BlOMEDlCA

Vol. 4, No. 3 y 4

- 1984

ACTUALIZACIONES

EL ANTIBIOGRAMA DE DISCOS.
TECNICA DE KIRBY-BAUER
MAYE BERNAL R.. * MIGUEL GUZMAN U.**

INTRODUCCION
En el manejo clnico de la enfermedad
infecciosa es indispensable la identificacin
del agente causal con el objeto de hacer un
control teraputico, en lo posible, especfico.
Tratndose de entidades de orgen bacteriano, este concepto es an ms estricto,
toda vez que el mdico cuenta con gran
cantidad de agentes antimicrobianos de los
cuales debe seleccionar aqullos que
adems de su fcil administracin, buena
penetracin y baja toxicidad sean realmente
activos contra el microorganismo causal (1).
Estas corisideraciones implican que el
mdico, adems del buen conocimiento y
comando de los aspectos clnicos, conozca
en profundidad los antimicrobianos y su
farmacologa, ordene el aislamiento e
identificacin del agente etiolgico y su
sensibilidad frente a dichos antimicrobianos
cuando llo sea necesario; esto permitir
establecer un manejo ms confiable evitando
su uso indiscriminado y la posibilidad de
seleccionar cepas bacterianas resistentes,
peligro cada vez ms creciente como lo
destacan investigadores de la gentica
bacteriana en reciente declaracin
mundial, (2).
Para que los estudios de sensibilidad de
los microorganismos a los antibiticos
tengan aplicacin y validez clnica, es
necesario que los procedimientos de
laboratorio que la investigan sean confiables. La experiencia mundial en el campo

demuestra que es necesario una normalizacin de su metodologa (3). El presente

trabajo, tiene por objeto dar las directrices
para la correcta realizacin e interpretacin
del antibiograma de disco que constituye el
sistema ms comunmente utilizado para
microorganismos de crecimiento rpido, (4).
El seguimiento estricto de estas directrices
asegura al laboratorio la realizacin
correcta del antibiograma y al mdico un
resultado confiable para el manejo de su
paciente.
La prueba de sensibilidad utilizando el
procedimiento del disco es una modificacin
de la tcnica descrita por Bauer, Kirby,
Sherris y Turk (5); es la tcnica que se
recomienda para los laboratorios clnicos.
La prueba es rpida, prctica y reproducible (6, 7, 8). Los procedimientos de
diluciones en agar o diluciones en caldo para
determinar la concentracin inhibitoria
mnima (CIM) de los antimicrobianos son
tambin procedimientos satisfactorios (8).
DISCO PARA ANTIBIOGRAMA
Los discos, p a r a antibiograma son
producidos por casas comerciales bajo un
riguroso protocolo de control internacional.
Cada disco contiene una concentracin
predeterminada que permite una correlacin
ms o menos precisa con la concentracin
mnima inhibitoria que dicho antibitico

Unidad de Bacteriologa Clnica. Grupo de Microbiologa e Inmunologia. Actualmente en el Grupo

de Micobacterias. Instituto Nacional de Salud - Bogot.

**

Jefe Grupo de Rdicrobiologia e Inmunologia. Instituto Nacional de Salud - Bogot. Profesor Asociado Facultad de Fdedicina, Universidad Nacional de Colombia.

EL ANTIBIOGRAMA D E

DISCOS.

NORMALlZAClON DE LA TECNICA DE KIRBY-BAUER

alcanza "in vivo" segn los resultados de

resistencia o susceptibilidad. Solo deben
utilizarse discos con nombre genrico (3).
La conservacin de los discos es crtica
ya que de lla depende la confiabilidad
de los resultados. Se debe, por lo tanto,
t e n e r p a r t i c u l a r cuidado a l respecto
siguiendo l a s indicaciones siguientes:
Los recipientes individuales que contienen
los discos deben mantenerse refrigerados de
4-5C. o almacenados a -20C. hasta que
sean utilizados; los discos que contienen
drogas de la familia de la penicilina o de las
cefalosporinas deben mantenerse siempre
congelados, excepcin de una pequea
cantidad de discos para el trabajo diario, los
cuales pueden mantenerse refrigerados
hasta por una semana. Los nuevos recipientes con discos de sensibilidad deben colocarse a temperatura ambiente antes de
abrirlos para ponerlos en uso. Los dispensadores que contienen discos para pruebas
de susce~tibilidaddeben almacenarse con
un desecknte en el refrigerador pero debe
permitirse que alcancen la temperatura
ambiente antes de ser utilizados. Se debe
desechar todo disco cuya fecha de expiracin, expresamente puesta por la casa
manufacturadora, est vencida. Los discos
deben mantenerse secos hasta que se
utilicen.
Las tcnicas de antibiogramas por difusin
han sido normalizadas para microorganismo~de crecimiento rpido, tales como
Staphylococcus y Enterobacteriaceae pero
no son confiables cuando se aplican a microorganismos de crecimiento lento, los cuales
pueden mostrar zonas de inhibicin mucho
ms grandes que aqullos de crecimiento
rpido. Sin embargo, la total resistencia
puede ser significativa; por lo tanto, la
prueba de susceptibilidad de microorganismos exigentes en sus requerimientos
nutricionales o que necesiten una atmsfera
anaerbica o concentraciones altas de COZ o
que presentan una rata de crecimiento
particularmente lenta, deben estudiarse con
mtodos de antibiograma por dilucin o
esoecficos como los va desarrollados v
esiandarizados de difusin para este tipo de
microorganismos (3, 7).

