE INTEGRACIN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD
DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES
SUBSECRETARIO DE PREVENCIN Y PROMOCIN DE LA SALUD
LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZLEZ
SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIN Y FINANZAS
DR. GABRIEL OSHEA CUEVAS
COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIN SOCIAL EN SALUD
LIC. MIKEL ARRIOLA PEALOZA
COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIN CONTRA RIESGOS SANITARIOS
DR. JOS MELJEM MOCTEZUMA
COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MDICO
DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS
TITULAR DE LA COMISIN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y
HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD
LIC. RODRIGO REINA LICEAGA
TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIN Y PARTICIPACIN SOCIAL
DR. NELLY AGUILERA ABURTO
TITULAR DE LA UNIDAD DE ANLISIS ECONMICO
LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA
DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIN SOCIAL
DR. JESS FELIPE GONZLEZ ROLDAN
DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL
DE ENFERMEDADES
DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE
DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIN DE LA SALUD
DR. CUITLHUAC RUIZ MATUS
DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGA
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GRUPO DE TRABAJO
DRA. HERLINDA GARCA LOZANO
JEFA DEL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES
COORDINADORA DE LA RED DE ROTAVIRUS
QFB. HEIDI LIZBETH TERN VEGA
ADSCRITA AL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES
BIOL. IRMA LPEZ MARTNEZ
DIRECTORA DE DIAGNSTICO Y REFERENCIA
DR. HUGO MARTNEZ ROJANO
ASESOR TCNICO DE LA DIRECCIN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE
COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL
DR. JOS ALBERTO DAZ QUINEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
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NDICE
INTRODUCCIN ................................................................................................................... 9
ANTECEDENTES DE LA RED PARA EL DIAGNSTICO DE ROTAVIRUS ...................... 10
MARCO LEGAL DEL LABORATORIO ................................................................................ 12
DEFINICIONES OPERATIVAS ........................................................................................... 12
OBJETIVOS .......................................................................................................................... 13
Objetivo general ................................................................................................................ 13
Objetivos especficos ......................................................................................................... 13
RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PBLICA PARA EL DIAGNSTICO
DE ROTAVIRUS ................................................................................................................... 14
ORGANIZACIN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE ROTAVIRUS ..........15
Laboratorio de Virus Gastrointestinales: Laboratorio Nacional de Referencia, el cual
realiza las siguientes tcnicas diagnsticas:.......................................................................15
Red de Laboratorios Estatales de Salud Pblica ................................................................15
FUNCIONES DE LOS INTEGRANTES DE LA RED ........................................................... 16
Funciones del laboratorio de virus gastrointestinales. Laboratorio Nacional de
Referencia.......................................................................................................................... 16
Funciones de los Laboratorios Estatales de Salud Pblica (LESP). ................................. 16
TOMA, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS ....................................................................... 18
ALMACENAMIENTO Y ENVO DE MUESTRAS ................................................................ 19
ALGORITMOS DE DIAGNSTICO DE TIPIFICACIN Y SECUENCIACIN PARA
ROTAVIRUS Y OTROS VIRUS GASTROINTESTINALES .................................................. 22
ESTNDARES DE CALIDAD............................................................................................... 23
CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS.............................................................................. 25
PROGRAMA DE EVALUACIN EXTERNA DEL DESEMPEO (PEED) .......................... 26
BANCO DE MATERIAL BIOLGICO .................................................................................. 27
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA LA RED DE ROTAVIRUS ............................... 29
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................................................... 30
ANEXO I: DISPOSITIVOS MDICOS ................................................................................. 32
ANEXO II: PREPARACIN DE REACTIVOS...................................................................... 33
ANEXO III: ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS PARA ROTAFORESIS .............. 37
ANEXO IV: ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIN DE REACTIVOS PARA PAGE. .... 39
ANEXO V: LINEAMIENTOS PARA LA SOLICITUD DE INSUMOS .................................. 41
ANEXO VII: FORMATO PARA LA VIGILANCIA DE LA ENFERMEDAD DIARREICA
AGUDA (EDA) POR ROTAVIRUS ....................................................................................... 43
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INTRODUCCIN
La enfermedad diarreica aguda (EDA) es un problema de salud pblica y la
segunda causa de mortalidad y morbilidad en la poblacin infantil a nivel mundial.
Los rotavirus humanos del grupo A son los principales agentes virales causantes de
cuadros diarreicos con deshidratacin severa. Anualmente en Amrica Latina y el
Caribe se presentan 15000 muertes, 75000 hospitalizaciones, 2 millones de visitas
clnicas y 10 millones de casos de cuadros diarreicos. La EDA es causada por
diferentes agentes etiolgicos entre los que se incluyen bacterias, parsitos y virus.
Los rotavirus humanos son la principal causa de episodios diarreicos en nios
menores de 5 aos ocasionando aproximadamente el 70% de estos casos. Los nios
de 6 a 24 meses de edad tienen mayor riesgo de adquirir la infeccin y se estima
que estos grupos etarios, por lo menos, cursan de uno a tres eventos de
gastroenteritis en su vida.
