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Toxicit long terme dun herbicide Roundup et dun mas modifi

gntiquement pour tolrer le Roundup


Gilles-Eric Sralini*, Emilie Clair, Robin Mesnage, Steeve Gress, Nicolas Defarge, Manuela Malatesta,
Didier Hennequin, Jol Spiroux de Vendmois
*Correspondance : criigen@unicaen.fr. Traduit en franais par les auteurs.
Rsum : Nous avons tudi pendant 2 ans sur des rats les effets sanitaires dun mas transgnique
tolrant lherbicide Roundup (introduit dans lalimentation 3 doses de 11, 22 et 33%), cultiv avec
ou sans pandage de cet herbicide, ou bien de Roundup seul dans l'eau de boisson ( partir de 0,1
parties par milliard). Les femelles, dans tous les groupes traits, sont mortes 2 3 fois plus que dans
le groupe-tmoin, et plus rapidement. Cette diffrence a t observe dans 3 groupes de mles
nourris avec lOGM. Tous les rsultats obtenus sont hormono-dpendants et lis au sexe,, avec des
profils pathologiques comparables dans presque tous les cas. Les femelles ont dvelopp plus
frquemment de grosses tumeurs mammaires et avant le groupe tmoin, lhypophyse tant le
second organe le plus touch ; lquilibre hormonal a t modifi par les traitements base dOGM
et de Roundup. Chez les mles traits, les ncroses et congestions du foie taient de 2,5 5,5 fois
plus leves. Cette pathologie a t confirme macroscopiquement, et en microscopie optique et
lectronique. Les nphropathies rnales progressives chroniques marques et svres taient
gnralement de 1,3 2,3 plus leves. Les mles prsentaient jusqu' 4 fois plus de grosses tumeurs
palpables, qui apparaissaient jusqu 600 jours plus tt que le groupe tmoin. Les donnes
biochimiques ont confirm des dficiences chroniques significatives des reins ; pour tous les
traitements et les deux sexes, 76% des altrations des paramtres physiologiques taient lis aux
reins. Ces rsultats peuvent sexpliquer par les perturbations endocriniennes non linaires (non
proportionnelles la dose) causes par le Roundup, ainsi que par la surexpression du transgne dans
lOGM, et ses consquences mtaboliques.

1. Introduction
Il y a un dbat international en cours sur la dure ncessaire des tudes de toxicit sur
mammifres lors de la consommation de plantes gntiquement modifies (GM) comportant des
analyses mtaboliques (Sralini et al., 2011). l'heure actuelle, aucune instance de rglementation
ne demande quune tude de toxicologie chronique (ou non) chez lanimal ne soit obligatoirement
effectue pour les OGM alimentaires et les pesticides formuls. Cependant, plusieurs tudes
constituant nourrir des rats pendant 90 jours ont t menes par l'industrie des biotechnologies.
Pour la plupart, ces tests concernent du soja et du mas qui sont soit tolrants aux herbicides
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(Roundup (R) dans 80% des cas), ou conus pour produire un insecticide modifi, la toxine Bt, ou les
deux. En consquence, ces cultures gntiquement modifies contiennent des nouveaux rsidus de
pesticides pour lesquels de nouvelles Limites Maximales de Rsidus (LMR) ont t tablies dans
certains pays.
Si les requrants concluent en gnral qu'il n'y a pas deffet majeur aprs des tudes de
toxicit subchronique de l'organisme gntiquement modifi (OGM) (Domingo et Gin Bordonaba,
2011; Hammond et al, 2004, 2006a, b), des perturbations significatives ont t trouves et peuvent
tre interprtes diffremment (Sralini et al, 2009; Spiroux de Vendmois et al., 2010). Des analyses
dtailles ont rvl des altrations des fonctions des reins et du foie qui peuvent tre des signes de
dbut dintoxication alimentaire chronique, pouvant s'expliquer au moins en partie par les rsidus de
pesticides prsents dans les aliments gntiquement modifis (Sralini et al, 2007; Spiroux de
Vendmois et al., 2009). En effet, il a t dmontr que des concentrations de R de l'ordre de 103 fois
infrieure la LMR induisent des effets de perturbation endocrine dans les cellules humaines
(Gasnier et al., 2009) et des effets toxiques des doses suprieures (Benachour et Sralini, 2009), y
compris in vivo (Romano et al., 2012). Aprs plusieurs mois de consommation d'un soja tolrant au
Roundup, le foie et le pancras de souris ont t touchs, montrant des perturbations de la structure
interne des noyaux de leurs cellules (Malatesta et al., 2008a, 2002a, b). En outre, cet effet toxique a
t reproduit par l'application de l'herbicide R directement sur des hpatocytes en culture (Malatesta
et al., 2008b).
Depuis lors, des tests de toxicologie long terme et multi-gnrationnels ont t mens
chez lanimal, dont certains semblent apporter des preuves dinnocuit, tandis que d'autres
concluent sur la ncessit d'investigations complmentaires en raison des modifications
mtaboliques (Snell et al., 2011). Cependant, aucune de ces tudes na inclus un suivi dtaill des
animaux utilisant jusqu 11 chantillons de sang et d'urine sur 2 ans, et aucune n'a tudi le mas
NK603 tolrant au R.
En outre, lvaluation de la toxicit des herbicides est gnralement effectue sur la
physiologie des mammifres travers une tude long terme du seul principe actif, plutt que de la
formulation complte utilise en l'agriculture, comme cela a t le cas pour le glyphosate (Williams
et al., 2000), le principe actif de l'herbicide R. Il est important de noter que le glyphosate est capable
de pntrer plus efficacement les organismes vgtaux cibles l'aide d'adjuvants prsents dans les
diffrentes formulations de R utilises dans le commerce (Cox, 2004). Lorsque des rsidus R sont
retrouvs dans l'eau du robinet, dans la nourriture humaine ou animale, ils proviennent de
lherbicide total en formulation, qui est le mlange le plus couramment utilis en agriculture; en fait,
de nombreux auteurs dans le domaine ont fortement insist sur la ncessit d'tudier les effets
toxiques potentiels des mlanges des produits chimiques plutt que des composants simples (Cox et
Surgan, 2006; Mesnage et al., 2010; Monosson, 2005). Mme des adjuvants et pas seulement le
glyphosate ou d'autres ingrdients actifs se retrouvent dans les eaux souterraines (Krogh et al.,
2002), et donc une exposition des dilutions de la formulation complte est plus reprsentative
d'une pollution environnementale que lexposition au glyphosate seul pour tudier les effets sur la
sant.
En vue de remdier ce manque d'information, nous avons effectu une tude dtaille de
toxicologie chronique de 2 ans chez le rat. La directive 408 actuelle de l'Organisation de coopration
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et de dveloppement conomiques (OCDE) a t suivie par certains fabricants d'OGM, mme si elle
n'a pas t conue cette fin. Nous avons explor plus de paramtres et plus frquemment que
recommand dans la prsente norme (Tableau 1) dans une exprience long terme. Cela nous a
permis de suivre en dtail les effets potentiels sur la sant et leurs origines possibles attribuables
aux consquences directes ou indirectes de la modification gntique elle-mme dans les OGM, ou
la formulation dherbicide en mlange utilise sur les OGM (et pas le glyphosate seul), ou aux deux.
En raison de revues rcentes sur les OGM (Domingo et Gin Bordonaba, 2011; Snell et al, 2011) nous
n'avions aucune raison dtablir dans un premier temps un protocole de carcinogense en utilisant
50 rats par groupe. Cependant, nous avons prolong les analyses biochimiques et hmatologiques et
appliqu le suivi mdical recommand dans les tudes chroniques combines en utilisant 10 rats par
groupe (jusqu' 12 mois dans l'OCDE 453). Cela reste le plus grand nombre de rats rgulirement
mesurs dans une tude standard de toxicologie sur un OGM. Nous avons galement test pour la
premire fois 3 doses (au lieu de 2 dans le protocole habituel 90 jours) du mas GM NK603 tolrant
au R seul, du mas transgnique trait avec R, et le R seul de trs faibles doses environnementales,
ces dernires dmarrant en dessous des niveaux autoriss par les autorits de rglementation dans
l'eau de boisson et dans les aliments GM.