CEPAS CONTROL
Para que los resultados del antibiograma
de discos sean realmente confiables es de
primordial importancia, adems de los
aspectos tcnicos, introducir un control de
calidad interno mediante el uso de las cepas
control. Estas son de uso universal, se trata
de cepas de S. aureus, E. coli y Ps aeruginosa
las cuales tienen un patrn de sensibilidad
ya conocido frente a los antimicrobianos
[Cuadro No. l ) , sensibilidad que debe ser
reproducida en cada laboratorio asegurndo con llo que el procedimiento empleado
est operando en ptimas condiciones (9).
Por las anteriores consideraciones, una cepa
control d e
Staphylococcus
aureus
(ATCC25923) multisensible, debe probarse
con el conjunto de discos para g6rmenes
Gram positivos y una cepa multisensfble de
Escherichia coli (ATCC25922)con el conjunto
de discos para microorganismos Gram
negativos. Una cepa control de Pseudomonas
aeruginosa (ATCC27853) debe ser probada
Cuadro No. 1
SENSl Bl L l DAD M L A S CEPAS CONTROL
ZONA DE INHIBICION EN mm.

e-

POTENClA
DEL
DISCO

S. BUIliU

L di

ATCC
25923

ATCC
25922

ATCC
27853

Acido Nalldixico

30 mcg

mmnm

21 - 2 5

rllmQU0

Aclcido Oxolinico

2 mcg

1 3 - 10

20 - 2 4

rmmm

Amikacimi

30 mcg

18-24

18

Amplclllna

1 0 mcg

24

ANTlMlCROEl ANO

Carbenicilina

100 m q

C.falotino

3 0 mcg

Cetomandole
C.fotaxima

30 m w
3 0 mcg

Cafoxilina

- 35

- 24

15-20

- 29

24

25

- 37
2 8 - 34

1 8 - 23
24

lnrmma

b!mmm

- 28
- 29

- 31

15 - 22

mnmm
20

- 24

emmm
mlmma
mmma

- 28

rmmmm

mmnmi

mlmmLl

3 0 mcg

23

Cllndomlclna

2 rncg

23

Clomnisnlcol
Col1 stina

3 0 mcq

19- 26

21 - 2 7

6 - 12

10 m 9

!mnnm

I I -15

1 2 - 16

Erltromicina

15 w
10 mcq

23

- X)

8 - 14

rnmm

Genlamlcina

1 9 - 27

1 9 - 26

16 - 21

Kanomiclna

30 m q

1 9 - 26

17

Nwomici~

30 m q
300 m q

18- 26
2 0 - 24

1 7 - 23
U - 24

mmmm

5 m q
10 U

17-22
26 - 3 7

mmm

wmmi~

7-13
23-27

12-16
22-26

30 m p

19-E

18-25

Nllroiurantoina
~xacilino
R"""'M
Pollmixina B
,xfilaroel
Tstroclclina

300 U

- 32

~rimwtoplm-SUI~O I 2512375 mp

24

TObramlcina
Vancomlclno

19-29
1 5 - 19

lomcg
3 0 mcg

23

- 25

24

- 32

18-26

0nmm
iUmmZa
11-16
6
9-14

mm
19-25

iimfB

MAYE BERNAL R.. MIGUEL GUZMAN U.

con Amikacina, Carbenicilina, Cloranfenicol,

Clindamicina, Gentamicina, Kanamicina,
Tetraciclina y Tobramicina. Esta cepa de
Pseudornonas aeruginosa, tiende frecuentemente a desarrollar mutantes resistentes a
la Carbenicilina durante los pases sobre los
medios de cultivo en el laboratorio; si esto
sucede se debe usar una nueva cepa. Las
cepas control deben probarse cada vez que
se realicen las pruebas y, el tamao de los
halos de inhibicin debe anotarse en una
hoja de control de calidad para cada
antibitico (Fig. 1). El dimetro de la zona
de inhibicin para los microorganismos
control debe caer dentro del rango indicado
en el cuadro No. 1. Las variaciones en cada
uno de los lmites deben investigarse y
corregirse p a r a a s e g u r a r resultados
validos (4).

