BIOQUMICA VEGETAL

Estudio del movimiento sistmico del virus del mosaico del pepino (cmv) en
plantas de pepino (cucumis sativus l.).
Autor: requena Gutirrez Andrs.
Ao: 2004.
Universidad: politcnica de Madrid.
Centro de lectura: e.t.s. de ingenieros agrnomos.
Centro de realizacin: e.t.s. de ingenieros agrnomos.
Resumen: la infeccin de un virus de plantas en un husped sistmico consta de
movimiento de clula a clula desde las clulas inicialmente infectadas seguido de
movimiento a larga distancia o movimiento sistmico, desde los rganos inicialmente
infectados al resto de la planta. Si el virus no puede moverse a larga distancia, la
planta es resistente a la infeccin. La mayor parte de los virus se mueven
sistmicamente por el floema, de forma paralela al flujo de fotoasimilados. se ha
descrito que la gran mayora de los virus necesitan la protena de la cpsida para
realizar este movimiento, y que hay interacciones entre factores del husped y factores
del virus cuando el virus accede al sistema vascular y/o al tubo criboso. sin embargo,
no se tienen evidencias directas de cual es la estructura del virus que se transloca por
el floema, y no se han descrito interacciones entre factores del virus y factores de la
planta durante esta etapa del movimiento sistmico. en esta tesis se analiza la
estructura viral que se transloca por el floema de plantas infectadas, y si esta
estructura interacciona con factores del floema. para ello, se ha estudiado el
movimiento sistmico del virus del mosaico de pepino (cmv) en plantas de pepino
(cucumis sativus l.). el pepino es una planta muy adecuada para estudiar la
translocacin del virus por el floema, ya que seccionando tallos y peciolos se obtienen
muestras de exudado de floema de pepino que, por su composicin y propiedades,
pueden considerarse muestras de la savia circulante por el floema. para analizar cmo
se transloca cmv por el floema se ha comparado la densidad de la estructura de cmv
presente en el exudado de floema de pepinos infectados con la densidad de partculas
virales mediante centrifugacin en gradientes de sacarosa, y se observ que los
perfiles de sedimentacin obtenidos son similares, lo que sugiere que la estructura de
cmv que se transloca por el floema es la partcula viral. la observacin de muestras de
exudado de floema de pepinos infectados al microscopio electrnico confirm la
presencia de viriones. los resultados obtenidos permiten concluir que la estructura
mayoritaria de cmv que se transloca en el floema de pepino es la partcula viral. la
centrifugacin en gradientes de sacarosa mostr que una fraccin de las partculas de
cmv que se translocan por el floema de pepino tena menor densidad que el resto, lo
que sugiere que las partculas pudieran asociarse con componentes del floema. se
analiz si la posible asociacin modificaba la accesibilidad a ribonucleasa a del rna
encapsidado. se observ que el rna encapsidado en las partculas de cmv presentes
en el exudado de floema de pepinos infectados y el rna encapsidado en partculas de
cmv mezcladas con exudado de floema de pepinos no inoculados era menos accesible
a ribonucleasa a que el rna encapsidado en partculas virales. se obtuvieron fracciones
del exudado de floema de pepinos no inoculados dializando el exudado para retirar
compuestos de bajo peso molecular y realizando una extraccin fenlica para retirar
protenas, y se determin que el componente de exudado de floema de pepino que
disminuye la accesibilidad a ribonucleasa a del rna encapsidado son las protenas. se
han analizado las interacciones in vitro entre las protenas presentes en el exudado de
floema de pepino, separadas por electroforesis en condiciones desnaturalizantes y
transferidas a una membrana de pvdf y las partculas de cmv. se observ que las
partculas de cmv interaccionan con protenas de peso molecular aparente de 69, 48,
44, 32 y 18 kda del exudado de floema de pepino. comparando la interaccin entre
partculas del virus de la aspermia del tomate, del virus del moteado y mosaico verde
del pepino, y partculas de cmv con las protenas de exudado de floema de pepino se

