Universidad de Concepcin

FACULTAD DE MEDICINA
CARRERA DE TECNOLOGA MDICA
Mencin de Morfofisiopatologa y Citodiagnstico

INFORME N 1

HANS ESQUIVEL CUEVAS

TECNICAS HISTOLOGICAS I E HISTQUIMICA
Profesora Andrea Dibarrart

ndice
ndice..........................................................................................................................2
Introduccin...............................................................................................................3
Actividad N1: Efecto de distintas soluciones fijadoras sobre las protenas.............4
Materiales:....................................................................................................... 4
Mtodo:............................................................................................................ 4
Tabla de resultados:......................................................................................... 5
Clasificacin de resultados de actividad 1.......................................................6

Actividad 2: Medicin del Grado de Retraccin de Muestras Incubadas en Distintas

Soluciones Fijadoras.................................................................................................6
Materiales:....................................................................................................... 6
Mtodo:............................................................................................................ 6
Tabla de resultados actividad 2........................................................................7
Grfico de los resultados obtenidos.................................................................9
Conclusiones:................................................................................................... 9

Actividad N 3: Velocidad de penetracin de las soluciones...................................11

Mtodo:.......................................................................................................... 11
Tabla de resultados........................................................................................ 12
Calculo de las constantes.............................................................................. 12
Grfico de la velocidad de penetracin de cada fijador.................................12
Discusin....................................................................................................... 13

Conclusin...............................................................................................................14
Bibliografa...............................................................................................................15

Introduccin.
Una vez que una pieza histolgica ha llegado al servicio de Anatoma Patolgica,
comienza su estudio microscpico donde comprende un conjunto de mtodos
estructurados que configuran un sistema de actuacin constante para cada
muestra de forma que los resultados puedan ser reproducidos por diferentes
patlogos.
Uno de estos mtodos es la fijacin, donde se someten los tejidos a diferentes
procesos qumicos o fsicos con el fin de preservar las estructuras histolgicas que
nos importan para el estudio de estos, como tambin permite detener los procesos
degenerativos que afectan la muestra.
Existen diferentes tipos de fijadores dependiendo de su efecto sobre la muestra y
su velocidad de penetracin.
El objetivo de estas actividades es diferenciar y darse cuenta de cada una de las
caractersticas de cada fijador sobre la albumina de huevo o cualquier protena, su
efecto coagulante o no coagulante, su grado de retraccin y su velocidad de
penetracin.

Actividad N1: Efecto de distintas soluciones fijadoras

sobre las protenas
Materiales:
-Solucin de albumina
- Etanol absoluto
-cido pcrico (solucin acuosa saturada)
-Formaldehido al 10 % V/V
- cido actico al 5 % V/V
- Acetona anhidra
-Tubos de ensayo

Mtodo:
Como en la mayora de los tejidos su estructura fundamental tanto en
membranas como citoplasmas se basa en lipoprotenas, protenas fibrosas de
colgenos y protenas globulares, los fijadores coagulantes son soluciones que
actan en los tejidos coagulando estas protenas y las transforman en estructuras
insolubles.
En cambio los fijadores no coagulantes son soluciones que se acoplan a
las macromolculas de los tejidos en diferentes sitios qumicos, formando una
especie de malla que las entrelaza. En comparacin con los fijadores
coagulantes, las molculas de agua que se eliminan de los tejidos es mucho
menor, haciendo que la mayora de los componentes de los tejidos se conserven
adecuadamente. Por lo tanto, la fijacin se produce por deshidratacin,
reticulizacin, formacin de sales o por cambio de estado coloidal:

Tome siete tubos de ensayo, coloque en cada uno de ellos 5 ml de solucin

de albmina, agregue igual volumen de solucin experimental. Para las
soluciones experimentales que se usen en concentraciones saturadas o
puras, se toman 3ml de Albmina y 7ml de solucin experimental, se agita
cada tubo para producir una mezcla homognea.
Observe el contenido de los tubos: Inmediatamente, a los 5 minutos, a 1
hora y al da siguiente y anote los resultados en la siguiente tabla.