A N T I 0 IOGRAMA DE DISCOS
CONTRM. DE C A L l D P D
A N T I M I C R O B I A N O ~ POTENCIA 1
0CCEA CONTROL E. eall ATCC 2B922

341

1
z

: ;1

CI

m--

g;;:..
-

- 20 m m

1514,
13
12

..

l o

1O

i
FECHA

i i 4

El disco de Penicilina G es representativo

de todas las penicilinas G.
El disco de Ampicilina es representativo
de todas las aminopenicilinas tales como:
Talampicilina, Pivampicilina, Bacampicilina,
Hetacilina, Amoxicilina y Epicilina.
~1 disco de oxacilina de
mcg es
representativo de todas las penicilinas
resistentes a las Beta-lactamasas tales
como: Meticilina. Nafcilina. Cloxacilina.
Flucloxacilina y ~icloxacilina,igualment
de todas las cefalos~orinas
es
de primera generacin frente a S. aureus.
El disco de Cefalotina es representativo
de todas las cefalosporinas de primera
generacin q u e incluye: Cefaloridina,
Cefalexina, Cefradina, Cefazolina, Cefaloglicina, Cefadroxil, Cefacetril, Cefapirina.
Las cefalosporinas de segunda y tercera
generacin deben probarse por separado ya
que no hay sensibilidad cruzada entre llas.

E:

o!

15

27262524232221-

RANW ACEPTABLE

333231
30-

Los antibiticos recomendados p a r a

pruebas de susceptibilidad de microorgan i s m o ~Gram positivos y Gram negativos
aparecen en el cuadro 2; la lista debe
entenderse como una simple sugerencia (4).
En la seleccin de los antimicrobianos
debe tenerse en cuenta los siguientes
hechos:

10

11

12

13

14

15

16

17

1 0 19

DIAS

-t

Figura 1

ANTIBIOTICOS RECOMENDADOS EN UN
ANTIBIOGRAMA
Con el objeto de tener una gua general
al realizar un antibiograma se debe seleccionar un nmero de antimicrobianos para
el microorganismo en estudio, ya que no es
recomendable, ni lgico, ni econmico
utilizar todos los antimicrobianos. Como
regla general se pueden seleccionar antimicrobianos para microorganismos Gram
positivos, y Gram negativos y dentro de estos
ltimos para microorganismos aislados de
tracto urinario y para Ps. aeruginosa.

El disco de Tetraciclina es representativo

de todas las Tetracicl.inas. Los aminoglucosidos aunque ntimamente relacionados
tienen variaciones individuales que obligan
a probarlos individualmente. Este grupo
incluye: Gentamicina, Tobramicina, Amikacina, Kanamicina, Sisomicina y Netilmicina.
Los Macrlidos slo tienen un representante que es la Eritromicina.
Las Lincomicinas incluyen Lincomicin y
Clindamicina. El disco de Clindamicina es
representativo y debe incluirse de rutina.
El Cloranfenicol, la Vancomicina y la
Nitrofurantoina deben probarse individualmente.
El grupo de las Polimixinas, incluye la
Polimixima B y E . Solo una debe probarse
usualmente para Ps. aeruginosa.

EL ANTIBIOGRAMA DE DISCOS. NORMALIZACION DE LA TECNICA DE KIRBY-BAUER

Cuadro No. 2
ANTl B l OGRAMA DE DISCOS
GUl A PARA LA SELECCI ON DE ANTl MlCROBl ANOS
GRAM NEGAT I VOS

OPC lON

SANGRE
INTEST I NAL

Streptococcus

P
A
Staphylococcus

URINARIA
TEJIDOS

PRIMERA

GRAM POSI T I VOS

OTROS
faecalis ( D)

aeruginoso

Ampicilina

Acido oxolinico Amikocina

Corbenicilina

Penicilina G.

Ampicilina

Ampicilina

Gentamicina

Acido ndidixico Ampicifina

Amikacino

Oxacilina

Cloranfenicol

Penicilina G

Cloranfenicol

Norfloxacina

Gentamicina

Gentamicina

Eritromicina

Tetrociclina

Oxacilina

Trimlop.imSullo Nitrohimntoino

Cloranfenicd

Tobramicino

Clomnfenicol

Eritromicina

Clindamicina

Tetraciclina

Cefamndole

Polimixina

Clindamicina'

Penicilina G

Eritromicini

Sulfisoxazole

Tetrocicl ino

Trimetoprm-Culfa Trimtoph-Sulb
Tobrdino

SEGUNDA

Colistino

Gentamicina

Ampicllina

Cefoxitina

Cloranfenicol

Cefotaxima

Netilmiclna

Gentamicino

Kanomicina

Voncomicina

Gentomicina
TrirnelopTii-Sul
Cloranfenicol

asi

La Carbenicilina y antibiticos relacionados deben probarse para Ps. aeruginosa y

otros Gram negativos.