observ que las protenas p69, p48 y p44 interaccionan de forma especfica con las
partculas de cmv; y estudiando la interaccin entre partculas de cmv y protenas del
exudado de floema en concentraciones crecientes de NaCl, se determin que las
partculas de cmv tienen mayor afinidad por la protena p48. se purific esta protena
del exudado de floema de pepinos no inoculados y se obtuvieron secuencias
aminoacdicas internas que se emplearon para realizar bsquedas en las bases de
datos. estas bsquedas no permitieron identificar protenas homlogas a la p48, pero
se observ que la p48 tiene una limitada homologa de secuencia con protenas
codificadas por el locus s de brassica, concretamente con glicoprotenas y con
receptores transmembrana con actividad kinasa. estas protenas participan en
procesos de interaccin protena-protena, lo que puede sugerir que la p48 podra
participar en ese tipo de interaccin durante la translocacin del virus por el floema.
para analizar si las partculas de cmv y la p48 interaccionan en la savia circulante por
el floema de pepinos infectados, se compararon sus perfiles de sedimentacin tras
centrifugar muestras de exudado de floema de pepinos infectados en gradientes de
densidad. no se observ que tuvieran perfiles de sedimentacin similares, lo que
sugiere que no existe interaccin in vivo, aunque no debe descartarse que la
interaccin ocurra pero que el mtodo empleado no permita detectarla.
Marcadores fisiolgicos y bioqumicos de maduracin/envejecimiento en pinus
spp.
Autor: valds garca ana elisa.
Ao: 2003.
Universidad: oviedo.
Centro de lectura: biologia.
Centro de realizacin: facultad de biologa.
Resumen: las especies leosas pierden cierta capacidad organognica como una de
las consecuencias de los procesos de maduracin y envejecimiento, lo que hace que
su propagacin vegetativa sea cada vez ms difcil con la ganancia de edad de la
planta. esta capacidad, fundamentalmente rizognica, se recupera parcialmente
mediante tcnicas de manipulacin exgena como el injerto seriado, mediante las
cuales la planta recobra el vigor necesario para la formacin de races. sin embargo, la
determinacin a simple vista del estado fisiolgico del material injertado es
actualmente inviable, siendo necesarios ensayos de prueba/error que resultan fallidos
en un alto porcentaje de los casos, lo que ocasiona prdidas econmicas en el sector
forestal, en el que las conferas se consideran especies de mximo inters. la
disponibilidad de marcadores de estado fisiolgico supondra minimizar los costes
asociados a este proceso, permitiendo el establecimiento de cadenas proliferativas
nicamente a partir de los individuos que presenten un estado fisiolgico ptimo. las
hormonas vegetales intervienen en la regulacin de la maduracin y el envejecimiento
con una participacin muy activa a lo largo de todos los estados de desarrollo, lo que
las convierte en posibles candidatas para la determinacin de estos ndices. por este
motivo, el trabajo de esta tesis se enfoca en la caracterizacin, desde un punto de
vista hormonal, de estados de desarrollo juveniles, adultos vegetativos y reproductivos
para la identificacin de un ndice fisiolgico y bioqumico de los procesos de
maduracin y/o envejecimiento en pinus spp. los resultados mostraron la presencia
diferencial de citoqumicas de diferente naturaleza en los estados juveniles y adultos,
lo que permiti la determinacin de un ndice basado en la relacin entre este tipo de
hormonas que posibilitara la caracterizacin fisiolgica antes de ser introducidos en
cultivo.
Clonacin y caracterizacin de genes de protenas inactivadoras de ribosomas
de las especies sambucus ebulus l. y beta vulgaris subsp. vulgaris .
Autor: prez bragado m. yolanda .
Ao: 2001.

Universidad: valladolid. centro de lectura: ciencias.

Centro de realizacin: facultad de ciencias - universidad de valladolid.
Resumen: en este trabajo se aborda la clonacin molecular de varias rips ("ribosomeinactivating proteins") presentes en sambucus ebulus l., y beta vulgaris subsp.,
vulgaris, utilizando la tcnica denominada race ("rapid amplification of cdna ends"). el
yezgo (s.ebulus) posee un gran nmero de rips en diversos tejidos, tanto de tipo 1
como de tipo 2. con este trabajo se ha conseguido la clonacin de la ebulina 1, rip de
tipo 2 no txica presente en las hojas de la planta. el gen de la ebulina 1 incluye la
secuencia de un pptido seal y de un pptido de conexin entre sus dos cadenas
constituyentes, que son procesados en la maduracin de la protena. en colaboracin
con el profesor j.d. robertus se han obtenido cristales de ebulina 1, lo que la convierte
en la primera rip de tipo 2, junto con la ricina, que ha sido clonada y cristalizada.
ambas protenas presentan la misma actividad enzimtica, por tanto, el cambio
observado en el subdominio de fijacin de azcares 2gamma, propio de las protenas
inactivadoras de ribosomas de tipo 2 del gnero sambucus, podra estar en la base de
su escasa toxicidad que las diferencia de la ricina. a partir de hojas de remolacha
azucarea, se han aislado y caracterizado varios clones cdna codificadores de la
protena betina 27. su traduccin da lugar a la misma protena pero difieren en la
regin no cidificadora en 3'. se han realizado, adems, experimentos de
deglicosilacin qumica de las betinas 27 y 29 nativas, lo que nos permite afirmar que
se trata de una misma protena con diferente grado de glicosilacin. se ha realizado un
intento de expresin preliminar del gen de la betina 27 en escherichia coli, pero se
trata de una rip altamente txica para la bacteria. se ha realizado un estudio de la
induccin de la expresin de las betinas en distintos estadios del desarrollo de la
planta sometidos al tratamiento con mediadores de la respuesta antipatognica que
indican que nicamente se inducen en el estadio adulto de la planta. esta es la primera
vez que se encuentran varios mensajeros distintos que codifican para la misma rip. la
presencia de dos poblaciones de mensajeros con diferente estabilidad sustenta la
teora de que la expresin de las betinas est regulada a dos niveles, traduccin y
transcripcin.
Protena shsp del castao comn (castanea sativa mill.): aspectos moleculares
de la respuesta al estrs abitico.
Autor: soto de viana lvaro.
Ao: 2000.
Universidad: politecnica de madrid.
Centro de lectura: ingenieros de montes.
Centro de realizacin: e.t.s. de ingenieros agrnomos.
Resumen: en esta tesis doctoral se refiere la caracterizacin de una protena de
choque trmico de bajo peso molecular abundante en la semilla del castao comn,
denominada cs hsp17.5, perteneciente a la clase i citoslica. por primera vez para una
protena de este tipo se ha demostrado su presencia constitutiva en el tallo,
principalmente en el cambium y floema secundario. se ha estudiado su expresin a lo
largo de la maduracin y germinacin de la semilla. as como en rganos vegetativos
de plntulas sometidas a estrs controlado. se ha mostrado que las temperaturas altas
(32 y 40c) y bajas (4c) inducen la expresin de la citada protena. se ha
caracterizado su actividad in vitro como chaperona molecular, empleando como
sustrato la endoquitinasa cs ch1 de la semilla de castao. se ha expresado de manera
estable en e.coli, demostrndose adems que cs hsp17.5 confiere una proteccin
frente a las temperaturas extremas, tanto altas (50c) como bajas (4c). este ltimo
resultado es la primera evidencia experimental de una proteccin frente al fro ejercida
por una protena de esta clase.
Estudio de la expresin y modulacin de las flavonas diosmina y neodiosmina
en diferentes materiales vegetales.