La gastroenteritis puede transmitirse por diferentes rutas, el principal mecanismo
es la va fecal-oral debido al consumo de alimentos o contacto de manos y objetos
contaminados con materia fecal. Adems existen evidencias de propagacin a
travs de aerosoles y secreciones.
En pases industrializados, los nios menores de tres aos presentan en promedio
tres episodios de diarrea al ao, en los pases en vas de desarrollo los individuos
presentan un mayor nmero de eventos diarreicos. Esto hace necesario que estn
sujetos a la vigilancia epidemiolgica para identificar de forma oportuna los
eventos que signifiquen un riesgo para la salud de la poblacin y con base en los
hallazgos, se tomen decisiones para las acciones de planeacin, control y
prevencin de las enfermedades sujetas a vigilancia.
En Mxico las acciones de vigilancia se apoyan en el Sistema Nacional de Vigilancia
Epidemiolgica (SiNaVE), el cual cuenta con el subsistema de laboratorio para
llevar a cabo las actividades de manera oportuna y uniforme para el diagnstico de
rotavirus, y otros virus gastrointestinales como son los Norovirus, Sapovirus,
Astrovirus y Adenovirus entricos asociados a la enfermedad diarreica aguda.
El presente documento establece los lineamientos de operacin que debe realizar la
Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud Pblica (RNLSP) para la
vigilancia basada en el laboratorio de la gastroenteritis viral incluyendo las
funciones por niveles; la toma, manejo y envo de muestras; la metodologa para el
anlisis de muestras (mtodos convencionales y mtodos moleculares); la
evaluacin del desempeo as como, los estndares de calidad.
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DEFINICIONES OPERATIVAS
Definicin de casos
Caso sospechoso
Todo nio menor de 5 aos hospitalizado por diarrea aguda.
Se define como:
Nio menor de 5 aos: todo nio de cero a cuatro aos, 11 meses y 29 das de
edad.
Hospitalizado: nio ingresado a la sala de rehidratacin o a la de hospitalizacin.
En los hospitales donde no existe una sala de rehidratacin, se considera
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OBJETIVOS
Objetivo general
Establecer los criterios y procedimientos adecuados para la aplicacin del
algoritmo del diagnstico y tipificacin de Rotavirus, y del algoritmo diferencial
para el diagnstico de otros virus gastrointestinales; as como analizar la
informacin generada por la RNLSP para proporcionar informacin
epidemiolgica convencional y de vigilancia basada en el laboratorio.
Objetivos especficos
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TOMA Y ENVIO
DE MUESTRAS
nombre
edad
fecha
procedencia
Etiquetar
Llenar
la encuesta
OFICIO
Directo
r
Dx.
Tcnic
a
Lista de
nombres y
resultados
nombre
edad
fecha
procedencia
Almacenar a 4C
Caja de envo
ENCUESTA
NuTraVE-EDA
No. Folio
REMU-F-12
muestra del paciente. El recipiente primario deber rodearse de material absorbente como gasa o papel
absorbente y colocarse en un recipiente secundario hermtico a prueba de derrames y golpes. Si se colocan
varios recipientes primarios dentro de un recipiente secundario se deber usar una gradilla y material
absorbente para evitar algn derrame. Es importante mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera)
tiene que haber suficientes refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8 C. Los recipientes
secundarios debern llevar las etiquetas de riesgo biolgico y seal de orientacin del recipiente, a su vez el
recipiente secundario deber ir contenido en un paquete externo de envo (caja de cartn o hielera) que proteja
el contenido de elementos externos del ambiente y debe estar etiquetado con los datos del remitente,
destinatario y seal de orientacin. La documentacin que se integre al triple embalaje deber colocarse en la
parte interior del paquete.
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NDICE DE
RECHAZO = Nmero de muestras rechazadas
N de muestras que llegan a la institucin para diagnstico
El segundo indicador de la fase pre-analtica es la oportunidad de la toma de la
muestra. Este indicador mide el tiempo ptimo de la toma de la muestra con
respecto al inicio de los sntomas de la enfermedad. El cumplimiento de este
indicador es indispensable para mantener la adecuada sensibilidad de la prueba.
Oportunidad
Resultados de diagnstico informados en tiempo estndar entre el nmero de
muestras recibidas para diagnstico por 100.
Meta
Cumplir con la emisin de los resultados de diagnstico en tiempo estndar por lo
menos el 90% de las muestras procesadas mensualmente.
2) Fase analtica
Comprende todo el flujo de muestra dentro del proceso analtico y se utilizarn dos
indicadores:
a) Desempeo tcnico
b) Oportunidad del proceso analtico
El indicador de desempeo tcnico ser obtenido a travs de paneles de eficiencia
dos veces por ao, cumplimiento de cdula de verificacin en visitas de supervisin
(una vez al ao), concordancia con las muestras enviadas para cultivo viral y el 10%
de negativas y cumplimiento con las bases del sistema vectorial de caminando a la
excelencia.
ndice de desempeo tcnico
Confiabilidad
Paneles aprobados con el 90% o ms sobre paneles recibidos por 100.