2.

Ajustar su pH a 7.2-7.4 con solucin

de NaOH 0.1N.

3.
El Acido Oxolnico, Acido Nalidixico y la
7cwfloxacina deben probarse slo para
~roorganismosaislados de tracto urinario.

Esterilizar en autoclave a una temperatura de 121"C por 15 minutos.

4.

Mantenerlo en bao mara hasta que la

temperatura sea de 48-50C.

La combinacin trimetoprim-Sulfa debe

obarse individualmente.

5.

Distribuir el medio e n c a n t i d a d
aproximada de 25 C . C . en cajas de
Petr de 15 x 150 ml, estriles.

Un disco de Sulfonamida de 300 mcg es

3presentativo de todas las sulfas. El disco
le Sulfisoxazole es el m8s utilizado.
.MEDIO DE CULTIVO
Se utiliza el medio de Muller-Hinton, el
cual debe prepararse as:
1.

Preparar el medio de acuerdo con las

instrucciones de la casa manufacturadora.

Cuando se van a estudiar microorganismos

exigentes tales como Streptococcus se debe
agregar a l medio, antes de distribuirlo en
las cajas de Petr, 5010 de sangre desfibrinada de cordero o conejo. Se debe dejar
solidificar y mantenerlo luego a temperatura
ambiente por un tiempo prudencial hasta
que el exceso de humedad se evapore. Las
cajas con el medio, pueden incubarse por
30 minutos a 35C. No debe haber gotas de

MAYE BERNAL R., MIGUEL GUZMAN U.

agua de condensacin sobre la superficie de

medio o sobre la tapa de las cajas de Petr.
El pH final de cada uno de los lotes del
medio de Mueller-Hinton solidificado debe
ser 7.2-7.4.
El medio as preparado puede ser utilizado
inmediatamente o puede conservarse en
refrigeracin hasta por dos semanas,
siempre y cuando las cajas de Petr se
guarden en recipientes hermticamente
sellados para prevenir la evaporacin. No se
deben utilizar medios secos o envejecidos
(3-7).

microorganismo en estudio. No usar

cultivos sin diluir.
2.

Colocar el aplicador por encima del

nivel del contenido del tubo y rotar10
contra las paredes del mismo para
remover el exceso del inculo.

Sembrar el inculo uniformemente

sobre la superficie del medio con el
aplicador. Hacer esta siembra en tres
direcciones. Evitar inculos muy
concentrados o muy diludos.

4.

Permitir que la superficie del medio

sembrado s e s e a u e d u r a n t e 5-20
minutos, manteniendo la caja con la
tapa cerrada.

5.

Colocar los discos sobre la superficie

del agar con un dispensador o con
pinzas estriles; con stas, presionar los
discos ligeramente sobre el agar para
asegurar un contacto uniforme.

6.

Colocar 6 discos en la periferia y 1 en el

centro (Fig. 2) dejando entre disco y
disco un espacio uniforme (aproximadamente de 2 cm.); para evitar que las
zonas de inhibicin queden imbricadas.
Colocar los antibiticos que difunden
bien en la parte externa y aquellos que
producen halos de inhibicin pequea
(tales como la Vancomicina, Colistina y
Polimixina B) en la parte central.

PREPARACION DEL INOCULO

Seleccionar 4 6 5 colonias del microorganismo en estudio, preferencialmente de
un cultivo puro o de un cultivo en que se
haya obtenido el aislamiento primario del
microorganismo. No utilizar cultivos de ms
de 24 horas. Transferir estas colonias,
simplemente tocando la parte superior de
cada una con asa bacteriolgica a un tubo
que contenga de 3-5 C.C. de caldo estril de
Mueller-Hinton o de Tripticase-soya.
Incubar este cultivo a 35C. por un tiempo
prudencial de 2 a 8 horas hasta que se
produzca un crecimiento moderado. Diluir el
cultivo con solucin salina estril o caldo
estril h a s t a obtener una turbidez
equivalente al tubo 0.5 de la escala de
McFarland lo cual corresponde aproximadamente a 108 microorganismos viables por
m1 (6).

ANT l B l OGRAMA DE DISCOS

ESTANDAR DE TURBIDEZ
Para preparar este estandar aadir 0.5 m1
de BaCL2. 2H2 O (1.175/o) a 99.5 m1 de
H2S04 0.36N (lolo). Mezclar perfectamente
y distribuir en tubos tapa rosaca 13 x 100
en cantidad de 6-8 ml.; sellar hermticamente y almacenarlos en un lugar oscuro a
temperatura ambiente. Preparar nuevo
estandar cada 6 meses. Para hacer la
comparacin con el cultivo, se debe agitar el
estandar preferiblemente con un agitador
tipo vortex (3).
SIEMBRA DE LA MUESTRA

Figura 2

1.

patrn de distribucin de los discos de antibiticos

Sumergir un aplicador de algod6n

estril, dentro de la suspensin del

en el medio de cultivo

EL ANTIBIOGRAMA DE

7.