2. Matriels et mthodes
2.1. Ethique
Le protocole exprimental a t labor en conformit avec les rglements de lthique dans
le cadre d'une animalerie autorise par le ministre franais de l'Agriculture et de la Recherche
(Agrment n A35-288-1). Les expriences sur les animaux ont t effectues conformment aux
directives d'thique des exprimentations animales (rgulation CEE 86/609). En ce qui concerne les
tudes sur le terrain des espces vgtales, aucun permis spcifique na t ncessaire, ni pour les
sites, ni pour les activits (cultures autorises au Canada). La dissmination dans l'environnement et
l'utilisation comme aliment pour btail du mas cultiv (MON-00603-6 communment appel NK603)
a t autoris par l'Agence canadienne d'inspection des aliments (Canadian Food Inspection Agency,
document 2002-35). Nous confirmons que l'emplacement n'tait pas une proprit prive ni
protge de quelque faon et que les tudes sur le terrain nimpliquaient pas despces menaces ou
protges. Ce mas OGM a t autoris l'importation et la consommation dans l'Union
europenne (rglementation CE 258/97).

2.2. Plantes, rgimes et produits chimiques


Les varits de mas utilises dans cette tude taient le NK603 tolrant au R (compagnie
Monsanto, USA), et son plus proche contrle isognique non transgnique. Ces deux types de mas
ont t cultivs dans les mmes conditions, sur le mme site, avec une distance suffisante pour
viter la contamination croise. La nature gntique, ainsi que la puret des semences GM et la
rcolte, ont t confirmes par l'analyse qPCR d'chantillons d'ADN. Un champ de mas NK603 a t
trait avec du R 3 ha/L (Weather-MAX, 540 g/L de glyphosate, Reg. EPA 524-537), et un autre
champ de NK603 n'a pas t trait au R. Les crales ont t rcoltes lorsque le taux d'humidit
tait infrieur 30% et ont sch une temprature infrieure 30C. De ces trois cultures de mas,
des croquettes pour rats de laboratoire ont t fabriques sur la base du rgime alimentaire
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standard A04 (Safe, France). Les croquettes ont t prpares pour contenir 11, 22 ou 33% de mas
transgnique, cultiv avec ou sans R, soit 33% de lisognique non transgnique. Les concentrations
de transgne ont t confirmes dans les trois doses de chaque rgime par qPCR. Toutes les
formulations d'aliments ont consist en une alimentation quilibre, analyse chimiquement comme
substantiellement quivalentes, sauf pour le transgne, et ne contenant pas de pesticides au-dessus
des limites rglementaires. Tous les mtabolites secondaires ne peuvent pas tre connus ni mesurs
dans la composition. Cependant, nous avons mesur les isoflavones et les acides phnoliques, y
compris lacide frulique, par HPLC-UV. Tous les ractifs utiliss sont de qualit analytique.
L'herbicide dilu dans l'eau de boisson tait la formulation commerciale de R (GT Plus, 450 g/L de
glyphosate, approbation 2020448, Monsanto, Belgique). Les niveaux dherbicides ont t valus par
analyse du glyphosate dans les diffrentes dilutions en spectromtrie de masse. (Aflatoxines et
autres mycotoxines taient absentes ou en dessous des normes autorises comme dans un
environnement de Bonnes Pratiques de Laboratoire, note de la traduction).

2.3. Animaux et traitements


Les rats vierges albinos Sprague-Dawley gs de 5 semaines ont t achets chez Harlan
(Gannat, France). Tous les animaux taient gards dans des cages en polycarbonate (820 cm2,
Genestil, France) avec deux animaux du mme sexe par cage. La litire (Toplit classic, Safe, France)
tait remplace deux fois par semaine. Les animaux taient maintenus 22 3C sous humidit (4565%) et la puret de l'air contrle avec un cycle de 12 h-jour/nuit, avec accs illimit la nourriture
et l'eau. Chaque cage tait rgulirement change demplacement dans la salle d'exprience.
Cette exprience vie entire de 2 ans a t mene dans un environnement BPL conformment aux
lignes directrices de l'OCDE. Aprs 20 jours d'acclimatation, 100 mles et 100 femelles ont t
rpartis de faon alatoire sur la base du poids en 10 groupes quivalents. Pour chaque sexe, un
groupe tmoin avait accs l'eau claire et lalimentation standard issue du mas contrle (isognique
le plus proche non transgnique), six groupes ont t nourris avec 11, 22 et 33% de mas GM NK603
trait ou non au R. Les trois derniers groupes ont t nourris avec lalimentation contrle et avaient
accs de l'eau additionne respectivement de 1,1x 10-8 % de R (0,1 ppb soit 50 ng/L de glyphosate,
le niveau de contamination de certaines eaux du robinet), 0,09% de R (400 mg/kg, LMR du
glyphosate dans certains aliments GM aux USA) et 0,5% de R (2,25 g/L, la moiti de la dilution
minimum pour usage agricole). Lalimentation et la boisson taient changes chaque semaine. Le
monitoring des animaux avait lieu deux fois par semaine, permettant l'observation attentive avec
palpation des animaux, enregistrement des signes cliniques, mesure de toutes tumeurs palpables
survenant, mesure de la consommation de nourriture et d'eau, et du poids du corps.