Autor: marin martin francisco.

Ao: 1998.
Universidad: murcia.
Centro de lectura: biologa.
Resumen: los flavonoides son metabolitos secundarios encuadrados dentro del grupo
de los fenoles vegetales. estas estructuras qumicas se encuentran restringidas al
reino vegetal, constituyendo aproximadamente el 2% del carbono fotosintetizado, y
presentando importantes funciones fisiolgicas en la planta. de igual manera
presentan propiedades farmacolgicas y modificadoras de la percepcin del sabor. de
manera general los flavonoides presentan actividad antioxidante, antiinflamatoria, son
utilizados en el tratamiento de desordenes vasculares y muestran un cierto efecto en la
prevencin de ciertos tipos de canceres. las flavonas glucosiladas diosmina y
neodiosmina presentan interesantes propiedades tanto desde el punto de vista
farmacolgico como desde el de la tecnologa de alimentos. el rutinsido diosmina
tiene propiedades antiinflamatorias y actividad frente a la fragilidad capilar siendo
prescrita como diferentes especialidades farmaceticas. actualmente se obtiene
mediante sntesis qumica a partir de la hesperidina encontrandose en los preparados
farmacuticos con una riqueza del 90%, estando el otro 10% formado por la flavanona
hesperidina, y no existiendo una fuente natural para su extraccin. el
neohesperidsido neodiosmina reduce la percepcin del sabor amargo causado por
determinados compuestos como la limonina en zumos de naranjas del tipo navel. as
dosis de 40 a 50 ppm aumentan el umbral de percepcin del limonoide desde 3-4 ppm
a 15 ppm, transformando un zumo con un desagradable sabor amargo en un zumo
aceptable. de igual manera no existen fuentes naturales de obtencin producindose
mediante sntesis qumica a partir de la flavanona neohesperidina. en esta tesis
doctoral se analiza, mediante hplc, el contenido en las flavonas diosmina y
neodiosmina as como el de sus precursores metablicos las flavanonas hesperidina y
neohesperidina en una amplia gama de ctricos y gneros afines as como en labiadas,
determinndose cual de entre los analizados es el mejor material para la realizacin de
extracciones industriales. igualmente se determina el estadio del crecimiento y los
tratamientos mediante fitorreguladores que permiten obtener los mximos niveles de
ambos compuestos. en las labiadas se detecta la presencia de un cido
hidroxicinmico, que una vez analizado su espectro de masas se identifica como ester
glucosa del cido isoferlico, asociado a la presencia de la flavona diosmina en la
mayora de las especies analizadas; rebatindose los datos encontrados en la
bibliografa en el que se identificaba como la flavanona hesperidina. con el fin de
obtener fuentes alternativas de produccin de estos metabolitos se procedi al
establecimiento de cultivos "in vitro" de naranja amarga y de hisopo. en el caso de los
cultivos "in vitro" de naranja amarga se obtiene presencia de la flavanonas naringina y
neohesperidina, siendo el nico caso descrito en que una lnea celular de ctricos no
presenta un patrn aberrante de flavonoides. no obstante los niveles detectados
fueron inferiores a los de los frutos. dadas las diferencias morfolgicas observadas en
los callos se realiz un estudio mediante microscopa ptica y electrnica
confirmndose estas y correlacionandose las zonas con mayor capacidad de
produccin de flavonoides con las que presentan un mayor retculo endoplasmtico.
en los cultivos "in vitro" de hisopo no se detecta la presencia de la flavona diosmina
pero si del ester glucosa del cido isoferlico llegando a detectarse niveles 48 veces
superiores a los encontrados en el rgano con mayor contenido en este cido
hidroxicinmico. igualmente se establece un protocolo de regeneracin que permitir
transformar las plantas de hisopo de rutinsidos a neohesperidsidos. debido a que
las flavonas diosmina y neodiosmina presentan una estructura aglicn exactamente
igual y que la nica diferencia entre ambas se localiza a nivel del enlace
ramnoglucsido, del tipo 1-6 en la diosmina y del tipo 1-2 en la neodiosmina, se
procedi al aislamiento de los genes de las ramnosiltransferasas responsables de
ambos tipos de enlaces. esta pequea variacin determina la aparicin de flavonoides

