1

Laboratorio N 01 - Calibracin
del micrmetro de ocular
1. Objetivos

Aprender a calibrar el micrmetro del ocular para objetivos de

10x y 43x y en algunos casos objetivos de 10x y 40x con el
micrmetro de platina para poder medir microorganismos y
clulas.
Calculo de las dimensiones (largo y ancho) de las clulas de
algas en el laboratorio con objetivos de 10x y 43x.

2. Fundamento Terico
2.1. Microscopio ptico compuesto
Un mic
roscop
io

compuesto tiene
ms
de
una lente objetivo.
Los
microscopios compuestos se utilizan especialmente para
examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan
finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o
ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a
simple vista. Adems del aumento una propiedad del
microscopio es su poder resolutivo. Esta es la capacidad de
mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos y,
por tanto, cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser
la definicin de un objeto
El microscopio ptico comn est conformado por tres
sistemas:

Microbiologa Sanitaria II
1

2
El sistema mecnico est constituido por una palanca
que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a
observar.
El sistema de iluminacin comprende un conjunto de
instrumentos, dispuestos de tal manera que producen las
ranuras de luz.

El sistema ptico:
Es el encargado de reproducir y aumentar las
imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen.
Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo
proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego
ampla.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del

tubo. Su nombre se debe a la cercana de la pieza con
el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la
imagen formada por el objetivo. Los oculares son
intercambiables y sus poderes de aumento van desde
5X hasta 20X
Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria
denominada revlver y producen el aumento de las
imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se
hallan cerca de la preparacin que se examina
Algunos objetivos se utilizan sin necesidad de colocar
sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara
externa llevan una serie de ndices que indican el aumento
que producen, la abertura numrica y otros datos. As, por
ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y
160/0,17, significa que el objetivo es plana cromtico, su
aumento 40 y su apertura numrica 0,65, calculada para
una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos
vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina.
Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente
utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.
2.2.

Micrmetro ocular
Un micrmetro ocular es un disco de vidrio que se
adhiere a un ocular de un microscopio. Un micrmetro
ocular tiene una regla que permite al usuario medir el
tamao de los objetos magnificados. La distancia entre
las marcas de la regla depende del grado de ampliacin.
La regla sobre un micrmetro ocular tpico tiene entre 50

Microbiologa Sanitaria II
2

3
y 100 marcas individuales, es de 2 mm de largo y tiene
una distancia de 0,01 mm entre las marcas.
2.3.

Micrmetro de platina
Estos micrmetros de platina de alta calidad se
utilizan para calibracin de rutina de una variedad de
instrumentos pticos de medicin, desde microscopios
pticos y oculares hasta platinas x-y, y bancos pticos El
micrmetro de platina es en realidad utilizado como un
"espcimen" para calibrar por ejemplo, una retcula de
ocular. Para el usuario profesional del microscopio ptico
o para el investigador, estos son los estndares
definitivos de calibracin para sus microscopios de luz.

2.4.

Calibracin del micrmetro ocular

El ocular del microscopio posee una escala que es
necesario calibrar para los distintos aumentos que se
puede lograr con el mismo. Pare ello se observar una
platina que tiene una escala de dimensiones conocidas,
es decir hay una distancia X entre las divisiones de la
misma. Por el microscopio se observan ambas escalas y
se determinar el nmero N de divisiones de la platina
que coinciden con n divisiones del micrmetro del ocular.
Se deber calibrar para cada objetivo del microscopio.

3. Materiales Procedimiento
3.1.

Materiales

Micrmetro de

Microbiologa Sanitaria II
3

Micrmetro de

Muestra de
algas

Microscopio

3.2.

Procedimiento
a. Colocar el micrmetro de ocular en el ocular y el
micrmetro de platina en la platina previamente de
haber limpio dichos materiales.
b. Ajustar el microscopio para ver con el objetivo las
divisiones del micrmetro de platina.
c. Coincidir las divisiones del micrmetro de platina con
las divisiones del micrmetro del ocular.

d. Una vez que coincidan paralelamente los micrmetros

realizamos la calibracin del micrmetro del ocular:
Determinar
cuntas
divisiones
del
micrmetro del ocular coinciden en las divisiones
del micrmetro de platina con objetivos 10x y 43
x.
Sea
blancas

a = Divisin de la platina lneas

b = Divisin del ocular lneas

negras
aX <> bY, dato: X=0.1mm
Y=(a/b) x0.1mm = c

Microbiologa Sanitaria II
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5
Y= distancia de las divisiones del micrmetro del
ocular.
Esto se hace para objetivos de 10x y 43 x.
e. Se procede a medir el tamao de la clula del alga de
la muestra:

Medir el tamao de la clula del alga en divisiones de

ocular (y).
Esto se hace para objetivos de 10x y 43 x.
f. Realizar un grfico. Medida en () vs unidades del
ocular.
g. Realizar un cuadro con los datos obtenidos.