2.4. Analyses biochimiques


Des chantillons de sang ont t prlevs dans la veine de la queue de chaque rat sous
courte anesthsie lisoflurane avant le traitement et aprs 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 et 24 mois: 11
mesures ont t obtenues pour chaque animal vivant 2 ans. Il a d'abord t dmontr que
l'anesthsie n'avait pas d'impact sur la sant des animaux. Deux prlvements de plasma et de srum
ont t prpars et stocks 80C. Ensuite, 31 paramtres ont t mesurs (Tableau 1) selon les
mthodes classiques, comprenant l'hmatologie et les paramtres de coagulation, l'albumine, la
globuline, la concentration totale en protines, la cratinine, l'ure, le calcium, le sodium, le
potassium, les chlorures, le phosphore inorganique, les triglycrides, le glucose, le cholestrol total,
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l'alanine aminotransfrase, laspartate aminotransfrase, la gamma glutamyl-transfrase (GT),


l'estradiol, la testostrone. De plus, aux mois 12 et 24, la protine C-ractive a t teste. Des
chantillons d'urine ont t recueillis galement 11 fois, au-del de 24h dans des cages
mtaboliques individuelles, et 16 paramtres ont t mesurs comprenant la cratinine, le
phosphore, le potassium, le sodium, le calcium, le pH et la clairance. A la fin de lexprience, des
chantillons de foie ont permis d'effectuer des mesures des activits des cytochromes CYP1A1, 1A2,
3A4 et 2C9 sur les fractions S9, ainsi que de la glutathione-S-transfrase et la gamma-GT.

2.5. Anatomopathologie
Les animaux taient euthanasis au cours de l'tude seulement si la souffrance le rendait
ncessaire, en accord avec les rgles d'thique (par exemple 25% de perte de poids de corps, des
tumeurs de plus de 25% du poids corporel, une hmorragie ou une prostration), , et la fin de
l'tude par exsanguination sous anesthsie l'isoflurane. Dans chaque cas, les organes suivants ont
t recueillis : le cerveau, le colon, le cur, les reins, le foie, les poumons, la rate, les ovaires, les
testicules, les glandes surrnales, lpididyme, la prostate, le thymus, l'utrus, l'aorte, la vessie, les
os, le duodnum, l'sophage, les yeux, l'ilon, le jjunum, les ganglions lymphatiques, le systme
lympho-rticulaire, les glandes mammaires, le pancras, les glandes parathyrodes, les plaques de
Peyer, l'hypophyse, les glandes salivaires, le nerf sciatique, la peau, la moelle pinire, l'estomac, la
thyrode et la trache. Les 14 premiers organes (au moins 10 par animal en fonction du sexe, tableau
1) ont t pess, ainsi que toutes les tumeurs apparues. Les neuf premiers organes ont t diviss en
deux parties, une moiti a t immdiatement congele dans de l'azote liquide ou de la glace
carbonique. Lautre moiti et les autres organes ont t rincs dans du PBS et conservs dans du
formaldhyde 4% pour lanatomopathologie. Ces chantillons ont t inclus dans de la paraffine,
monts sur lame et colors avec la coloration histologique HES. Pour la microscopie lectronique
transmission, les reins, le foie et les tumeurs ont t coups en fragments de 1 mm3. Les chantillons
ont t fixs et pr-rfrigrs dans du paraformaldhyde 2%/ glutaraldhyde 2,5% dans du PBS 0,1
M pH 7,4 4C pendant 3 h et traits comme dcrit prcdemment (Malatesta et al., 2002a).

2.6. Analyse statistique


Les donnes biochimiques ont t traites par analyse multivarie avec le logiciel SIMCA-P
(V12) (UMETRICS AB Uma, Sude). L'utilisation d'outils chimiomtriques, par exemple lanalyse en
composantes principales (ACP), par les moindres carrs partiels aux structures latentes (PLS), et PLS
orthogonales (OPLS), sont des mthodes robustes pour la modlisation, l'analyse et linterprtation
des donnes biologiques et chimiques complexes. LOPLS est une modification rcente de la
mthode PLS celle-ci tant une mthode de rgression utilise pour trouver la relation entre deux
tableaux de donnes appels X et Y. Lanalyse de rgression PLS (Eriksson et al., 2006b) consiste
calculer au moyen d'itrations successives, des combinaisons linaires des variables X mesures
(variables explicatives). Ces combinaisons linaires des variables X donnent les composantes PLS
(vecteurs de score t). Une composante PLS peut tre considre comme une nouvelle variable - une
variable latente - qui reflte les informations des variables X originales qui prsente un intrt pour
la modlisation et la prdiction de la variable-rponse Y au moyen de la maximalisation des carrs de
la covariance (Max COV2 (X, Y)). Le nombre de composantes est dtermin par validation croise. Le
logiciel SIMCA utilise lalgorithme itratif non linaire Partial Least Squares algorithme (NIPALS) pour
la rgression PLS. L Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis (OPLS-DA) a t
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utilise dans cette tude (Weljie et al, 2011;Wiklund et al, 2008). Le but de l'analyse discriminante
est de trouver un modle qui spare les groupes d'observations sur la base de leurs variables X. La
matrice X comprend les donnes biochimiques. La matrice Y contient des variables fictives qui
dcrivent l'appartenance de chaque observation un groupe. Des variables binaires sont utilises
pour coder lidentit du groupe. L'analyse discriminante trouve un plan discriminant dans lequel les
observations projetes sont bien spares en fonction de chaque groupe. L'objectif de lOPLS est de
diviser la variation systmatique dans le bloc-X en deux partie-modles, une linairement relie Y
(dans le cas d'une analyse discriminante, l'appartenance un groupe), et l'autre non apparente Y
(orthogonale). Les composantes relies Y sont appeles prdictives, et celles non relies Y sont
appeles orthogonales. Ce partitionnement des donnes X amliore la transparence du modle et
linterprtation (Eriksson et al., 2006a).

