INTRODUCCION

La gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ a cido

lctico dependiendo del organismo que lo efecte, como siendo en el primer caso las
levaduras las responsables.
Ambas rutas de fermentacin son similares hasta la formacin de piruvato, manteniendo
idnticas las etapas de conservacin de energa que conducen a la formacin de ATP.
La gluclisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que conduce
a la produccin de Acetil-Co-A y a su oxidacin en el ciclo del cido ctrico, sino que
tambin proporciona una va importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada
de los alimentos. La caracterstica de la gluclisis de proporcionar ATP en ausencia de
oxgeno es de significado crtico biomdico, porque permite al msculo esqueltico
hacer un trabajo sumamente eficiente an cuando la oxidacin aerbica se vuelva
insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucoltica pueden sobrevivir a
episodios de anoxia. Inversamente el msculo cardaco, que est adaptado al trabajo
aerbico, tiene una capacidad glucoltica relativamente deficiente y supervivencia
escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un nmero pequeo de enfermedades en las
que las enzimas del sistema glucoltico como por ejemplo la piruvatocinasa muestran
actividad deficiente; estas anomalas se manifiestan principalmente como anemias
hemolticas. En las clulas cancerosas que proliferan con rapidez, la gluclisis procede a
una velocidad mucho mayor que la requerida por el ciclo del cido ctrico, por tanto, se
produce ms piruvato que el puede ser metabolizado. El resultado es una produccin
excesiva del lactato, que favorece un entorno local relativamente cido en el tumor,
situacin que puede tener implicaciones con ciertos tipos de teraputica contra el cncer.
Tambin se produce acidosis lctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.

OBJETIVOS

Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentacin de levadura

Observar la fermentacin de piruvato, mediante cambios de color

MATERIALES

4 tubos de ensayo
2 tubos de centrifuga
Beaker de 400 ml
Pipetas de 5 ml
Balanza
Calentador
Pinzas para tubo de ensayo
Termmetro
Esptula
Solucin de glucosa
Levadura
Fosfato de sodio dibsico 0,5 M
Fosfato de potasio monobsico 0,5 M
Acido tricloroacetico 10%
2,4 dinitrofenilhidracina saturado en HCL 2M
NAOH 10%

TEORIA RELACIONADA

Fermentacin.
Es la extraccin de energa del piruvato en ausencia de oxgeno. Hay dos tipos de
fermentacin: la fermentacin alcohlica y la fermentacin lctica o cida. En ambos
casos la fermentacin produce dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa que
se rompe.
Las levaduras son hongos unicelulares que en presencia de oxgeno tienen respiracin
aerbica pero en ausencia de ese gas, cambian a respiracin anaerbica. Las levaduras
llevan a cabo la fermentacin alcohlica, que es aquella que con vierte el piruvato en
dixido de carbono y etanol (alcohol), por eso se ha dado el nombre de fermentacin
alcohlica.
La fermentacin alcohlica es un importante recurso econmico. Los panaderos usan la
fermentacin alcohlica de la levadura para producir pan. Cuando la levadura rompe los
carbohidratos de la pasta de harina, libera CO 2 y este forma burbujas en la pasta y esta
crece (esas burbujas son los espacios llenos de aire en la masa del pan). Cuando se
hornea el pan la levadura muere y el alcohol se evapora.
La fermentacin alcohlica se utiliza en la produccin de vinos, cervezas, ron y otras
bebidas alcohlicas, y en la produccin de etanol que se usa para producir la mezcla de
gasohol o gasolina-alcohol, usada como combustible de motor en algunos pases.
Las clulas animales no desarrollan la fermentacin alcohlica, aunque algunas como
las clulas musculares, pueden convertir al piruvato en cido lctico. La respiracin
anaerbica que produce esta sustancia se denomina fermentacin lctica (porque
produce cido lctico).
Durante un ejercicio violento, puede suceder que la respiracin no provea suficiente
oxgeno para suplir las necesidades de las clulas, y entonces las clulas musculares
continan trabajando y cambian a respiracin anaerbica, produciendo cido lctico.
Luego de un ejercicio fuerte sobreviene la fatiga muscular y sentimos dolor, ese dolor se
debe a la produccin de cido lctico y su acumulacin en los msculos. La mayora de
ese cido se moviliza a la sangre y en el hgado se convierte otra vez en piruvato.
Cuando tenemos un calambre, el cual produce un dolor tras una contraccin fuerte de un
msculo, esta se debe a una acumulacin de cido lctico producida por la contraccin
que ocurri a expensas de respiracin anaerbica por las clulas del msculo.