FIJADOR
ES
cido
actico 5%

5 Min

Sin cambios

1 hora
Sin
cambios

Formaldeh
ido 10%

Sin cambios

cido
pcrico sat

Presenta coagulo

Mayor
notoriedad
del
coagulo

Etanol abs

Coagulacin blanca
como agua y aceite

Sin
cambios

Acetona
anhidra

Coagulante de color
blanco

Sin
cambios

Sin
cambios

24 horas
Sin cambios

Sin cambios

Mayor notoriedad del coagulo

Sin cambios

Mayor notoriedad del coagulo

Tabla de resultados:

Clasifi cacin de resultados de actividad 1

COAGULANTES

cido pcrico saturado

Etanol absoluto
Acetona anhidra

NO COAGULANTES

cido actico 5%
Formol neutro 10%

Actividad 2: Medicin del Grado de Retraccin de

Muestras Incubadas en Distintas Soluciones Fijadoras
Materiales:

Solucin acuosa de gel gelatina albumina al 15 % p/v (cubos)

Etanol absoluto
cido pcrico (solucin acuosa saturada)
Formaldehido al 10 % V/V
cido actico al 5 % V/V
Acetona anhidra
Recipientes de vidrio.

Mtodo:
Durante el periodo de fijacin se producen cambios que modifican el estado de la
muestra histolgica, los ms importantes son el aumento de volumen y la
retraccin de los tejidos as como tambin la alteracin en el color. Los fijadores
que producen aumento de volumen se debe a que estos destruyen los enlaces
formando molculas de agua que son absorbidas por la pieza. Otros fijadores
realizan el efecto contrario el de retraer el volumen de la muestra, esto se produce
porque el fijador absorbe el agua del tejido por eso es importante que la presin
osmtica del lquido fijador sea equivalente a la del tejido y que la de su pH se
aproxime al pH fisiolgico.

Sumerja los cubos en un recipiente de vidrio que contenga 50ml de cada

una de las soluciones
Observe los resultados, mida con una regla plstica, la distancia entre cada
arista (X, Y, Z) y registre sus resultados a 0, 1, 4 y 24 horas.

GELATINA ALBUMINA
VOLUMEN (MM3)
FIJADORES

0
hora
s

cido actico
5%

7,2
mm3

1 hora

3 horas
No
se

No se
pudo
seguir
midiendo

24 horas

Observaciones

No se pudo seguir midiendo

pudo seguir midiendo

Formaldehido
10%

8,8
mm3

7,854 mm3

9,792
mm3

8,712 mm3

En cada medicin se
notaba ms duro.

Tabla de resultados actividad 2

cido pcrico
sat

7,48
mm3

67,83mm3

Etanol abs

Acetona
anhidra

6,069
mm

7,92 mm3

7,581 mm

5,4 mm3

4,59 mm3

4,59 mm3

4,448
mm3

7,92 mm3

2,925 mm3

2,448 mm3

En cada medicin se
notaba ms blando.

En cada medicin se
notaba ms duro.

En cada medicin se
notaba ms duro.

Grfi co de los resultados obtenidos.

Grado de retraccin
Acetona Anhidrica
Etanol Abs

Fijadores

Acido pitrico
formadehido
Acido Acetico
0

10

12

Volumen de albumina (mm3)

0 Hrs

1 Hrs

3 Hrs

24 Hrs

Conclusiones:
Acetona anhidra: Luego de 24 horas es el fijador con ms retraccin de los
analizados y comparando los datos experimentales con los bibliogrficos
concuerdan en el resultado. Esta caracterstica de la acetona se debe a que su
poder de fijacin se produce por deshidratacin, por lo tanto elimina las molculas
de agua de la muestra, disuelve los lpidos y los carbohidratos quedan
conservados debido a la correcta precipitacin de las protenas. Sin embargo, la
rpida extraccin del agua desde el tejido provoca una contraccin del ncleo, que
deja un halo perinuclear, especialmente, en los epitelios y por esta razn es poco
utilizable.