DISCOS.

NORMALlZAClON D E LA TECNlCA D E KIRBY-BAUER

Incubar las cajas inmediatamente o en

los prximos 30 minutos a 35C. No
usar temperaturas ms altas porque
algunas c e p a s d e Staphylococcus
resistentes a Meticilina pueden no
detectarse. No incubar en cmara de
COZ.

8.

Leer las cajas depus de 16-24 horas de

incubacin.

MICROORGANISMOS EXIGENTES
Para este tipo de microorganismos se
recomiendan tcnicas especficas para cada
uno de llos, as:
Haemophilus influenzae: Se utiliza el
medio de Mueller-Hinton enriquecido con
3010 de hemoglobina o 5% de sangre de
caballo y l0/o de isovitalex (BBL) o suplemento VX (Difco). El inculo se obtiene a
partir del crecimiento de un cultivo de 18
horas. Se emulsiona el cultivo con caldo de
Mueller-Hinton a la turbidez necesaria y se
siembra como en el caso convencional. No
se requiere incubacin en C02. Las cepas
que producen un halo
de 19 mm frente al
disco de Ampicilina o Penicilina G son
productoras de Beta-Lactamasa y por tanto
no son susceptibles a la Ampicilina (3).
Neisseria gonorrhoeae: el antibiograma de
discos se ha adaptado para investigar
especialmente las cepas de N. gonorrhoeae
~ r o d u c t o r a sde Beta-lactamasa. Se utiliza
medio base GC enriquecido con 1% de
isovitalex o suplemento VX, pero no se le
agrega hemoglobina. El inculo se obtiene
a partir de un cultivo de 18 horas, se
emulsiona en caldo de Mueller-Hinton y se le
da la turbidez necesaria. Se inocula en la
forma convencional. Se incuba a 35C. en
C02. Zonas
19 mm frente al disco de
Penicilina de 10 U son productoras de
Beta-lactamasa. Las cepas susceptibles
darn zna
20 mm (3).
Streptococcus pneumoniae: Hay en la
actualidad preocupacin por la ocurrencia
de cepas de S. pneumoniae resistentes a
Penicilina con CIM 2 2 mcg/ml. Se ha
observado que hay cepas con relativa resistencia CIM 0.12 a 1.0 mcg/ml que no respon-

den al tratamiento con Penicilina. Este hecho

hace necesario recomendar que cepas
aisladas de LCR, sangre u otro lquido
orgAnico se prueben frente a un disco de
Oxacilina de 1 mcg. Se utiliza el medio
de Mueller-Hinton enriquecido con 5% de
sangre de carnero. El inculo se obtiene a
partir de un cultivo de 18 horas, el cual se
emulsiona en caldo de Mueller-Hinton, se
ajusta la turbidez al patrn convencional y
se siembra en la forma ya mencionada, se
coloca un disco de Oxacilina de 1 mcg,y se
20
incuba a 35C por 18 horas. Un halo
mm indica susceptibilidad, zonas
19 mm
indican resistencia (3).
MEDICION DE LOS HALOS DE INHIBICON
Medir la zona de inhibicin de cada
disco contra una superficie oscura bajo
luz reflejada. Medir el dimetro de la zona
incluyendo los 6 mm del disco, con una
regla sobre el respaldo de la caja de
Petr sin remover la tapa. Una lectura de
6 mm indica que no hay zona de inhibicin.
Si se ha usado agar sangre para la prueba,
la medicin de la zona de inhibicin debe
hacerse sobre la superficie removiendo la
tapa de la caja.
El punto final de inhibicin completa
del crecimiento se estima a simple vista,
excepto para las sulfonamidas y para
algunas especies de Proteus.
Con las sulfonamidas puede ocurrir
un discreto crecimiento en la zona de
inhibicin, debido a que algunos rnicroorganismos crecen por algunas generaciones
antes de que la accin de la sulfonamida
tenga lugar y debido tambin, al hecho
de que el medio de Mueller-Hinton contiene
Timidina la cual inhibe la actividad de
la sulfonamida.
Las cepas deProteus mirabilis y Proteus
vulgaris pueden crecer dentro de los halos
de inhibicin alrededor de ciertos agentes
antimicrobianos. Sin embargo, la zona de
inhibicin est usualmente bien delimitada
y este tipo de crecimiento invasivo, debe
ser ignorado.

MAYE BERNAL R.. MIGUEL GUZMAN U.