CUESTIONARIO

1. Cul es la funcin del acido tricloroacetico?

cido tricloroactico (tambin conocido como cido tricloroetanico) es un anlogo
del cido actico en el cual los tres tomos de hidrogeno del grupo metilo fueron
substituidos por tomos de cloro. Tiene frmula qumica CCl3COOH.
ES preparado por la reaccin del cloro con al cido actico en la presencia de un
catalizador adecuado.
CH3COOH + 3 Cl2 CCl3COOH + 3 HCl
ES anchamente usado en bioqumica para la precipitacin de macromolculas tal como
protenas, ADN y RNA. Su sal de sdio es usado como un herbicida. Soluciones
conteniendo cido tricloroactico como ingrediente son usadas para el tratamiento de
verrugas, incluyendo verrugas genitales. ES considerado seguro para el uso con este
propsito durante gestao.[1]
Sales de cido tricloroactico son llamados tricloroacetatos. Reduccin de cido
tricloroactico resulta en cido dicloroactico, un compuesto farmacolgicamente activo
que se muestra promisor en el tratamiento de cncer.
2. Cul es la reaccin de la 2,4 dinitrofenilhidrazina con el piruvato?
Los metabolitos de piruvato y acetaldehdo se encuentran presentes normalmente en
muy bajas concentraciones, por tanto para demostrar su existencia como intermediario
en el camino metablico, es necesario impedir que sean transformados en otros
compuestos. Este proceso se usa mucho cuando se investigan caminos metablicos y se
hace bloqueando la enzima que catalizas la conversin del compuesto, que se est
investigando mediante inhibidores.
La pirvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera
que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con
nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrocina.

Oxidacin aerbica y anaerbica de glucosa en la levadura

Los cristales de las distintas hidrazonas tienen puntos de fusin y ebullicin
caractersticos. Gracias a ello la 2,3-DNFH puede usarse para distinguir entre diversos
compuestos con grupos carbonilos. Este mtodo es particularmente importante porque
las determinaciones de punto de fusin requieren tan slo instrumental de bajo costo.
Esta aplicacin en qumica analtica fue desarrollada por Brady y Elsmie.[3]
Adems, no reacciona con otros grupos funcionales que contengan carbonilos, como los
cidos carboxlicos, amidas y steres.
3. Que funcin cumple el NAD+ en la produccin de piruvato?
La enzima Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) EC 1.1.1.8 cataliza la reaccin
de oxidacin del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+ como
aceptor de electrones.
Glicerol-3-fosfato + NAD+

dihidroxiacetona fosfato + NADH

Esta enzima tambin cataliza las reacciones de oxidacin y reduccin del propano-1,2diol y del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucha menos afinidad.
Durante la gliclisis se genera NADH en el citosol en la oxidacin del gliceraldehdo-3fosfato y se debe regenerar ms NAD + para que la gliclisis contine. El NADH no
puede pasar a la mitocondria para ser oxidado por la cadena respiratoria ya que la
membrana interior mitocondrial es impermeable al NADH y NAD +. La solucin es que
los electrones del NADH, en vez del propio NADH, sean transportados a travs de esta
membrana.
Una de las maneras de introducir electrones del NADH en la cadena respiratoria es la
lanzadera del glicerol-3-fosfato. El primer paso es transferir un par de electrones desde
el NADH a la dihidroxiacetona fosfato, un intermedio glicoltico, para formar glicerol3-fosfato. Esta reaccin es catalizada por la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa en el
citosol. El glicerol-3-fosfato es reoxidizado a dihidroxiacetona fosfato en la superficie
exterior de la membrana interior mitocondrial por una isozima de la glicerol-3-fosfato