del tipo rutinsido (enlace 1-6), inspidos, y del tipo neohesperidsidos (enlace 1-2), en
la mayora de los casos amargos. a partir de hojas jvenes de pomelo y mediante el
uso de la tcnica de la rt-pcr se procedi al aislamiento del gen de la udp: 1-2
ramnosiltransferasa responsable de la formacin de los neohesperidosidos y
encontrndose un alto grado de homologa con la 1-2 ramnosiltransferasa de
pummelo. para el aislamiento de la udp: 1-6 ramnosiltransferasa se utilizaron hojas
jvenes de naranja. una vez localizados los dominios que presentaban un alto grado
de homologa, entre los que se encontraba la huella caracterstica de las udpglucosiltransferasas, se procedi al diseo de cebadores degenaros que mediante rtpcr permitieron el aislamiento los extremos 3' de dos genes con alto grado de
homologa. para el aislamiento de los extremos 5' se utilizaron diversas tcnicas como
la 5'-iss-race y una modificacin del paseo cromosmico, obteniendose finalmente una
"orf" de 1.224 pb con la huella caracterstica de las udp-glucosiltransferasas y varias
posiciones consenso de fosforilizacin mediante kinasas y presencia de secuencias
interpetables como microsatlites, ausentes en la ramnosiltransferasa 1-2 y en las
glucosiltransferasas descritas. los resultados analticos, obtenidos mediante el hplc,
sugeran la presencia simultanea en la mayora de los ctricos de un metabolismo
predominantemente rutinsido o neohesperidsido pero con trazas del otro metabolto.
as la ausencia en algunas de las muestras, entre ellas la naranja, del otro tipo de
flavonoides, entre ellas la naranja, se interpreto como contenidos inferiores al umbral
de deteccin. con el fin de confirmar el patrn general observado en ctricos se
procedi, mediante la realizacin de "southerns" y mediante pcr inversa, a intentar
localizar en el adng de naranja la presencia de la 1-2 ramnosiltransferas, utilizandose
como controles positivos el adng de pomelo y pumelo, detectndose este gen en
pomelo y pumelo pero no en naranja dulce. estos resultados indican la existencia de al
menos dos tipos de genotipos en ctricos. un primer grupo formado por la inmensa
mayora de los ctricos que permite dos fenotipos: fenotipo predominantemente
rutinsido y fenotipo predominantemente neohesperidsido, debiendo estar la
expresin regulada mediante algn tipo de control pre o post-transcripcional. un
segundo grupo, formado al menos por las naranjas, presenta un fenotipo rutinsido
obligado. finalmente se investig la posible presencia de intrones en el gen de las 1-2
ramnosiltransferasas en pummelo, no detectndose interrupciones en la secuencia.
Papel de reacciones defensivas de plantas a hongos patgenos.
Autor: cachinero diaz juana m..
Ao: 1996.
Universidad: cordoba.
Centro de lectura: ingenieros agronomos.
Centro de realizacin: departamento: bioquimica y biologia molecular programa de
doctorado: bioquimica y biologia molecular .
Resumen: en la presente tesis doctoral se han estudiado las reacciones defensivas de
plantas frente a hongos fitopatogenos centrandose en los patosistemas girasol /
plasmopara halstedii y garbanzo / fusarium oxysporum f. sp. ciceris. en el primer
patosistema se han determinado los niveles constitutivos de las hidrolasas antifungicas
beta-1,3-glucanasas y quintanasas, asi como su induccion por la inoculacion con el
patogeno en reacciones compatibles e incompatibles, observandose que tales
actividades se expresan constitutivamente en todos los tejidos de girasol y que la
induccion de tales actividades por efecto de la inoculacion con el patogeno se produce
cronologicamente antes en plantas resistentes que en plantas susceptibles. en el
patosistema garbanzo / fusarium oxysporum f. sp. ciceris se han determinado la
induccion de fitoalexinas y de las actividades enzimaticas beta-1,3-glucanasas,
quitinasas y peroxidasas tras la inoculacion de plantulas de garbanzo con organismos
no patogenicos, pudiendo pensarse que la resistencia inducida depende mas de la
respuesta desencadenada por la inoculacion con el inductor que de una hipotetica
sensibilizacion de la planta que la hiciera capaz de responder mas activamente al

ataque del patogeno. el estudio de la capacidad antifungica de fitoalexinas de

garbanzo frente a distintas razas de fusarium oxysporum f. sp. ciceris y aislados de
fusarium oxysporum revela que las razas mas virulentas de fusarium oxysporum f. sp.
ciceris son mas afectadas por estas fitoalexinas que los aislados no patogenicos de
fusarium oxysporum.
Regulacin de la expresin de los genes beta(1,3)glucanasa: participacion en la
respuesta de defensa vegetal y en los procesos de senescencia y muerte celular.
Autor: obregon calderon patricia.
Ao: 1996.
Universidad: complutense de madrid.
Centro de lectura: biologia.
Centro de realizacin: departamento: bioquimica y biologia molecular programa de
doctorado: bioquimica y biologia molecular.
Resumen: con el fin de estudiar la funcion de los enzimas beta(1,3)glucanasa, hemos
analizado la expresion de los genes que codifican para dichos enzimas: a) plantas
sanas: determinacion de la existencia de dos grupos de isoenzimas implicados en el
desarrollo vegetal durante la germinacion (gn1 y gn3) y la senescencia (gn1); b)
plantas infectadas: estudio, a nivel espacial y temporal durante una interaccion
incompatible y compatible. determinacion de la regulacion de la expresion diferencial
entre los genes estudio y otros genes relacionados con la respuesta de defensa
vegetal. implicacion de isoformas (gn1) en procesos de muerte celular; c) estudio de la
proteccion vegetal en respuesta a infecciones patogenas, a traves de la preinduccion
de los genes estudio por tratamientos hormonales o patogenos. la presencia de
glucanasas en el tejido preinfectado no previene la infeccion, pero si protege
temporalmente dichos tejidos.
Nuevas protenas vegetales antipatogenicas.
Autor: segura carnicero ana.
Ao: 1994.
Universidad: politecnica de madrid.
Centro de lectura: ingenieros agronomos.
Centro de realizacin: departamento: biotecnologa programa de doctorado:
biotecnologia agraria y forestal.
Resumen: se han aislado proteinas de diferentes especies vegetales con propiedades
antipatogenicas. estas proteinas se pueden clasificar, en base a su homologia de
secuencia, en dos grupos: ltps (proteinas de transferencia de lipidos) y pths
(pseudotioninas). la distribucion de estas proteinas en la planta es periferica en ambos
casos, lo que apoya la idea de su participacion en funciones defensivas. se ha clonado
un adnc que codifica por una pth de espinaca y se ha analizado la expresion de los
genes pth y ltp durante el desarrollo normal y en diferentes estreses bioticos y
abioticos. los genes pth se expresan a altos niveles en tallo, flor y raiz y en menor nivel
en hoja. los genes ltp se expresan a altos niveles en hoja, tallo, flor y a muy bajo nivel
en raiz. tratamientos con sal, ina y aba aumentan los niveles basales de expresion de
estos dos genes, igual que la infeccion con el patogeno botrytis cinerea. por tanto,
estas proteinas pueden considerarse como proteinas de defensa.
Sensibilidad de los ribosomas de escherichia coli, brevibacterium
lactofermentum, streptomyces lividans y agrobacterium tumefaciens a las
proteinas inactivadoras de ribosomas (rips) de origen vegetal.
Autor: alegre alija carlos.
Ao: 1993.
Universidad: valladolid.
Centro de lectura: ciencias.