Si se necesita un resultado muy rpido,

el dimetro de la zona de inhibicin puede
leerse despus de 6-8 horas de incubacin
pero estas lecturas deben confirmarse
posteriormente, al trmino del perodo
de incubacin de 18 horas.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Los resultados obtenidos deben interpretarse de acuerdo con el cuadro N o . 3.
En la interpretacin de tales resultados
es necesario tener en cuenta lo siguiente:
El dimetro de las zonas obtenido con
aminoglucsidos d e p e n d e del medio
utilizado, debido a la variacin del contenido de cationes y depende de la calidad
del medio de Mueller-Hinton que ofrecen
las casas productoras. Los rangos de
interpretacin son los siguientes:

Cuadro No. 3
ANTl B l OGRAMA DE DISCOS
l NTERPRETAC l ON DE RESULTADOS

ANTIMICROBIANO

Zona Inhibicl6n (mm)

~l~~~
(mca i

~(54 I

Acido Nalldixico
Acldo Oxolinico

l n f e c c i i urinarla

Aml kacina
Amoicilina
Ampicill na
Carbeniclllna
Carbenlcllina

10
100

19
17

20

Haemophi ius

18-22

23

17

17
18

Proteus Y
Pssudhmohs a g l n o s a

100

13

14

Cefalotina

30

14

15

Cefamandole
Cafotaxlma

30
30

14

15

17

18

Cefoxltina

30

14

15

17

18

Clindamicina

14

15

16

17

30
IO
15

12

13

9
14

Cloranfenicol
co~lstina
Erltrom lclna

16

18
10 I I
1 7 18
1 4 15

16
16

17

Gentamlclna

10

13
12

Kanamlclna

30

13

14

- 17

18

Neomicina

30

12
1'4

13
15

17
17

13

Resistente

Indeterminado

Sensible

Amikacin

1 1 inm

12-15 mlri

16 iriin

Pmnlcllina G

10 U

10 1 1 - 1 2
20 2 1
28

(;enlaniicina

12 nim

13-16 irim

17 mm

Penicilina

IO U

11

Tobrarniciiia

1 2 min

13-16 nim

17 rnm

Polimlxlna B
Sulf l s o x a r o l s

Nilrofuranta lna
Oxacllina
G

El disco para ampicilina, es representativo

de Hetacilina y Amoxicilina. De las penicilinas resistentes a las penicilinasas el disco
clsico es la Meticilina y sus resultados
son aplicables a : Cloxacilina, Dicloxacina,
Oxacilina, Nafxilina. La Oxacilina y la
Nafxilina son sin embargo, ms resistentes
a degradarse durante el perido de almacenamiento. Los discos de Cloxacilina no
deben usarse debido a que ellos no captan
las cepas de Staphilococcus aureus resistentes a penicilina.

Trfmetoprlm -Sulfa
Tobramiclna
Vancomlcina
R

300
5

Tetraclcl l n a

Las variaciones debidas a la influencia

del medio son mucho ms marcadas con la
Pseudomonas aeruginosa; por lo tanto,
la zona indeterminada se basa sobre la
medida del dimetro de la zona que se
tenga con la cepa control de Pseudomonas
aeroginosa (ATCC 27853) y es de 3 a 6 mm
menos que cada medida. Por ejemplo,
si el dimetro medio de la cepa control
es de 19 mm la interpretacin debe ser
a 1 2 mm para cepas resistententes,
13-16 mm para cepas indeterminadas y
2 17mm para cepas susceptibles, estas
interpretaciones estandar son tentativas, 7.

OBSERVACIONES

\S(>.)

Residente

300 U 8
300
12
30

14

125&m 10
11
10
9
30

1 = Intermedio

12
9
13
15

11
12
10

- 21
-

22

16

13

19
14

1 1

12

- 18
- 15

Infeccidn u r i n a r i a

13
9 ~Q~VIOCOCCUQ
12
17

11

Infeccin urinarla

Otros mlcmorganlsmos
pseudomonap

19

S = Sensible

0:

Los datos de susceptibilidad para el

Acido Nalidco, Acido Oxolnico, Colistina,
Nitrofurantona y Sulfas d i f e r e n t e s a
Trimetorm-Sulfa son vlidos solamente
para microoganismos aislados del tracto
urinario.
Algunos microorganismos tales como
enterococos y bacilos Gram negativos que
pueden causar infecciones sic tmicas
responden a dsis altas de penicilina G ,
la serisibilidad debe interpretarse segn
la tabla incluida.
El disco de Cefalotina debe usarse para
probar la susceptibilidad de todos los tipos
de Cefalosporinas de primera generacin, estn incluidas en este grupo Cefalotina, Cefaloridina, Cefalexina, Cefazolina, Cafacetril,
Cefradina y Cefapirina entre otras. Las cepas