3. Rsultats
3.1. Mortalit
Au cours de l'exprience, les mles tmoins ont survcu en moyenne 624 21 jours, tandis
que les femelles ont vcu pendant 701 20 jours, auxquels il faut ajouter dans chaque cas 5
semaines (ge la rception des animaux), plus les 3 semaines de la priode de stabilisation. Aprs
ce temps de survie coul, les dcs survenus ont t considrs comme largement dus au
vieillissement. Avant cette priode, 30% des mles tmoins (trois au total) et 20% des femelles
(seulement deux) sont dcds spontanment, tandis que 50% des mles et 70% des femelles sont
morts dans certains groupes dont le rgime alimentaire contenait du mas gntiquement modifi
(Fig. 1). Cependant, le taux de mortalit n'tait pas proportionnel la dose de traitement, atteignant
un seuil la quantit de mas GM la plus faible (11%) ou intermdiaire (22%) dans le rgime
quilibr, avec ou sans application de R sur la plante. Il est noter que les deux premiers rats mles
qui sont morts dans les deux groupes traits par lOGM ont d tre euthanasis du fait de tumeurs
rnales de Wilm qui dpassaient 25% du poids corporel. Et cela peu prs un an avant la mort du
premier animal tmoin. La premire mort chez les femelles s'est produite dans le groupe contenant
l'alimentation 22% de mas GM, cause par un fibroadnome mammaire 246 jours avant la
premire femelle tmoin. La diffrence maximale de mortalit chez les mles tait de 5 fois plus de
dcs, au 17e mois dans le groupe consommant 11% de mas GM, et chez les femelles, de 6 fois plus
de mortalit au 21e mois avec le rgime alimentaire contenant 22% de mas GM avec et sans R. Chez
les femelles, il y a eu 2-3 fois plus de dcs dans tous les groupes traits par rapport aux tmoins la
fin de l'exprience, et en gnral de faon plus prcoce. Les femelles taient plus sensibles la
prsence de R dans l'eau de boisson que les mles, comme en tmoigne leur dure de vie plus
courte. Les causes gnrales de la mort reprsentes en histogrammes (Fig. 1) sont lies
principalement aux tumeurs des glandes mammaires chez les femelles, et d'autres problmes
biologiques chez les mles.

3.2. Observations anatomopathologiques


Tout au long de l'exprience, tous les rats ont t soigneusement surveills pour leur
comportement leur apparence, les tumeurs palpables et les infections, et au moins 10 organes par
animal ont t mesurs et jusqu' 34 analyss post-mortem, l'chelle macroscopique et/ou
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microscopique (tableau 1). Toutes les donnes ne sont pas publiables dans un- seul- article, et seules
les plus pertinentes sont dcrites ici. Aucun rejet de l'alimentation avec ou sans OGM n'a t
observ par les animaux, ni aucune diffrence majeure dans le poids corporel.
Les grosseurs palpables (au-dessus d'un diamtre de 17,5 mm chez les femelles et 20 mm
chez les mles) se sont rvles tre dans 95% des cas des tumeurs non rgressives, et non des
nodules infectieux. Au cours de l'exprimentation, ces grosseurs ont progressivement augment en
taille et en nombre, mais pas proportionnellement la dose dans le traitement (Fig. 2). Comme dans
le cas des taux de mortalit, ceci suggre qu'un seuil a t atteint ds les plus faibles doses. Les
tumeurs furent presque toujours plus frquentes, rarement en nombre gal dans tous les groupes de
traits, par rapport aux tmoins, souvent 2-3 fois plus chez les deux sexes. Les tumeurs ont
commenc atteindre une grande taille, en moyenne 94 jours avant chez les femelles traites et
jusqu' 600 jours plus tt dans 2 groupes de mles traits au mas GM (11 et 22% avec ou sans R).
Chez les femelles, les grosses tumeurs taient 5 fois plus frquentes que chez les mles aprs
2 ans, 93% dentre elles tant des tumeurs mammaires. Adnomes, fibroadnomes et carcinomes
sont dltres en raison de leur trs grande taille, plus que le grade de la tumeur elle-mme. La
grande taille des tumeurs peut causer soit une gne pour la respiration, la nutrition et/ou la
digestion en fonction de leur localisation thoracique ou abdominale et peut galement entraner une
hmorragie. De plus, un cystadnocarcinome mtastatique de l'ovaire et deux tumeurs de la peau
ont t identifis. Des mtastases ont t observes dans 2 cas seulement, l'un dans le groupe nourri
avec 11% de mas GM et un autre dans la dose la plus leve de traitement au R.
Jusqu' 14 mois, aucun animal des groupes tmoins ne montrait de signe de tumeurs alors
que 10-30% des femelles traites dveloppaient des tumeurs, l'exception d'un groupe (33% GMO +
R). Au dbut du 24e mois, 50-80% des femelles avaient dvelopp des tumeurs dans tous les groupes
traits, avec un maximum de 3 tumeurs par animal, tandis que seulement 30% des tmoins taient
touchs. Les groupes traits au R ont montr les plus forts taux de frquence des tumeurs avec 80%
des animaux atteints et jusqu' 3 tumeurs pour une femelle, dans chaque groupe. Un rsum de
toutes les tumeurs mammaires la fin de l'exprience, indpendamment de la taille, est prsent
dans le tableau 2. La mme tendance a t observe dans les groupes recevant du R dans leur eau de
boisson, toutes les femelles, sauf une (prsentant un carcinome mtastatique de l'ovaire), ont
dvelopp en plus des hypertrophies mammaires avec dans certains cas une hyperplasie avec atypie
(tableau 2).
Le deuxime organe le plus touch chez les femelles tait l'hypophyse, en gnral environ 2
fois plus que les tmoins pour la plupart des traitements (tableau 2). A ce niveau encore, adnomes
et/ou hyperplasies et hypertrophies ont t notes. Pour tous les groupes traits au R, 70-80% des
animaux prsentaient 1,4 2,4 fois plus danomalies que les tmoins au niveau de cette glande.
A la fin de l'exprience, les grosses tumeurs palpables chez les mles (dans les reins, et le
plus souvent la peau) taient, en moyenne, deux fois plus frquentes que chez les tmoins, chez qui
un fibrome de la peau est apparu au cours du 23e mois. A cela, des tumeurs internes non-palpables
ont vu le jour, mais leurs quantits restaient toutefois plus faibles chez les mles que chez les
femelles. Ils n'taient pas vraiment diffrents des tmoins, bien que lgrement au-dessus chez les
femelles (histogrammes Fig. 2).

Les organes les plus touchs chez les mles taient le foie, avec lensemble de l'appareil
hpatodigestif, et les reins (Tableau 2 et Fig. 3). Les congestions hpatiques, les foyers ncrotiques
macroscopiques et microscopiques taient de 2,5 5,5 fois plus frquents dans tous les traitements
par rapport aux groupes tmoins. L'activit gamma GT hpatique a augment, en particulier pour les
groupes OGM + R (jusqu' 5,4 fois), ceci tant probablement d une maladie du foie.
De plus, les activits des cytochromes ont aussi gnralement augmentes en prsence de R
(dans l'eau de boisson ou dans l'alimentation GM), selon la dose et jusqu' 5,7 fois la dose la plus
leve. Les observations des chantillons de foie au microscope lectronique transmission ont
confirm les modifications pour tous les groupes traits, en ce qui concerne la dispersion du
glycogne ou l'apparence en lacs, laugmentation des corps rsiduels et l'largissement des cristaux
dans les mitochondries (figure 4). Les groupes nourris au mas GM avec ou sans application de R ont
montr une transcription rduite des ARNm et des ARNr, en raison de la teneur leve en
htrochromatine, et une diminution en composants nuclolaires fibrillaires denses. Dans le groupe
OGM + R ( la dose la plus leve), le rticulum endoplasmique lisse a considrablement augment
et les nucloles diminu de taille, devenant plus compacts. Pour le traitement au R seul, des
tendances similaires ont t observes, avec une reprise partielle de l'activit nuclolaire la dose la
plus leve.
La dgnrescence des reins avec des zones inflammatoires turgescentes dmontre
l'augmentation de l'incidence des nphropathies progressives chroniques marques et svres,
jusqu 2 fois plus leve dans les groupes mas GM 33% et la dose la plus faible de R (tableau 2 et
Fig. 3).

