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Analyse par Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC)

de filtres solaires
Larrahondo Maria, Rieb Estelle

Master 2 Professionnel "Chimie Analytique et Instrumentation"

Promotion 2006

La chromatographie est une technique analytique dont les premires expriences, celles de Tswett, datent de 1903. Elle permet la sparation dun ou
plusieurs composs dun mlange pour leur identification et leur quantification. La chromatographie en phase liquide est une mthode physico-chimique
base sur des diffrences dinteractions. Les molcules des produits sparer (soluts) sont mises en solution dans un solvant. Ce mlange est introduit
dans la phase mobile liquide (luant). Suivant la nature des molcules, elles interagissent plus ou moins avec la phase stationnaire contenue dans la
colonne chromatographique. Ces interactions provoquent des changes qui aboutissent la sparation dsire. La phase mobile pousse par une pompe
sous haute pression, parcourt en permanence le systme chromatographique, dont fait partie la colonne.
Les composs en solution se rpartissent suivant leur affinit, entre la phase mobile et la phase stationnaire.

Un peu de thorie
trB

trA

Largeur
mi-hauteur

Phase stationnaire polaire et phase mobile apolaire

Temps de rtention r : caractristique du


constituant et des conditions danalyse
Surface du pic: fonction de la quantit de
constituant.

Temps de
rtention

R = 1 , 18

chromatographie polarit de phase normale.


Phase stationnaire apolaire et phase mobile polaire
chromatographie polarit de phase inverse.

t rB t rA
d A + d B

Phase
Phase
Phase
Phase

Si R < 1 la rsolution est mauvaise


Si 1 < R < 1,5 la rsolution est acceptable
Si R > 1,5 la rsolution est bonne

Mode isocratique: le mlange de diffrents solvants ne varie pas au cours de la


sparation
Mode gradient dlution: variation des pourcentages des solvant au cours de la
sparation

Fig.1 Illustration des paramtres en chromatographie

Appareillage

stationnaire polaire affinit pour les soluts polaires.


stationnaire apolaire affinit pour les soluts apolaires.
mobile polaire entrane les soluts polaires.
mobile apolaire entrane les soluts apolaires.

Systme de pompage : permet dobtenir un dbit stable, et non puls.


Les deux solvants : sont pomps sparment puis mlangs dans la chambre de mlange.

Dgazeur

Le systme de dgazage : limine les bulles qui perturbent la fonctionnement du dtecteur (largissement de pics).

Chambre de mlange

Chambre de mlange : le mlange est mis sous pression puis envoy vers linjecteur

Pompes

Dispositif dinjection de lchantillon : permet dintroduire lchantillon en tte de colonne tout en conservant la pression leve sur
la colonne. Le volume est matris par une boucle dinjection (20, 50L...). Une vanne
Rhodyne est alors bascule manuellement pour lancer lanalyse.

Injecteur automatique

Le four : maintient la temprature de la colonne constante.


Dtecteur

La colonne : est un tube rempli de phase stationnaire.

(DAD : barrettes de diode)

Dtecteur barettes de diodes : permet l'acquisition du spectre de l'chantillon en temps rel, une reprsentation en 3
dimensions (temps, absorbance, longueur d'onde) et une caractrisation des composs par leur
spectre.

+ colonne thermostate dans four (de prfrence)


Fig.2 Photo dune chane
HPLC Agilent 1100

Application

Une exposition au soleil peut gnrer des lsions cutanes. La concentration des filtres UV doit tre connue pour ne pas dpasser un taux limite autoris, fix par diffrentes lgislations.Une
procdure de dosage de deux filtres solaires, octocrylne et parsol, a t mise au point par HPLC.

Conditions de sparation de loctocrylne et du parsol


Systme HPLC Agilent 1100
Mode isocratique
Phase mobile eau/actonitrile (15/85, v/v)
Colonne Waters Nova-Pak C18 3,9 mm id x 75 mm
0,8 ml.min-1
= 310 nm dtecteur DAD
chantillon solubilis dans 60% dactonitrile + 40%
deau

Octocrylne
O
O

2-ethylhexyl 2-cyano-3,3-diphenylacrylate

Chromatogramme dune crme solaire


Chromatogramme 3D dune crme solaire

OCTOCRYLENE
PARSOL

Aire
Courbe d'talonnage

Parsol

yp = 161.24x + 22.184
R2 = 0.9999

4000
3500
3000
Aire

parsol

2000

Linaire (parsol)

1500
O

Linaire (octocrylne)

1000
500

yo = 69.688x + 12.043
R2 = 0.9999

octan-3-yl 3-(4-methoxyphenyl)acrylate

Fig.4 Chromatogramme dune crme


contenant 13% doctocrylne et 9%
de parsol.

octocrylne

2500

10

15

20

25

Concentrations g/ml

Fig.3 Courbe dtalonnage: tmoigne de


la linarit.
Intervalle: Octocrylne 0,625-15 g/ml
Parsol 0,825-19,8 g/ml

Concentration
Octocrylne
Parsol

LOD (ng/mL) LOQ (ng/mL)


9
29
5
16

Fig.5 Chromatogramme 3D (temps, absorbance,


longueur donde)

Tab.1 Limites de dtection


(3*Signal/bruit) et de
quantification (10*Signal/bruit)

Prix d'un appareil


AGILENT 1100
La Chromatographie Haute Performance est une mthode particulirement slective, linaire et sensible. Pouvant tre couple avec la plupart des dtecteurs (UV,
MASSE, FLUORESCENCE, RMN), elle sadapte une trs large gamme de matrices et analytes. Loptimisation est relativement simple. Cependant, plusieurs
paramtres (pH, Phase mobile, Colonne, Temprature) peuvent influencer la sparation.

35 126 TTC