UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO TECNOLGICO
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE
ALIMENTOS

ROSENY DINAH SANTOS

PRODUO ENZIMTICA DE POLI(-CAPROLACTONA)

EM DIXIDO DE CARBONO SUPERCRTICO

Florianpolis/SC
2011

ROSENY DINAH SANTOS

PRODUO ENZIMTICA DE POLI(-CAPROLACTONA)

EM DIXIDO DE CARBONO SUPERCRTICO

Dissertao apresentada ao Curso de Ps-Graduao

em Engenharia de Alimentos do Centro Tecnolgico
da Universidade Federal de Santa Catarina, como
requisito parcial obteno do ttulo de Mestre em
Engenharia de Alimentos.
rea de concentrao: Desenvolvimento de
Processos na Indstria de Alimentos.

Orientadora: Prof. Dr. Sandra R. S. Ferreira

Co-Orientador: Prof. Dr. Jos Vladimir de Oliveira

Florianpolis/SC
2011

Catalogao na fonte pela Biblioteca Universitria

da
Universidade Federal de Santa Catarina

S237p

Santos, Roseny Dinah

Produo enzimtica de poli(-caprolactona) em dixido de
carbono supercrtico [dissertao] / Roseny Dinah Santos ;
orientadora, Sandra Regina Salvador Ferreira. - Florianpolis,
SC, 2011.
79 v.: il., grafs., tabs.
Dissertao (mestrado) - Universidade Federal de Santa
Catarina, Centro Tecnolgico. Programa de Ps-Graduao
em Engenharia de Alimentos.
Inclui referncias
1. Engenharia. de alimentos. 2. Polmeros. 3. Lipase.
4. Dixido de carbono. 5. Biopolmeros. I. Ferreira, Sandra
Regina Salvador. II. Universidade Federal de Santa Catarina.
Programa de Ps-Graduao em Engenharia de Alimentos. III.
Ttulo.
CDU 663

Dedico este trabalho aos meus pais,

Raimundo e Hortencia, pela educao,
amor e apoio, e ao meu namorado,
Harri, por ter estado sempre ao meu lado
e me encorajado nos momentos mais
difceis, aqui e a quilmetros de
distncia.

AGRADECIMENTOS
Agradeo a Deus por abenoar sempre a minha vida pessoal e
profissional, concedendo mais uma vitria na minha vida.
Aos meus pais e irmos, Helcio e Rossane, pelo carinho,
incentivo e ajuda.
Prof. Dr. Sandra R. S. Ferreira e ao Prof. Dr. Jos Vladimir de
Oliveira, pela orientao, confiana e ensinamentos transmitidos.
Sibele Rosso, por ter sido como minha terceira orientadora,
pela dedicao, pacincia e grande ajuda no desenvolvimento deste
trabalho, que com certeza fez todo o diferencial.
Aos professores da URI Erechim, Dbora de Oliveira, Helen
Treichel, Marco Di Luccio e professor Tuca, pela colaborao neste
trabalho.
Ao pessoal do Laboratrio de Termodinmica Aplicada da URI
pela assistncia e disponibilizao do laboratrio para a realizao dos
experimentos. Em especial, agradeo s meninas da Iniciao Cientfica,
Aline, Eline e Mel pela ajuda com os experimentos e momentos de
alegria nas horas mais crticas. Agradeo Bebel pela colaborao j na
reta final, mas que fez toda a diferena. Ao Anderson pela pacincia e
por colaborar com as anlises de cromatografia.
Agradeo ao pessoal do LATESC em Florianpolis, por ter feito
parte do grupo de pesquisa do laboratrio e pela disposio.
Especialmente Ktia pela amizade conquistada.
Ao Programa de Ps-Graduao em Engenharia de Alimentos da
UFSC pela oportunidade do mestrado.
Agradeo aos meus amigos, Lvia, Daiane, Diana, Anderson e
Tiago pelo incentivo e momentos de distrao em Florianpolis. E s
amigas de Aracaju, rica, Silviane e Catarina por torcerem pelo meu
sucesso.
Agradeo ao Harri, meu amor, pela pacincia, compreenso e por
acreditar que tudo daria certo.
A CAPES e ao CNPq pelo apoio financeiro.
E por fim, quero agradecer a todos que no citei, mas que de
alguma forma colaboraram para o desenvolvimento deste trabalho.

RESUMO
Policaprolactona (PCL) um dos mais atrativos polisteres alifticos
para aplicaes biomdicas devido a sua biocompatibilidade,
biodegradabilidade e compatibilidade com uma ampla faixa de
polmeros. Diversas aplicaes biomdicas podem ser encontradas na
literatura sobre policaprolactona e seus copolmeros. Tradicionalmente,
a PCL tem sido sintetizada por polimerizao em massa, em soluo ou
em suspenso. Para qualquer destas tcnicas utilizado um iniciador
organometlico na presena ou ausncia de um co-iniciador contendo
hidrognio ativo. A poli(-caprolactona) e seus copolmeros podem ser
sintetizados quimicamente atravs do mtodo da policondensao e do
mtodo da polimerizao pela abertura do anel de steres cclicos
(lactonas, lactdeos e glicoldeos), o qual permite preparar polisteres de
alta massa molar. A utilizao de enzimas como catalisadores na
polimerizao por abertura de anel vem se tornando uma alternativa
bastante atrativa devido polimerizao ocorrer em condies mais
amenas, principalmente no que concerne temperatura. Desta forma, o
objetivo do presente trabalho foi investigar a produo de poli(caprolactona) em dixido de carbono supercrtico catalisada por enzima,
especificamente a lipase comercial Novozym 435. Os parmetros
empregados para avaliao da produo foram a massa molar e o ndice
de polidisperso obtidos na reao. Alm disto, foi determinada a
atividade da enzima aps a reao com o intuito de verificar a
possibilidade de seu reuso. Foram realizados dois planejamentos
experimentais. No primeiro, as variveis estudadas foram o binmio
temperatura/presso (35 a 65 C/ 83 a 145 bar), a quantidade de enzima
(1 a 10 %), a quantidade de gua (0 a 2,5 %) e a agitao do meio (200 a
400 rpm). O diagrama de Pareto mostrou que apenas a varivel
quantidade de enzima foi significativa, no nvel de 90 % de
significncia, para as faixas de condies estudadas. As massas molares
mdias numricas variaram de 1050,4 a 7419,6 g/gmol. No houve
perda significativa de atividade enzimtica aps a reao com aumento
de atividade em alguns casos, considerando-se o nvel de significncia
de 90 % no diagrama de Pareto. O segundo planejamento avaliou os
efeitos do deslocamento da faixa de estudo para nveis mais altos:
presso (150 a 200 bar), quantidade de enzima (5 a 15 %) e quantidade

de gua (0 a 4 %). Os resultados mostraram que o aumento dos nveis

das variveis operacionais no causou alterao estatisticamente
significativa das reaes para o nvel de significncia de 90 % no grfico
de Pareto. Nesse planejamento, as massas molares variaram de 1099,5 a
1463 g/gmol. Como a quantidade de gua estava maior no sistema do
segundo planejamento experimental (monmero, dixido de carbono,
enzima e, em alguns casos, gua), uma das razes para a diminuio das
massas molares em geral, poderia ser o efeito deletrio da gua no
mecanismo da reao. A atividade enzimtica para o segundo
planejamento apresentou tendncia a ser significativa no diagrama de
Pareto para o nvel de 90 % de confiana. Esse resultado tambm
considervel na diminuio das massas molares dos polmeros obtidos
visto a importncia da atividade da enzima no desencadeamento das
reaes. Os resultados obtidos nesse trabalho demonstram que o uso de
catalisador enzimtico e fluido supercrtico pode ser to efetivo quanto
s tcnicas que empregam catalisadores metlicos e meios orgnicos,
com a vantagem de no apresentarem toxicidade e no necessitar de
tratamento para o descarte no ambiente.
Palavras-chave:

policaprolactona,
biopolmero.

lipase,

dixido

de

carbono,

ABSTRACT
Polycaprolactone (PCL) is one of the most attractive aliphatic polyesters
for biomedical applications due to its biocompatibility, biodegradability
and compatibility with a wide range of the polymers. Several biomedical
applications can be found in the literature using poly(-caprolactone)
and their copolymers. Traditionally, the PCL has been synthesized by
bulk polymerization, solution or suspension. In any of these techniques
it is used organometallic initiators in the presence or absence of a coinitiator containing active hydrogen. The poly(-caprolactone) and its
copolymers can be chemically synthesized by the method of
polycondensation and the method of polymerization by ring-opening of
cyclic esters (lactones, lactide and glicolides), which allows to prepare
high molecular weight polyesters. The use of enzymes as catalysts in the
polymerization by ring-opening has become a very attractive alternative
because the polymerization occurs in milder conditions, especially in
relation to the temperature. The aim of this work was to synthesize
poly(-caprolactone) in supercritical carbon dioxide catalyzed by lipase,
namely Novozym 435. Enzymatic reactions were evaluated taking into
account the molar mass and polydispersity index obtained. Besides, the
enzyme activity was evaluated after polymerization reactions. Two
experimental designs were carried out: in the first, the variables were
binomial temperature/pressure (35 to 65 C/ 83 to 145 bar), enzyme
concentration (1 to 10 wt %), water content (0 to 2.5 wt %) and agitation
(200 to 400 rpm). The Pareto diagram showed the enzyme concentration
was significant (90 % confidence interval) in the experimental ranges
investigated. The average molecular weight for the polymers ranged
from 1050.4 to 7419.6 g/gmol. Enzymatic activity did not suffer
significant changes for 90 % confidence interval. The second planning
evaluated the effects of those variables at higher levels: pressure (150 to
200 bar), enzyme concentration (5 to 15 wt %), water content (0 to 4 wt
%). Results showed that increasing levels of process variables did not
cause a change for the statistical results of the reactions (90 %
confidence interval). In these planning, the molecular weight ranged
from 1099.5 to 1463 g/gmol. As the water concentration was higher in
the second planning system, one of the reasons for the decrease of the
masses in general, could be the deleterious effect of water on the

reaction mechanism. The enzyme activity for the second design tended
to be significant in the Paretos chart for the 90 % confidence interval.
This result is also considerable for the decrease in the molecular weight
of polymers whereas the importance of enzyme activity for the
reactions. Results obtained in this study may be considered relevant as it
is shown that the use of enzyme catalysts and supercritical fluids may be
as effective compared to the traditional metal catalysts and organic
medium, due to the advantages as no toxicity and does not require any
treatment for disposal in the environment.
Keywords: polycaprolactone, lipase, carbon dioxide, biopolymer.

