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La chromatographie

IV.1. Gnralits sur la chromatographie

Le concept de Chromatographie en phase gaz a t introduit par Archer Martin et Richard


Synge en 1941. La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est comme toutes les techniques
de chromatographie, une technique qui permet de sparer des molcules d'un mlange
ventuellement trs complexe de nature trs diverses. Elle s'applique principalement aux
composs gazeux ou susceptibles d'tre vaporiss par chauffage sans dcomposition. Elle est
de plus en plus utilise dans les principaux domaines de la chimie.
IV.1.1. Dfinition :

La chromatographie est une mthode physique de sparation base sur les diffrences
d'affinits des substances analyser l'gard de deux phases, l'une stationnaire ou fixe, l'autre
mobile. Selon la technique chromatographique mise en jeu, la sparation des composants
entrans par la phase mobile, rsulte soit de leur adsorption et de leur dsorption successive
sur la phase stationnaire, soit de leur solubilit diffrente dans chaque phase.

On dfinit un coefficient de partition K :

C S : concentration dans la phase stationnaire.


Cm : concentration dans la phase mobile.

IV.1.2. Classification des techniques chromatographiques

Les techniques chromatographique peuvent reparties suivant plusieurs critres : en fonction


de la nature des deux phases en prsence, ou du procd utilis, ou du phnomne physicochimique responsable du coefficient de distribution k.
Classification selon la nature physique des phases :
La phase mobile : fluide (liquide ou gaz).
La phase stationnaire : solide ou liquide.
La combinaison de ces diffrentes possibilits permet de distinguer :
Chromatographie liquide-liquide.
Chromatographie liquide-solide.
Chromatographie gaz-liquide.
Chromatographie gaz-solide.

Chromatographie en phase gazeuse (CPG)

Figure : appareil de CPG

IV .2. Dfinition de la CPG :

Technique de sparation applicable aux composs gazeux ou susceptibles dtre volatiliss


par lvation de chauffage sans dcomposition.
Elle permet lanalyse de mlange ventuellement trs complexe de nature et de volatilit
trs diverses. Manuel pratique de la CPG P.ARPINO, A.VEROGNOL,P.WITIER /4eme
dition PARIS MILAN 1995

IV .2.1. Principe :

La chromatographie gaz-liquide (partage). La phase stationnaire est un liquide non


volatil fix par imbibition d'un support inerte. Le solut se partage entre le gaz vecteur
et le liquide stationnaire.

La chromatographie gaz-solide (adsorption). La phase stationnaire est un solide


adsorbant (gel de silice, alumine). Plus l'adsorption d'un solut sur la phase
stationnaire est leve.

IV .3. Matriels
Description d'un chromatographe

Figure : schma dun chromatographe en phase gazeuse


Le chromatographe comprend schmatiquement 5 parties : une source de gaz, une chambre
dinjection, un four dans lequel se trouve plac une colonne, un dtecteur coupl un
enregistreur.
IV .3.1. Source de gaz

La source de gaz (gaz porteur ou vecteur) constitue la phase mobile. Conserv sous pression
dans des bonbonnes mtalliques, le gaz passe dans des dtendeurs permettant dobtenir
des pressions allant de 0.2 4 bars.
Ils existent des rgulateurs permettent de choisir et de contrler la vitesse de passage dsire
de cette phase mobile. Elle variera selon les dimensions de la colonne.
Les principaux gaz utiliss sont : N2, Ar, He, H2.
Ils doivent rpondre un certain nombre de critres :
trs grande puret.
inertie vis--vis des substances chromatographie.
trs faible viscosit.
compatibles avec le systme de dtection. 05 chromato gaz

IV .3.2. Injecteur :

Il permet d'introduire un liquide qui doit tre vaporis instantanment avant d'tre transfr
dans la colonne. Sa temprature doit tre suprieure d'environ 20C la temprature du
produit le moins volatil.
Le gaz porteur est de prfrence prchauff, entre dans une chambre chauffe, obture par une
pastille dlastomre, le septum, qui assure ltanchit travers lequel Les gaz sont introduits
soit par une seringue soit par un systme de vanne et de boucles. La boucle est un tube qui est
alternativement balay par le mlange analyser, ou par le gaz vecteur. Ce systme permet
l'injection de volumes constants pour des analyses multiples reproductibles.
Il existe deux types d'injecteurs. Ceux pour les colonnes remplies (peu nombreux actuellement) et
ceux pour les colonnes capillaires (le plus frquent ...)