3.3. Analyses biochimiques


Pour les diffrents mas et rgimes alimentaires, l'tude de la composition chimique standard
na rvl aucune diffrence particulire ; c'est pourquoi ils ont t classs comme quivalents en
substance, sauf pour la quantification en ADN du transgne. Par exemple, il n'y avait pas de
diffrence entre les isoflavones totales. En outre, d'autres composs spcifiques qui ne sont pas
toujours demands pour l'tablissement de lquivalence en substance ont t analyss. Parmi les
acides phnoliques, les seuls rsultats consistants et significatifs (p <0,01) concernaient lacide
frulique diminu de 16-30% dans les rgimes alimentaires contenant lOGM et lOGM + R, en
comparaison au rgime tmoin (889 107, 735 89 respectivement vs contrle 1057 127 mg/kg)
et l'acide cafique diminu de 21-53% (17,5 2,1, 10,3 1,3 vs contrle 22,1 2,6 mg/kg).
Pour les mesures biochimiques chez le rat, l'analyse statistique a t effectue sur les
rsultats obtenus partir des chantillons prlevs au 15e mois, ce fut le dernier prlvement o la
plupart des animaux taient encore en vie (90% des mles traits, 94% des femelles traites, et 100%
des tmoins). Les modles 2 classes en OPLS-DA ont t construits entre chaque groupe trait et
les tmoins, et par sexe. Seuls les modles avec une variance explicative R2(Y) 80%, et une capacit
prdictive par validation croise Q2(Y) 60%, ont t utiliss pour la slection des variables
discriminantes (Fig. 5A) quand leurs coefficients de rgression taient significatifs au seuil de
confiance de 99%. Ainsi, chez les femelles traites, les dficiences rnales sont apparues au niveau
biochimique (82% du total des paramtres perturbs). Les ions (Na, Cl) ou lure ont augment dans
l'urine. Par consquent, les mmes ions taient diminus dans le srum (figure 5B), tout comme les
niveaux de P, K et Ca. La cratinine ou la clairance ont diminu dans les urines pour tous les
8

traitements par rapport aux tmoins femelles (tableau 3). Pour les mles traits au mas GM (avec ou
sans R), 87% de variables discriminantes taient relies aux reins, mais les profils perturbs taient
moins vidents en raison des nphropathies chroniques avances et des dcs. En rsum, pour tous
les traitements et dans les deux sexes, 76% des variables discriminantes taient lies aux reins par
rapport aux tmoins.
En outre, chez les femelles (tableau 3) la balance androgne / strogne dans le srum a t
modifie par les traitements au mas GM et les traitements au R (au moins au seuil de confiance de
95%, Fig. 5B), et pour les mles; la plus forte dose de traitement au R, les niveaux d'estrognes ont
plus que doubl.

4. Discussion
Ce rapport dcrit la premire tude de toxicologie vie entire sur rongeurs (rats) recherchant
de possibles effets toxiques d'un mas gntiquement modifi tolrant le R (NK603) et dune
formulation commerciale complte de lherbicide R.
Nos donnes ont montr, comme c'est souvent le cas pour les maladies hormonales, que les
effets les plus observs dans cette tude n'taient pas proportionnels la dose de traitement (mas
transgnique avec et sans application de R; R seul), non-monotone et avec un effet de seuil
(Vandenberg et al., 2012). On a remarqu galement que des degrs similaires de symptmes
pathologiques apparaissaient partir des plus basses et jusqu'aux plus hautes doses, suggrant un
effet de seuil. Cela correspondrait des niveaux susceptibles de dcouler de la consommation ou
l'exposition environnementale, tels que 11% de mas GM dans la nourriture, ou 50 ng/L de
glyphosate en formulation de R, comme cela peut se trouver dans certaines eaux du robinet
contamines ; et ces valeurs entrent dans les limites autorises.
La dure de vie du groupe des tmoins correspondait la dure de vie moyenne des rats,
mais comme cest frquemment le cas chez la plupart des mammifres y compris les humains (OMS,
2012), les mles sont morts en moyenne avant les femelles, l'exception de quelques groupes de
femelles traites. Tous les traitements dans les deux sexes ont accru lincidence des grosses tumeurs
de 2 3 fois en comparaison des tmoins, mais aussi le nombre de tumeurs mammaires par rapport
la mme souche Sprague Dawley Harlan (Brix et al., 2005), et dans l'ensemble autour de 3 fois plus
par rapport la plus grande analyse de1329 rats Sprague-Dawley femelles (Chandra et al., 1992).
Dans notre tude, les tumeurs se dveloppaient considrablement plus vite que chez les tmoins,
mme si la majorit des tumeurs furent observes aprs 18 mois. Les premires grandes tumeurs
dtectables sont arrives respectivement 4 et 7 mois chez les mles et les femelles, ce qui souligne
l'insuffisance des tests standards 90 jours pour l'valuation de la toxicit de l'alimentation et des
cultures GM (Sralini et al., 2011).
La souffrance induisant l'euthanasie et la mort concernait principalement les femelles
dveloppant de grosses tumeurs mammaires. Celles-ci semblaient tre clairement lies aux
diffrents traitements lors de la comparaison au groupe tmoin. Ces tumeurs sont gnralement
connues comme tant dpendantes des estrognes (Harvell et al., 2000). Nous avons observ une
induction marque frappante des tumeurs mammaires par le R seul, un pesticide majeur en
9