LISTA DE FIGURAS
Figura 3.1. Representao esquemtica de estruturas moleculares das
cadeias polimricas. (a) Lineares, (b) Ramificadas, (c)
Com ligaes cruzadas e (d) Em rede.. .............................. 28
Figura 3.2. Representao esquemtica de um homopolmero e de
copolmeros. ....................................................................... 28
Figura 3.3. Representao das reaes de polimerizao: (a)
Formao de polister por meio da policondensao entre
um diol e um dicido, com eliminao de gua. (b)
Polimerizao do estireno exemplificando a formao de
um polmero de adio, em que n o grau de
polimerizao do polmero resultante................................. 29
Figura 3.4. Tipos de polimerizao. (a) Polimerizao em cadeia para
a formao de polietileno. (b) Reao em etapas
representada pela formao de um poliol polister.. .......... 30
Figura 3.5. Fotografia em tamanho natural de flocos de poli(caprolactona) de aproximadamente 3 mm de dimetro e
massa molar entre 70000 e 90000 g/gmol determinado
por GPC.. ............................................................................ 36
Figura 3.6. Estrutura qumica da -caprolactona e poli(caprolactona). (a) Estrutura qumica da -caprolactona na
sua forma cclica, com um anel de sete membros e
frmula molecular C6H10O2. (b) Estrutura da poli(caprolactona) representada pela sua unidade monomrica,
a -caprolactona, com o anel aberto ................................... 36
Figura 3.7. Estrutura tridimensional da CAL-B .................................... 39
Figura 3.8. Mecanismo de polimerizao de lactonas por abertura do
anel.. ................................................................................... 40
Figura 3.9. Esboo do mecanismo da polimerizao enzimtica da caprolactona e quatro rotas indicadas por I (formao do
complexo ativo), II (formao do polmero), III

(propagao do polmero) e IV (formao de oligmeros

cclicos) .............................................................................. 41
Figura 3.10. Diagrama P-T para um fluido puro. .................................. 42
Figura 4.1. Amostra da enzima utilizada nas reaes, lipase
comercial imobilizada Candida antarctica, a Novozym
435.................................................................................... 46
Figura 4.2. Diagrama esquemtico do aparato experimental. ............... 47
Figura 4.3. Vista geral da unidade de reao.. ...................................... 48
Figura 4.4. Sistema composto de um banho termosttico e reatores de
vidro utilizados para a determinao da atividade
enzimtica. ......................................................................... 50
Figura 4.5. Cromatgrafo HPLC AGILENT 1100 Series utilizado
nas anlises por GPC. ......................................................... 52
Figura 5.1. Poli(-caprolactona) produzida no primeiro planejamento
experimental a 65 C, 145 bar, 10 % de enzima, 200 rpm
de agitao e sem adio de gua. ...................................... 57
Figura 5.2. Diagrama de Pareto para a massa molar mdia numrica
do primeiro planejamento experimental com nvel de
significncia de 90 %. ........................................................ 58
Figura 5.3. Diagrama P-x-y para o sistema binrio CO2 (1) + caprolactona (2).................................................................. 59
Figura 5.4. Diagrama de Pareto para a massa molar mdia numrica
do segundo planejamento (nvel de 90 % de
significncia). ..................................................................... 63
Figura 5.5. Poli(-caprolactona) produzida no segundo planejamento
experimental a 65 C, 200 bar, 15 % de enzima, 200 rpm
de agitao e sem adio de gua. ...................................... 64
Figura 5.6. Diagrama de Pareto para a atividade enzimtica do
primeiro planejamento no nvel de 90 % de significncia. 67
Figura 5.7. Diagrama de Pareto para a atividade enzimtica do
segundo planejamento no nvel de 90 % de significncia. . 69

LISTA DE TABELAS
Tabela 4.1. Caractersticas da lactona estudada. .................................. 45
Tabela 4.2. Nveis das variveis investigadas nos planejamentos
experimentais. ................................................................... 53
Tabela 5.1. Resultados do primeiro planejamento para a produo
de poli(-caprolactona) em CO2 alta presso catalisada
por lipase. .......................................................................... 56
Tabela 5.2. Resultados do segundo planejamento experimental da
produo de policaprolactona em CO2 alta presso
catalisada por lipase. ......................................................... 62
Tabela 5.3. Atividade enzimtica aps as reaes realizadas no
primeiro planejamento experimental. ............................... 66
Tabela 5.4. Atividade enzimtica aps as reaes do segundo
planejamento experimental. .............................................. 68

LISTA DE ABREVIATURAS
CAL-B
DP
EAM
-CL
GPC
HPLC
IP
M
ME
Mi

mu

PCL
PE
PET
PP
PVC
RID
SEC
t
Va
Vb
Ve
Vf
wi
xi

Lipase da Candida antarctica frao B

Degree of Polymerization (Grau de Polimerizao)
Enzyme-activated monomer complex (Complexo
monmero ativado pela enzima)
-caprolactona
Gel Permeation Chromatography (Cromatografia de
Permeao em Gel)
High Performance Liquid Chromatography
(Cromatografia Lquida de Alta Eficincia)
ndice de Polidisperso
Molaridade da soluo de hidrxido de sdio (mol/L)
Massa de enzima utilizada na reao (g)
Massa molar mdia da faixa de tamanhos i
Massa molar mdia numrica (g/gmol)
Massa molar da unidade repetitiva
Massa molar mdia ponderada (g/gmol)
Poli(-caprolactona)
Poli(etileno)
Poli(tereftalato de etileno)
Poli(propileno)
Poli(cloreto de vinila)
Refractive Index Detector (Detector de ndice de Refrao
Size-Exclusion Chromatography (Cromatografia por
Excluso de Tamanho)
Tempo de reao (min)
Volume de hidrxido de sdio gasto na titulao da
amostra no tempo zero (mL)
Volume de hidrxido de sdio gasto na titulao da
amostra aps 40 minutos de reao (mL)
Volume da alquota do meio reacional retirada para
titulao (mL)
Volume da alquota do meio reacional retirada para
titulao (mL)
Frao em peso das molculas na faixa de tamanhos i
Frao em nmero das molculas na faixa de tamanhos i

SUMRIO
1 INTRODUO ................................................................................ 21
2 OBJETIVOS..................................................................................... 25
2.1 OBJETIVO GERAL............................................................................. 25
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS .................................................................. 25
3 REVISO BIBLIOGRFICA........................................................ 27
3.1 POLMEROS ...................................................................................... 27
3.1.1 Classificao, estrutura e tipos de polmeros ................................. 27
3.1.2 Massa molar e distribuio de massa ............................................. 30
3.1.3 Mercado de polmeros ..................................................................... 32
3.2 A IMPORTNCIA DOS BIOPOLMEROS COMO BIOMATERIAIS ............ 33
3.2.1 Biodegradabilidade e biocompatibilidade...................................... 34
3.3 POLI(-CAPROLACTONA) ................................................................. 35
3.4 MERCADO DE BIOPOLMEROS .......................................................... 37
3.5 LIPASES COMO CATALISADORES ...................................................... 38
3.6 POLIMERIZAO POR ABERTURA DO ANEL RING-OPENING
POLYMERIZATION (ROP) .............................................................. 39
3.7 FLUIDOS SUPERCRTICOS ................................................................. 41
4 MATERIAIS E MTODOS ........................................................... 45
4.1 MATERIAIS ...................................................................................... 45
4.2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ..................................................... 46
4.2.1 Aparato experimental das reaes de polimerizao .................... 46
4.2.2 Determinao da atividade enzimtica........................................... 49
4.2.3 Anlises por GPC (Gel Permeation Chromatography) ................. 51
4.2.4 Planejamento experimental ............................................................. 52
5 RESULTADOS E DISCUSSES ................................................... 55
5.1 REAES DE POLIMERIZAO ......................................................... 55
5.2 ATIVIDADE ENZIMTICA.................................................................. 64
6 CONCLUSES E SUGESTES .................................................... 71
6.1 CONCLUSES ................................................................................... 71
6.2 SUGESTES ...................................................................................... 71
REFERNCIAS .................................................................................. 73

1 INTRODUO
Materiais polimricos, naturais e sintticos, so indispensveis
para a sociedade moderna (KOBAYASHI; MAKINO, 2009). Eles tm
um papel importantssimo por estarem presentes em praticamente todos
os setores da economia como medicina, agricultura, construo civil,
embalagens e eletroeletrnicos. A produo destes produtos estimada
na ordem de 180 milhes ton/ano, sendo que a quantidade de resduos
de materiais polimricos descartados no ambiente chega a 20 % do total
produzido
(BORSCHIVER;
ALMEIDA;
ROITMAN,
2008;
FRANCHETTI; MARCONATO, 2006). A grande maioria desses
polmeros obtida a partir de monmeros derivados do petrleo, fonte
no-renovvel e geradora de poluentes de degradao lenta tanto na
produo quanto no descarte.
A partir da dcada de 80 e, mais efetivamente, na dcada de 90,
houve uma maior preocupao com o desenvolvimento de uma
sociedade sustentvel. A utilizao de recursos naturais renovveis
como alternativa para produtos derivados de combustveis fsseis vem
ganhando preferncia, principalmente devido sua disponibilidade
inesgotvel e s condies ambientais (van DAM; KLERK-ENGELS;
RABBINGE, 2005; JUAIS, 2009).
A produo de polmeros biodegradveis de alta pureza uma
questo importante, considerando seu potencial de aplicao na
medicina e na indstria de alimentos (GREGOROWICZ, 2008).
Borschiver, Almeida e Roitman (2008) realizaram um monitoramento
tecnolgico e mercadolgico de biopolmeros entre 2002 e 2007, onde
encontraram que o PHA (polihidroxialcanoato) apresentou o maior
nmero de artigos publicados e a rea medicinal a que contempla maior
nmero de patentes, seguido da nanotecnologia e indstria de
biotecnologia. Nesses casos, a busca pelo uso de tecnologias limpas
fator determinante, j que a produo de substncias de alta pureza exige
a utilizao de reagentes no-txicos e economicamente viveis.
Os processos envolvendo fluidos supercrticos tm atrado
especial ateno nas ltimas dcadas. Suas aplicaes tm amplo
alcance como em processos de extrao, separao, fracionamento,
reao e processamento de frmacos e polmeros (KALOGIANNIS;
PANAYIOTOU, 2006). Particularmente, a tecnologia de fluidos
supercrticos tem recebido recentemente grande ateno no campo da

22

Introduo

formao de partculas de polmeros biodegradveis, que podem ser

usados como sistemas de liberao controlada de drogas e agentes
bioativos. Diversos trabalhos esto disponveis na literatura sobre o
tema, mostrando as vantagens do uso dessa tecnologia, a exemplo do
encapsulamento de partculas utilizando polmeros (YUE et al., 2004),
sntese de polisteres (VARMA et al., 2005), sntese de microesferas de
poli(cido lctico) (YOON et al., 2007), sntese de poli(cido lctico)
catalisada por enzima (GARCA-ARRAZOLA et al., 2009) e
polimerizao de -caprolactona (LOEKER et al., 2004; BERGEOT et
al., 2004; STASSIN; HALLEUX; JRME, 2001).
Alm do uso da tecnologia supercrtica, o uso de enzimas in vitro
para sntese de polmeros tem sido estudado ativamente na ltima
dcada (VARMA et al., 2005). A lipase constitui o grupo mais
importante de biocatalisadores por ser facilmente obtida na natureza,
apresentar alta seletividade e baixo impacto no meio ambiente.
Eisenmenger e Reyes-De-Corcuera (2009) apresentaram uma detalhada
reviso a respeito da estabilidade de diversas enzimas em diferentes
fluidos a altas presses. Em destaque, a lipase, que foi estudada em
dixido de carbono (VIJA; TELLING; TOUGU, 1997; VARMA;
MADRAS, 2008; HABULIN; KNEZ, 2001), propano (KNEZ;
HABULIN; KRMELJ, 1998; HABULIN; KNEZ, 2001; OLIVEIRA et
al., 2006) e butano (KNEZ; HABULIN; KRMELJ, 1998; OLIVEIRA et
al., 2006). Alm disso, reaes qumicas podem ser conduzidas
utilizando lipase diretamente em meio orgnico (OLIVEIRA et al.,
2006), catalisando a polimerizao atravs da abertura do anel de
lactonas (pequenos e grandes anis), disteres cclicos (lactdeos) e
carbonatos cclicos para produzir polisteres ou policarbonatos
(VARMA et al., 2005).
Policaprolactona (PCL) um dos mais atrativos polisteres
alifticos para aplicaes biomdicas devido a sua biocompatibilidade,
biodegradabilidade e compatibilidade com uma ampla faixa de
polmeros (STASSIN; HALLEUX; JRME, 2001; PITT et al., 1981;
OLABISI; ROBESON; SHAW, 1979). Loeker et al. (2004) utilizaram a
Candida antarctica lipase B (CAL-B) na produo de policaprolactona
em dixido de carbono supercrtico. Os autores mostraram que
possvel obter produtos qualitativa e quantitativamente similares aos
obtidos em reaes catalisadas por catalisadores metlicos, que
encerram uma grande desvantagem, a toxicidade. Os mesmos autores
demonstraram que o uso de presses muito altas e longo tempo de
reao podem afetar a atividade da enzima. Assim, condies de
processo mais brandas so essenciais para a otimizao do processo.

Introduo

23

Thurecht et al. (2006) investigaram a cintica da polimerizao

enzimtica de -caprolactona em dixido de carbono supercrtico. Os
autores concluram que a cintica apresenta as mesmas caractersticas da
cintica de polimerizaes em tolueno.
O campo da sntese de policaprolactona em dixido de carbono
supercrtico catalisada por enzima ainda no conta com uma literatura
vasta, podendo a rea ser considerada incipiente. Os nicos trabalhos
encontrados relacionados a este assunto, at o momento, foram os
citados anteriormente. Por se tratar de um tema novo, muitas questes
ainda no esto totalmente esclarecidas acerca do uso de enzima nesse
meio reativo. A tentativa de avaliar seus efeitos na polimerizao surge
como desafio. dentro desse contexto que este estudo objetiva
investigar a produo de policaprolactona em dixido de carbono
supercrtico catalisada por enzima, uma lipase comercial, utilizando
como parmetros de avaliao da reao as massas molares obtidas na
polimerizao e o ndice de polidisperso. Sabe-se tambm, que o
desenvolvimento de um novo processo tecnolgico deve primar pela
viabilidade tcnica e econmica.
Este estudo no teve a finalidade de avaliar economicamente o
processo, detendo-se somente pesquisa da viabilidade tcnica.
Portanto, estudou-se a atividade enzimtica aps a reao para verificar
a possibilidade de reutilizao da enzima em reaes posteriores.
Deseja-se assim, colaborar cientificamente com este campo do
conhecimento, onde se verifica considervel lacuna no que se refere a
publicaes cientficas.