4. Datos y/o observaciones

Datos relacionados a la divisin del micrmetro de platina:

El equivalente de una divisin de micrmetro de platina

con el objetivo de 10x fue de 6 divisiones por lo tanto una
divisin del micrmetro del ocular es de 16.67 m
entonces la medida del alga resulta a=25m; L=83.33
m
El equivalente de una divisin de micrmetro de platina
con el objetivo de 40x fue 26.5 divisiones por lo tanto una
divisin del micrmetro del ocular es de 3.77 m entonces
la medida del alga resulta a=23.75 m; L=74.27 m
El error es de 5.32% en el ancho y en el largo fue 12.19%.

Tamao de la clula del alga:

Se observa que la clula del alga tiene una forma

rectangular, de color verde, con divisiones claras entre
clulas.
Una divisin del micrmetro de platina tiene menos
divisiones al observar con objetivo 10x que cuando
observamos con objetivo 43x.

5. Clculos y resultados
Microbiologa Sanitaria II
5

6
a. Determinacin de la calibracin del micrmetro de
platina:
Para Objetivo de 10x:
1 divisin de platina <> Divisin del ocular
1X <> 6Y, dato: X=0.1mm
Y = (1/6) x0.1mm =16.67 m
Para Objetivo de 40x:
1 divisin de platina <> Divisin del ocular
1X <>26.5 Y, dato: X=0.1mm
Y = (1/26.5) x0.1mm =3.77 m
b. Medicin del alga:
Para Objetivo de 10x:
a = 1.5y =25m
L = 5y =83.33m
Para Objetivo de 40x:
a = 6.3y =23.75m
c. Calculo del error de medicin :
L= 19.7y=74.27m
Error10x=

25 m23.75 m
x 100 =5.32 ;
23.75 m

Error40x=

83.33 m74.27 m
x 100=12.19
74.27 m

6. Grficos
7. Conclusiones
En el proceso de calibracin del micrmetro y medicin del
alga se obtuvieron los siguientes resultados:
Calibracin

Medicin

Error de
calibracin
(%)