dehidrogenasa unida a la membrana. Un par de electrones se transfiere desde el glicerol3-fosfato al grupo prosttico FAD de la enzima para producir FADH 2. Esta reaccin
regenera la dihidroxiacetona fosfato.
Por ltimo, la flavina reducida transfiere sus electrones a al transportador de electrones
Q que entra en la cadena respiratoria como QH2.
La lanzadera del glicerol-3-fosfato se utiliza mucho en los msculos ya que permite
mantener una alta velocidad de fosforilacin oxidativa. En cambio, en el corazn y en el
hgado, los electrones del NADH citoslico son transportados a la mitocondria por la
lanzadera del malato-aspartato que est formada por 2 transportadores y 4 enzimas (2
unidades de la malato deshidrogenasa y 2 unidades de la aspartato transaminasa).
El ciclo de Krebs tiene lugar en las mitocondrias de las plantas y animales, mientras que
en los procariotas ese ciclo ocurre en el citosol; se hace, pues en todos los organismos
aerobios. El punto de entrada de todos los combustibles al ciclo de Krebs a travs del
intermediario metablico acetil CoA; ste se condensa con una molcula de oxalacetato,
para dar citrato, de all el nombre de ciclo del cido ctrico, y como da origen a otros
cidos tricarboxlicos, tambin se llama ciclo de los cidos tricarboxlicos. El
oxalacetato que se desprende en forma de CO2 corresponde al oxalacetato y no al ltimo
acetilo incorporado.
En consecuencia, el oxalacetato que se regenera al final del ciclo no contiene los
mismos tomos de carbn que el oxalacetato original. En cada vuelta del ciclo se oxida
un residuo acetil CoA a dos molculas de CO 2; simultneamente se reducen 4
coenzimas 3 NAD+ a 3 NADH y 1 FAD a 1 FADH 2. Adems se genera un GTP a partir
de GDP + fosfato inorgnico que dar posteriormente un ATP3.
La velocidad de las enzimas para regular el ciclo depende bsicamente de la cantidad de
ATP; si hay demasiado, la velocidad de ciclo disminuye y, si por el contrario hay exceso
de ADP la velocidad del ciclo aumenta4. El ciclo de Krebs representa la va final comn
de la oxidacin aerbica de todos los sustratos de la dieta (protenas, lpidos y
carbohidratos) con produccin de CO2 como desecho, reduccin de coenzimas que van
a transportar tomos de hidrgeno y electrones que se utilizarn en la cadena
respiratoria para la formacin de ATP y de una molcula de GTP que reaccionar con el
ADP y formar ATP. As se resume la utilidad y la productividad del ciclo.
Cada molcula de NAD+ acepta 2 electrones y 1 protn. El protn y uno de los
electrones se une a un tomo de carbono de la molcula de NAD+; el otro electrn
neutraliza la carga positiva. Esta forma reducida de NAD+ se denomina NADH. El
NADH es el principal intermediario entre el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria.
Algunos insectos no tienen L-lactato deshidrogenasa y son completamente dependientes
de la lanzadera del glicerol-3-fosfato para regeneral el NAD+ citoslico.

4. Consulte la va de la glicolisis y determine los pasos irreversibles de esta

va?
La gluclisis es la va metablica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y as
obtener energa para la clula. Consiste esta ruta en 10 reacciones enzimticas que
convierten a la glucosa en dos molculas de piruvato, el cual es capaz de seguir otras
vas metablicas y as continuar entregando energa al organismo. Es la va inicial del
catabolismo (degradacin) de carbohidratos.
Etapas de la gluclisis
La gluclisis se divide en dos partes principales y diez reacciones enzimticas, que se
describen a continuacin.
Fase de gasto de energa (ATP)
Esta primera fase de la gluclisis consiste en transformar una molcula de glucosa en
dos molculas de gliceraldehdo. Hasta el momento solo se ha consumido energa
(ATP), sin embargo, en la segunda etapa, el gliceraldehdo es convertido a una molcula
de mucha energa, donde finalmente se obtendr el beneficio final de 4 molculas de
ATP.
1er paso: Hexoquinasa
La primera reaccin de la gluclisis es la fosforilacin de la glucosa, para activarla
(aumentar su energa) y as poder utilizarla en otros procesos cuando sea necesario. Esta
activacin ocurre por la transferencia de un grupo fosfato del ATP, una reaccin
catalizada por la enzima hexoquinasa,[7] la cual puede fosforilar (aadir un grupo
fosfato) a molculas similares a la glucosa, como la fructosa y manosa.
Las ventajas de fosforilar la glucosa son 2: La primera es hacer de la glucosa un
metabolito ms reactivo, mencionado anteriormente, y la segunda ventaja es que la
glucosa-6-fosfato no puede cruzar la membrana celular -a diferencia de la glucosa-ya
que en la clula no existe un transportador de G6P. De esta forma se evita la prdida de
sustrato energtico para la clula.
Tcnicamente hablando, la hexoquinasa slo fosforila las D-hexosas, y utiliza de
sustrato MgATP2+, ya que este catin permite que el ltimo fosfato del ATP (fosfato
gamma, -P o P) sea un blanco ms fcil para el ataque nucleoflico que realiza el
grupo hidroxilo (OH) del sexto carbono de la glucosa, lo que es posible debido al Mg 2+
que apantalla las cargas de los otros dos fosfatos.
2o paso: Glucosa-6-P isomerasa
ste es un paso importante, puesto que aqu se define la geometra molecular que
afectar los dos pasos crticos en la gluclisis: El prximo paso, que agregar un grupo
fosfato al producto de esta reaccin, y el paso 4, cuando se creen dos molculas de
gliceraldehido que finalmente sern las precursoras del piruvato.