Centro de realizacin: departamento: bioquimica; biologia molecular y fisiologia

programa de doctorado: "bioquimica y biofisica de los procesos de transporte en
membranas biologicas".
Resumen: en este trabajo se han obtenido sistemas bacterianos de sintesis de
polifenilalanina cuyo grado de actividad biosintetica depende en gran medida de la
presencia de rnasas endogenas en las propias bacterias. el sistema de b.
lactofermentum es el menos activo y posee los ribosomas mas degradados. los
sistemas de traduccion preparados a partir de e. coli, b. lactofermentum, s. lividans y a.
tumefaciens muestran una sensibilidad variable a la accion de las rips, aunque las rips
de una cadena activas sobre e. coli lo son en mayor o menor medida sobre los
ribosomas de las otras bacterias. el efecto de las rips sobre el ribosoma depende de la
concentracion de magnesio y por tanto de la conformacion ribosomica. existen
posibilidades de clonacion de alguna de las rips sobre estos sistemas ya que en
muchos casos han mostrado ser inactivas sobre los ribosomas bacterianos. por otra
parte, el mecanismo de accion enzimatica de las rips sobre los ribosomas, parece ser
el mismo en todos los casos y se ha demostrado que la estabilizacion del ef-g sobre el
ribosoma mediante la formacion de complejos estables dependientes de acido fusidico
protege de la accion de las rips, sugiriendo que es imposible la interaccion simultanea
del ef-g y la rip con el ribosoma.
ferro superoxido dismutasas en plantas de citrus: purificacion y caracterizacion de las
fe-enzimas de limonero verna (citrus limonum r.).
Autor: almansa pascual del riquelme m. soledad .
Ao: 1990.
Universidad: murcia.
Centro de lectura: biologia.
Centro de realizacin: departamento: centro de edafologia y biologia aplicada del
segura c.s.i.c. programa de doctorado:
Resumen: se ha llevado a cabo la purificacion a homogeneidad y caracterizacion de
una superoxido dismutasa conteniendo hierro. asi como la purificacion parcial de una
segunda fe-sod a partir de extractos crudos de hojas de citrus limonum r. asi mismo se
ha llevado a cabo un estudio que ha puesto de manifiesto la presencia de actividad fesod en distintas especies y variedades del genero citrus, entre las que se incluyen a c.
limonum vars. verna, fino y eureka; c. paradisi vars. red blush y marsh; c. sinensis
vars. salustiano, valencia y navel; c. reticulata var. satsuma y c. aurantium var. comun.
los resultados obtenidos aumentan el numero de especies vegetales donde se ha
descrito la presencia de dichas metaloenzimas consideradas hasta fechas recientes
como tipicas de organismos procarioticos y contribuyen a la necesidad de realizar
nuevas consideraciones sobre las teorias existentes con respecto a la evolucion de las
mismas. la ferro-superoxido dismutasa purificada a partir de hojas de citrus limonum r.
constituye la quinta metaloenzima de este tipo de dismutasas que hasta la fecha ha
sido purificada y caracterizada a partir de una planta superior.
Los cambios en el transporte de fotoasimilados: causa o efecto del crecimiento
vegetal. La induccin hormonal de la fructificacion del guisante (pisum satim l.)
como modelo experimental.
autor: estruch miana juan jose.
ao: 1990.
universidad: valencia.
centro de lectura: biologia.
centro de realizacin: departamento: instituto de agroquimica y tecnologia de alimentos
(i.a.t.a.). (c.s.i.c.)..
Resumen: las conclusiones fueron las siguientes: . definiendo el estado de desarrollo
del ovario de guisante: tratamiento con reguladores del crecimiento y decapitacion. . el
carbono-11 como radisotopo marcador en los estudios de translocacion. . distribucion

de asimilados en planta intacta de guisante. . el desarrollo partenocarpico de ovarios

