UNMSM

E.A.P ING. AGROINDUSTRIAL

LABORATORIO DE ANLISIS
INSTRUMENTAL
PRCTICA N 01:
DETERMINACIN DE CAFENA EN BEBIDAS
GASIFICADAS

INTEGRANTES:
HUAMN PONTE JORGE ALBERTO
LEN FLORES EMIL ROMERO
PROFESOR:
QUIM. EDDY SAUL REY-SANCHEZ GARCA

PRCTICA N 02
1. RESUMEN

Se muestra el uso de la tcnica de espectrofotometra UV en la determinacin de

la concentracin de cafena en gaseosa inca cola. Se utiliz estndares primarios a
concentraciones de 1, 2, 5 y 10 ppm con el fin de determinar un modelamiento que nos
permita cuantificar la concentracin de cafena en la gaseosa, para ello se hicieron 3
diluciones de la muestra 1ml/ 25 ml , 1ml / 50 ml , 1 ml/ 100 ml. La gaseosa inka cola
tiene una concentracin de 150.9 ppm y est dentro de los lmites (menor a 200 ppm)
que exige la norma tcnica peruana de bebidas gasificadas.
2. PRINCIPOS TEORICOS

La cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas, slido cristalino, blanco y de

sabor amargo, que acta como una droga psicoactiva, levemente disociativa y
estimulante por su accin antagonista no selectiva de los receptores de adenosina.
Fisone G, Borgkvist A, Usiello A (2004).
Su frmula qumica es C8H10N4O2, su nombre sistemtico es 1,3,7-trimetilxantina
o 3,7-dihidro-1,3,7-trimetil-1H-purina-2,6-diona y su estructura puede verse en la figura
1.
La cafena es tambin un ingrediente comn de muchas bebidas no alcohlicas
(especialmente bebidas gaseosas), como refrescos de cola originalmente preparados a
partir de la nuez de cola. Estas bebidas contienen tpicamente entre 10 y 50 miligramos
de cafena por racin. En contraste, las bebidas energticas como Red Bull pueden
contener ms de 80 miligramos de cafena por racin. La cafena en estas bebidas est
presente en los ingredientes usados en ellas, o se aade. El guaran, un ingrediente
primario en las bebidas energticas, contiene grandes cantidades de cafena con

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pequeas cantidades de teofilina y teobromina junto a un excipiente natural que produce

una lenta liberacin de estas sustancias.
Este experimento se basa en la determinacin del espectro de absorcin de energa
radiante por una sustancia en la regin ultravioleta, a partir del cual se determina la
longitud de onda de mxima absorcin. Con esta longitud de onda se establece la curva
de calibracin a partir de soluciones estndares preparadas a partir de una solucin
patrn. Luego se miden las muestras con la longitud de onda de mxima absorcin que
se determin de la solucin patrn y se calcula la concentracin utilizando la curva de
calibracin.
El espectro de absorcin de la cafena en agua presenta un mximo de absorcin
de 273 nm. (Reyes. 1983).
-Scattering:
El concepto de scattering se relaciona mucho con el de reflexin. De hecho, scattering
es un tipo de reflexin, al que se le llama reflexin difusa. A las reflexiones comunes (en
donde la luz impacta la no-uniformidad o superficie y rebota en un ngulo predicho por
la Ley de reflexin) se les denomina reflexiones especulares. En la figura 3 puede
observarse como acta el fenmeno de reflexin difusa.

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3. EQUIPO

Espectrofotmetro UV 1700 SHIMADZU

ESPECIFICACIONES:
o Rango de longitud de onda de 190 a 1100 nm
o Banda espectral: 1 nm de ancho (190 a 1100nm)
o Longitud de onda de visualizacin: incrementos de 0,1 nm
o Longitud de onda establecidos: incrementos de 0.1 nm (incrementos de 1 nm al
establecer el alcance de deteccin)
o Longitud de onda precisin:

0,1 nm en 656.1nm D2

o 0,3 nM (190 a 1100nm)

o Repetibilidad de longitud de onda: 0,1 nm
o Sistema fotomtrico: doble haz
o Rango fotomtrico:

Absorbancia: -4-4 Abs

Transmitancia: 0% a 400%

o Precisin fotomtrica:

0,002 Abs (0.5Abs)

o 0,004 Abs (1.0Abs)
o 0,006 Abs (2.0Abs)

o Repetibilidad fotomtrica:

menos de 0,001 Abs (0.5Abs)

o menos de 0,001 Abs (1Abs)

o menos de 0,003 Abs (2.0Abs)
o La estabilidad de lnea de base: menos de 0.0003 Abs / H a 700 nm
o (Una hora despus de la fuente de luz en ON)
o Nivel de ruido: Dentro 0,00005 Abs valor RMS (a 700 nm)
o Peso: 15kg