En esta reaccin, la glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa-6-fosfato, mediante la

enzima glucosa-6-fosfato isomerasa. La isomerizacin ocurre en una reaccin de 4
pasos, que implica la apertura del anillo y un traspaso de protones a travs de un
intermediario cis-enedio
Puesto que la energa libre de esta reaccin es igual a +1,7 kJ/mol la reaccin es no
espontnea
y
se
debe
acoplar.

3er paso: Fosfofructoquinasa

Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato en el carbono 1, con gasto de un ATP, a travs de
la enzima fosfofructoquinasa-1 (PFK1). Tambin este fosfato tendr una baja energa de
hidrlisis. Por el mismo motivo que en la primera reaccin, el proceso es irreversible. El
nuevo producto se denominar fructosa-1,6-bifosfato.
La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la gluclisis.
Como hay otros sustratos aparte de la glucosa que entran en la gluclisis, el punto de
control no est colocado en la primera reaccin, sino en sta. La fosfofructoquinasa
tiene centros alostricos, sensibles a las concentraciones de intermediarios como citrato
y cidos grasos. Liberando una enzima llamada fosfructocinasa-2 que fosforila en el
carbono
2
y
regula
la
reaccin.

4o paso: Aldolasa
La enzima aldolasa (fructosa-1,6-bifosfato aldolasa), mediante una condensacin
aldlica reversible, rompe la fructosa-1,6-bifosfato en dos molculas de tres carbonos
(triosas): dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato. Existen dos tipos de
aldolasa, que difieren tanto en el tipo de organismos donde se expresan, como en los
intermediarios de reaccin.
Esta reaccin tiene una energa libre (G) entre 20 a 25 kJ/mol, por lo tanto en
condiciones estndar no ocurre de manera espontnea. Sin embargo, en condiciones
intracelulares la energa libre es pequea debido a la baja concentracin de los sustratos,
lo
que
permite
que
esta
reaccin
sea
reversible.

5o paso: Triosa fosfato isomerasa

Puesto que slo el gliceraldehdo-3-fosfato puede seguir los pasos restantes de la
gluclisis, la otra molcula generada por la reaccin anterior (dihidroxiacetona-fosfato)
es isomerizada (convertida) en gliceraldehdo-3-fosfato. Esta reaccin posee una energa
libre en condiciones estndar positiva, lo cual implicara un proceso no favorecido, sin
embargo al igual que para la reaccin 4, considerando las concentraciones intracelulares
reales del reactivo y el producto, se encuentra que la energa libre total es negativa, por
lo que la direccin favorecida es hacia la formacin de G3P.
ste es el ltimo paso de la "fase de gasto de energa". Slo hemos gastado ATP en el

primer paso (hexoquinasa) y el tercer paso (fosfofructoquinasa-1). Cabe recordar que el