no polinizados conlleva una modificacion en la distribucion de asimilados. . actividad
invertasa como marcador bioquimico del desarrollo del ovario de guisante. . los
cambios en las actividades invertasa preceden al desarrollo del ovario del guisante
inducido por ga3. . el sistema invertasa-transporte de hexosas constituye el principal
mecanismo de incorporacion de azucares a ovarios de guisante. un transporte
especifico de sacarosa lo complementa. . el transportador de la glucosa es susceptible
de ser regulado por ga3 en ovarios de guisante.
Bsqueda de toxinas vegetales inhibidoras de sintesis de proteinas y
aislamiento y caracterizacion de la toxina de stellaria holostea l.
autor: merino gonzalez m. jesus.
ao: 1989.
universidad: valladolid.
centro de lectura: medicina. centro de realizacin: facultad de ciencias (medicina).
Resumen: en este trabajo se han estudiado 21 especies vegetales y se han
encontrado 4 inhibidores de la sintesis de proteinas que son euphorbia serrata,
mordeum murinum, aegylops geniculata y stellaria holostea. estos inhibidores
presentan propiedades que los definen como proteinas inactivadoras de ribosomas
que que no son dializables precipitan con sulfato de amonio, son inactivables por el
calor y no presentan actividades proteasicas y rnasicas inespecificas. estas toxinas
nuevas son de tipo 1, es decir poseen una sola cadena polipeptidica. nos centramos
en la toxina de stellaria holostea y una vez aislada presenta un peso molecular de
27000. para estudiar estos inhibidores se pusieron a punto sistemas biosinteticos de
origen vegetal que fueron germen de vicia villosa, vicia lens y culumis satius. los
estudios de optimizacion llevados a cabo permiten un alto grado de biosintesis en
estos tres sistemas y por tanto son de gran utilidad en la investigacion de la
especificidad de sustrato frente a diversas proteinas inactivadoras de ribosomas. la
sensibilidad de los sistemas iosinteticos de origen vegetal a las toxinas es menor que
la sensibilidad de los sistemas animales. no obstante dentro del reino vegetal existe
heterogeneidad en la sensibilidad de la maquinaria ribosonica de las distintas especies
frente a la misma toxina. ademas la misma maquinaria ribosomica presenta
sensibilidades variables frente a toxinas de distinto origen.
Bsqueda de protenas inactivadoras de ribosomas en especies vegetales y
aislamiento y caracterizacin parcial del inhibidor de cucunis melo.
autor: ferreras rodriguez jose miguel.
ao: 1988.
universidad: valladolid.
centro de lectura: medicina.
centro de realizacin: dpto. bioquimica, biologia molecular y fisiologia de la universidad
de valladolid..
Resumen: se han buscado inhibidores de traduccion en 41 especies vegetales y se ha
encontrado que petrocoptis grandiflora, petrocoptis glaucifolia, lychnis flos-cuculi,
capsella bursapastoris, muscari comosum, cucumis melo, cucumis sativus, citrullus
vulgaris y vicia villosa poseen inhibidores de traduccion que actuan en diversos
sistemas biosinteticos obtenidos a partir de un amplio espectro de organismos
eucariontes. estos inhibidores no son dializables, precipitan con sulfato de amonio, no
muestran actividades rnasicas ni proteasicas inespecificas, son termosensibles, se
inactivan por congelacion-descongelacion repetida, son insensibles a reactivos de
grupos sulfhidrilo y a tripsina, actuan en la etapa de elongacion de las cadenas
polipeptidicas y provocan un efecto menor en celulas que en sistemas acelulares.
todas estas propiedades demuestran que son proteinas inactivadoras de ribosomas de
una sola cadena (o toxinas de tipo 1). se ha aislado el inhibidor de cucumis melo por
cromatografia de intercambio de cationes, este inhibidor tiene un peso molecular de
23500. se ha puesto a punto un procedimiento mas rapido y barato para buscar el

inhibidor en eluatos cromatograficos. el procedimiento consiste en medir el efecto

hipercromico inducido por el inhibidor en ribosomas purificados.
Mecanismo de la tolerancia al cobre en plantas de pisum sativum l.: cuproproteinas y metabolismo peroxisomal.
autor: palma martinez jose manuel.
ao: 1988. universidad: granada.
centro de lectura: ciencias .
centro de realizacin: departamento: estacion experimental del zaidin (c.s.i.c).
granada.
Resumen: se ha llevado a cabo la purificacion y caracterizacion parcial de las cuproproteinas de baja masa molecular presentes en hojas de dos variedades de pisum
sativum l. con distinto grado de sensibilidad al cobre, no encontrandose, tanto en una
variedad sensible como en otra relativamente tolerante, ninguna proteina del tipo de
las metalotioneinas descritas en otras especies vegetales. sin embargo, si parecen
estar implicados en los procesos de la tolerancia al cobre, complejos de cobre de
masas moleculares de 3700, 66000 y 2000 da. por otro lado, en los estudios
realizados sobre el efecto de concentraciones altas de cobre en la actividad de
distintas metaloenzimas distribuidas en diferentes compartimientos celulares, se
demostro inequivocamente la exclusiva presencia de una cu,zn-superoxido dismutasa
en cloroplastos, asi como una mayor actividad en las plantas tolerantes al cobre de las
enzimas peroxisomales relacionadas con oxigeno activado (mn-superoxido dismutasa
y catalasa). estos resultados sugieren la participacion de intermediarios reactivos del
oxigeno en el mecanismo de la toxicidad del cobre y tambien implican una funcion
para la mn-superoxido dismutasa peroxisomal en los procesos moleculares
responsables de la tolerancia al cobre en pisum sativum l. se ha demostrado tambien
la generacion de radicales libres superoxido (o2-) dependiente de nadh en membranas
de peroxisomas de hojas, mientras que en la matriz peroxisomal la incubacion con
xantina no induce la produccion de o2-, a pesar de haberse demostrado la presencia
en esta fraccion soluble de xantina oxidasa. la generacion de radicales libres
superoxido en peroxisomas de hojas, junto con los resultados descritos recientemente
sobre la produccion de estos radicales en glioxisomas, sugieren que la produccion de
superoxido podria ser un evento metabolico normal en los peroxisomas, y apuntan
hacia la existencia de nuevas funciones de estos organulos en el metabolismo celular
relacionadas con radicales libres de oxigeno. por ultimo, se llevaron a cabo
experiencias sobre el efecto del clofibrato, un compuesto hipolipidemico, en el
metabolismo del oxigeno activado en peroxisomas de pisum sativum l., y se obtuvieron
evidencias que sugieren que este farmaco probablemente induce la proliferacion de
peroxisomas en las hojas, originando al mismo tiempo una sobreproduccion de
radicales libres de oxigeno en estos organulos. este mecanismo de toxicidad
provocado por intermediarios reactivos del oxigeno podria ser tambien operativo en
peroxisomas de algunos animales donde se ha demostrado que el clofibrato y otros
agentes hipolipidemicos son cancerigenos.
superoxido dismutasa en peroxisomas vegetales especializados: localizacin
intraorganular y estudio de la produccin de radicales libres de oxgeno.
autor: sandalio gonzalez luisa m. .
ao: 1987.
universidad: granada.
centro de lectura: ciencias.
centro de realizacin: estacion experimental del zaidin (c.s.i.c.).
Resumen: en peroxisomas aislados se ha demostrado por primera vez la presencia
de la metaloenzima superoxido dismutasa (sod; ec 1. 15. 1. 1). para el estudio de esta
localizacion celular se utilizaron dos clases de peroxisomas con distinto grado de
especializacion: glioxisomas y peroxisomas de hojas. en glioxisomas purificados de