Dans le cas des colonnes capillaires, 3 modes d'injections peuvent se prsenter :

injection avec division (split) : le mlange est divis en deux parties. La plus petite
partie arrive sur la colonne alors que la plus importante est vacue.

injection sans division (splitless) : le mlange n'est pas divis en deux parties.

injection dans la colonne (on-column) : il n'y a pas d'tape de vaporisation


l'chantillon .

Figure injecteur programmable split/splitless

Figure : vue en dtail dun PSS et on colonne

IV .3.3. Colonne :

C'est l'organe principal. Elle est constitue d'un tube gnralement mtallique de diamtre
intrieur de l'ordre du millimtre. Ce tube contient la phase stationnaire constitue par un
substance active ; solide, liquide .la colonne est balaye en permanence par un gaz appel gaz
vecteur (porteur).
Les constituants de lchantillon partis en mme tempe de linjection vont se dtache les uns
des autres a traverse la colonne, selon leur affinit pour la phase stationnaire. Manuel pratique

Il existe deux types de colonnes avec des variantes :

colonnes remplies ou garnissage (packed)

colonnes capillaires (open tubular).

Les grains jouent le rle du support de la phase stationnaire, elles sont base de diatomite qui
peut tre selon la phase stationnaire :

des grains macroporeux pour si la phase est liquide.

des grains de petits taille si la phase est solide.

A. Caractristiques des colonnes remplies ou garnissage

diamtre interne : 3,2 mm ou 6,4 mm

longueur : 0,5 3 mtres

tube :
acier inoxydable : inerte et bon conducteur de chaleur.
Verre : inerte mais mauvais conducteur de chaleur.

Figure : colonnes remplies

Figure : schma dune colonne remplies

B-Caractristiques des colonnes capillaires

diamtre interne
longueur : 15 100 mtres
tube : silice fondue recouvert dune mince couche de polyimide.

Figure : colonnes capillaires

Figure : schma dune colonne capillaire

IV .3.4. Le four

Cest un four bain dair, pourvu de rsistances


chauffantes et dun systme de ventilation et de
brassage pour lhomognisation de la temprature.
La rgulation est assure par un thermocouple,
grce auquel la variation nexcde pas 0,2C,
pour un intervalle de fonctionnement allant de la
temprature

ambiante

jusqu

400C.

Sa

temprature est en gnral de 20C infrieure

Figure : four de CPG

celle du solut de plus bas point dbullition.


Cette partie de l'quipement doit pouvoir fonctionner suivant deux modes :
isotherme entre 20 et 400C
en programmation de temprature avec des squences plus ou moins complexes.

IV .3.5. Dtecteur :

Les dtecteurs dclent la prsence des substances chromatographies dans le gaz vecteur au
fur et mesure de leur lution. Ils sont toujours placs en sortie de colonne. Ces substances
modifient une proprit chimique ou physique du gaz et ces variations sont transformes par
le dtecteur en signaux lectrique qui sont amplifies et transcrit sous forme dun graphique.
A- Un Dtecteur conductibilit thermique (TCD) ou catharomtre :
Il est fond sur une comparaison continuelle entre le flux de chaleur
emport par le gaz vecteur pur et le flux de chaleur emport par le gaz
vecteur charg des molcules de solut. Nous obtiendrons un signal
chaque fois que l'un des constituants se prsentera dans la cellule car la
conductibilit thermique du gaz vecteur (qui traverse le dtecteur)

Figure : Dtecteur TCD

varie quand le constituant X traverse le dtecteur.