Introduo

2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

O trabalho proposto tem como objetivo geral a produo de
poli(-caprolactona), utilizando um catalisador enzimtico, lipase
comercial, em meio contendo dixido de carbono alta presso.
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
- Determinar a massa molar mdia numrica () e a ponderada
() do polmero produzido e, a partir destes valores, calcular
o ndice de polidisperso (), como forma de
caracterizar o produto obtido.
- Avaliar o efeito das variveis que influenciam a reao de
polimerizao como: temperatura, presso, quantidade de
enzima, quantidade de gua e agitao.
- Determinar a atividade enzimtica da enzima comercial
utilizada (Novozym 435) com a finalidade de verificar o
impacto das condies reacionais sobre a enzima.

3 REVISO BIBLIOGRFICA

3.1 POLMEROS
Os polmeros que ocorrem naturalmente, aqueles que esto
presentes na natureza e so derivados de plantas e animais, tm sido
utilizados pelo homem nas mais diversas aplicaes por muitos sculos
como na construo civil, na fabricao de utenslios e roupas, uso como
medicamentos e fontes de energia. Esses materiais incluem a madeira, a
borracha, o algodo, a l, o couro e a seda. Outros exemplos de
polmeros naturais so as protenas, as enzimas, os amidos e a celulose,
que desempenham importante papel em processos biolgicos e
fisiolgicos, nas plantas e nos animais (CALLISTER, 2002).
As ferramentas modernas de pesquisa cientfica, como a
cromatografia, tcnicas de ressonncia magntica nuclear e de
espectrometria de massa, tornaram possvel a determinao das
estruturas moleculares deste grupo de materiais, bem como o
desenvolvimento de numerosos polmeros, os quais so sintetizados a
partir de molculas orgnicas pequenas. Muitos dos plsticos, borrachas
e materiais fibrosos que nos so teis nos dias de hoje consistem em
polmeros sintticos. Os materiais sintticos podem ser produzidos de
maneira barata, e as suas propriedades podem ser aprimoradas num
nvel em que muitas delas so superiores s suas contrapartes naturais
(CALLISTER, 2002).
3.1.1 Classificao, estrutura e tipos de polmeros
Os polmeros so formados pela repetio de um grande nmero
de unidades qumicas, chamadas meros ou unidades monomricas. As
cadeias polimricas podem apresentar variaes quanto estrutura
(linear, ramificada, com ligaes cruzadas e em rede), tipo
(homopolmeros e copolmeros), forma de obteno (polmeros de
condensao e polmeros de adio) e mecanismo de reao
(polimerizao em etapas e polimerizao em cadeia). Quando os meros
so ligados entre si formando uma unidade contnua, a cadeia linear,
quando as unidades so conectadas de forma tridimensional formando
uma rede (ou mais redes unidas), o polmero reticulado ou contm

28

Reviso Bibliogrfica

ligaes cruzadas; e quando uma cadeia possui ramificaes laterais, o

polmero chamado de ramificado ou no-linear. A Figura 3.1 mostra as
quatro formas bsicas de estrutura molecular para a formao
polimrica: linear, ramificada, cruzada e em rede (AKCELRUD, 2007).

Figura 3.1. Representao esquemtica de estruturas moleculares das cadeias

polimricas. (a) Lineares, (b) Ramificadas, (c) Com ligaes cruzadas e (d) Em rede.
Os crculos representam as unidades monomricas que se repetem (CALLISTER,
2002).

Quanto ao nmero de monmeros envolvidos na formao da

cadeia macromolecular, os polmeros podem ser classificados de duas
maneiras: polmeros preparados a partir de um nico monmero, que
so chamados de homopolmeros; e polmeros em que dois ou mais
monmeros so empregados, os copolmeros. Nestes ltimos, as
unidades monomricas podem ser distribudas randomicamente
(copolmero randmico ou aleatrio), de modo alternado (copolmero
alternado), ou em blocos (copolmero em bloco) e, ainda, um polmero
pode ramificar a cadeia de um outro polmero graftzado ou enxertado. A
Figura 3.2 apresenta uma representao esquemtica da classificao
dos polmeros quanto aos monmeros envolvidos na sua formao
(STEVENS, 1999; MANO; MENDES, 1999).

Figura 3.2. Representao esquemtica de um homopolmero e de copolmeros

(RAMOS, 2007).

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29

Em 1929, Carothers props uma classificao dos polmeros em

duas categorias: polmeros de condensao e polmeros de adio. Os
polmeros de condensao so aqueles formados a partir de reaes de
condensao com eliminao de pequenas molculas: gua, cido
clordrico ou metanol (por exemplo, formao de poliamidas,
policarbonatos e poliuretano). J os polmeros de adio so formados
sem que haja sada de molculas orgnicas, sendo a estrutura da unidade
repetitiva idntica quela do monmero (por exemplo, poliestireno,
polietileno e poli(cloreto de vinila)). A Figura 3.3 apresenta uma
representao esquemtica das reaes para a obteno de polmeros de
condensao e de polmeros de adio (AKCELRUD, 2007).

Figura 3.3. Representao das reaes de polimerizao: (a) Formao de polister

por meio da policondensao entre um diol e um dicido, com eliminao de gua.
Se R = (CH2)2 e R = fenila, o polister formado o poli(tereftalato de etileno). (b)
Polimerizao do estireno exemplificando a formao de um polmero de adio, em
que n o grau de polimerizao do polmero resultante (AKCELRUD, 2007).

Rotular um polmero como de adio ou de condensao pode ser

inadequado, pois alguns polmeros podem ser sintetizados a partir de
reagentes diferentes, e, consequentemente, pela classificao de
Carothers, receberiam classificaes diferentes dependendo da rota
sinttica utilizada (STEVENS, 1999). Para evitar interpretao errnea,
a classificao proposta por Flory (1953) surge baseada no mecanismo
da reao, dividindo em duas classes de polmeros: polimerizao em
etapas (inclui todos os polmeros de condensao e aqueles formados
por meio de etapas definidas) e polimerizao em cadeia (essas reaes
requerem a formao de um centro ativo ao qual as molculas de
monmero adicionam-se para formar o polmero final). A Figura 3.4
mostra exemplos de polimerizao em cadeia e de reao em etapas
(AKCELRUD, 2007).

30

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Figura 3.4. Tipos de polimerizao. (a) Polimerizao em cadeia para a formao de

polietileno. Esse processo envolve trs estgios distintos (iniciao, propagao e
terminao), em que na iniciao uma espcie catalisadora reage com o monmero,
formando um complexo ativo. Na propagao ocorre o crescimento linear da
molcula medida que unidades do monmero se fixam umas s outras em
sucesso. A etapa de terminao se encerra quando as extremidades ativas de duas
cadeias que se propagam reagem entre si, formando uma molcula no-reativa.
(b) Reao em etapas representada pela formao de um poliol polister. O polmero
formado mediante reaes intermoleculares entre o etilenoglicol e o cido adpico,
com eliminao de gua (CALLISTER, 2002).

3.1.2 Massa molar e distribuio de massa

A caracterstica mais importante dos polmeros o seu tamanho
molecular. A massa molar de um polmero no pode ser calculada como
normalmente feito com compostos puros de baixa massa molar. Os
polmeros so formados por agrupamentos de molculas de vrios
tamanhos, ou seja, exibem uma distribuio de massa molar e so
denominados polidispersos. Portanto, a massa molar de um polmero
expressa como massa molar mdia (LUCAS; SOARES; MONTEIRO,
2001).
Existem vrias maneiras segundo as quais a massa molar mdia
pode ser definida. A massa molar mdia pelo nmero de molculas, ,

Reviso Bibliogrfica

31

obtida pela classificao das cadeias em uma srie de faixas de

tamanhos, seguida pela determinao da frao das cadeias que se
encontram dentro de cada faixa de tamanho. Essa massa molar mdia
pelo nmero de molculas expressa como:

(3.1)

onde Mi representa a massa molar mdia da faixa de tamanhos i, e xi

representa a frao do nmero total das cadeias que se encontram dentro
da faixa de tamanhos correspondente.
A massa molar mdia pelo peso, , se baseia na frao em peso
das molculas que se encontram dentro das vrias faixas de tamanho.
Ele calculado de acordo com a relao:

(3.2)

onde Mi representa a massa molar mdia dentro de uma faixa de

tamanhos, enquanto wi representa a frao em peso das molculas dentro
do mesmo intervalo de tamanhos (CALLISTER, 2002).
O grau de polimerizao o nmero de meros da cadeia
polimrica, representado por DP (do ingls degree of polymerization). A
expresso a seguir relaciona a massa molar do polmero como um todo,
, com o grau de polimerizao, DP, e a massa molar da unidade
repetitiva, mu.

(3.3)

A mesma relao pode ser feita para :

(3.4)

A distribuio da massa molar, ou polidisperso, determinada a

partir da razo (). Para amostras monodispersas, os valores de
e so praticamente idnticos, e a polidisperso igual unidade
(LUCAS; SOARES; MONTEIRO, 2001).

32

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Quando se consideram mtodos instrumentais para determinao

da massa molar importante distinguir aqueles que fornecem a massa
molar absoluta daqueles mtodos que necessitam calibrao, utilizandose padres de massa molar conhecida. Mtodos absolutos incluem
medidas de propriedades coligativas para determinao de e tcnicas
de espalhamento de luz para determinao do . Mtodos que
requerem calibrao incluem medidas de viscosidade em soluo e
cromatografia de excluso por tamanho que fornece a distribuio da
massa molar (LUCAS; SOARES; MONTEIRO, 2001) (esta ltima
tcnica est descrita no item 4.2.3).
3.1.3 Mercado de polmeros
No recente panorama internacional, onde se presencia o aumento
relativo na integrao entre polticas tecnolgicas e de comrcio
internacional, algumas empresas dependem fortemente da gerao de
tecnologia para se sustentar. Este o caso das empresas que compem
as indstrias qumicas (na qual se insere o setor de polmeros) onde a
tecnologia parte indispensvel da estratgia corporativa dessas
empresas e fator determinante para promover mudanas nos nveis de
competitividade.
A indstria de polmeros constitui hoje um dos pilares do estilo
de vida contemporneo. enorme a quantidade de bens que nos cercam,
produzidos de material polimrico, uma vez que eles so utilizados em
quase todas as reas das atividades humanas, principalmente nas
indstrias automobilsticas, de embalagens, de revestimentos e de
vesturio, e se incorporaram de forma permanente ao dia-a-dia de nossas
vidas. Isso se deve tambm ao fato de que os materiais polimricos vm
conquistando muitos mercados atravs da substituio de outros
insumos, como papel, madeira e metais (HEMAIS; ROSA; BARROS,
2000).
Atualmente, o consumo per capita de plsticos no Brasil ainda
baixo, em comparao com pases mais desenvolvidos. Ele gira em
torno de 23 kg/habitante/ano, enquanto nos Estados Unidos e no Japo o
consumo per capita supera 80 kg/habitante/ano. Pode indagar se, com
maiores investimentos em P&D, o mercado poderia ser expandido. As
pesquisas em inovao no campo dos polmeros se referem obteno
de novas formulaes, ganhos de produo e, principalmente,
adequao dos produtos para usos especficos. Em geral, as empresas
brasileiras produzem a partir de licenciamento de tecnologia de

