Medida de la Biomasa

La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada frecuentemente como

base para la medida de una actividad metablica, o de un constituyente metablico o qumico.
Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables, pero pueden volverse
complicados si se busca la exactitud.
Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la
separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de
muestra.
La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al
peso total de la masa. La cantidad de lquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de
clulas bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 530% del peso, de acuerdo a la forma y deformacin celular. Para corregir el peso hmedo se
determina la cantidad de lquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una
centrifugacin, para ello se utilizan soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden
ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.
Peso seco: El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una
suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta
tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a que diferencias del orden de los
miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias.
La desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el
secado y puede existir alguna degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad durante
el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.
Determinacin de cidos nucleicos: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa
de una poblacin bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico
(generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la poblacin.
Determinacin de nitrgeno: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de
una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que
contiene una muestra con relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede analizarse el
nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el nitrgeno proteico mediante absorcin en UV,
Reaccin de Biuret, Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de Kjeldahl.

El Mtodo Kjeldahl es un proceso de anlisis qumico para determinar el contenido

en nitrgeno de una sustancia qumica y se engloba en la categora de medios por digestin
hmeda
Se usa comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos.
El principal inconveniente de este mtodo consiste en la posible valoracin de nitrgeno no
protico (NNP), e incluso de sustancias txicas y sin ningn valor nutritivo como lo ocurrido
en china en 2008
Otro mtodo para medir el contenido de nitrgeno es mtodo Dumas
El Mtodo desarrollado por Kjeldahl consta de tres etapas:

1. Digestin: conversin del Nitrgeno (proveniente de las protenas, por ejemplo) en

ion amonio mediante calentamiento (a una temperatura de 400 C aproximadamente)
en bloque de digestin con adicin previa de cido sulfrico y catalizador (sulfato de
cobre (II) ), que desencadenan la conversin del nitrgeno de la muestra en amonio.
2. Destilacin: separacin por arrastre con vapor del amonaco y posterior
solubilizacin en una solucin cida de concentracin conocida.
En esta etapa se adiciona NaOH a la disolucin de amonio obtenida previamente,
generndose NH3 y vapor de agua, que arrastra al mismo.
La solubilizacin posterior en la solucin cida permite la conversin de NH3 a catin
amonio, el cual se encuentra junto con el exceso de solucin cida aadido.
El NH3 puede recogerse sobre dos medios: cido fuerte en exceso de concentracin
conocida, o bien, cido brico en exceso medido.
3. Valoracin: medicin de la cantidad de cido neutralizado por el amonaco disuelto,
lo que indica la cantidad de Nitrgeno presente en la muestra inicial.
Segn el medio de recogida en la destilacin, el amonio se valora de dos formas:

Recogida sobre cido fuerte en exceso medido: se emplea una base y el indicador
rojo metilo.

Recogida sobre cido brico en exceso medido: se emplea un cido y el indicador

rojo metilo.