formulation, mme la plus faible dose administre. Il a t montr que le R perturbe l'aromatase,
enzyme qui synthtise les estrognes (Richard et al., 2005), mais aussi que le R interfre avec les
rcepteurs des estrognes et des andrognes dans les cellules (Gasnier et al., 2009). En outre, le R
apparat tre un perturbateur endocrinien in vivo galement chez les mles (Romano et al., 2010).
Les strodes sexuels sont galement modifis chez les rats traits. Ces phnomnes hormonodpendants sont confirms par un dysfonctionnement accru de lhypophyse chez les femelles
traites. Un mcanisme de rtroaction modifi par les estrognes pourrait agir ce niveau (Popovics
et al., 2011; Walf et Frye, 2010). Les profils pathologiques similaires provoqus par le mas GM
contenant des rsidus de R pourraient par consquent tre expliqus par les rsidus de R euxmmes, sachant que la dose moyenne de traitement au R correspond des niveaux acceptables de
ces rsidus de pesticides dans les OGM. Fait intressant, dans les groupes d'animaux nourris avec le
mas NK603 sans application de R, des effets similaires l'gard de l'incidence accrue des tumeurs et
du taux de mortalit ont t observs. Une explication plausible cette situation serait la production
d'un ou de plusieurs compos(s) spcifique(s), qui se retrouverait dans l'alimentation GM, et qui
pourrait tre directement toxique et/ou provoquer l'inhibition de voies mtaboliques qui, leur tour,
pourraient gnrer des effets toxiques chroniques. Et ceci malgr le fait que la varit de mas
gntiquement modifi utilis dans cette tude a t juge par l'industrie et les organismes de
rglementation comme tant quivalente en substance par rapport la varit isognique la plus
proche non-GM. Comme la composition chimique totale du mas gntiquement modifi ne peut pas
tre mesure en dtail, l'utilisation de l'quivalence en substance est insuffisante pour mettre en
vidence de potentielles toxines inconnues et ne peut donc pas remplacer des tudes de toxicologie
des OGM long terme sur animaux. Une explication de ces effets pourrait tre que le mas NK603
gntiquement modifi utilis dans cette tude a t conu pour surexprimer une version modifie
de la 5-nolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) provenant d'Agrobacterium tumefaciens
(Hammond et al., 2004) permettant la tolrance au R. LEPSPS modifie n'est pas inhibe par le
glyphosate contrairement l'enzyme sauvage. Dans la plante, lEPSPS est connue pour catalyser la
premire tape de la biosynthse des acides amins aromatiques par la voie du shikimate ; en outre
les isoflavones estrogniques et leurs glycosides sont galement des produits de cette voie de
biosynthse (Duke et al., 2003). Ils n'ont pas t perturbs dans notre tude. En revanche, les
niveaux des acides cafique et frulique dans les rgimes alimentaires gntiquement modifis, qui
sont aussi des mtabolites secondaires issus de cette voie, mais qui ne sont pas toujours mesurs
dans les tests rglementaires, sont considrablement rduits. Cela pourrait diminuer leurs effets
protecteurs contre la carcinogense et mme contre les tumeurs mammaires (Kuenzig et al., 1984;
Baskaran et al., 2010). En outre, ces acides phnoliques et en particulier l'acide frulique pourraient
moduler les rcepteurs des estrognes ou la voie estrognique dans les cellules de mammifres
(Chang et al., 2006). Cela n'exclut pas l'action d'autres mtabolites inconnus. Cette explication
correspond galement au fait que les effets observs du NK603 et de R ne sont pas cumulatifs et
atteignent un seuil. Ce qui implique que le mas NK603 et le R pourraient provoquer des troubles
hormonaux dans la mme voie biochimique et physiologique.
Comme prvu, les tumeurs mammaires chez les mles taient beaucoup moins frquentes
que chez les femelles. La mort chez les rats mles tait principalement due au dveloppement de
graves insuffisances hpatornales, confirmant les premiers signes de toxicit observs dans les tests
90 jours avec le mas NK603 (Spiroux de Vendmois et al., 2009). Chez les femelles, les fuites d'ions
au niveau des reins ont t mises en vidence au niveau biochimique au 15me mois, tandis des
10

nphropathies graves ont t retrouves au niveau anatomo-pathologique chez les mles morts par
la suite. Des signes de toxicit prcoce dans les reins et le foie ont galement t observs 3 mois
pour 19 plantes GM comestibles contenant des rsidus de pesticides (Sralini et al., 2011). En fait,
seuls les rats mles gs sont sensibles aux nphropathies progressives chroniques (Hard et Khan,
2004). La perturbation des paramtres rnaux peut avoir t induite par la diminution des acides
phnoliques dans notre tude, puisque les acides cafique et frulique sont bnfiques pour le rein
en empchant le stress oxydatif (Srinivasan et al, 2005; U Rehman et Sultana, 2011). Nanmoins,
nous avions prcdemment dmontr que des extraits vgtaux contenant ces mmes acides
fruliques et cafiques favorisaient la dsintoxication des cellules embryonnaires de rein aprs
contamination au R (Gasnier et al., 2011). Il est ainsi possible que la consommation de NK603, en
rduisant ces composs, puisse ainsi provoquer un vieillissement prmatur de la physiologie rnale,
comme pour le R, par le stress oxydatif.
Les perturbations qui se sont produites dans le foie des mles sont caractristiques d'une
intoxication chronique, confirme par des altrations dans les paramtres biochimiques du
fonctionnement du foie et des reins. L'observation du fait que le fonctionnement hpatique chez les
femelles est moins affect peut tre due leur physiologie mieux adapte au mtabolisme des
estrognes. En outre, il a clairement t dmontr que les enzymes hpatiques sont spcifiques au
sexe dans leurs profils d'expression, y compris dans une tude 90 jours chez des rats nourris avec
du mas NK603 (Spiroux de Vendmois et al., 2009). Cependant, dans une tude long terme, la
preuve du vieillissement prcoce du foie avait t observe chez des souris femelles nourries avec du
soja GM tolrant au R (Malatesta et al., 2008a). Dans la prsente tude, une analyse plus
approfondie au niveau ultrastructural a rvl l'existence d'un blocage de la transcription ainsi que
dautres anomalies dans la structure nuclaire des hpatocytes qui taient comparables pour les
deux sexes, et proportionnels la dose dans tous les traitements. Ceci est cohrent avec les effets
toxiques bien documents de trs faibles dilutions de R sur l'apoptose, la fonction mitochondriale, et
la destruction de la membrane cellulaire induisant la ncrose des hpatocytes, et d'autres lignes
cellulaires (Benachour et Sralini, 2009; Benachour et al., 2007; Gasnier et al, 2010;. Peixoto, 2005).
Les perturbations au moins des voies lies aux estrognes et/ou l'augmentation du stress
oxydatif par tous les traitements ncessitent de pousser plus loin les investigations. Cela peut se faire
par l'application de mthodes de transcriptomique, de protomique et de mtabolomique pour
analyser les profils molculaires des reins et des foies, ainsi que celui du mas GM NK603 (Jiao et al,
2010; Zhou et al, 2009; Zolla et al, 2008). Les autres causes possibles des effets pathognes qui ont
t observs pourraient tre une modification de l'expression des gnes due aux effets de linsertion
de transgne, ou des effets mutagnes ou mtaboliques (Latham et al., 2006;. Wilson et al, 2006)
comme cela a t montr pour le mas GM MON810 (Rosati et al., 2008). Une perturbation
consquente du mtabolisme gnral dans l'OGM ne peut tre exclue, ce qui pourrait conduire, par
exemple, la production d'autres composs potentiellement actifs tels que des micro-ARN (Zhang et
al., 2012) ou les leucotoxines diols (Markaverich et al., 2005).
En conclusion, il tait dj connu que la consommation de glyphosate dans l'eau au-dessus
des limites autorises pouvait provoquer des dysfonctionnements rnaux et hpatiques (EPA). Les
rsultats de l'tude prsente ici dmontrent clairement que des niveaux infrieurs de formulations
compltes d'herbicides base de glyphosate, des concentrations bien en dessous des limites
officielles de scurit, induisent des problmes hpatiques, rnaux et mammaires hormono11