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33

fornecedores estrangeiros. A grande maioria das pesquisas realizadas no

Brasil na rea de polmeros se encontra situada em universidades, no
existindo vnculo direto com as atividades produtivas empresariais e,
por conseguinte, no resulta em patentes ou rendimentos econmicos.
No entanto, com a expanso de mercado e o desenvolvimento
econmico, produtos de maior valor agregado passaram a ser
produzidos no pas. Isto se deve, tambm, ao desenvolvimento da
indstria brasileira de polmeros, matria-prima do setor de
transformao. Ao longo dos ltimos trinta anos, a indstria de
polmeros adquiriu um importante status em termos de produo, e hoje
participa ativamente de diversos segmentos industriais, tais como
txteis, embalagens, eletroeletrnicos, automobilstico, etc. Entretanto, a
quase totalidade dos polmeros produzidos e consumidos no Brasil so
commodities ou pseudo-commodities, tais como polietileno,
polipropileno, poliestireno, PVC e PET. (CERQUEIRA; HEMAIS,
2001).
3.2 A IMPORTNCIA DOS BIOPOLMEROS COMO BIOMATERIAIS
Os biomateriais so materiais que tm a capacidade de interagir
com tecidos naturais, podendo ser naturais ou sintticos. Isto significa
que no sentido mais amplo so enquadrados nesta categoria todos os
materiais empregados na medicina, na odontologia, na medicina
veterinria e na farmacologia. Alm daqueles que entram na forma de
implantes em contato direto com o tecido do corpo. Dessa forma, os
biomateriais podem ser polmeros sintticos, metais, cermicas e
macromolculas naturais que so manufaturados ou processados para se
adequarem utilizao em dispositivos mdicos que entram em contato
ntimo com protenas, clulas, tecidos, rgos e sistemas orgnicos
(JAHNO, 2005). Dentre os materiais utilizados como implantes, os
polmeros apresentam grande potencial de uso, pois so, geralmente,
fceis de produzir, manusear e apresentam caractersticas semelhantes
aos dos materiais biolgicos (JAHNO, 2005).
Com a crescente preocupao da sociedade com os ndices de
poluio mundial, fez-se necessrio o desenvolvimento de novos tipos
de polmeros. Esses novos tipos de polmeros so chamados
biopolmeros e podem ser definidos como qualquer polmero (protena,
cido nuclico, polissacardeo) produzido por um organismo vivo. A
matria-prima principal para a manufatura desses biopolmeros uma
fonte de carbono renovvel, geralmente um carboidrato derivado de

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plantios comerciais de larga escala como cana-de-acar, milho, batata,

trigo e beterraba; ou um leo vegetal extrado de soja, girassol, palma ou
de outra planta oleaginosa (PRADELLA, 2006).
Esse desenvolvimento tecnolgico aumentou a qualidade de vida
e resultou na produo dos mais eficientes e sofisticados dispositivos
mdicos disponveis no mercado hoje. A chave do sucesso de
biomateriais a partir de polmeros a relativa facilidade/baixo custo em
que eles podem ser sintetizados com ampla faixa de propriedades como
alta resistncia mecnica, baixo atrito, dureza, elasticidade e
funcionalidades como matria-prima de prteses ortopdicas, implantes
de tecido sseo, cpsulas de comprimidos e materiais cirrgicos. A
grande variedade de reaes envolvidas na cincia dos polmeros torna
altamente desejvel descobrir e desenvolver novas estratgias de sntese
e gerar novos biomateriais polimricos a partir dessas estratgias. Alm
disso, os recentes desenvolvimentos na engenharia de tecidos e sistemas
de liberao de drogas tm renovado a busca por polmeros mais
eficientes, biocompatveis e biodegradveis (KULSHRESTHA;
MAHAPATRO, 2008).
3.2.1 Biodegradabilidade e biocompatibilidade
A biodegradao consiste na degradao dos materiais
polimricos atravs da ao de organismos vivos. Segundo estabelecido
pela American Standard for Testing and Methods (2011), polmeros
biodegradveis so polmeros nos quais a degradao resulta
primariamente da ao de microorganismos tais como bactrias, fungos
e algas de ocorrncia natural. Em geral, derivam desse processo dixido
de carbono (CO2), metano (CH4), componentes celulares microbianos e
outros produtos. A maioria dos compostos de alta massa molar que
apresentam biodegradabilidade so polisteres. Estes so polmeros
contendo grupos funcionais steres em suas estruturas e so degradados
por fungos atravs de hidrlise (ROSA et al., 2002). As propriedades
dos polmeros como a estrutura qumica e cristalinidade influenciam na
taxa de degradao do polmero. Polmeros que possuem baixa
cristalinidade, ou seja, a fase amorfa maior na molcula, a taxa de
degradao maior, se degradando mais rpido devido mobilidade das
cadeias. Em virtude disso, quanto mais cristalino o polmero, menor a
taxa de degradao, j que as cadeias de polmeros com alta
cristalinidade so mais resistentes (ALVES, 2008).

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35

Biocompatibilidade significa que o material e seus possveis

produtos de degradao devem ser tolerados pelos tecidos envoltrios e
no devem causar prejuzo ao organismo a curto e longo prazo.
Atualmente, entende-se como biocompatibilidade a caracterstica do
material que, usado em aplicaes especficas, desenvolve respostas
teciduais adequadas aos sistemas hospedeiros (JAHNO, 2005).
Uma exigncia para que um polmero seja usado em aplicaes
biomdicas a sua biocompatibilidade, ou seja, a ausncia de
toxicidade. J a biodegradabilidade uma vantagem adicional, pois
evita que o polmero tenha que ser removido depois de um perodo
apropriado de implatao em um organismo vivo. Os polmeros poli(caprolactona), poli(glicoldeos) e poli(lactdeos) so de grande interesse
pois so hidroliticamente instveis e degradam tanto in vitro como
tambm in vivo, resultando no lanamento de subprodutos atxicos,
como produto de degradao (DUBOIS; JEROME; TEYSSIE, 1991
apud JAHNO, 2005).

3.3 POLI(-CAPROLACTONA)
A poli(-caprolactona) (PCL), tambm chamada de poli(6hidroxihexanoato) (P(6-HH)), um polister sinttico de cadeia linear
que de grande interesse para a rea de biomateriais devido s suas
propriedades mecnicas e sua biocompatibilidade (JELLINEK; KACHI,
1989; ANDRADE et al., 2002 apud ALVES, 2008). A Figura 3.5 ilustra
a poli(-caprolactona) em uma de suas formas de comercializao, como
flocos semi-cristalinos de aproximadamente 3 mm de dimetro.
Diversas aplicaes biomdicas podem ser encontradas na
literatura sobre policaprolactona e seus copolmeros: Darney et al.
(1992) investigaram o uso de cpsulas de caprolactona contendo
levonorgestrel em implantes de contraceptivo subcutneo. Hattori et al.
(2001) desenvolveram uma nova tcnica para fixao de ossos
utilizando fios de blenda de poli(l-cido lctico) e poli(-caprolactona);
Lemmouchi e Schacht (1997) investigaram o uso de copolmeros de caprolactona e d,l-dilactdeo em liberao controlada de medicamentos
para tripanosomase, uma doena que acomete frequentemente animais
domsticos africanos (CASTRO, 2006); den Dunnem et al. (1997)
investigaram o uso de copolmero l-dilactdeo, d-dilactdeo e caprolactona como biomaterial para reconstituio de nervos perifricos.

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Figura 3.5. Fotografia em tamanho natural de flocos de poli(-caprolactona) de

aproximadamente 3 mm de dimetro e massa molar entre 70000 e 90000 g/gmol
determinado por GPC. (BUSYTRADE.COM, 2010; SIGMA-ALDRICH, 2010).

Industrialmente, o custo de produo da poli(-caprolactona) no

muito elevado, uma vez que pode ser obtido por polimerizao da caprolactona (CL), um monmero relativamente barato, pela tradicional
reao de oxidao Bayer-Villing a partir de ciclohexanona (ALVES,
2008). A Figura 3.6 mostra a estrutura qumica do monmero caprolactona e do polmero poli(-caprolactona).

Figura 3.6. Estrutura qumica da -caprolactona e poli(-caprolactona). (a) Estrutura

qumica da -caprolactona na sua forma cclica, com um anel de sete membros e
frmula molecular C6H10O2. (b) Estrutura da poli(-caprolactona) representada pela
sua unidade monomrica, a -caprolactona, com o anel aberto (Sigma-Aldrich,
2010).

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37

A PCL possui baixa temperatura de fuso (55 a 60 C),

hidrofbico e possui cristalinidade em torno de 50 %, alm de possuir
habilidade de formar blendas miscveis com uma grande variedade de
polmeros e ser solvel em uma grande variedade de solventes orgnicos
(ALVES, 2008). Bordes et al. (2010) estudaram a solubilidade de PCLs
de diferentes massas molares em diversos solventes para a substituio
do diclorometano em processos de microencapsulao. Os autores
observaram tambm que a poli(-caprolactona) solvel em diversos
solventes orgnicos.
Tradicionalmente, a PCL tem sido sintetizada por polimerizao
em massa, soluo ou suspenso. Em qualquer destas tcnicas
utilizado um iniciador organometlico na presena ou ausncia de um
co-iniciador contendo hidrognio ativo (CASTRO, 2006).
Estudos sobre a polimerizao por abertura de anel (ciclo-adio)
da -caprolactona (CL) foram concentrados principalmente na
determinao de estruturas de centros ativos e nas relaes entre as
cinticas de propagao e reaes secundrias (como transesterificao
inter
ou
intramolecular)
(SLOMKOWSKI;
SOSNOWSKI;
GADZINOWSKI, 1998 apud CASTRO, 2006). Informaes mais
detalhadas sobre polimerizao da -caprolactona esto no item 3.5.
A PCL sofre degradao microbiana e enzimtica devido s suas
ligaes steres, passveis hidrlise, seguidas de cadeia aliftica. No
entanto, a taxa de degradao bastante lenta (de 2 a 3 anos) em relao
a outros polmeros biodegradveis, como o PHB. A degradao da PCL
foi estudada em diversos meios como gua de rio, de lago e de mar, lodo
de esgoto e solo, indicando que quanto maior a quantidade de
microorganismos no meio, maior a taxa de degradao da PCL. Ainda, a
degradao da PCL em ambientes aerbicos mais rpida do que em
ambientes anaerbicos (ALVES, 2008).
3.4 MERCADO DE BIOPOLMEROS
O mercado dos biopolmeros, exceto o da Goma Xantana, era da
ordem de 60 mil toneladas em 2002 com preo de comercializao de
US$ 4/kg. Este mercado tem taxa de crescimento acima de 20 % ao ano
e custos de produo decrescente para cerca de US$ 2/kg, antevendo um
consumo em 2015 da ordem 1 milho ton/ano, perfazendo um mercado
anual de US$ 2 bilhes. consenso entre as fontes consultadas que o
preo de venda do produto o obstculo principal para sua entrada no

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mercado, apontando-se um preo teto de cerca de US$ 2/kg, ou seja,

cerca de at 50 % superior aos preos de comercializao das resinas
sintticas mais comuns (PE, PP, PET). No obstante, entre os anos 1990
e 2002 houve duplicao da demanda de bioplsticos a cada dois anos
(BORSCHIVER; ALMEIDA; ROITMAN, 2008).
Uma anlise da evoluo do preo destes biopolmeros, levandose em conta a curva de evoluo tecnolgica e do preo do petrleo em
diversos cenrios, demonstrou que os preos de polietileno tereftalato
(PET) e bioplsticos convergiriam para cerca de US$ 1/kg no ano de
2020, caso o petrleo subisse de US$ 25 a US$ 50/barril, cenrio
bastante provvel na atual conjuntura. A Goma Xantana tem um
mercado atual de cerca de US$ 270 milhes e 40 mil ton/ano com taxa
de crescimento acima de 5 % ao ano, perfazendo em 2015 um mercado
de US$ 400 milhes e 80 mil ton/ano) (PRADELLA, 2006).
3.5 LIPASES COMO CATALISADORES
Lipases (glicerol ster hidrolases, E.C. 3.1.1.3) so classificadas
como hidrolases e ocorrem largamente na natureza onde elas catalisam a
hidrlise de steres de gliceris e cadeias longas de cidos graxos,
liberando molculas de lcool e cido. No entanto, foi observado que as
lipases permanecem enzimaticamente ativas em solventes orgnicos e
reagem no sentido inverso (na sntese de steres) (EISENMENGER;
REYES-DE-CORCUERA, 2009).
O interesse industrial por tecnologias enzimticas vem
aumentando gradativamente, principalmente nas reas de engenharia de
protenas e enzimologia em meios no convencionais, as quais
ampliaram consideravelmente o potencial de aplicao das enzimas
como catalisadores em processos industriais (FIAMETTI, 2008).
Apresentam-se como vantagens a alta eficincia na converso de
substratos devido sua alta seletividade para uma dada transformao
orgnica e possibilidade de reciclagem do catalisador. As enzimas tm a
habilidade de serem usadas na maioria dos meios reacionais (exemplos
de meios reacionais alternativos incluem vrios solventes orgnicos,
misturas aquosas, misturas azeotrpicas e fluidos supercrticos), alm de
evitarem o uso de catalisadores potencialmente txicos (JUAIS, 2009).
O reconhecimento dessas vantagens tem proporcionado um aumento
considervel na produo e comercializao de lipases, resultando no
desenvolvimento de tecnologias alternativas consistentes para utilizao
no setor industrial (CASTRO et al., 2006). Certamente, a CAL-B, que

Reviso Bibliogrfica

39

a lipase de Candida antarctica frao B (Figura 3.7), tem sido a lipase

mais amplamente utilizada. Essa enzima tem uma caracterstica
chamada promiscuidade cataltica (COPLEY, 2003), que a habilidade
do stio ativo da enzima em catalisar diferentes transformaes qumicas
(JUAIS, 2009).