Microscopi
o

Objetivo
10x
En
calibraci
n: 9; real
=14

1x <> 6y
y=16.67
m
1x <>

Objetivo
43x
(algunos
40x)
1x <>
26.5y
y=3.77
m
1x <>

Microbiologa Sanitaria II
6

Objetivo 10x
a

1.5y
25m

2y

5y
83.33
m
5y

Objetivo
43x (algunos 40x)
a
L

6.3y
23.75
m
7y

19.7y
74.27
m
21y

5.32

12.19

7
11

En
calibraci
n: 11; real
= 24
13

10

12

8y
y=12.5
m
1x < >
7,5y
y=
13.3m

30y
y=3.12
m
1x < >
31y
y=
3.2m

1 < > 10
y=
10m
1x <> 6y
y=16.67
m

1 < > 42
y=
2.38m
1x <>
28y
y=3.57
m
1X <>
30Y
Y=
3.3333
m
1X <>
32Y
Y=
3.1m

1X<>7Y
y=14.28
57m

25m

62.5m

21.84
m

65.52
m

12.64

4.61

1.5y
19.95
m

5y
66.5m

6y
19.2m

21y
67.2m

3.76

1.04

2y
20m

6y
60m

1y
16.67
m

3y
50m

9y
21.42
m
5Y
17.85
m

28y
66.64
m
15y
53.55
m

7.1

11.06

6.61

6.63

1.5Y
21,428
6m

5Y
71,4286
m

19Y
63,3333
m

7Y
23,3333
m

11.33

8.16

42m

84m

40.3m

80.6m

4.408

4.047

22.2
m

59.2m

21.42
m

57.12
m

3.51

3.51

16.6
m

69.72
m

17.76
m

64.75
m

6.98

7.67

1.5y
21.45
m

4y
57.2m

6y
22.2m

15y
55.5m

3.38

2.97

1y
14.3
m

3y
42.9m

5y
17.85
m

16y
57.12
m

24.82

33.14

16

En
calibraci
n: 11; real
=3

1X<>7Y
y=14m

En
calibraci
n: 4; real
=29

4X<>27
Y
Y=14.8
m

1X<>28
Y
Y=3.54
m

En
calibraci
n: 9; real
=22

1x <> 6y
y=16.6
m
1x < >
7y
y=
14.3m
1x < >
7y
y=
14.3m

1x<>27y
y=3.70
m
1x < >
27y
y=
3.7m
1X<>28
Y
Y=3.57
m

En
calibraci
n: 5; real
=4

1x < >
7y
y=
14.28m

1X<>29
Y
Y=3.4m

1y
14.28
m

5Y
71,4m

5y
17m

22y
74.8 m

1x < >

1X<>28

1y

4y

6y

20y

Microbiologa Sanitaria II
7

En
calibraci
n:27; real
=4

7y
y=
14.28m
1x < >
7y
y=
14.29m

Y
Y=3.57
m
1X<>28
Y
Y=3.57
m

14.28
m

57.12
m

21.42
m

71.4m

33.32

20

28.28
m

71,45
m

28.56
m

60.69
m

0.07

17.73

1.6

4.02

3.47

7.33

1x < >
1X<>31
2y
4y
9y
17y
7y
Y
28.57
57.14
29.034 54.842
y=
Y=3.226
m
m
m
m
14.286
m
m
7
1x < >
1x<>27y 21.43
171.43
22.22
185m
7y
y=3.70
m
m
m
y=
m
14.286
m
La precisin de calibracin puede haber sido afectada por la
iluminacin utilizada como la visin de observador as como el
estado de los objetivos y ocular.
En los resultados obtenidos se obtuvo que los resultados con
mayor longitud se dieran en el objetivo de 10x que con el objetivo de
40x por lo tanto la medicin es ms aproximada con el objetivo de
40x por que podemos contar ms aproximado que en el 10x ya que
al redondear se ve un mayor error.
Calcular la medida adecuada a los microorganismo es
importante para poder determinar las caractersticas de los
microorganismos y poder dar un buen tratamiento a las muestras de
agua a analizar.
El error de medicin no puede ser calculado ya que
necesitamos los datos obtenidos por un microscopio de la misma
marca y calibrado que es difcil de conseguir.

8. Recomendaciones

Antes de empezar todo trabajo limpiar el microscopio

para evitar cualquier problema con la visibilidad del
ocular.
Como hay 1 micrmetro de platina para todos los
alumnos entonces por cuestin de tiempo podemos
realizar las mediciones a la clula con el micrmetro del
ocular y luego cuando se tenga en micrmetro de
platina calibrar el ocular.

Microbiologa Sanitaria II
8

Para medir el tamao de la clula se debe escoger

aquella que est libre de obstrucciones o sobre
posiciones con otras clulas.

9. Bibliografa

http://acuanatura.galeon.com/cursosonline/tiposdemicros
copios/tiposdemicroscopios.pdf
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmaci
a/catedraMicro/10_membrana_filtrante.pdf
http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lar/orop
eza_b_vm/capitulo4.pdf
http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan2/05862/0586209.pdf
http://www.h-gac.com/community/water/ossf/OSSFTreatment-Systems_Sand-Filter-S.pdf
http://eportal.magrama.gob.es/id_tax/ficha/buscador/4/31
481
http://eportal.magrama.gob.es/id_tax/report/taxon/4/3148
1

10. Anexos

sistema de tratamiento

Filtro biologico

11. Cuestionario
a. Seale los diferentes tamaos de microorganismos y
compare cada uno con sus caractersticas. Por qu es
importante conocer el tamao de los microorganismos?

