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PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA

1) Realice una clasificacin general de los diferentes mecanismos de separacin cromatogrficos,


indique la naturaleza del las fases y el tipo de interaccin que tiene lugar en cada caso. D algunos
ejemplos de los mtodos comprendidos.
PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA PLANAR
2) a-En base al cuadro de los adsorbentes ms comunes dado a continuacin discuta porque no est
incluida celulosa.
b- Justifique por qu en cromatografa de adsorcin no usara sacarosa como fase estacionaria slida si
tuviese que analizar una solucin acuosa que contiene cationes sodio, potasio y magnesio.
Adsorbentes dbiles

Adsorbentes medianos

Adsorbentes fuertes

sacarosa

carbonato de calcio

silicato de magnesio activado

almidn

fosfato de calcio

almina activada

talco

fosfato de magnesio

carbn activado

hidrxido de calcio

slica gel activada

carbonato de sodio

3) Dado el Rf = 0.5 para una sustancia, cul es la posicin de la misma sobre la placa que se muestra
a continuacin?
Frente de solvente

9 cm

Lnea de siembra

4) Para la separacin de dos analitos (una acetona aliftica de un alcohol aliftico) en silicagel, discuta
porque el Rf del alcohol debera ser menor que el de la cetona (consultar Tabla III).
Podra esperarse una retencin por quimiosorcin?
5) Dos componentes A y B en una mezcla tienen un Rf muy similar de 0.02 y 0.03 en slica gel con
fase mvil de 2-cloropropano : pentano (8:92). Cul de las siguientes fases mviles usara para la
separacin de los componentes A y B:
a- pentano
c- acetonitrilo-pentano (20:80)
b- metanol
d- metanol-diclorometano (1.5:98.5).
Para conocer el valor de o (energa de adsorcin del solvente por unidad de rea del adsorbente)
consulte la nomografa que se adjunta (tablas I y II).

6) a- La Fig. 1 muestra la separacin de acetofenona y bifenilo. Calcule la resolucin entre ambos


compuestos, siendo la distancia entre los centros de las manchas 1,27 cm y
Frente del solvente los dimetros promedio del bifenilo y acetofenona 0,35 y 0,40 cm
respectivamente.
Bifenilo
b- Discuta cmo se podra mejorar la resolucin entre dos compuestos que
tienen un valor de Rf aceptable pero que no estn bien separados.
Acetofenona
7) A continuacin se clasifican y dan algunos ejemplos de los diferentes
mtodos de revelado que se utilizan en cromatografa planar:
Origen

Fig.1

Segn se destruya o no la muestra


Destructivo
No destructivo
Radiacin UV
Radiacin V
Vapores de yodo
Radiacin UV
cido sulfrico
Vapores de yodo
Agua
Agua

Segn el tipo de interaccin


Qumico
Fsico
Vapores de yodo
cido sulfrico
Agua

Radiacin V
Radiacin UV

a- A partir de la observacin del cuadro discuta las siguientes aseveraciones:


a1- Cuando se visualizan aminocidos rociando con un spray de ninhidrina se est usando una tcnica
qumica destructiva.
a2- El agua podra actuar como agente destructivo en el caso de algunos sters.
a3- Los compuestos inorgnicos no pueden detectarse utilizando cido sulfrico.
a4- La radiacin ultravioleta podra ser una tcnica de visualizacin destructiva.
b- En una cromatografa preparativa justifique qu mtodo usara para visualizar: destructivo o no
destructivo?

PROBLEMAS DE CROMATOGRAFA EN COLUMNA


8) Si el tiempo de retencin de un componente A es mucho mayor que el de un componente B, qu
indica esto acerca de los analitos en:
a- Una cromatografa de permeacin en gel?
b- Una cromatografa de fase reversa?
9)
b- En qu circunstancias es conveniente derivatizar un analito antes de realizar un anlisis por CG?
c- Qu es un gradiente en CG y en CL?
d- Qu ventajas tiene una fase estacionaria ligada en CG?
e- Porqu el detector de conductividad trmica responde a todos los analitos excepto al gas
portador?
f- Comparar las propiedades de una columna tubular abierta con las de una columna empaquetada.

