COLORACIONES

ClAm + Protena-COOK Cl- + K+ + Protena-COOAm

Los colorantes pueden ser:

a)- Bsicos: El cromforo es el catin. Ej.: azul de metileno,
cristal violeta, safranina, fucsina.

Cristal Violeta

Safranina

b)- Acidos: El cromforo es el anin. Ej.: eosina, cido pcrico.

Coloracin simple

PROCEDIMIENTO

Preparar los frotis bacterianos

Teir con cristal violeta

1min.

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Fijar el extendido
con calor

Teir con safranina

1min.

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Secar con papel secante

Observacin microscpica
con aceite de inmersin
(X1000)

Coloracin indirecta con Nigrosina

Observacin microscpica
con aceite de inmersin
(X1000)

Coloracin indirecta de Micrococcus luteus

Coloracin de Gram

Estructura de pared celular Gram+

Estructura de pared celular Gram-

PROCEDIMIENTO

Preparar el frotis bacteriano

Fijar el extendido
con calor

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Teir con cristal violeta

1min.

Decolorar con alcoholalcoholacetona o alcohol

(30seg)

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Cubrir con Lugol 1min

Teir con safranina

1min.

Lavar con abundante

agua el exceso de
colorante

Secar con papel secante

Observacin microscpica
con aceite de inmersin
(X1000)

Procedimiento
Etapas
Tincin inicial
Mordentado
Decoloracin
Colorante de contraste

Resultados

Reactivos

Gram +

Gram -

cristal violeta
1 minuto

coloracin
violeta

coloracin violeta

lugol
1 minuto

permanece
violeta

permanece
violeta

alcohol
20 segundos

permanece
violeta

queda incoloro

safranina
1 minuto

permanece
violeta

coloracin rosada

Coloracin Gram- de Escherichia coli

Coloracin Gram+ de Staphylococcus aureus

Coloracin Gram+ de Bacillus anthracis

Coloracin Gram mixta

Tincin de esporas
Preparar el frotis bacteriano.
1. Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de
madera colocar la muestra cerca de la llama del
mechero para que el colorante humee, pero sin que
hierva, durante 5 minutos. Aadir ms colorante si
la muestra se seca. Esperar que se enfrie.
2. Lavar con agua el resto de colorante.
3. Teir con safranina durante 1 minuto.
4. Lavar con agua el resto de colorante.
5. Secar la preparacin.
6. Observar la preparacin al microscopio con aceite
de inmersin (X1000).

Endoesporas de Bacillus megaterium

Tincin de cpsula
PROCEDIMIENTO

1. Agitar el caldo leche descremada con el ansa y colocar 2-3 ansadas

del microorganismo sobre el portaobjetos.
2. Con el ansa, cubrir todo el portaobjetos, obteniendo una capa delgada
de material.
3. Secar al aire. No secar con calor. Las cpsulas se pegan bien al vidrio
y el calor podra destruirlas.
4. Colorear con cristal violeta por 1 minuto.
5. Lavar el exceso de colorante con solucin de sulfato de cobre. No
usar agua!
6. Secar con papel secante y observar al microscopio con aceite de
inmersin. El microorganismo y la leche seca sobre el portaobjetos toman
la coloracin purprea mientras que la cpsula permanece incolora.
El caldo leche descremada brinda nutrientes esenciales para la formacin
de la cpsula y tambin ayuda a la fijacin del colorante.

Coloracin de cpsula de Enterobacter aerogenes.