EL ANTIBIOGRAMA DE DISCOS. NORMALIZACION D E LA TECNlCA DE KIRBY-BAUER

de Staphilococcus aereus que muestran

resistencia a los discos de oxacilina deben
reportarse como resistentes a los antibiticos tipo cefalosporina, sin tener en cuenta
el halo de inhibicin ya que en la mayora
de las infecciones causadas por estos
organismos hay una resistencia clnica a
las cefalosporinas, por tal motivo el disco
de oxacilinade Smcg, es valido para las
penicilinas-resistentes a penicilinasa y
las cefalosporinas de primera generacin;
las de segunda y tercera deben probarse
por separado ya que no hay sensibilidad
cruzada entre ellas, 3.
El disco de Clindamicina debe usarse
para probar la susceptibilidad tanto para
la Clindamicina como para la Lincomicina.
La Colistina y Polimixina B, difunden
muy pobremente en el agar por lo tanto
la precisin de los procedimientos de
susceptibilidad por el mtodo de difusin
es menor que con otros antibiticos. La
resistencia es siempre significativa pero
cuando se postula la posibilidad de usar
tratamiento en infecciones producidas por
cepas susceptibles, los resultados de las
pruebas hechas por el mtodo de difusin
debern confirmarse con procedimientos
mediante el mtodo de dilucin. La concentracin mnima inhibitoria [CIM) no puede
c a l c u l a r s e confiablemente p a r a e s t o s
antibiticos por medio de los anlisis de
curva de regresin.
Para antiobiograma de discos se puede
utilizar cualquier disco comercial de sulfas
de 250-300 mcg, interpretandose los resultados segn la tabla incluida, los medios
que contienen sangre no son, en general
satisfactorios para antibiogramas de discos
de sulfas, excepto si se usa sangre lisada
de caballo, debe tenerse en cuenta que
el Mueller-Hinton para este antibiograma
debe ser en lo posible libre de Timidina.
El disco de Tetraciclina es representativo
de todas las tetraciclinas y su resultado
aplicable, por tanto, a todos los microorganismo~, sin embargo, muestran una
mayor sensibilidad a la doxiciclina y
minociclina.

INFORME DE LOS RESULTADOS.

El informe del resultado debe ser enviado
mdico lo mas pronto posible.
Dicho informe debe ser sencillo, claro
y preciso. Debe incluir, nombre del paciente,
muestra estudiada, microorganismo aislado
y el listado de antibiticos a los cuales
ha sido sensible. Para algunos mdicos
tambin es importante el listado de antibiticos a los cuales el microorganismo es
resistente, por tanto dicha lista debe
tambin incluirse. En algunas ocasiones
los mdicos tratantes solicitan un antibitico
especfico; este resultado debe incluirse.
Un modelo de informe aparece enla figura
N". 3.
FUENTES DE ERROR EN EL
ANTIBIOGRAMA POR DISCO
Frecuentemente algunos errores de tipo
tcnico pueden comprometer la seguridad
y confiabilidad del antibiograma por discos
ANTIBIOGRAMA

DE DISCOS

INFORME DEL RESULTADO

Nombre del paciente

Medico cmwltank
hbestra estudiada
Mlcroorgimisrno aislado

Acido Nalidixico

L1

14 Gentarnicina

2 Aci& Oxolinico

15. Konamicina

3 . Arnikacina

16 Nemicina

17. Nlhofuranloina

Arnpicilina

5 Carbenicilina
6

Cefalotina

18. Oxacilina
19. Penicilina G

7. Cefarnandoie

P.Polirnixina

21. Sulfisoxazole

Cefatarima

9 Cefoxitina

22 Tetraciclina

10. Clindarnicina

23. Trirnetoprirn-Sulfa

I l . Cloranfeniml

24 Tokarnicina

12. Colistina

25 Vancomicina

13. Eritromicina

26.

m=
m=

SENSIBLE
RESISTENTE

= INTERMEDIO

Figura 3

S I MBOLOS E

INTERPRETACION

NO

$8 piobd aam on<lmlcmbhno

por no rn dlil an el

&m(

mlcioorg~nlimo aislado.

del

MAYE BERNAL R.. MIGUEL GUZMAN U.

invalidando el procedimiento(7). La siguiente

lista incluye algunos de los errores ms
frecuentes que el laboratorio de Bacteriologa Clnica debe evitar:
1. Utilizacin de un medio diferente al de

Mueller-Hinton.
2. Preparacin incorrecta del medio de

Mueller-Hinton, particularmente en lo
que se refiere a la determinacin del pH.
3. Uso de medios con fecha de expiracin
vencida o uso de medio incorrectamente almacenado.
4. Preparacin incorrecta y almpicsna-

miento incorrecto
turbidez.

del estandar

de

5. Almacenamiento incorrecto d e los

discos.
6. I n a d e c u a d a estandarizacin d e la
concentracin del inculo.
7. OmisiBn de eliminar el exceso de cultivo
contenido en el aplicador antes de
inocular el medio slido.
8. Demora excesiva en la estandarizacin
del cultivo o demora en la inoculacin
del medio slido.
9. Demora excesiva en la aplicacin de los

discos despus de haber hecho la

inoculacin en el medio slido.
10. Demora excesiva en la incubacin del

midio despus de haber sido puestos

los discos.
11. Incubacin a temperatura diferente de

35 "C o incubacin en atmsfera de C02.