dpendants. De mme, la perturbation des voies de biosynthse qui peuvent rsulter de la


surexpression du transgne EPSPS dans le mas gntiquement modifi NK603 peut donner lieu des
pathologies comparables qui pourraient tre lies des mtabolites anormaux ou en proportions
dsquilibres dacides phnoliques, ou lis des composs apparents . Dautres effets mutagnes
et mtaboliques de cet OGM alimentaire ne peuvent tre exclus. Ce sera l'objet d'tudes futures, y
compris lanalyse de la prsence de transgne et de glyphosate dans les tissus de rats. Des tudes de
reproduction et des tudes multi-gnrationnelles serviront galement fournir des informations
nouvelles sur ces problmes. Cette tude est la premire tude dtaille sur les effets dltres
long terme lis la consommation d'un mas GM tolrant au R et de R, lherbicide le plus utilis dans
le monde.
En fait, les perturbations biochimiques significatives et les problmes physiologiques
importants documents dans ce travail confirment les effets pathologiques de ces traitements OGM
et R pour les deux sexes, avec des amplitudes diffrentes. Nous proposons que les OGM agricoles
alimentaires et les pesticides en formulation soient valus avec soin par des tudes long terme
permettant de mesurer leurs effets toxiques potentiels.

Conflits d'intrts
Les auteurs dclarent qu'ils nont pas de conflits d'intrts.

Remerciements
Nous remercions Michael Antoniou pour son aide en anglais et ses commentaires constructifs sur le
manuscrit, ainsi que Herrade Hemmerdinger pour la relecture. Nous tenons remercier l'Association
CERES, la Fondation Charles Lopold Mayer pour le Progrs de l'Homme , le Ministre franais de
la Recherche, et le CRIIGEN pour leur soutien majeur.

12

Table 1
Protocole suivi et comparaison avec lvaluation existante, et avec les tests rglementaires non
obligatoires.
Traitements et analyses

Hammond et al., 2004

Traitements
+ contrles

Notre travail
OGM NK603,
OGM NK603 + Roundup,
Roundup, et mas
isognique le plus proche

Doses par traitement

Dure en mois

24 (chronique)

Animaux mesurs
/ groupe / sexe
par cage (mme sexe)
Monitoring / semaine
Consommation de nourriture
et eau de boisson
Organes et tissus tudis
histologie / animal
organes pess
Microscopie lectronique
Etudes du comportement
(nombre)
Ophtalmologie (nombre)

10 rats SD/10
(200 rats mesurs)
1-2

OGM NK603 + Roundup,


mas isognique le plus
proche,
et 6 autres varits de mas
non quivalentes en substance
2
3 (subchronique: 13
semaines)
10 rats SD/20
(200 rats mesurs/400)
1

2
Mesures

1
Nourriture uniquement

1 ou plus
Nourriture au minimum

34
10
Oui

17 / 36
7
Non

Plus forte dose et contrles


au moins 30
au moins 8
Non

1 (protocole non indiqu)

2
11, chaque mois (0-3)
Puis tous les 3 mois

2, semaines 4 et 13

1, la fin

31 (11 fois en gnral)

31 (2 fois)

Testostrone, estradiol

Non

25 minimums (2 fois min.)


Non, sauf si perturbation
endocrine suspecte

11

16

18

Facultatif, dernire
semaine
7 si mesurs

Oui

Oui

Non

Etudis

Non tudis

Non obligatoire

Etudi

Non tudi

Non tudi

Nombre dchantillons de
sang/ animal
Paramtres sanguins
Strodes sexuels
plasmatiques
Paramtres du
tissuhpatique
Nombre dchantillons
durine
paramtres tudis
Microbiologie (fcs ou
urine)
Rsidus de Roundup dans les
tissus
Transgene dans les tissus

Tests rglementaires
OGM ou produits
chimiques
(dans lalimentation ou
leau de boisson)
Au moins 3
3
Au moins 10 rongeurs
1 ou plus

Le protocole suivi pour ce travail a t compar lvaluation rglementaire du mas NK603 ralise par
la compagnie (Hammond et al., 2004), et avec les tests in vivo rglementaires non-obligatoires pour les
OGM, ou obligatoires pour les produits chimiques (OCDE 408, 1998). Seuls les rsultats les plus importants
sont montrs dans cette publication.

13

Organes et pathologies
associes

Contrle

OGM1
1%

OGM2
2%

OGM
33%

OGM
11%+R

OGM22%
+R

OGM33%
+R

R (A)

R (B)

R (C)

Mles, Foie

2 (2)

5 (4)

11 (7)

8 (6)

5 (4)

7 (4)

6 (5)

11 (5)

9 (7)

6 (5)

Tractus hpatodigestif

6 (5)

10 (6)

13 (7)

9 (6)

9 (6)

13 (6)

11 (7)

23 (9)

16 (8)

9 (5)

Reins, NPC

3 (3)

4 (4)

5 (5)

7 (7)

5 (5)

4 (4)

4 (4)

6 (6)

5 (5)

3 (3)

Femelles, tumeurs mammaires

8 (5)

15 (7)

10 (7)

15(8)

10 (6)

11 (7)

13 (9)

20 (9)

16(10

12 (9)

Glandes mammaires

10 (5)

22 (8)

10 (7)

16(8)

17 (8)

16 (8)

15 (9)

26(10

20(10

18 (9)

Hypophyse

9 (6)

23 (9)

20 (8)

8 (5)

19 (9)

9 (4)

19 (7)

22 (8)

16 (7)

13 (7)

Table 2
Rsum des pathologies observes les plus frquentes.
Aprs le nombre danomalies pathologiques, le nombre de rats atteints est indiqu entre parenthses. Chez les
mles, les congestions du foie, les tches macroscopiques et les foyers microscopiques sont importants. Les
problmes hpatodigestifs concernent le foie, lestomac et lintestin grle (duodenum, ileum or jejunum).
Seules les nphropathies progressives chroniques (CPN) marques et svres sont recenses, excluant les deux
nphroblastomes dans les groupes OGM 11% et OGM 22%+R. Chez les femelles, les fibroadnomes et les
adnocarcinomes mammaires sont les principales tumeurs; des galactocles et des hyperplasies avec atypie
ont aussi t observes. Les dysfonctionnements de lhypophyse incluent des adnomes, des hyperplasies et
des hypertrophies. Pour les dtails des traitements, se reporter aux lgendes de la Fig.1.