Software UV PROBE

Agitador magntico

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4. MATERIALES

Vasos de 50 mL
Fiolas de 25, 50 y 10mL
Pipeta volumtrica de 1, 2, 5 mL
Propipeta
Papel tissue

5. REACTIVOS

Estndar de cafena
Agua Destilada

6. MATERIA PRIMA

Gaseosa Inka Kola

7. PROCEDIMIENTO EMPLEADO
Preparacin de la muestra

Se coloc 50mL aproximadamente de la muestra (gaseosa Inka Kola) en un vaso

de 100 mL, Luego se colc en el agitador magntico para desgasificarlo

Se tom 1mL del agua desgasificada y se llev en una fiola a un volumen de

50mL, en otra con25mL y 100mL con agua destilada. Teniendo tres soluciones
distintas

Preparacin de estndares

Se pes 0,104 g de cafena y se llev a una fiola de 100 mL con agua destilada.

Se tom 1mL de esta solucin y se llev a un volumen de 50mL (sol. Patrn:

10ppm)

Se prepar soluciones de 1, 2 y 5 ppm a partir del patrn.

Determinacin de las absorciones de las muestras

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Con la ayuda del espectrofotmetro UV-1700 Shimadzu y utilizando el software

UV probe realizamos la determiacion de la longitud de onda de la cafena

Luego trazamos la curva con los estndares

A continuacin realizamos las lecturas de las muestras y graficamos la curva

patrn

El software nos brinda las concentraciones obtenidas de las muestras con

respecto al patrn.

8. TABLAS DE RESULTADOS

Cuadro 1. Longitud de onda de la cafena a 1ppm de solucin estndar.

N

CONCENTRACION

1 (PICO)
2 (VALLE)1

1 ppm
1 ppm

LONGITUD DE
ONDA MAXIMA
273
246

ABSORBANCIA
0.073
0.042

Cuadro 2. Valores de absorbancia de la solucin estndar y blanco a distintas

concentraciones.
IDENTIDAD
BLANCO
ESTANDAR 1
ESTANDAR 2
ESTANDAR 3
ESTANDAR 4

CONCENTRACION (ppm)
0
1
2
5
10

ABSORBANCIA A 273 nm
0
0.046
0.106
0.263
0.507

Cuadro 3. Valores de concentracin y absorbancia de la muestra a distintas diluciones.

IDENTIDAD
INCA KOLA 1/25
INKA KOLA 1/50
INKA KOLA 1/100

CONCENTRACION
ANALITO (ppm)
6.036
3.001
1.416

Cuadro 4. Prueba de GRUBBS

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ABSORBANCIA A 273 nm
0.306
0.154
0.073

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PRUEBA DE GRUBBS
Ts obtenido para 1.416
0.881
ppm
T fijado al 95 %
1.99

Ts < T

Valor tipico

Cuadro 5. Concentracin de cafena en la gaseosa (ppm)

Cafena en gaseosa

150.9 ppm

GRAFICO 1. Espectro de absorcin de la cafena a un 1ppm.

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En un rango de longitud de onda de 180 400 nm se muestra el espectro de una

solucin estndar a una concentracin de 1 ppm de cafena. Se observa que la longitud
de onda mxima de absorcin de la cafena es de 473 nm a una absorbancia de 0.073.
Grafico 2. Absorbancia vs concentracin.
0.6
0.5

f(x) = 0.05x + 0
R = 1

0.4

absorbancia

0.3
0.2
0.1
0

10

12

Concentracion (ppm)

Al variar la concentracin de una solucin estndar (1, 2, 5 y 10 ppm) con la

absorbancia se obtiene una recta con pendiente positiva con un nivel de aceptacin de
99.91 % lo cual indica que los datos cumplen con el modelamiento.
Grafico 3. Concentracin del analito (ppm) en funcin a las muestras a evaluar.
7
6
5

f(x) = - 2.31x + 8.1

R = 0.97

4
Concentracin del analito (ppm)

3
2
1
0
0.8

1.3

1.8

2.3

2.8

Numero de muestra

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La concentracin del analito disminuye directamente proporcional con las diluciones

hechas con la muestra de gaseosa. Se obtiene una aceptacin del 96,82 %, lo cual est
dentro de lo aceptable pero se tiene que analizar el porqu de la variacin del ltimo
punto, ya que es el que genera una ligera desviacin.