Figura 3.7. Estrutura tridimensional da CAL-B (Novozymes S.A., 2010).

Polmeros naturais como os polissacardeos, protenas, polisteres

so sintetizados na natureza por enzimas. O uso de enzimas para sntese
de polmeros in vitro tem sido ativamente estudado na ltima dcada.
Catlise enzimtica tem fornecido uma nova estratgia sinttica para a
produo de polmeros. Por outro lado, os catalisadores organometlicos
derivados de Zn, Al, Sn ou Ge podem ser txicos na natureza. Eles
podem se concentrar na matriz remanescente depois da degradao do
polmero (ALBERTSSON; SRIVASTAVA, 2008).
3.6 POLIMERIZAO POR ABERTURA DO ANEL RING-OPENING
POLYMERIZATION (ROP)
A poli(-caprolactona) e seus copolmeros podem ser sintetizados
quimicamente atravs do mtodo da policondensao e do mtodo da
polimerizao pela abertura do anel de steres cclicos (lactonas,
lactdeos e gligoldeos), o qual permite preparar polisteres de elevada
massa molar.

40

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A utilizao de enzimas como catalisador na polimerizao por

abertura de anel vem se tornando uma alternativa bastante atrativa
(THURECHT et al., 2006; LOEKER et al., 2004), devido a
polimerizao ocorrer em condies mais amenas, principalmente no
que concerne temperatura (BENDER et al., 2010). As lipases tm se
mostrado efetivas na catlise de polimerizaes por abertura do anel de
lactonas, de lactdeos e de carbonatos cclicos (THURECHT et al.,
2006), sendo a Candida antarctica lipase B a enzima mais aplicada
(THURECHT et al., 2006; LOEKER et al., 2004).
Albertsson e Srivastava (2008) reportaram o mecanismo de
polimerizao de lactonas por abertura de anel descrito na Figura 3.8.
Na etapa de iniciao, a lipase faz um ataque nucleoflico no
monmero, formando um complexo ativo com a enzima (EAM). A gua
presente no meio reativo, que se acredita estar presente na enzima, faz
um ataque nucleoflico a esse complexo EAM, liberando a enzima e
originando um polmero de cadeia curta, o cido -hidrxi-carboxlico.
A etapa de propagao nada mais do que o crescimento da cadeia do
cido -hidrxi-carboxlico quando esse polmero faz sucessivos
ataques nucleoflicos nos complexos ativos formados. A polimerizao
se encerra quando duas cadeias de polmeros reagem, tornando-se
inativa (ALBERTSSON; SRIVASTAVA, 2008).

Figura 3.8. Mecanismo de polimerizao de lactonas por abertura do anel. Na etapa

de iniciao a lipase rompe o anel, formando um complexo ativo (EAM). Este
complexo sofre ataque pela gua, liberando a lipase e a unidade monomrica para a
sequncia de reaes. Durante a propagao, o processo se repete at que, na etapa
de terminao, duas unidades monomricas reagem, encerrando a reao
(ALBERTSSON; SRIVASTAVA, 2008).

Reviso Bibliogrfica

41

O mecanismo da polimerizao por abertura do anel tambm foi

reportado por Thurecht et al. (2006) numa abordagem um pouco
diferenciada. Os autores consideram, alm da rota sugerida por
Albertsson e Srivastava (2008), uma rota reacional que conduz
formao de oligmeros de cclicos, conforme a Figura 3.9 a seguir.

Figura 3.9. Esboo do mecanismo da polimerizao enzimtica da -caprolactona e

quatro rotas indicadas por I (formao do complexo ativo), II (formao do
polmero), III (propagao do polmero) e IV (formao de oligmeros cclicos)
(THURECHT et al., 2006). As rotas I, II e III seguem o mesmo desencadeamento do
mecanismo apresentado por Albertsson e Srivastava (2008). A rota IV aquela em
que ocorre a formao de oligmeros quando o grupo ster do complexo ativado e
ocorre a reao entre esse grupo ster e o grupo hidroxila terminal da mesma cadeia,
formando uma cadeia cclica (THURECHT et al., 2006).

3.7 FLUIDOS SUPERCRTICOS

Um fluido supercrtico pode ser definido como uma substncia
para a qual ambas temperatura e presso esto acima dos valores crticos
(Figura 3.10).

42

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Figura 3.10. Diagrama P-T para um fluido puro (COOPER, 2000).

As vantagens do uso de fluidos comprimidos sobre os solventes

lquidos como meios reacionais so bem discutidos na literatura.
Estudos tm demonstrado que muitas reaes podem ser conduzidas em
dixido de carbono supercrtico ou lquido e, em alguns casos, as taxas
de reao e seletividades alcanadas so superiores aos obtidos em fase
gasosa (OLIVEIRA et al., 2006).
Em comparao aos solventes orgnicos usuais (hexano,
diclorometano, benzeno, entre outros), o dixido de carbono supercrtico
no txico, no inflamvel e apresenta risco ambiental
consideravelmente menor. Sua utilizao em processos industriais
apresenta como vantagem a ausncia de traos de solvente no produto
final, a possibilidade de reciclagem do efluente gasoso, a facilidade de
separao do solvente da amostra e propriedades favorveis de
transporte que podem acelerar a transferncia de massa em reaes
enzimticas (ANDRADE, 2008).
O uso de dixido de carbono supercrtico como solvente em
catlise enzimtica de grande interesse devido baixa polaridade do
meio, podendo dissolver preferencialmente compostos hidrofbicos. O
dixido de carbono supercrtico considerado um solvente no polar
(ANDRADE, 2008).
Knez e Habulin (2002) e Oliveira et al. (2006) avaliaram a
estabilidade de lipases em dixido de carbono supercrtico, em propano
e em butano alta presso. A magnitude da presso, temperatura e
tempo de exposio necessrio para afetar fortemente a atividade de

Reviso Bibliogrfica

43

lipases depende da natureza e fonte da enzima e, principalmente, se a

enzima est na sua forma nativa ou imobilizada (OLIVEIRA et al.,
2006). Tambm foi observado que a maior perda enzimtica ocorreu
para o CO2 supercrtico. Tal fato foi atribudo s interaes enzimasolvente, conduzindo formao de complexos covalentes com grupos
amino livres na superfcie da enzima para formar carbamatos, que
resultaria na remoo de carga dos resduos de histidinas, e assim
poderia contribuir para a perda de atividade da enzima (OLIVEIRA et
al., 2006). Entretanto, Knez e Habulin (2002) observaram que
determinadas lipases, como lipases de Candida antarctica, Candida
rugosa e Pseudomonas fluorecens, apresentam alta atividade e so
estveis em CO2 supercrtico.

4 MATERIAIS E MTODOS
As reaes de polimerizao alta presso em meio enzimtico,
as anlises por GPC (Gel Permeation Cromatography) para a
determinao da massa molar mdia numrica ( ) e ponderada ()
dos polmeros produzidos, e por consequncia o clculo do ndice de
polidispersividade (); e os experimentos para a determinao da
atividade enzimtica foram realizados no Laboratrio de
Termodinmica Aplicada da Universidade Regional Integrada, Campus
de Erechim/RS.
4.1 MATERIAIS
A lactona utilizada para as reaes de polimerizao era a caprolactona com 97 % de pureza, adquirida da Sigma-Aldrich com
especificaes indicadas na Tabela 4.1.
Tabela 4.1. Caractersticas da lactona estudada.

Lactona

-caprolactona

Frmula
molecular

Massa
molecular
(g/gmol)

C6H10O2

114,14

Estrutura
molecular

Pureza
(%)

97

Fonte: Sigma-Aldrich, 2010.

O catalisador empregado era a lipase comercial imobilizada

Candida antarctica, a Novozym 435, fornecida pela Novozymes S/A e
ilustrada na Figura 4.1. O dixido de carbono (99,9 % de pureza)
utilizado era adquirido da White Martins S/A. A atividade da Novozym
435 medida antes das reaes era de 9661,72 U/g.

46

Materiais e mtodos

Figura 4.1. Amostra da enzima utilizada nas reaes, lipase comercial imobilizada
Candida antarctica, a Novozym 435, fornecida pela Novozymes S/A.

Para a determinao da atividade enzimtica era utilizado cido

lurico (Vetec, 98 % de pureza), lcool n-proplico (Synth, 99,5 % de
pureza), acetona (Quimex, 99,5 % de pureza), lcool etlico (Quimex,
99,5 % de pureza) e hidrxido de sdio (Quimex 99,5 % de pureza).
Para as anlises cromatogrficas por GPC (Gel Permeation
Chromatography) era utilizado tetraidrofurano (THF) (Vetec, 99 % de
pureza) e padres de poliestireno (Sigma-Aldrick, Fluka) de 500, 4000,
30000, 70000, 150000, 200000, 500000 e 1 milho g/gmol.
4.2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

4.2.1 Aparato experimental das reaes de polimerizao

O aparato experimental dos ensaios de polimerizao alta
presso est esquematizado na Figura 4.2 e a vista geral da unidade
experimental na Figura 4.3. A montagem e o modo de operao da
unidade de reao foram baseados nos trabalhos de Esmelindro et al.
(2008) e Fiametti (2008). O sistema composto de um reator
encamisado de 50 mL de ao inoxidvel (Parr Instrument Company,
model 4843, Moline, IL, EUA) com agitao mecnica, um cilindro de
dixido de carbono e uma bomba seringa (Isco Inc., model 260D,
Lincoln, EUA) conectada a um banho termosttico.

Materiais e mtodos

47

Figura 4.2. Diagrama esquemtico do aparato experimental.

Fonte: Esmelindro et al. (2008).

No diagrama esquemtico da unidade de reao (Figura 4.2),

cada componente do sistema indicado por siglas conforme apresentado
a seguir: banho termosttico (B), cilindro de dixido de carbono (A),
bomba seringa (SP), reator (R), indicador de temperatura (TI), indicador
de presso (PI), controlador do sistema de reao (RC), tubo coletor
(C), vlvula de reteno (CV) e vlvulas esfera (V1, V2, V3 e V4).
No procedimento experimental, inicialmente, a bomba (SP) era
carregada com dixido de carbono proveniente do cilindro reservatrio
(A) e o banho termosttico (B) ligado para a manuteno da temperatura
da bomba em 5 C. Media-se a massa de -caprolactona, da enzima e da
gua em balana analtica (Ohaus Analytical Standard, 0,0001 g de
preciso) em quantidades especificadas no planejamento experimental e
eram adicionados ao reator (R). A -caprolactona era utilizada sem
purificao prvia, medindo-se apenas o teor de gua pelo mtodo de
Karl-Fischer (Mettler Toledo Model DL 50).
Em todos os experimentos a enzima era previamente ativada em
estufa a 40 C por 1 hora por ser a condio que possibilita maior
atividade enzimtica (FEIHRMANN, 2005). Em seguida, procedia-se o
fechamento do reator (R), a conexo do sensor de temperatura, do
agitador e da camisa de aquecimento. Depois de o sistema estar
totalmente fechado, iniciava-se a pressurizao da bomba de 10 em 10
bar at a presso desejada. Enquanto isso, ajustava-se a temperatura do
reator no controlador da reao (RC). O prximo passo consistia na

48

Materiais e mtodos

pressurizao do reator pela abertura da vlvula de alimentao (V2),

mantendo o fluxo de dixido de carbono baixo, at que todo o sistema
estivesse pressurizado, ou seja, fluxo zero. As quantidades de CO2 e caprolactona necessrias para preencher o reator e manter a frao
mssica de 4:1 de dixido de carbono:-caprolactona eram previamente
calculadas levando em considerao as densidades das substncias
puras.