cotiledones de citrullus vulgaris schrad. se identifico la presencia de dos isoenzimas de

superoxido dismutasa una cu zn-sod y una mn-sod que representan el 80% y el 20%
de la actividad sod total presente en estos organulos respectivamente. mediante
ensayos de solubilizacion y latencia de actividad sod en glioxisomas intactos se pudo
comprobar que la isoenzima cu zn-sod se encuentra localizada en la fraccion soluble
de estos organulos (matriz) mientras que la mn-sod minoritaria parece encontrarse
ligada a la parte externa de la membrana glioxisomal. por el contrario en peroxisomas
intactos purificados de hojas de pisum sativum l. solamente est presente la isoenzima
mn-sod ubicada en la matriz de estos orgnulos oxidativos. Utilizando mtodos
qumicos y de resonancia de spin electronico (rse) en la modalidad de atrapamiento de
spin se investig la produccin de radicales libres de oxigeno (o sub 2 e oh) en
fracciones suborganulares de glioxisomas. las purinas xantina e hipoxantina inducian
la produccion de radicales o sub 2 en matrices de glioxisomas y esta generacion era
inhibida por el alopurinol un represor tipico de la xantina oxidasa. en membranas de
glioxisomas el nadh estimula la produccion de radicales libres superoxido con tasas de
generacion de radicales ligeramente superiores a las observadas en matrices. esta
generacion de radicales superoxido por purinas se debe a la xantina oxidasa (ec 1. 1.
3. 22) una fe mo flavo-enzima eficaz productora de o sub 2 cuya presencia en
glioxisomas fue localizada en la matriz de estos organulos. estos resultados
constituyen la primera evidencia de la ubicacion de la xantina oxidasa en la matriz de
peroxisomas vegetales especializados. la produccion de radicales o sub 2 en
peroxisomas inducida por metabolitos potencialmente endogenos sugiere nuevas
funciones para los peroxisomas en el metabolismo celular relacionadas con especies
de oxigeno activo (o sub 2 oh).
Influencia de nutrientes y polifenoles vegetales en la humificacin de la
hojarasca de especies autctonas e introducidas de la provincia de huelva.
Autor: Domnguez de juan m. teresa.
Ao: 1985.
Universidad: autonoma de madrid.
Centro de lectura: ciencias.
Centro de realizacin: instituto nacional de investigaciones agricolos madrid.
Resumen: con el fin de clasificar los eucaliptos introducidos en la provincia de huelva
(er globulus y e. camaldulensis) y las especies autoctonas (quercus suber quercus ilex
pinus pinea cistus ladanifetus y halimiun halimifolium) en relacion con la evolucion del
suelo bajo las mismas se hace un estudio comparativo de la concentracion de
nutrientes (n p ca mg k y al) y polifenoles clasificando las especies de acuerdo con su
contenido en dichos productos. tambien se determina mediante incubacion el
nitrogeno mineral liberado por los microorganismos del suelo estableciendo la relacion
entre el n liberado y el contenido de polifenoles y se estudia la influencia del extracto
hidrosoluble en la germinacion de semillas de lechuga y eucalipto y en el crecimiento
de hojas y raices de plantitas de trigo.
Variacin de los carotenoides en relacion con el ciclo vegetativo de la planta en
distintas especies del gnero vicia.
Autor: barro de neyra m. carmen.
Ao: 1978.
Universidad: complutense de madrid.
Centro de lectura: farmacia.
Centro de realizacin: facultad de veterinaria.
Resumen: se han extraido aislado identificado y cuantificado los carotenoides de v.
villosa v. sativa v. monanthas y v. ernilia en cinco fases distintas de su ciclo vegetativo.
las muestras se liofilizaron inmediatamente despues de cortadas. la extraccion se hizo
por el metodo de la a.o.a.c. y la identificacion por cromatografia en capa fina. Con los
resultados obtenidos se realizo un analisis estadistico. Resultaron ser iguales (p 0 01)