Microbiologa Sanitaria II
9

10
Microorganismo
Bacterias
Hongos
Algas
Protozoos

Tamao aprox.
Miden del orden de un micrn.
Tamaos variables.
Miden desde 250 micrones.
Miden entre 30 y 300 micrones

El tamao de los microorganismos tiene importancia

porque determina algunas propiedades biolgicas, de su
ecologa y su evolucin y est muy relacionado con la
relacin: superficie- volumen.
La cantidad de membrana disponible va a determinar las
tasas de transporte. Cuanto ms pequeos, mayor superficievolumen, mayor membrana y, mayor tasa de transporte, por lo
tanto, mayor velocidad de crecimiento. Esto hace que en los
hbitats naturales se multipliquen rpidamente.
Consecuencias evolutivas: A mayor velocidad de
crecimiento, mayor velocidad de evolucin. No sabemos el
lmite de tamao pero parece claro que tiene que haber un
lmite por lo tanto a mayor tamao, menor velocidad de
transporte y por lo tanto ineficiencia.
El tamao tambin es importante para determinar la
velocidad de sedimentacin.
b. Cul es la medicin que recomienda para compararla
con la informacin en los textos?
Alga utilizada en la medicin: Mougeotia
En el texto encontramos que las dimensiones del alga tienen
las siguientes medidas: 50-150 x 20-35 m
Por lo tanto la medicin que es recomendada para utilizar
es con el objetivo de 10x porque tiene como medidas del
alga a=25m; L=83.33m

c. Aplicaciones de medida de los microorganismos en

sistema de tratamiento:
1. Filtro biolgico (tratamiento de agua residuales)
El proceso de filtracin biolgica puede definirse
como un sistema de lechos de distintos materiales sobre
los cuales se vierten de una manera continua o
intermitente las aguas residuales. A medida que las
aguas residuales y el aire fluyen a travs del lecho, el
limo biolgico hace uso de ellos para obtener de los
compuestos orgnicos la energa necesaria para sus
procesos vivientes, material y energa para sintetizar
nueva masa celular, el oxgeno necesario para las

Microbiologa Sanitaria II
10

11
reacciones de oxidacin bioqumica y los nutrientes
indispensables para la sntesis celular.
La acumulacin de crecimiento biolgico sobre la
superficie de medio que constituye el lecho tiene un
lmite, por lo cual es arrastrado con el efluente del filtro
percolador por lo tanto se necesita el tamao de los
microrganismos para evitar la obstruccin del relleno
perjudicando flujo del agua residual y la transferencia de
oxgeno a los microorganismos aerobios.
2. Wetland (tratamiento de aguas residuales)
Sistema de Tratamiento Biolgico que imita el
funcionamiento de los humedales naturales usando la
capacidad de estos para remover materia orgnica.
Los wetlands son reas de tierra inundada que se
conocen tambin como pantanos, con poca profundidad
para que la vegetacin pueda llegar a la parte inferior y
sostenerse del suelo firme. Las plantas de estos sitios
proveen a la superficie de una pelcula de bacterias,
ayuda en la filtracin y absorcin de componentes,
transfiere oxgeno y controla el crecimiento de algas al
evitar la penetracin de la luz solar.
Es necesario conocer el tamao de los
microorganismos de la pelcula de las bacterias para
poder determinar la velocidad de crecimiento de las
colonias para poder as tener un mejor control sobre el
crecimiento de algas.
3. Filtro de arena (tratamiento de aguas)
La filtracin de arena es el proceso mediante el cual
el agua es separada de la materia en suspensin
hacindola pasar a travs de una sustancia porosa como la
arena.
El filtro de arena purifica el agua de tres formas:
La filtracin. En este mtodo, las partculas se
separan fsicamente de las aguas negras que entran por
medio de la filtracin.
La absorcin qumica. En la absorcin qumica, los
contaminantes se pegan a la superficie de la arena y al
crecimiento biolgico en la superficie de la arena.
La asimilacin. En este mtodo, los microbios
aerbicos consumen los nutrientes de las aguas negras. El
xito en el tratamiento de las aguas negras depende de
estos microbios. Tiene que haber aire para que estos
microbios vivan.

Microbiologa Sanitaria II
11

12
Es
necesario
conocer
el
tamao
de
los
microorganismos sobre todo en el proceso de filtracin
para saber que
microorganismos quedan
con las
partculas para poder determinar el mejor tratamiento
para el siguiente proceso.
d. Aplicaciones de la medida en:
1. Mtodo de filtro de membrana
Este mtodo se fundamenta en determinar el
nmero y tipo de microorganismos presentes en una
muestra de agua de proceso, por medio de la filtracin de
la misma a travs de una membrana filtrante con poros de
tamao adecuado (0,45 m de dimetro), la consiguiente
retencin de los microorganismos sobre dicha membrana y
el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al
tipo de microorganismo.
Es importante saber las medidas de los
microorganismos para saber el tipo de microorganismo
presente en una muestra de agua cualquiera.

Microbiologa Sanitaria II
12