Etanol: Tambin es deshidratante como la acetona pero no tan potente, entre ms

concentrado este la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide
que el fijador penetre a la parte interna de la pieza o tejido. Es un fijador que
preserva el glucgeno y la actividad de ciertas enzimas titulares, fija los pigmentos
y se ocupa en las extensiones citolgicas
.

10

cido pcrico: Este fijador entra en la clasificacin de fijadores por formacin de

sales con los tejidos y tiene un escaso poder de endurecimiento y la muestra se
hincha levemente y lentamente. Tenemos tambin un claro color amarillo que tie
la muestra por lo tanto es recomendable lavar con alcohol etlico varias veces.
Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las
confieren gran apetencia por colorantes cidos, adems fija bien los cidos
nucleicos y forma una malla homognea en el ncleo, lo que permite gran
estabilidad espacial de sus componentes.

Formaldehido: Es un fijador que acta por reticulacin de protenas, esto quiere

decir que forma una especie de red o malla con las protenas. Provoco escasa
retraccin tisular y dureza de la muestra, y en el color no hay cambios visibles.
Este fijador es el ms utilizado gracias a sus caractersticas, por lo que es llamado
el Fijador universal, es barato y cumple con muchas de las caractersticas de un
buen fijador.

cido actico: En los datos tericos este fijador tiene un alto poder de aumentar
el volumen tanto es as que en el experimento no se pudo seguir midiendo porque
la muestra se destruy, se ablando y era imposible seguir con la medicin.
Siempre se utiliza en mezclas de fijadores y no solo ya que se obtienen resultados
inadecuados como los ya observados. Entre las ventajas de este fijador es que el
citoplasma se fija homogneamente, el ncleo se retrae ligeramente, mientras que
el ADN se preserva correctamente.

11

Actividad N 3: Velocidad de penetracin de las

soluciones
Mtodo:
La velocidad de fijacin es uno de los factores que presentan los fijadores y no es
nada ms que la rapidez con la que la sustancia o qumico se introduce en el
interior de la muestra o tejido que se quiere tratar para ms tarde observar. Para
determinar la profundidad de penetracin de fijador tenemos una ecuacin en
donde tenemos una constante de penetracin para cada fijador la cual
multiplicamos por la raz del tiempo en que tenemos la muestra sumergida.

d = k t
d= Profundidad de penetracin
K= coeficiente difusin
T= tiempo

Como es un caso experimental nosotros mediremos la profundidad de penetracin

y luego con la formula sacaremos las constantes de difusin en cada hora y en
cada fijador.

Se utilizara una solucin acuosa de gelatina-albumina al 15% P/V y se

pondr en 4 tubos de vidrio (pipetas pasteur) en los cuales habr un
extremo libre y en el otro extremo una pipeta plstica, estos se llenaran
hasta la mitad con la solucin gelatina-albumina y se dejara solidificar.
Adems sern marcados con un lpiz diamante en la zona superior, con el
fin de tener un punto de referencia para medir la penetracin del fijador.

Sumergimos los 4 tubos de vidrio con la solucin gelatina-albumina en los

diferentes fijadores: formalina tamponada 10%, acido pcrico saturado,
etanol absoluto, acetona anhidra.

Se realizarn mediciones 1 hr, 3 hrs y 24 hrs despus de comenzar la

fijacin. En el caso de la formalina no se puede medir de la misma manera
ya que este fijador no produce un cabio de opacidad, por lo cual se deber
sumergir el tubo en agua a 37C donde la gelatina-albumina fijada no se
derretir en cambio la no fijada s. Luego se de este procedimiento se
realizar la toma de medidas correspondiente.