Figura 4.3. Vista geral da unidade de reao. Da esquerda para a direita: a bomba
seringa, o reator encaixado na manta de aquecimento e o controlador do reator.

Simultaneamente pressurizao, ajustava-se a velocidade de

agitao, gradativamente, at a velocidade de interesse. Aps a unidade
de reao estar em funcionamento nas condies desejadas, iniciava-se o
tempo de reao, que era de 2 horas para todos os ensaios. Este tempo
de duas horas foi escolhido para proporcionar uma rpida resposta das
condies para polimerizao. Vale ressaltar que, durante o processo de
pressurizao, era verificado se havia ocorrncia de vazamentos. Aps o
tempo de reao, dava-se incio aos procedimentos de despressurizao.
Primeiramente, a bomba era despressurizada e em seguida, a camisa de
aquecimento era removida e diminuia-se a velocidade de agitao. Para
a despressurizao do reator, abria-se a vlvula de alvio (V3)

Materiais e mtodos

49

vagarosamente. A sbita abertura da vlvula de alvio causava a

danificao de componentes do aparato experimental. A liberao do
solvente na condio em que o sistema estava homogneo dentro do
reator, conduzia a liberao da poli(-caprolactona) junto com o dixido
de carbono. Com a diminuio da presso e, consequentemente da
temperatura, a policaprolactona endurecia e obstrua as conexes e
vlvulas, impedindo a despressurizao. O problema era evitado com a
utilizao de banho de gelo para o resfriamento do reator antes da
abertura da vlvula de alvio (V3). Seguindo esse procedimento, o
sistema atingia presses e temperaturas em que o sistema era imiscvel,
evitando que a poli(-caprolactona) fosse evacuada junto com o dixido
de carbono. Aps a total despressurizao do sistema, os sensores de
temperatura e o agitador eram desconectados, possibilitando a abertura
do reator. As amostras eram retiradas do reator com auxlio de uma
esptula e armazenadas em frascos de amostragem com a massa
previamente medida. Todas as reaes eram realizadas na razo mssica
entre solvente e monmero prximas a 4:1. A quantidade mssica da
enzima era medida em relao massa do monmero utilizada em cada
ensaio assim como a de gua, nos experimentos que incluram gua.
4.2.2 Determinao da atividade enzimtica
A atividade enzimtica era avaliada seguindo metodologia
descrita em Oliveira et al. (2006), Fiametti (2008) e Krger (2010). A
quantificao ocorria por meio da reao de esterificao entre o cido
lurico e o lcool n-proplico na razo molar 3:1, temperatura de 60C
com 5% (m/m) de enzima. A reao era conduzida em um reator de
vidro aberto com agitao magntica cuja temperatura era mantida a
60C com o auxlio de um banho termosttico (Figura 4.4). Eram
retiradas alquotas de 150 L, em triplicata, do meio reacional no tempo
zero e aps 40 minutos de reao e eram diludas em 20 mL da soluo
acetona/etanol 1:1. A quantidade de cido lurico consumido era
determinada pela titulao de hidrxido de sdio 0,01N. Uma unidade
de atividade (U) determinada como a quantidade de enzima que
conduz ao consumo de 1mol de cido lurico por minuto nas condies
experimentais descritas.
A determinao da atividade enzimtica da Novozym 435 de
cada reao era realizada em triplicata.

Materiais e mtodos

50

Figura 4.4. Sistema composto de um banho termosttico e reatores de vidro

utilizados para a determinao da atividade enzimtica.

lipase:

A seguinte equao foi empregada para o clculo da atividade da

(

(4.1)

onde:
AE = atividade enzimtica (mol de cido/min.ME ou U/g);
Va = volume de hidrxido de sdio gasto na titulao da amostra no
tempo zero (mL);
Vb = volume de hidrxido de sdio gasto na titulao da amostra aps o
tempo t (mL);
M = molaridade da soluo de hidrxido de sdio (mmol/mL);
Vf = volume final do meio reacional (mL);
t = tempo de reao (min);
ME = massa de enzima utilizada na reao (g);
Ve = volume da alquota do meio reacional retirada para titulao (mL);
1U = 1 mol de cido/minuto.
Para o clculo da perda ou ganho da atividade enzimtica, a
seguinte relao era utilizada:

Materiais e mtodos

51

( )

(4.2)

4.2.3 Anlises por GPC (Gel Permeation Chromatography)

Para a determinao da massa molar mdia numrica () e
ponderada () e o clculo do ndice de polidispersidade ()
eram utilizados os valores obtidos das anlises de GPC (Gel Permeation
Chromatography) para os polmeros resultantes das reaes
enzimticas. Essa tcnica, tambm chamada de SEC (Size Exclusion
Chromatography), consiste no fracionamento das cadeias polimricas de
um polmero. O princpio de fracionamento da GPC envolve a separao
do polmero a ser analisado em nmero muito grande de fraes com
diferentes massas molares. Essa separao ocorre quando uma soluo
bombeada de uma coluna recheada com um gel poroso. Este gel possui
uma porosidade de dimenses conhecidas, permitindo s cadeias
polimricas a entrarem nos poros, excluindo as cadeias maiores que
ento contornam as partculas. Ao penetrarem nestes poros, as cadeias
menores percorrem um caminho maior que as cadeias maiores,
atrasando-se em relao a estas. Ao final da coluna de separao,
cadeias de massa molar maior sero eludas primeiro, sendo seguidas
pelas cadeias menores (CASTRO, 2006).
Para as anlises cromatogrficas era utilizado um sistema
modular HPLC AGILENT 1100 Series (Califrnia, EUA) (Figura 4.5)
com injetor automtico (G1313A ALS), degaseificador (DEGASSER
G1379A), bomba quaternria (G1311A), operando em modo isocrtico,
trocador de calor (G1316A) e detector por ndice de refrao (G1362A
RID). A coluna utilizada era a Bimodal Agilent Zorbax PSM 6,2 x 250
mm. O volume de amostra injetado era de 20 L e a fase mvel utilizada
era tetraidrofurano (THF) (Vetec, 99 % de pureza) com fluxo de 0,5
mL/min e temperatura fixa da coluna de 30 C. A calibrao era
realizada com padres de poliestireno. Todas as solues dos padres,
assim como o THF utilizado, eram analisados por HPLC (High
Performance Liquid Chromatography) nas mesmas condies das
determinaes das amostras e as impurezas no apresentaram
interferncias significativas para a deteco em ndice de refrao.

Materiais e mtodos

52

Figura 4.5. Cromatgrafo

nas anlises por GPC.

HPLC

AGILENT

1100

Series

utilizado

4.2.4 Planejamento experimental

A tcnica de planejamento de experimentos uma ferramenta
estatstica que permite determinar as variveis que exercem maior
influncia em um determinado processo, assim como avaliar possveis
inter-relaes entre variveis de um processo. Alm disto, esta
ferramenta tambm permite otimizar o sistema em estudo, com o
objetivo de minimizar ou maximizar uma resposta. A principal
vantagem da utilizao desta ferramenta a reduo do nmero de
experimentos e a consequente reduo de custos (RODRIGUES e
IEMMA, 2005).
Para avaliar a influncia das variveis de processo na produo
enzimtica de poli(-caprolactona) em CO2 alta presso foram
realizados dois planejamentos fatoriais, totalizando 22 experimentos. O
primeiro planejamento experimental foi o fatorial fracionado 24-1 e o
segundo foi um planejamento fatorial completo 23. As variveis de
processo e os nveis empregados em cada varivel esto na Tabela 4.2.
O binmio temperatura/presso foi investigado de forma a manter a
densidade do dixido de carbono aproximadamente constante (0,53

Materiais e mtodos

53

g/cm3). A quantidade de enzima foi calculada em relao massa do

monmero utilizada, assim como a quantidade de gua adicionada ao
reator.
Os nveis das variveis investigadas no primeiro planejamento
foram baseados em experimentos realizados na literatura (LOEKER et
al., 2004). As altas presses (83, 114, 145, 150, 175 e 200 bar)
correspondem a regies de homogeneidade entre o solvente e o
monmero estudadas por Bender et al. (2010). Um teste adicional foi
realizado junto ao primeiro planejamento experimental com o propsito
de observar o efeito do aumento da presso de 145 para 180 bar.
O segundo planejamento foi elaborado a partir das observaes e
do resultado da anlise estatstica do primeiro planejamento. Alm
disso, no segundo planejamento a temperatura e a agitao foram
mantidas constantes em 65 C (temperatura tima da enzima) e 200
rpm. Os resultados foram analisados com o auxlio do software
Statistica 8.0 Statsoft Inc.
Tabela 4.2. Nveis das variveis investigadas nos planejamentos
experimentais.

Variveis
Binmio Temperatura (C)/Presso (bar)a
Quantidade de enzima (% m/m)
Quantidade de gua adicionada (% m/m)
Agitao (rpm)
Variveis
Presso (bar)
Quantidade de enzima (% m/m)
Quantidade de gua adicionada (% m/m)
a

Primeiro planejamento
experimental
Nveis
-1
0
+1
35/83
50/114
65/145
1
5,5
10
0
1
2
200
300
400
Segundo planejamento
experimental
Nveis
-1
0
+1
150
175
200
5
10
15
0
2
4

O binmio temperatura/presso foi escolhido para manter a densidade do CO 2

aproximadamente constante em 0,53 g/cm3, com exceo do teste adicional em que a
densidade era 0,66 g/cm3.

5 RESULTADOS E DISCUSSES
Esta seo apresenta os resultados obtidos da produo de poli (caprolactona) em dixido de carbono alta presso catalisada pela
lipase comercial Novozym 435. A discusso ser focada nos resultados
da anlise por GPC e na influncia das variveis de processo na massa
molar dos polmeros obtidos.
5.1 REAES DE POLIMERIZAO
A Tabela 5.1 mostra as condies de processo e os resultados das
anlises por GPC para a massa molar numrica e ponderada e o ndice
de polidisperso (IP) obtidos para o primeiro planejamento
experimental. A Tabela 5.1 apresenta tambm o resultado do balano de
massa ou massa recuperada calculada com o material coletado do reator.

Resultados e discusses

35/(83 3)
65/(145 3)
35/(83 3)
65/(145 3)
35/(83 3)
65/(145 3)
35/(83 3)
65/(145 3)
50/(114 3)
50/(114 3)
50/(114 3)

65/180

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

12

0,66

Densidade
do CO2
(g/cm3)
0,56
0,53
0,56
0,53
0,56
0,53
0,56
0,53
0,54
0,54
0,54
10

Teste adicional
200

79,22

7419,6

14550,0

gua
Massa
Enzima
Agitao
Mn
Mw
adicionda
recuperada b
(m/m%)
(rpm)
(g.gmol-1) (g.gmol-1)
(m/m%)
(%)
1
0
200
n.p.d
-c
-c
d
1
0
400
n.p.
123,5
125,6
10
0
400
n.p.d
-c
-c
10
0
200
100
3893,2
7639,6
1
2
400
n.p.d
-c
-c
d
1
2
200
n.p.
125,1
126,6
10
2
200
96,19
1252,6
1867,7
10
2
400
92,77
2105,6
3129,2
5,5
1
300
91,16
1050,4
1176,5
5,5
1
300
93,93
2064,5
3023,2
5,5
1
300
93,45
2555,9
3957,1

1,96

-c
1,02
-c
1,96
-c
1,01
1,49
1,49
1,12
1,46
1,55

IP

O binmio temperatura/presso est relacionado densidade aproximadamente constante do CO2. b A massa recuperada a massa do produto obtido aps
a polimerizao calculada pela relao: massa recuperada = [(massa do produto de reao/massa de entrada (monmero + enzima + gua (se
adicionada))]x100. c Amostra insuficiente para anlise ocasionado por perda devido a problemas na despressurizao. d n.p.: no ocorreu a
polimerizao.

Binmio T/P a
(C)/bar

Experimento

Tabela 5.1. Resultados do primeiro planejamento para a produo de poli(-caprolactona) em CO2 alta presso
catalisada por lipase.