1 2 . Lectura prematura de los resultados

antes de un perido de incubacin de

16-18 horas.
13. Lectura incorrecta en la medicin de los
bordes de la zona de inhibicin por
incorrecta iluminacin.
14. Lecturas hechas sin reglilla de medicin.

15. Pruebas hechas con cultivos mixtos.

16. Realizacin d e antibiogramas con
microorganismos de crecimiento lento
o anaerbico.
17. Omisin de los controles de calidad con
las cepas control y omisin de anotar
los resultados de estas cepas control.
18. Error en la transcripcin de los
resultados de las pruebas individuales.
PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD
DIRECTA EN MATERIAL CLINICO
La inoculacin directa sobre medios para
p r u e b a s d e susceptibilidad puede en
ocasiones
suministrar
informacin
preliminar invaluable en aquellos problemas
de infeccin clnica q u e constituyen
emergencia, por ejemplo se pueden realizar
pruebas directas de muestras de urgencia
sembradas sobre el medio en casos como
LCR y otros lquidos corporales o material
purulento, si la coloracin de Gram indica
la presencia de un nmero suficiente de
bacterias o si se supone que un slo tipo de
microorganismo va a crecer. Sin embargo,
debe evitarse realizar pruebas de sensibilidad de rutina sobre muestras clnicas
directas.
La mezcla de microorganismos, muy
comn en nuestras clnicas, ofrece resultados incorrectos. Por otra parte, es muy
difcil estandarizar la concentracin de un
inculo en una muestra clnica directa. Los
resultados de estos estudios de sensibilidad
deben tomarse como resultados preliminares
o tentativos y deben repetirse y confirmarse
por uno de los procedimientos estandar
recomendados.
Cuando las pruebas de inoculacin directa
no son satisfactorias se puede obtener una
valiosa informacin preliminar haciendo una
lectura de las pruebas de sensibilidad
hechas en forma regular despus de 5 a 6
horas de incubacin a 35C. Cuando esto se
hace la prueba debe volverse a reincubar y
leerse nuevamente despus de un perido
de incubacin de 16 a 18 horas (3, 6).

EL ANTIBIOGRAMA D E DISCOS. NORMALlZAClON D E LA TECNICA DE KIRBY-BAUER

UTILIDAD EPIDEMIOLOGICA
A d e m s de la u t i l i d a d q u e el a n t i b i o g r a m a
t i e n e en e l m a n e j o clnico individual, t i e n e la
a d i c i o n a l de p e r m i t i r la vigilancia de resist e n c i a q u e p u e d e c a p t a r s e p a r a a s establecer algunas medidas tendientes a
c o n t r o l a r l a (10). T a m b i n c o n d u c e a d e f i n i r
s e n s i b i l i d a d de g n e r o s y e s p e c i e s y la
e s t a b i l i d a d de tal s e n s i b i l i d a d , l o cual
p e r m i t e al m d i c o definir c r i t e r i o s de a n t i b i o t e r a p i a p a r a tales m i c r o o r g a n i s m o s s i n
t e n e r q u e r e c u r r i r s i s t e m t i c a m e n t e a la
r e a l i z a c i n de a n t i b i o g r a m a s (11).
Aspectos Especiales
En la i n t e r p r e t a c i n de l o s r e s u l t a d o s de
inhibicin, c u a n d o e s t o s caen en el r a n g o
i n t e r m e d i o (1), se debe t e n e r en cuenta q u e
n o p u e d e a f i r m a r s e q u e la c e p a sea r e s i s tente (R), o s e n s i b l e (S); s i el antibitico en
c u e s t i n es u n a a l t e r n a t i v a i m p o r t a n t e en el
m a n e j o t e r a p u t i c o d e l p a c i e n t e , deber
hacerse a n t i b i o g r a m a p o r dilucin para
d i l u c i d a r s i , el m i c r o o r g a n i s m o es o n o
sensible.
NOTA: En a l g u n a s tablas q u e a p a r e c e n en
este t r a b a j o n o estn incluidos los d a t o s de
d i m e t r o s de s e n s i b i l i d a d p a r a los antimicrobianos recientemente introducidos,
llo se d e b e a q u e oficialmente n o han s i d o
i n c o r p o r a d o s e n los m a n u a l e s de r e f e r e n c i a .

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