B- Un dtecteur ionisation de flamme (FID) :
Une tension de l'ordre de la centaine de volts est maintenue entre la
buse de la flamme et une lectrode entourant cette dernire. Lorsque les
molcules traversent la flamme, elles sont ionises ce qui provoque
entre les lectrodes un courant lectrique qui est ensuite amplifi. Il a
aussi linconvnient, contrairement au catharomtre, de dtruire le solut
qui le traverse, car son principe est de brler, dans une flamme dhydrogne.

Figure : Dtecteur FID

C-Un dtecteur absorption lectronique (ECD) : des lectrons sont mis que le tritium (H3)
ou le (Ni63), en gnral par une source radioactive (rayonnement bta), et traversent le gaz,
lorsqu'un lectron rencontre une molcule de gaz, il peut tre captur, ce qui fait varier
l'intensit du courant d'lectrons, cette intensit tant mesure en continu.
D- Un dtecteur thermoonique (NPD).
E- Un spectromtre de masse (MS) : utilisant principalement l'impact lectronique ou
l'ionisation chimique comme modes d'ionisation.
IV .3.6. Le chromatogramme :

figure : reprsentation dun chromatogramme


C'est la courbe donnant la concentration des produits sortant de la colonne (effluents) en
fonction du temps ou du volume de gaz vecteur dbit. Gnralement cette courbe est une
courbe de type gaussien (pic). Le premier pic est, uniquement avec un dtecteur
catharomtre, le pic de l'air, invitablement inject avec le mlange inconnu. Il correspond au
volume de gaz de la colonne car l'air n'est pas retenu par la phase stationnaire.
Le pic d'un compos quelconque se caractrise par :

t0: dbut de l'injection

tr : Le temps de rtention.

tr' : temps de rtention rduit.

h : La hauteur.

tm : temps mort.

Wb : largeur du pic la base ().

Wh : largeur du pic mi-hauteur ().

Vm : volume mort de la colonne.


Figure : CHROMATOGRAMME

Le temps de rtention rduit est gal la diffrence d'abscisses entre le compos et l'air, il est
directement li au cfficient de partage du compos entre les phases mobile et stationnaire.

IV .4. Optimisation

de la sparation :

Lobjectif du chromatographie est triple : obtenir des pics chromatographiques les plus fins
possibles (grande efficacit), les mieux spars possible (bonne rsolution), en un temps
danalyse minimum. Dans cet but La plupart des utilisateurs travaillent en "programmation ",
ses mthodes dits les mthodes doptimisation par les plans dexpriences (PE) .
IV .4.1. Paramtres influenant les sparations :

Sur quels paramtres peut-on jouer en GC ?

choix de la temprature de sparation :

choix de type de colonne :

choix de la phase stationnaire :

choix de Dbit du gaz vecteur :

choix de systme(s) dinjection :


Figure :Paramtres influenant les sparations

A-Choix de Temprature :

L'ensemble des organes dcrits ci-dessus sont placs dans des enceintes thermostates
des tempratures programmes selon la disposition des organes et la nature de
l'chantillon analyser.

Linjecteur : une temprature de 20 30 C au-dessus de celle de la colonne.

la colonne : La temprature de la colonne est en gnral infrieure de 20C celle du


point d'bullition du solut le plus volatil. Plus la temprature de colonne est basse,
meilleure est la sparation, mais cela risque d'allonger le temps d'analyse.

Le four : la temprature doit tre lgrement suprieure la temprature d'bullition


des composs de manire ce que les composs ne sortent pas trop tt. On peut
travailler en isotherme, cest--dire avec une temprature fixe durant toute l'analyse ou
avec un programme de temprature qui varie.

dtecteurs : Il est galement ncessaire que ces dtecteurs puissent tre ports des
tempratures aussi leves que les colonnes pour viter qu leur contact les vapeurs
se condensent.

Le facteur de capacit dpend de la temprature.

RM : Souvent, on trouve dans un mlange complexe des espces bas et haut point
dbullition. Si la temprature est rgle de manire obtenir une bonne rsolution pour le
compos bas PE, il faudra un temps relativement long pour luer celui haut PE. Au
contraire, si les conditions sont fixes pour le compos haut PE, les espces bas PE
apparatront pour ainsi dire spontanment et leur sparation sera mauvaise. On propose,
alors, une programmation de la temprature rgulirement tout au long du processus de la
sparation.