10) Los siguientes datos fueron obtenidos por medio de un cromatograma gas lquido, en una columna
de 1.50 m., cuya fase estacionaria es de escualeno.
Compuesto
no retenido
benceno (PE 80 C)
hexano (PE 68 C)

tr (min)
3
10
11

w (min)

1.1
1.4

Calcular :
a- El tiempo de retencin corregido (tr') para cada compuesto.
b- El nmero promedio de platos (N prom.).
c- La resolucin (R) entre ambos picos y decir si se logra la separacin.
d- En base a los datos obtenidos grafique un cromatograma, respetando las escalas. Considere que el
hexano es el compuesto que est en mayor concentracin.
e- Cmo se puede mejorar la resolucin entre dos picos prximos en CG?
11) Los siguientes tiempos de retencin y ancho de picos fueron observados en una columna gas
lquido de 1,50 m, rellena con FE muy polar, de composicin qumica del tipo del etilen glicol.
Compuesto
no retenido
hexano (PE 68 C)
1-metiletil metanoato (PE 68 C)

tr (min)
0.40
4.60
5.00

w (min)
0.35
0.37

Calcular:
a- El factor de capacidad (k') para cada sustrato.
b- El factor de selectividad ().
c- La altura equivalente del plato terico (AEPT o H).
d- Qu modificaciones hubiese observado en los tr si la fase estacionaria hubiese sido no polar, por
ejemplo escualeno? Y si la fase hubiese sido levemente polar, con una estructura del tipo de ftalato de
didonilo? (ver Tablas IV, V y VI).
12) Para determinar la op de una CGL, se procede a injectar alcuotas iguales de una misma muestra,
a distintas velocidades de flujo cada vez. Los datos obtenidos son los siguientes:
Alcuota
1
2
3
4
5
6
7

tr (min)
5.53
8.58
11.33
11.64
11.92
12.16
6.9

w (min)
0.70
0.85
0.80
0.85
0.90
1.00
0.70

(cm/seg)
5
10
20
30
40
50
70

a- Con esta informacin dibuje la curva de Van Deemter, indicando en la grfica la op y la Hmin. La
longitud de la columna es de 90 cm.
b- Si la muestra usada es un compuesto halogenado, sugiera el tipo de fase estacionaria.
c- Qu proceso considera cada uno de los trminos de la ecuacin de Van Deemter?.
d- Por qu la difusin longitudinal (trmino B) es un problema ms serio en CG que en CL?.

13) Los cromatogramas de CG de la pgina 6 se obtuvieron bajo las condiciones indicadas.


a- Cules cambios realizara en cada caso para mejorarlos y lograr la separacin de los compuestos
en la mezcla?
b- Qu ventajas aporta la programacin de temperatura en CG?

14) Se desea determinar la concentracin de etanol en sangre por el mtodo de patrn interno. Para
ello se procesan (de la misma manera) una serie de soluciones acuosas patrn de etanol y una
muestra de suero: una alcuota de 0.01 mL de cada solucin se diluyen con 0.1 mL de una solucin
patrn de 2-propanol 0.1mg/mL. Se inyectan 0.1 l de cada solucin en un CG provisto de un
detector FID (ionizacin de llama), un integrador y una columna PEG-400 (polietilenglicol) a 80 C.
Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
Medida del integrador
Patrones de etanol (mg/mL)
0.5
0.75
1.0
1.25
1.5
Muestra de sangre

Pico del etanol

Pico del propanol

5518
7563
10350
13935
15628
9862

12754
11893
12084
12870
12314
12604

a- Construir el grfico de calibracin correspondiente y usarlo para determinar la concentracin de


etanol en la muestra de sangre.
b- Qu ventajas tiene emplear las reas integradas de los picos en vez de sus alturas para realizar la
cuantificacin?
15) a- Realice una clasificacin de tipos de resinas de intercambio inico, indicando grupo inico
fijo y contrain (in intercambiado).
b- Indicar los efectos de aumentar el entrecruzamiento en las columnas de intercambio inico.
16) Las siguientes aseveraciones se refieren a los distintos modos de HPLC. Indique si las mismas
son verdadera (V) o falsas (F).
a- En cromatografa de adsorcin la fase mvil es no polar.
b- Molculas polares pueden ser fcilmente separadas por cromatografa de adsorcin.
c-El tiempo de retencin de los solutos en cromatografa de exclusin puede ser alterado cambiando
la polaridad de la fase mvil.
d- La exclusin molecular se usa slo para separar molculas grandes.
e- En cromatografa reversa la fase mvil es ms polar que la fase estacionaria.
17) Una mezcla de fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno y metil benceno se separa en una
columna C18 con una fase mvil metanol: agua 60:40. En estas condiciones la cetona eluye
primero.
a- En qu orden eluyen los otros solutos?
b- Cmo se puede cambiar la composicin de la fase mvil para cambiar el tiempo de retencin de
los solutos?
c- Cmo se afectara el tiempo de retencin de los solutos si se usa una columna ligada con grupos
fenilos en lugar de C18?

18) Una mezcla conocida de los compuestos C y D produce los siguientes resultados en HPLC:
Compuesto

Concentracin (mg.mL-1)
en la mezcla

rea del pico (cm2)

1.03

10.86

1.16

4.37

Se prepara una solucin mezclando 12.49 mg de D ms 10,00 mL de un problema que slo contiene
C y se diluye a 25,00 mL. La reas de los picos son de 5.97 y 6.38 cm2 para C y D respectivamente.
Hallar la concentracin de C (mg.mL-1) en el problema.