la v monanthas y la v. ernilia. la v. villosa es la que tiene mayor cantidad de

carotenoides por unidad de sustancia seca. se aislaron carotenos luteina zeaxantina
violaxantina y neoxantina. la mayor cantidad de pigmento corresponde a la luteina en
las cuatro especies y en los cinco cortes. la neoxantina y violaxantina aparecen en
cantidades parecidas y en algunos cortes su significacion fue p 0 01
Influencia de las hormonas vegetales sobre la sintesis de acidos nucleicos y
proteinas de microorganismos fotosinteticos.
Autor: Fernndez valiente Eduardo.
Ao: 1977.
Universidad: complutense de Madrid.
Centro de lectura: biologa.
Centro de realizacin: instituto gregorio maraon c.s.i.c..
Resumen: los acidos indolacetico y giberelico inducen una estimulacion en el
crecimiento de euglena gracilis acompaada de un incremento en las sintesis de
acidos nucleicos proteinas e hidratos de carbono. el aumento de la sintesis de acidos
nucleicos y proteinas de e. gracilis en presencia de los acidos indolacetico y giberelico
se debe a un incremento en la actividad de la enzima rna polimerasa del alga. la
kinetina estimula el crecimiento de e. gracilis pero no las sintesis de acidos nucleicos y
proteinas. chlorella pyrenoidosa y anacystis montana no son sensibles al tratamiento
con ninguna de las tres hormonas.
Estudio sobre el metabolismo aminoacido y alcaloidico en plantas de nicotiana
irradiadas con u.v.
Autor: gomez pea rosa antonia.
Ao: 1976.
Universidad: barcelona.
Centro de lectura: farmacia.
Centro de realizacin: facultad de farmacia barcelona.
Resumen: se ha estudiado en plantas de nicotiana rustica el efecto de la irradiacion
uv sobre el metabolismo aminoacido y alcaloidico. la irradiacion uv cercana (350 nm) a
las dosis aplicadas (10 y 20 minutos diarios) no ha ocasionado estimulo alguno
aparente de la sintesis de nicotina. la irradiacion uv lejana (a las dosis de 1 y 2 minutos
diarios) ha inhibido parcialmente la sintesis de nicotina segun se deduce de los valores
absolutos pero los valores expresados en porcentaje sonparecidos a los de las plantas
control.
Reactivacin por luz azul de la nitrato reductasa de algas verdes y plantas
superiores.
Autor: roldan nogueras Jos Manuel.
Ao: 1976.
Universidad: sevilla.
Centro de lectura: ciencias.
Centro de realizacin: departamento bioqumica. Facultad de ciencias y c.s.i.c./u.
sevilla.
Resumen: el complejo enzimatico nitrato-rasa puede presentarse en dos formas
metabolicamente interconvertibles : una oxidada y activa y otra reducida e inactiva. el
mecanismo de inactivacion del enzima se habia establecido previamente pero el
agente fisiologico responsable de la reactivacion quedaba aun por elucidar. en el
presente trabajo se muestra que la luz azul es capaz de realizar el proceso de
reactivacion al oxidar al componente (o componentes) del enzima cuyo estado
reducido determina la forma inactiva del complejo. el fad grupo prostetico del enzima
actua como pigmento colector de luz potenciando la reactivacion. la caracterizacion del
proceso incluyo la dependencia con el ph y la temperatura asi como elefecto de
diversos compuestos como piridin-nucleotidos edfa ioduro etc

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Esta tcnica de cromatografa se utiliza para separar los pigmentos de las hojas de una planta.
MATERIAL: Hojas de hiedra, coleo y espinaca, Mortero, Etanol de 96, Papel de filtro, Vaso de
precipitados, Varilla, Matraz, Embudo, Carbonato de Calcio.
PROCEDIMIENTO
1. Se lavan unas cuantas hojas frescas, se quitan los nervios y se secan lo mejor posible con
papel de filtro. A continuacin se cortan en pequeos fragmentos.
2. Se trituran los fragmentos en un mortero. Se aade unos 50 cm3 de etanol y una
pequesima (punta de esptula) de CO3Ca (para evitar la degradacin de los pigmentos) y
se remueve hasta que el alcohol adquiera el mismo color que las hojas.
3. Se filtra utilizando el embudo recubierto de papel de filtro y se recoge el filtrado en un
matraz o vaso de precipitado hasta que alcance una altura de 5 mm.
4. Se corta una tira de papel de filtro de unos 3 cm de ancho y se la apoya sobre el fondo del
vaso de precipitado sujeta a una varilla de madera para que se mantenga vertical.
5. Transcurridos entre 20 y 30 minutos, el alcohol habr ascendido por el papel arrastrando a
los diferentes pigmentos.

Mirad las cromatografas que nos salieron, se han agrupado por tipo de vegetal y por tipo de
disolvente orgnico:

As que, ahora slo quedara extraer conclusiones en funcin de los resultados. Se trata de
determinar qu disolvente orgnico permite diferenciar mejor los distintos pigmentos vegetales, as
como tratar de saber qu pigmento es cada fase (cada color).
Ya puedes empezar a practicar!

Prctica: "Fabricacin de Almidn".

Esta prctica consiste en tapar una parte de una hoja de cualquier planta comn, nosotros hemos
usado un Geranio, con el fin de que no pueda hacer el importante proceso metablico de la
Fotosntesis. As pues, una vez tapadas las hojas se le deja varios das a la luz y se le riega
convenientemente.
El da de la prctica se cortan dichas hojas tapadas y se meten enrolladas en tubos de ensayo
grandes, se cubren de Etanol y se pone el tubo de ensayo al "bao mara" para que se vaya
calentando lentamente el etanol (muy inflamable) y pueda extraer por disolucin una buena parte de
los pigmentos de la hoja. Mirad las fotografas qu bonitas:

El resultado es:
-La hoja se va decolorando en funcin del tiempo que se tenga calentando.
-El etanol se va coloreando de verde, porque se diluyen los pigmentos extraidos.
Luego se saca la hoja, se seca bien y se introduce en Lugol, reactivo con yodo similar al Betadine,
que teir los lugares de la hoja donde hay almidn.
Moraleja:
La banda tapada quedar ms clara, menos teida por Lugol, porque la hoja ha tenido que utilizar el
almidn de esa zona, su sustancia de reserva energtica, para que sobrevivan las clulas de esa zona.
Es una evidencia de que en esa zona no ha podido realizar la fotosntesis por la ausencia de luz y, por
tanto, tampoco ha podido sintetizar el almidn de reserva por sntesis (unin) de Glucosas (azcares
esenciales que se producen en la fotosntesis).
Qu bonito!