Meta
Cumplir con el 85% o ms del programa de evaluacin del desempeo para cada
diagnstico.
3) Fase post-analtica
El indicador de la fase post-analtica es la emisin de resultado, el cual medir el
tiempo transcurrido entre el trmino del anlisis de PAGE y la llegada de la
informacin a la base de datos (plataforma de vigilancia epidemiolgica). Todos los
laboratorios que realizan el diagnstico para esta red deben informar los resultados
por da de proceso y no acumular los resultados para capturar resultados en el
sistema de informacin general. Tiempo entre procesamiento, captura y envo de
informacin dentro de las primeras 24 horas de terminado el proceso:
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Satisfactorio
Mnimo
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DIC
NOV
OCT
SEP
AGO
JUL
JUN
MAY
ABR
MAR
FEB
ACTIVIDAD
ENE
xx
xx
xx
xx
xx
xx
xx
xx
xx
Nota: Las fechas del cronograma pueden estar sujetas a cambio de da.
Si algn da coincide con fin de semana o da de asueto, la fecha se
mueve al da hbil siguiente.
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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Mexico. J Clin Microbiol. 1998; 36:1688-1692.
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Procedimiento:
Procedimiento:
Pesar 0.5 g de Agarosa ultrapura.
Disolver la agarosa en 33 mL de agua bidestilada estril con ayuda de un
termoagitador.
Agregar 0.2 mL de Xilen-Cianol (50 mg/mL).
Dejar enfriar, tapar y etiquetar.
Guardar a temperatura ambiente.
Xilen-cianol 50 mg/mL
Procedimiento
1. Pesar 1.0 g de Xilencianol.
2. Disolverlo en 20 mL de agua bidestilada estril.
Solucin Acrilamida 30%/Bisacrilamida 0.8%
(Solucin de acrilamida-bisacrilamida)
Procedimiento
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Procedimiento:
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DE
LOS
REACTIVOS
PARA
SOLUCIN A 5X
SOLUCIN B 1X
Fenol, ultra puro, cristales, (Sigma, Invitrogen, Fluka-Biochemika).
Tris, Tris-Base, Trizma-Base, cristales, peso molecular 121.1 (Roche, Promega).
cido clorhdrico (Hycel, Reproqifin).
-mercaptoetanol, 2-mercaptoetanol (Sigma).
8-Hidroxiquinoleina, cristales, peso molecular 145.2, (Sigma).
CLOROFORMO
Cloroformo, grado analtico A.C.S., peso molecular 119.38, (Hycel, Fermont).
ACRILAMIDA
Acrilamida, grado electroforesis o biologa molecular, peso molecular 71.08,
(Sigma, Boehringer).
BIS-ACRILAMIDA
Bis-acrilamida, N, N, Metilen Bis acrilamida, grado electroforesis o grado
biologa molecular, peso molecular 154.2 (Sigma, MP Biomedicals, Bio-Rad).
PERSULFATO DE AMONIIO
Persulfato de amonio, grado electroforesis, (Gibco, ICN, Sigma).
TEMED
Temed, N, N, N, N, Tetra metil etilen diamino, grado electroforesis (Sigma,
Research-Organic, Bio-Rad).
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SOLUCIN C 1X
Agarosa, ultra pura, grado analtico (Sigma).
Xilen-Cianol, grado electroforesis (Sigma, Bio-Rad).
SOLUCIN D 10X
Tris, Tris-Base, Trizma-Base, grado molecular cristales, peso molecular 121.1
(Roche, Promega).
Glicina, Glicina ultra pura, grado electroforesis, peso molecular 75.07 (Sigma,
Gibco, Research-Organic).
SOLUCIN E 10X
cido actico glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)
Etanol absoluto (Hycel, Golen Bell)
SOLUCIN F 100X
Nitrato de plata, reactivo A.C.S. (Sigma, Fermont)
SOLUCIN G 125X
Formaldehdo, (J.T. Baker, Golen Bell)
Hidrxido de sodio, reactivo analtico, grado U.S.P., peso molecular 40.00
(Reproquifin, Quiromed, Fermont, J.T. Baker)
SOLUCIN H
cido actico glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)
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Caducidad
Solucin A 1X
Temperatura
ambiente
6 meses
Solucin B
Refrigeracin
6 meses
Solucin C
Temperatura
ambiente
6 meses
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
Solucin D 10X
Temperatura
ambiente
6 meses
Solucin E 10X
Temperatura
ambiente
6 meses
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
Solucin F 100X
Temperatura
ambiente
6 meses
Solucin G 125X
Temperatura
ambiente
6 meses
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
Solucin H
Temperatura
ambiente
No aplica
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
Cloroformo
Temperatura
ambiente
No aplica
Solucin de hidrxido de
sodio al 3%
Temperatura
ambiente
6 meses
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
Acrilamida/Bisacrilamida
Refrigeracin
3 meses
Reactivos
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Tipo de
almacenamiento
Refrigeracin
3 meses
TEMED
Refrigeracin
No aplica
Refrigeracin
3 meses
Frasco de vidrio
transparente con tapn de
rosca
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