9. DISCUSION DE RESULTADOS
En la grfica 1 se muestra el espectro de absorcin de la cafena a 1ppm con una
longitud de onda mxima de 273 nm lo cual se constata con lo dicho por Harold F y
Jorge reyes (1983). La determinacin de la longitud de onda nos permiti tabular y
obtener un grfico (grfico 2) de absorbancia que vara linealmente en funcin a las
distintas concentraciones de solucin estndar lo que a su vez conlleva a pensar que se
est cumpliendo con la ley de Lambert-Beer. El grafico 3 muestra una tendencia lineal
con un nivel de confianza de 96,82 % con una ligera desviacin del ltimo punto, es
decir con la menor dilucin

(1ml/100 ml) generada por errores volumtricos al

memento de pipetear la gaseosa, por inexperiencia del manipulador al momento de

hacer las diluciones, por la luz parasitaria en el espectrofotmetro UV-1700
(manipulador mantuvo expuesta mucho tiempo el lugar donde se coloca la muestra a
radiacin externa), se palpo la zona de la celda por donde pasa el haz de luz, porque no
se saba con exactitud la pureza de la cafena utilizada como estndar entre otros. La
desviacin se trat de eliminar mediante la Prueba de Grubbs, se hall un T de 0.88 y

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est por debajo del T de 1.99 en un nivel de confianza al 95 % lo que nos indica que
dicho valor no es atpico por ende no puede ser eliminado.
La concentracin de cafena en la gaseosa inka cola fue de 150.9 ppm y est dentro del
rango de los requisitos de la norma tcnica peruana BEBIDAS GASIFIICADAS.
JARABEADAS - INDECOPI ( ex ITINTEC ) 214.001. el cual menciona que debe ser
menor a 200 ppm.
10. CONCLUSION Y RECOMENDACIONES
No hay dificultad para el cumpliento de la ley de Lambert-Beer.
El proceso de anlisis por espectrofotometra UV de cafena en gaseosa no fue
muy tedioso por la flexibilidad y versatilidad de la tcnica.
La concentracin de cafena fue de 150.9 ppm y est dentro de los lmites que la
norma tcnica peruana de bebidas gasificadas te lo exige.

11.

BIBLIOGRAFIA

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The international harmonized protocol for the proficiency testing of analytical chemistry
laboratories. Pure & Appl. Chem., Vol 78, 1, 145 -196 (2005).
Thomas Murphy y Alex T. Lau. (Noviembre/Diciembre 2008). Manejo de valores
atpicos. 03/04/2015, de Magazines & Newsletters / ASTM Standardization News Sitio
web: http://www.astm.org/SNEWS/SPANISH/SPND08/datapoints_spnd08.html.
INDECOPI. (1974). NTP 214.002. Bebidas y gaseosas. 2002-2015, de Montana S.A
Sitio web: http://biblioteca.montana.com.pe/dspace/handle/123456789/16/browse?
type=subject&order=ASC&rpp=20&value=Normas+T%C3%A9cnicas.
Anglica Rodrgues B.. (2001). Determinacin de cafena en bebidas gasificadas
oscuras y determinacin de casena en leche con aplicacin de espectrofotometra de
segunda derivada.. Revista Peruana de Qumicos e Ing. qumicos, 4, 72-77.
Mximo Gallignani*, Marifred Torres, Carlos Ayala y Mara del Rosario Brunetto.
(2008). Determination of caffeine in coffee by means Fourier transform infrared
spectrometry. Rev. Tc. Ing. Univ. Zulia., 31, 159-168
Harold F. WATSON/ Jorge Reyes. (1983). modern chemical analysis and
instrumentation. EE.UU: Revert.

12. ANEXOS
CALCULOS
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1. PRUEBA DE GRUBBS
Se calcula un promedio (Xp) de las tres concentraciones de la muestra del analito
(cuadro 3):
Xp=

6.036+3.001+1.416
=3.4843
3

Se halla la desviacin estndar (S):

S=

(6.0363.001)2 +(3.0013.4843)2+(1.4163.4843)2
=2.3476
2

Y finalmente el T, lo cual permitir definir si el valor es atpico o tpico:

T=

l 1.4183.4843 l
=0.88
2.3476

El T < al T=1.99 definido para un nivel de confianza del 95 %. Entonces el valor no es

atpico.
2. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE CAFEINA EN LA
GASEOSA
Se tiene que:
Para una dilucin de 1 ml gaseosa en 25 ml de agua hay una concentracin de 6.036
ppm , entonces:
ppm x 1 ml=25 ml x 6.036 ppm
ppm=150.9 ppm
En conclusin en la muestra hay 150.9 ppm de cafena.

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FIGURAS

Figura 1. Esquema molecular de la cafena

Figura 2. Espectrofotmetro UV-1700 shimadzu

Figura 3. Reflexin difusa (scattering)

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