14

Table 3. Pourcentage de variation des paramtres indiquant des problmes rnaux chez les
femelles.
OGM
11%+R

OGM
22%+R

OGM
33%+R

OGM
11%

OGM
22%

OGM
33%

R (A)

R (B)

R (C)

Clairance

-4

-11

-20

-20

-20

-19

-20

-24

-40

Cratinine

-5

-32

-37

-19

-37

-36

-43

-23

-1

Cratinine ex

-5

-11

-19

-18

-17

-21

-21

-22

-39

Ure

12

18

15

15

12

-1

13

32

Na

25

33

30

52

-2

95

62

65

91

Na ex

24

50

68

50

24

125

108

51

Cl

14

35

28

46

101

67

56

94

Cl ex

20

63

70

51

31

138

121

48

13

Na

-1

-4

-6

-7

-3

Cl

-1

-2

-2

-5

-7

-6

-8

-1

-4

-6

-11

-13

-17

-18

-20

-32

-9

-13

10

-4

-4

-5

Ca

-2

-5

-6

-6

Estradiol

-1

-2

-25

-26

-73

39

Testostrone

-9

27

56

17

81

97

-72

10

Variables discriminantes
Diminution dans
lurine

Augmentation
dans lurine

Diminution dans le
srum

Gonades

Lanalyse OPLS-DA a t conduite sur 48 variables au 15me mois. Ici nous montrons les diffrences
des moyennes (%) des variables (discriminantes au niveau de confiance de 99%, en gras) indiquant
les paramtres rnaux des animaux femelles, ainsi que les hormones sexuelles. Les pathologies
rnales des mles sont dj illustres dans la Table 2.

15

Figure 1. Mortalit des rats nourris lOGM trait ou non au Roundup, et effets du Roundup seul.
Les rats ont t nourris avec le mas GM NK603 (avec ou sans application de Roundup) 3 doses
diffrentes (11, 22, 33% dans la nourriture: en traits fin, moyen et gras, respectivement) compares
au mas non-GM isognique le plus proche quivalent en substance (tmoin, en pointill). Le
Roundup a t administr dans leau de boisson 3 doses croissantes, mmes symboles utiliss
[teneur environnementale (A), LMR dans les OGM agricoles (B) et moiti du niveau minimal utilis en
agriculture (C), (cf. matriels et mthodes). Lesprance de vie pendant lexprience du groupe
tmoin est reprsente par les barres verticales +/- SEM (zones grises). Dans les histogrammes, les
causes de la mort avant la zone grise sont dtailles en comparaison avec les tmoins (0). Les
euthanasies ncessaires du fait de la souffrance en accord avec les rgles thiques (tumeur
suprieure 25% du poids du corps, perte de poids suprieure 25%, saignement hmorragique,
etc.) sont reprsentes en noir; les morts spontanes sont reprsentes en hachur.

16

Fig 2. Grosses tumeurs non-rgressives chez les rats nourris lOGM trait ou non au Roundup, et
effets du Roundup seul. Les symboles des courbes et les traitements sont expliqus dans la lgende
de la Fig. 1. Les grosses tumeurs palpables pendant lexprience sont comptabilises partir dun
diamtre de 20 x 20 mm pour les mles et 17,5 x 17,5 mm pour les femelles. Au-dessus de cette
taille, 95% des tumeurs sont non-rgressives. Toutes les tumeurs sont indiques dans les
histogrammes : grosses tumeurs non rgressives en noir, petites tumeurs internes en blanc, et
mtastases en gris.

17

Figure 3. Observations en anatomopathologie des rats nourris lOGM trait ou non au Roundup,
et effets du Roundup seul. Les photographies macroscopiques et microscopiques montrent les foies
des mles (A-E) et leurs reins gauches (F-I), les glandes mammaires (J-P) et les hypophyses (Q-T) chez
les femelles, en illustration de la Table 2. Le numro de chaque animal ainsi que son traitement sont
spcifis. Les tches ples macroscopiques (D),les foyers ncrotiques microscopiques dans le foie (C
focus cellules claires, E focus basophiles avec atypie), et les nphropathies progressives chroniques
marques et svres sont illustrs. Chez les femelles, les tumeurs mammaires (J,J,N adnocarcinome
et K,K,L,L,O,P fibroadnomes) et les adnomes de lhypophyse (R-T) sont montrs et compars aux
tmoins (C suivi du numro du rat).
18

Figure 4. Ultrastructure des hpatocytes chez les rats mles partir des groupes prsentant le plus
haut degr de pathologie du foie. 1. Hpatocyte typique de rat tmoin (barre 2 m sauf dans le 4). 2.
Effets du Roundup faible dose. Le Glycogne (G) est dispers dans le cytoplasme. L, gouttelette
lipidique; N, noyau; R rticulum endoplasmique rugueux. 3. Hpatocytes danimal nourri au mas GM
(GMO) 22% de la nourriture totale. On observe de grands lacs de glycogne dans le cytoplasme. M,
mitochondrie. 4. Dtails des effets du traitement 22% dOGM (barre 1 m). a. Groupe de corps
rsiduels (astrisques). b. Les mitochondries montrent de nombreux cristaux largis (flches).

19

Figure 5. Analyse discriminante par mesure des moindres carrs partiaux orthogonaux (OPLS-DA)
pour les donnes biochimiques (femelles nourries 33% dOGM versus tmoins). (A) Les
coefficients de rgression pour la composante prdictive, avec intervalles de confiance jackknifed 99% de seuil de confiance, en OPLS-DA, indiquent les paramtres discriminants par rapport
aux tmoins au 15me mois (Abrviations: U urinaire, UEx excrt dans lurine en 24h, APPT temps de
thromboplastine partielle active, MCV volume corpusculaire moyen, PT temps de prothrombine,
RBC globules rouges, ALT Alanine aminoTransfrase, MCHC concentration en hmoglobine
corpusculaire moyenne, A/G ratio albumine/globuline, WBC globules blancs, AST ASpartate
aminoTransfrase). (B) Dans ce cas, des exemples dtaills de distribution de variables
significativement discriminantes entre les femelles nourries 33% dOGM (en gras) et les tmoins
(en pointill). Sur laxe des abscisses : les animaux; sur laxe des ordonnes : valeurs dans le srum ou
lurine des ions sodium (Na) et chlorure (Cl), de lestradiol et de la testostrone. Les profils mettent
en vidence les fuites ioniques au niveau des reins et la perturbation de lquilibre des hormones
sexuelles par rapport aux tmoins.
20

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