B-Choix du gaz vecteur

Contrairement lHPLC, le Gaz Vecteur nintervient pas dans le mcanisme de


sparation.
Plus le gaz est pur, plus la dure de vie de la colonne est prolonge et plus la
sensibilit sen trouve augmente.
Pratique : afin de garantir une excellente puret, il est conseill dintercaler des filtres
(piges) entre lalimentation de gaz vecteur et le GC.
Des piges et des filtres doivent tre installs en amont du Chromatographe.
A- type de gaz vecteur ( mobile) en fonction de :
Ses proprits obligatoires : inertie, faible diffusion, puret, peu coteux, compatible
avec le dtecteur
Example: N2, He, H2, Ar/CH4, ...
il est donc ncessaire quil y ait la plus grande diffrence possible entre la conductivit de ce
solut et celle du gaz porteur. A cet effet, on utilise pratiquement toujours lhydrogne
(danger dexplosion) ou lhlium comme gaz vecteur.
B-le vitesse linaire du gaz :

il faut un dbit de gaz dans la colonne stable, reproductible et contrl

Dbit recommand pour le gaz vecteur :

Colonnes remplies 20-60 mL/min

Colonnes capillaires 0.5-2 mL/min

C-Systme(s) dinjection :

Combien injecter ?

Comment injecter ?

A la main ?

autosampler

Gaz : Introduction laide dune chambre ou dune seringue gaz


Liquide : Introduction laide de micro seringues
Solide : Introduction laide de micro seringues aprs dissolution de lchantillon dans un
solvant appropri Volume dInjection.

D-Choix de type de colonne :


Une augmentation de la longueur de la colonne augmente les temps de rtention mais
s'accompagne souvent d'un largissement des pics.

E-Choix de la phase stationnaire :


Le choix de la phase stationnaire conditionne la bonne sparation des constituants .Il faudra la
choisir polaire ou apolaire en fonction de la nature des substances sparer .On distingue :

les phases apolaires sont base dhydrocarbures aliphatiques saturs ou de silicones


(squalane, apiezon,...). dans la phase apolaire la force de dispersion (interaction) joue
un rle primordial, donc la diffrence dans ces forces refltes dans les points
dbullition

les phases polaires sont des polymres possdant des fonctions polaires : polyols,
polyesters, polyamides. dans la phase polaire on trouve linteraction diple-diple en
plus des forces de dispersion

IV .4.2. Couplage

de CPG :

Figure : schma dun appareil de couplage GC-MS


Lidentification de composants dun mlange, ncessit ou non de coupler la
chromatographie avec une mthode spectroscopique ou avec las pectromtrie de masse
(CPG/SM ou GC/MS), contrle de puret, purification de produits (colonnes prparatives),
suivi de raction en continu pour optimiser des paramtres, dosages (quantification)
Les limites de la GC-MS sont celles de la chromatographie en phase gazeuse. Le facteur
limitant tant la volatilit des soluts, cette technique est rserve lanalyse de molcules
aisment vaporisables et thermiquement stables, cest dire, en premire approximation, de
composs de poids molculaire faible moyen. Ces limites admises, la GC-MS est un
formidable outil danalyse. La diversit des modes dinjection et des colonnes capillaires
(gomtrie, nature de la phase stationnaire) autorise la sparation de mlanges extrmement
complexes (huiles essentielles, mtabolites, hydrocarbures). Contrairement aux autres
dtecteurs,
Le spectromtre de masse fournit des informations structurales sur les analytes tudis et peut
permettre leur identification instantane si ceux-ci sont rpertoris dans des bibliothques de
spectres. Le spectromtre de masse permet galement de quantifier les analytes , mme colus, des concentrations infrieures au ng/L. Cest sa capacit dtecter spcifiquement
une ou plusieurs molcules au sein dun chantillon trs complexe qui en fait un dtecteur
idal pour lanalyse de traces en toxicologie, pharmacologie et mdecine, environnement,
ptrochimie, et de synthse organique. Le couplage chromatographie en phasegazeusespectromtrie de masse Stphane Bouchonnet1, Danielle Libong