56
56

Resultados e discusses

57

O polmero de maior massa molar obtido foi o experimento 12

(7419,6 g/gmol). O experimento foi um teste adicional da variao da
presso do experimento 4 de 145 para 180 bar, para verificar o que
ocorreria com a massa molar do polmero obtido. A condio 4 foi
escolhida por ser o polmero de maior massa molar do planejamento
(3893,2 g/gmol, Figura 5.1).

Figura 5.1. Poli(-caprolactona) produzida no primeiro planejamento experimental a

65 C, 145 bar, 10 % de enzima, 200 rpm de agitao e sem adio de gua.

J nos experimentos 2 e 6 no houve formao de polmero, o

produto de reao obtido apresentou-se como um lquido de aspecto
similar ao monmero. Alm disso, a baixa massa molar (123,5 e 125,1
g/gmol, respectivamente) comparvel com a massa molar da caprolactona (114,14 g/gmol).
As massas recuperadas nas reaes, apresentadas na Tabela 5.1,
ficaram numa mdia de 94 % em relao massa de entrada
(monmero, enzima e, em alguns experimentos, gua). Esse resultado
indica que a perda foi mnima, visto os problemas encontrados na
despressurizao do sistema (vide item 4.2.1). Alm disso, esse
resultado tambm indicou que o rendimento das reaes foram altos nas
condies avaliadas, ou seja, houve maior converso do monmero. O
alto rendimento implicou na formao de maior nmero de cadeias
polimricas de diferentes tamanhos, aumentando a polidisperso. O
fator que tambm contribui para polidispersividades mais altas, alm do
alto rendimento, so as reaes que ocorrem paralelamente s reaes

Resultados e discusses

58

para a formao da poli(-caprolactona) com a formao de oligmeros

cclicos, reportado no item 3.6).
Em relao massa molecular dos polmeros produzidos, os
obtidos neste trabalho foram menores do que aqueles obtidos por Loeker
et al. (2004). Um fator que pode ter influenciado nesta menor eficincia
o tempo de reao. Enquanto neste trabalho foi utilizado um tempo
total de 2 horas de reao, os autores citados empregaram ensaios com
tempo de reao de 6 a 72 horas. O melhor resultado alcanado por eles
foi em reaes de 24 horas com a obteno de um polmero com massa
molar de 30000 g/gmol. Este tempo de duas horas foi escolhido para
proporcionar uma rpida resposta das melhores condies para
polimerizao, j que foi observado por outros autores (BERGEOT et
al., 2004) que em reaes acima de 2 horas, o rendimento decresce e a
polidispersividade aumenta por causa da formao de oligmeros,
conforme citado no pargrafo anterior. No entanto, tempos mais longos
de reao podem ser estudados atravs de cinticas a serem realizadas
por outros colaboradores de nosso grupo de pesquisa.
A respeito da influncia das condies de processo na formao
de PCL quanto massa molar foi realizada uma anlise estatstica
atravs do diagrama de Pareto, em que os nveis foram avaliados para o
intervalo de confiana de 90 % (p = 0,10). O diagrama de Pareto (Figura
5.2) mostra que apenas a quantidade de enzima foi estatisticamente
significante para a faixa de condies de processo estudadas.

(2)Enzima

2,444035

(1)Temp/Presso

1,642231

Interao entre 1 e 2

1,642231

(4)Agitao

-1,03663

Interao entre 1 e 3

-1,03549
-1,03549

Interao entre 1 e 4

-,234828

(3)H2O

-,233691

p = 0,10
Estimativa de Efeito Padronizado (Valor Absoluto)

Figura 5.2. Diagrama de Pareto para a massa molar mdia numrica do primeiro
planejamento experimental com nvel de significncia de 90 %.

Resultados e discusses

59

Loeker et al. (2004) observaram que temperaturas mais baixas

no favorecem a formao de PCL de cadeias grandes. Os polmeros de
maiores massas molares obtidos por tais autores foi a 50 e 65 C e os de
menores, a 35 C. Os polmeros de maiores massas molares
(experimento 4 com 3893,2 g/gmol e o experimento 12 com 7419,6
g/gmol) obtidos nesse estudo tambm foram 65C, estando de acordo
com a literatura. Bergeot et al. (2004) tambm verificaram um aumento
na massa molar com o aumento da temperatura.
A -caprolactona praticamente insolvel em dixido de carbono
a baixas presses, assim, o conhecimento do diagrama de fases entre caprolactona e dixido de carbono fundamental para saber a regio de
solubilidade desse sistema. Para as reaes de polimerizao, trabalhar
dentro da regio de solubilidade permite que haja uma maior interao
entre o monmero e a espcie iniciadora da reao, permitindo o
monmero se difundir rapidamente para o stio ativo no crescimento das
cadeias do polmero (LOEKER et al., 2004). Bender et al. (2010)
investigaram o equilbrio de fases de diversos sistemas de lactonas em
dixido de carbono em ampla faixa de presso. A Figura 5.3 mostra o
diagrama de fases para o sistema -caprolactona e dixido de carbono
obtido pelos autores para diferentes condies de temperatura, presso e
frao molar de CO2.

Figura 5.3. Diagrama P-x-y para o sistema binrio CO2 (1) + -caprolactona (2)
(BENDER et al., 2010).

O grfico, na Figura 5.3, mostra as regies de solubilidade, que

so as regies indicadas acima de cada isoterma e os tipos de transio
de fases envolvidos. Ainda no grfico, possvel observar que medida
que as isotermas e as fraes de CO2 aumentam, a presso de transio

60

Resultados e discusses

tambm aumentada devido a um aumento na energia interna com o

aumento da temperatura. Logo, significa que necessria uma presso
maior para que o sistema apresente-se totalmente miscvel (BENDER et
al., 2010).
A discusso detalhada sobre o comportamento de fases de caprolactona em CO2 no o foco principal desse trabalho, contudo
pode ser encontrada nos trabalhos de Bender et al. (2010), Xu et al.
(2002) e Bergeot et al. (2004).
As presses adotadas neste trabalho (83, 114, e 145 bar no
primeiro planejamento, 150, 175 e 200 bar no segundo planejamento e
para o teste adicional, 180 bar) foram escolhidas de forma que a caprolactona seja solvel em dixido de carbono. A regio de
miscibilidade entre -caprolactona e o dixido de carbono supercrtico
alcanada em presses mais elevadas (acima de 80 bar). Embora a
miscibilidade do sistema seja favorvel ocorrncia da polimerizao
por facilitar a interao entre o solvente e o monmero, ela no
determinante. Um exemplo disso que os experimentos 1, 3 e 5 foram
realizados numa presso de 83 bar e no foi verificada formao de
polmero. No entanto, as reaes que produziram polmero de maior
massa molar foram aquelas conduzidas em presses mais elevadas, de
114 e 145 bar. O aumento do rendimento e da massa molar do polmero
obtido para o experimento 12 com o aumento da presso de 145 bar para
180 bar tambm foi observado.
Essa no polimerizao dos experimentos 1, 3 e 5 pode estar
relacionada s outras condies de processo e interao entre elas. Os
fatores que determinam a formao de polmero ou no, ainda alvo de
investigao dos grupos de pesquisa. Thurecht et al. (2006) relataram
que condies timas para a polimerizao enzimtica da -caprolactona
em dixido de carbono supercrtico so alcanadas pela descoberta do
balano entre o poder de solubilizao do solvente e a melhor
temperatura para a atividade da enzima.
Loeker et al. (2004) e Bergeot et al. (2004) tambm obtiveram
PCLs de maiores massas molares em presses mais elevadas.
Os resultados da Tabela 5.1 mostraram que a formao de PCL
de massas molares maiores (3893,2 g/gmol no experimento 4 e 7419,6
g/gmol no experimento 12 ocorreu quando foi utilizado 10 % (m/m) de
enzima. O diagrama de Pareto, na Figura 5.2, confirma esse resultado,
por indicar a quantidade da enzima como uma varivel significativa
(para o nvel de 90 % de significncia). Loeker et al. (2004) tambm

Resultados e discusses

61

encontraram massas molares maiores (35000 g/gmol) com a utilizao

de 10 % (m/m) de enzima.
O contedo de gua na polimerizao de -CL tambm foi alvo
de investigao. De acordo com o mecanismo apresentado no trabalho
de Albertsson e Srivastava (2008), a gua participa como iniciador da
reao ao fazer um ataque nucleoflico ao complexo formado quando a
lipase age no monmero. Dessa forma, a polimerizao ir responder de
forma diferente de acordo com a quantidade de gua adicionada.
Segundo Thurecht et al. (2006), existe uma relao inversa entre a
massa molar e quantidade de gua, e quantidades mais baixas de gua
conduzem a formao de polmeros de massas molares maiores. Neste
trabalho, os polmeros de maiores massas molares foram obtidos sem
adio de gua (experimento 4 e 12), enquanto que os polmeros de
massas molares menores tiveram adio de gua, com quantidades
indicadas na Tabela 5.1. Thurecht et al. (2006) tambm obtiveram
polmero de maior massa molar quando no houve adio de gua no
sistema.
Os trabalhos disponveis na literatura sobre polimerizao de
poli(-caprolactona) alta presso em meio enzimtico no relataram
observaes relacionadas velocidade de agitao, rendimento e massa
molar.
Como o diagrama de Pareto indicou a significncia de apenas
uma varivel (nvel de 90 % de significncia) no primeiro planejamento,
a quantidade de enzima, os nveis do segundo planejamento foram
deslocados na tentativa de observar as outras variveis que possam ser
estatisticamente significativas. Nesse planejamento, a temperatura foi
fixada em 65 C por estar na regio tima da enzima (aproximadamente
70 C de acordo com as especificaes tcnicas fornecida pela
Novozymes S/A). Alm disso, a agitao tambm foi fixada (200 rpm)
para evitar a possibilidade de quebra das partculas de polmero em
formao em agitaes mais altas. Alm disso, no foi verificada relao
entre a velocidade de agitao e produo de polmero.
A Tabela 5.2 mostra as condies de processo e os resultados das
anlises por GPC para massa molecular numrica e ponderada e o ndice
de polidisperso (IP) obtidos para os ensaios do segundo planejamento
experimental. A Tabela 5.2 apresenta tambm o resultado do balano de
massa ou massa recuperada calculada com o material coletado do reator.

Resultados e discusses

0,55
0,69
0,55
0,69
0,55
0,69
0,55
0,69
0,64
0,64
0,64

150 3
200 3
150 3
200 3
150 3
200 3
150 3
200 3
175 3
175 3
175 3

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

5
5
15
15
5
5
15
15
10
10
10

Enzima
(m/m%)
0
0
0
0
4
4
4
4
2
2
2

gua
adicionada
(m/m%)
Mn
(g.gmol-1)
71,2
1394,4
1463,3
123,9
80,0
1148,0
1099,5
82,0
-c
1263,4

Massa
recuperada (%)
n.pb
86,78
n.pb
92,94
n.pb
n.pb
76,59
84,83
n.pb
n.pb
88,27

72,6
1831,9
2046,5
125,7
81,3
1361,7
1195,1
83,80
-c
1463,3

Mw
(g.gmol-1)

a
Temperatura: 65 C e agitao: 200 rpm. b n.p.: no ocorreu a polimerizao. c Amostra insuficiente para anlise ocasionado por perda devido a
problemas na despressurizao do sistema.

Densidade
do CO2
(g/cm3)

Presso
(bar)

Experimento

1,02
1,31
1,39
1,01
1,02
1,19
1,09
1,02
-c
1,16

IP

Tabela 5.2. Resultados do segundo planejamento experimental da produo de policaprolactona em CO2 alta
presso catalisada por lipasea.

62
62

Resultados e discusses

63

O diagrama de Pareto para o segundo planejamento experimental

(Figura 5.4) no mostrou nenhuma varivel significante dentro da faixa
de estudo para o nvel de 90 % de significncia.

Interao entre 1 e 3

-1,31245

(1)Presso

1,225953

(2)Enzima

,9906014

Interao entre 2 e 3

(3)H2O

Interao entre 1 e 2

,9225423

-,258615
-,258615

,0283189

p = 0,10
Estimativa de Efeito Padrnizado (Valor Absoluto)

Figura 5.4. Diagrama de Pareto para a massa molar mdia numrica do segundo
planejamento (nvel de 90 % de significncia).