4to paso (aldolasa) genera una molcula de gliceraldehdo-3-fosfato, mientras que el 5to
paso genera una segunda molcula de ste. De aqu en adelante, las reacciones a seguir
ocurrirn dos veces, debido a las 2 molculas de gliceraldehdo generadas de esta fase.
Hasta esta reaccin hay intervencin de energa (ATP).
Fase de beneficio Energtico
6o paso: Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa
Esta reaccin consiste en oxidar el gliceraldehdo-3-fosfato utilizando NAD+ para aadir
un ion fosfato a la molcula, la cual es realizada por la enzima gliceraldehdo-3-fosfato
deshidrogenasa o bien, GAP deshidrogenasa en 5 pasos, y de sta manera aumentar la
energa del compuesto.
Tcnicamente, el grupo aldehdo se oxida a un grupo acil-fosfato, que es un derivado de
un carboxilo fosfatado. Este compuesto posee una energa de hidrlisis sumamente alta
(cercana a los 50 kJ/mol) por lo que se da inicio al proceso de reacciones que permitirn
recuperar el ATP ms adelante.
Mientras el grupo aldehdo se oxida, el NAD + se reduce, lo que hace de esta reaccin
una reaccin redox. El NAD+ se reduce por la incorporacin de algn [H+] dando como
resultado una molcula de NADH de carga neutra.
7o paso: Fosfoglicerato quinasa
En este paso, la enzima fosfoglicerato quinasa transfiere el grupo fosfato de 1,3bisfosfoglicerato a una molcula de ADP, generando as la primera molcula de ATP de
la va. Como la glucosa se transformo en 2 molculas de gliceraldehdo, en total se
recuperan 2 ATP en esta etapa. Ntese que la enzima fue nombrada por la reaccin
inversa a la mostrada, y que sta opera en ambas direcciones.
Los pasos 6 y 7 de la gluclisis nos muestran un caso de acoplamiento de reacciones,
donde una reaccin energticamente desfavorable (paso 6) es seguida por una reaccin
muy favorable energticamente (paso 7) que induce la primera reaccin. En otras
palabras, como la clula se mantiene en equilibrio, el descenso en las reservas de 1,3
bifosfoglicerato empuja a la enzima GAP deshidrogenasa a aumentar sus reservas. La
cuantificacion de la energa libre para el acople de ambas reacciones es de alrededor de
-12 kJ/mol.
sta manera de obtener ATP sin la necesidad de O2 se denomina fosforilacin a nivel de
sustrato.
8o paso: Fosfoglicerato mutasa
Se isomeriza el 3-fosfoglicerato procedente de la reaccin anterior dando 2fosfoglicerato, la enzima que cataliza esta reaccin es la fosfoglicerato mutasa. Lo nico
que ocurre aqu es el cambio de posicin del fosfato del C3 al C2. Son energas
similares y por tanto reversibles, con una variacin de energa libre cercana a cero.

9o paso: Enolasa
La enzima enolasa propicia la formacin de un doble enlace en el 2-fosfoglicerato,
eliminando una molcula de agua formada por el hidrgeno del C2 y el OH del C3. El
resultado es el fosfoenolpiruvato.
10o paso: Piruvato quinasa
Desfosforilacin del fosfoenolpiruvato, obtenindose piruvato y ATP. Reaccin
irreversible mediada por la piruvato quinasa.
El enzima piruvato quinasa es dependiente de magnesio y potasio. La energa libre es de
-31,4 kJ/mol, por lo tanto la reaccin es favorable e irreversible.
El rendimiento total de la gluclisis de una sola glucosa (6C) es de 2 ATP y no 4 (dos
por cada gliceraldehdo-3-fosfato (3C)), ya que se consumen 2 ATP en la primera fase, y
2 NADH (que dejarn los electrones Nc en la cadena de transporte de electrones para
formar 3 ATP por cada electrn). Con la molcula de piruvato, mediante un paso de
oxidacin intermedio llamado descarboxilacin oxidativa, mediante el cual el piruvato
pasa al interior de la mitocondria, perdiendo CO2 y un electrn que oxida el NAD+, que
pasa a ser NADH ms H+ y ganando un CoA-SH (coenzima A), formndose en acetilCoA gracias a la enzima piruvato deshidrogenasa, se puede entrar al ciclo de Krebs
(que, junto con la cadena de transporte de electrones, se denomina respiracin.

BIBLIOGRAFIA

http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol25No2/celulas.html

http://www.xuletas.es/ficha/protocolo-10/

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http://es.wikilingue.com/pt/%C3%81cido_tricloroac%C3%A9tico