12

FIJADORES 1 hora
Formol
neutro 10%
cido pcrico
sat
Etanol abs

No se
midi

Gelatina-albumina
Penetracin (mm)
4
24 horas
horas
No se
23 mm
midi

Ningn
cambi
o
2 mm

2 mm

4 mm

3 mm

7mm

2 mm

3 mm

10 mm

Metanol

Observaciones
A las 24 horas se
fij completamente
Frente de
penetracin
disparejo
Frente de
penetracin
disparejo
Frente de
penetracin
disparejo

Tabla de resultados

Calculo de las constantes

Fijador
Formol neutro 10%
cido pcrico
Etanol
Metanol

1 hora
No hubo
medicin
No hubo
penetracin
K= 2
K= 2

4 horas
No hubo
medicin
K= 1

24 horas
K= 4,69

K= 1,5
K= 1,5

K= 1,24
K= 2,04

K= 0,81

Grfi co de la velocidad de penetracin de cada

fi jador.

13

Velocidad de penetracion
25
20
15

Penetracion (mm)

10
5
0
0 Hrs

1Hrs

4 Hrs

24 Hrs

Horas
Formol Neutro

Acido picrico

Etanol

Metanol

14

Discusin.
Por los resultados nos damos
cuenta que el fijador con
mejor rendimiento en cuanto
a poder de penetracin al cabo
de 24 horas es el formol
neutro y en comparacin con
los
datos
que
tenemos
bibliogrficamente esta en lo
correcto.
Esto se debe a que formol acta
sobre las protenas de forma
aditiva y forma una malla con ellas, en cambio los fijadores no aditivos, no
interactan qumicamente con el tejido. En cambio el fijador que menos mm
penetro fue el cido pcrico con apenas 4 mm. En comparacin con los 23 mm del
formol.
Dentro de las primeras 4 horas los alcoholes actuaron de igual forma penetrando
los dos 3 mm., pero al cabo de las 24 horas el metanol obtuvo un mejor resultado
con 3 mm. sobre el etanol.
Con respecto a la velocidad del metanol, etanol y ac. pcrico es poca la diferencia
que existe, no hay ninguno que tenga una gran pendiente de velocidad como el
formol, porque aunque solo se midi a las 24 horas es muy evidenciable su
crecida en la curva.
Nuevamente el formol sale como ganador en esta actividad y afirma
empricamente que lleva bien puesto el nombre de fijador universal.

15

Conclusin.
Pasar la muestra o tejido por una fijacin adecuada a sus caractersticas es de
suma importancia para los pasos que le siguen en el camino hacia la observacin.
La fijacin como es el primer paso de las siguientes tcnicas histolgicas que
proceden en un examen mediato tiene que ser buena, una mala fijacin puede
afectar la inclusin, el corte o la tincin.
Un fijador debe cumplir con muchas cualidades y caractersticas para poder ser
considerado un buen fijador, y claramente no existe ninguno que cumpla a la
perfeccin todas ellas.
En estas actividades nos pudimos dar cuenta y apreciar como algunos qumicos
poseen mejores cualidades que otros, unos poseen cualidades que otros no tiene
y viceversa, por lo que en muchas ocasiones no se ocupa un solo fijador, si no que
una mezcla de ellos equiparando las falencias de cada uno, pero hay un fijador
que se lleva el primer lugar en el sentido que cumple con muchas de estas
cualidades, el formol.
Este compuesto es sumamente til y efectivo, adems de ser el fijador ms
barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina en
Anatoma patolgica.

16

Bibliografa
Gua de estudio y manual de laboratorio de T.H. I
http://morfoudec.blogspot.com/2008/11/accin-fijacin-segn-carson.html
http://educacionhistotecnologiafijacion.blogspot.com/
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/2-fijadores.php
http://educacionhistotecnologiafijaciondos.blogspot.com/

17