Para este segundo planejamento, a maior massa molar foi a obtida

no experimento 4, Figura 5.5, com 1463,3 g/gmol para 200 bar, 15 % de
enzima, nenhuma adio de gua, agitao de 200 rpm e temperatura de
65 C. Observa-se que o aumento da presso e da quantidade de enzima
gerou polmeros de massas molares menores em relao ao primeiro
planejamento. A princpio, isso parece contrariar a discusso realizada
acerca do planejamento anterior em que polmeros de maiores massa
molares foram produzidos em presses mais altas.
Isso pode ser elucidado com a observao do contedo de gua
inicial do monmero utilizado em cada um dos planejamentos. No
segundo planejamento, o contedo de gua do monmero era de 2,5 %
enquanto no planejamento anterior era de 1,5 %. A gua, alm de atuar
como um iniciador, tem um efeito deletrio na produo de poli(caprolactona), ou seja, ela interrompe a polimerizao, impedindo a
propagao da cadeia e a obteno de polmero de massa molar menor
devido formao de polmeros de cadeias mais curtas (Thurecth, et al.,
2006). O item 3.6 reporta informaes mais detalhadas a respeito do
mecanismo de reao. A polidispersidade apresentou valores baixos,
confirmando a formao de polmeros de cadeias similares e

64

Resultados e discusses

consequentemente de massas molares mdias menores.

Figura 5.5. Poli(-caprolactona) produzida no segundo planejamento experimental a

65 C, 200 bar, 15 % de enzima, 200 rpm de agitao e sem adio de gua.

As massas recuperadas ficaram numa mdia de 86 % em relao

s massas de entrada (monmero, enzima e, em alguns experimentos,
gua). Ao comparar com as massas recuperadas no primeiro
planejamento (94 %), verificado que no segundo planejamento houve
uma maior perda (14 %) do que no primeiro planejamento (6 %). Os
motivos para a maior perda no segundo planejamento esto relacionados
principalmente ao problema da despressurizao do reator. Esse
resultado tambm indicou que o rendimento das reaes foi alto nas
condies avaliadas. As baixas massas molares obtidas justificam o alto
rendimento das reaes por no apresentarem uma relao linear entre si
(Thurecht et al. 2006). O mecanismo proposto no trabalho de Thurecht
et al. (2006) (Figura 3.9) sugere uma possvel explicao para essa no
linearidade entre a massa molar e converso do monmero: a existncia
de outras reaes que no conduzem a formao do polmero. Isso
significa que durante a reao ocorre a converso do monmero, mas
essas converses no conduzem necessariamente formao de
polmeros de altas massas molares. Como mostrado no mecanismo de
Thurecht et al. (2006), a converso do monmero pode conduzir tanto a
formao de cadeias polimricas grandes como de oligmeros.
5.2 ATIVIDADE ENZIMTICA
Os resultados das anlises de atividade enzimtica, determinada
conforme descrito no item 4.2.2, so apresentados nas Tabelas 5.3 e 5.4,

Resultados e discusses

65

que correspondem ao primeiro e segundo planejamentos experimentais,

respectivamente.
No foram encontrados na literatura estudos relacionados
atividade enzimtica aps a produo de policaprolactona em CO2
supercrtico catalisada por lipase. Observou-se, no entanto, trabalhos
que avaliaram a atividade de lipases em diferentes fluidos alta presso,
como o de Oliveira et al. (2006), de Eisenmenger e Reyes-De-Corcuera
(2009), Knez e Habulin (2002) e Feihrmann (2005).
A atividade da Novozym 435 medida antes das reaes foi de
9661,72 U/g. A partir da possvel discutir se a atividade da enzima
diminuiu, aumentou ou se permaneceu a mesma, uma vez que atividade
enzimtica pode ser consideravelmente afetada pela temperatura e
presso (OLIVEIRA et al. 2006; KNEZ e HABULIN, 2002).
Oliveira et al. (2006) mostraram que quando a Novozym 435
submetida ao dixido de carbono a altas presses ocorre perda da
atividade numa mdia de 5,2 %. Segundo os autores, essa perda pode
estar diretamente relacionada s interaes enzima-solvente, conduzindo
a formao de complexos covalentes com grupos amino livre na
superfcie da enzima para formar carbamatos, que resultaria na remoo
de carga da histidina, e assim poderia contribuir para a perda da
atividade enzimtica. Isso justifica a perda da atividade enzimtica
detectada nas reaes 2, 4, 6, e 12 do primeiro planejamento deste
trabalho (Tabela 5.3) devido exposio presso de 145 bar, e 180 bar
para o experimento 12, por 2 horas. O ensaio 10 apresentou atividade
enzimtica discordante dos demais pontos centrais (9 e 11). Os
experimentos 9 e 11 apresentaram perda da atividade (13,57 % e 3,18
%, respectivamente) enquanto que o experimento 10 apresentou ganho
de atividade enzimtica (16,58 %). Ao checar o desvio padro da
atividade enzimtica para este experimento (11263,98 2198,83),
possvel dizer que houve erro da anlise, ocasionando a interpretao
inadequada do resultado.

0,56
0,53
0,56
0,53
0,56
0,53
0,56
0,53
0,54
0,54
0,54
0,66

35/83

65/145

35/83

65/145

35/83

65/145

35/83

65/145

50/114

50/114

50/114

65/180

10

11

12

10

5,5

5,5

5,5

10

10

10

10

Enzima
(m/m%)

gua
adicionada
(m/m%)

200

300

300

300

400

200

200

400

200

400

400

200

Agitao
(rpm)

-b

751,634 670,14

9354,07 33,83

11263,98 2198,83

8350,61 323,37

12453,25 839,05

7783,42 1914,33

6713,29 1661,45

Perda de 92,22

Perda de 3,18

Ganho de 16,58

Perda de 13,57

Ganho de 28,89

Perda de 19,44

Perda de 30,52

-b

Perda de 24,62

7283,11 269,07

Perda de 18,31

-b

-b
7892,31 258,81

Perda/Ganho de
atividade (%)

Atividade
enzimtica (U/g)

A perda ou ganho de atividade enzimtica considera a atividade enzimtica da Novozym 435 medida antes das reaes, 9661,72 U/g, e a relao
indicada no item 4.2.2, equao 4.2. b Amostra insuficiente para anlise.

Densidade
do CO2
(g/cm3)

Binmio
T/P
(C)/bar

Experimento

Resultados e discusses

Tabela 5.3. Atividade enzimtica aps as reaes realizadas no primeiro planejamento experimental.

66
66

Resultados e discusses

67

O diagrama de Pareto apresentado na Figura 5.6 mostra que

nenhuma varivel foi significativa para a faixa de condies estudadas.
A agitao e gua mostraram uma tendncia maior a influenciar o
processo do que as demais variveis.

(4)Agitao

1,299442

(3)H2O

1,238

Interao entre 1 e 4

1,126714

Interao entre 1 e 2

1,107214

(1)Temp/Presso

0,8751759
0,8751759

(2)Enzima

0,8533986
0,8533986

Interao entre 1 e 3

0,2870889
0,2870889

p = 0,10
Estimativa de Efeito Padronizado (Valor Absoluto)

Figura 5.6. Diagrama de Pareto para a atividade enzimtica do primeiro

planejamento no nvel de 90 % de significncia.

Na Tabela 5.4 esto apresentados os resultados de atividade

enzimtica aps as reaes do segundo planejamento experimental.

0,69
0,55
0,69
0,55
0,69
0,55
0,69
0,64
0,64
0,64

200

150

200

150

200

150

200

175

175

175

10

11
b

0,55

150

10

10

10

15

15

15

15

Enzima
(m/m%)

gua adicionada
(m/m%)

8347,02 2462, 09

Perda de 13,61

-c
-

Perda de 84,57
c

Perda de 66,35

Ganho de 7,10

Perda de 95,03

Perda de 94,47

1490,85 271,63

3251,23 673,84

10347,59 365,53

480,45 107,24

534,67 82,98

7381,74 231,22

Perda de 23,60

-c

Perda de 86,70

Perda de 95,24

Perda/Ganho de
atividade (%)

1284,92 237,02

460,32 134,69

Atividade
enzimtica (U/g)

Temperatura: 65C e agitao de 200 rpm. A perda ou ganho de atividade enzimtica considera a atividade enzimtica da Novozym 435 medida antes
das reaes, 9661,72 U/g, e a relao indicada no item 4.2.2, equao 4.2. c Amostra insuficiente para anlise.

Densidade do CO2
(g/cm3)

Experimento

Presso
(bar)

Tabela 5.4. Atividade enzimtica aps as reaes do segundo planejamento experimentala.

Resultados e discusses

68

69

Observa-se, de forma geral, que houve uma maior perda na

atividade enzimtica para o segundo planejamento quando comparado
com o primeiro. A perda de atividade da enzima, considerando somente
os ensaios em que houve perda, foi de 69,56 % no segundo
planejamento e 13,10 % no primeiro planejamento. A Figura 5.7 mostra
o diagrama de Pareto para a atividade enzimtica avaliada para o
segundo planejamento.

(2)Enzima

1,77968

Interao entre 1 e 3

-1,3567

Interao entre 2 e 3

0,5711636

(3)H2O

Interao entre 1 e 2

(1)Presso

0,4347651

-0,123065

0,0208543

p = 0,10
Estimativa de Efeito Padronizado (Valor Absoluto)

Figura 5.7 Diagrama de Pareto para a atividade enzimtica do segundo planejamento

no nvel de 90 % de significncia.

Observa-se pela Figura 5.7 que a enzima foi a varivel que

mostrou maior tendncia a ser significativa ao nvel de 90% de
significncia. A quantidade de gua e o binmio presso/gua, apesar de
no serem significativas, apresentaram uma influncia negativa sobre a
atividade enzimtica. Uma vez que a umidade inicial do monmero no
segundo planejamento foi maior do que no primeiro. O excesso de gua
facilita a agregao da enzima e pode causar um decrscimo na sua
atividade (FEIHRMANN, 2005). Esta pode ter sido uma das razes que
ocasionaram grandes perdas de atividade em alguns experimentos. Alm
disso, no segundo planejamento as presses eram maiores (150 a 200
bar). Assim, como demonstrado por Oliveira et al. (2006) a perda de
atividade pode ser devida ao contato da enzima com o dixido de
carbono a altas presses.

6 CONCLUSES E SUGESTES

6.1 CONCLUSES
A rea de produo de biopolmeros est crescendo cada vez mais
com o uso de tcnicas menos agressivas ao ambiente. A produo de
poli(-caprolactona) em CO2 alta presso catalisada por lipase um
tema ainda pouco explorado pela comunidade cientfica, Isso faz desse
trabalho um estudo promissor e com grande contribuio para a
comunidade cientfica. O objetivo de produzir policaprolactona por via
enzimtica alta presso foi satisfatoriamente alcanado. Entretanto,
estabelecer controle sobre a polimerizao ainda um desafio devido s
diferentes variveis que influenciam no sistema. Os dados de equilbrio
de fases do sistema -caprolactona e dixido de carbono foram
fundamentais para o desenvolvimento desse estudo. A importncia dessa
rea do conhecimento se deveu possibilidade de investigao das
melhores condies reacionais. As observaes verificadas nesse estudo
estiveram em concordncia com as relatadas na literatura. As maiores
massas molares foram obtidas para altas presses (at 200 bar) e grande
quantidade de enzima (at 15 %). Enquanto o grande contedo de gua
(at 4 %) aparentemente teve um efeito deletrio para a polimerizao.
Com relao temperatura, os melhores resultados foram obtidos na
faixa de temperatura tima da enzima (65 C). Dentre as condies
estudadas, o polmero de maior massa molar (7419,6 g/gmol) foi obtido
a 65 C, 180 bar, 10 % de enzima com 200 rpm de agitao e sem
adio de gua. No que diz respeito atividade enzimtica aps a
polimerizao observou-se um efeito negativo de altas quantidades de
gua e altas presses sobre a atividade enzimtica aps as reaes.
6.2 SUGESTES
Baseando-se nos resultados obtidos no presente trabalho, algumas
sugestes podem ser enumeradas como forma de aprimoramento do
tema:
Emprego de outras enzimas;
Emprego de outros fluidos pressurizados;
Avaliar o efeito da variao da proporo entre caprolactona e dixido de carbono sobre a polimerizao;

Concluses e Sugestes

72

Estudar a cintica de reao;

Estudar os oligmeros formados durante a polimerizao da
-caprolactona.

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