MARCO ANTONIO MESA GUEVARA

Mg. Bilogo-Microbilogo

Bacterias en forma de bastn o coco bacilar.

Se colorean de color rojo con el Gram.

Crecen bien en los medios de cultivo.

Forman colonias grandes lisas o mucosas.

Son aerobias, facultativas o anaerobias.

Pueden fermentar la glucosa.

Causan la mayora de infecciones.

Su habitad es el hombre, animales, agua.

ESTRUCTURA PARED
Medio externo
Ag O

Membrana

Core

Lpido A

externa
Porinas

Lipopolisacrido
LPS

Proteinas
Lipoproteinas
Peptidoglicano
Membrana
citoplsmica

Espacio
periplsmico
CITOPLASMA

Antgenos O : antgenos somticos

Antgenos H: antgenos flagelares

Antgenos K: antgenos capsulares (Vi)

Antgenos F: antgeno de fimbria

Familia Enterobacteriaceae

Familia Vibrionaceae

Familia Aeromonaceae

Familia Campylobacteriaceae

Familia Helicobacteriaceae

Familia Pseudomonaceae

Familia Pasteurellaceae

Bacilos Gran Negativos Fermentadores Oxidasa Negativo:

BGNFO(-): Enterobacterias

Bacilos Gram Negativos Fermentadores Oxidasa Positivos:

BGNFO(+): Vibrios y Aeromonas

Bacilos Gram Negativos No Fermentadores Oxidasa Positivo:

BGNNFO(+): Pseudomonas, Alcaligenes.

Bacilos Gran m Negativos No ferementadores Oxidasa

Negativo: BGNNFO(-): Stenotrophomonas, Acinetob.

Bacterias Fastidiosas: BGNF.

Bacterias Anaerobios: BGNA.

Medios Selectivos:

Pocos selectivos: EMB, Mac Conkey.

Moderadamente Selectivos: XLD, SS, HecKtoen

Muy Selectivos: BS, BGA.

Cultivar: por agotamiento, para obtener colonias

aisladas

Directa
Area.
Oral.
Contacto.
Sexual.

Indirecta

Agua.

Alimentos

Comidas

Artefactos

Insectos

1- Utilizacin de la Lactosa.
2- Utilizacin de la Glucosa.
3- Produccin de gas de la Glucosa.
4- Descarboxilacin de la Lisina.
5- Produccin de cido sulfrico.
6- Utilizacin del citrato.
7- Produccin de la ureasa.
8- Motilidad.
9- Produccin de Indol

La identificacin final del gnero o de la especie de

la bacteria investigada por mtodo clsica, se hace
comparando las pruebas positivas o negativas con
tablas estndares de reacciones bioqumicas de

entero bacterias.

Usar tablas estndares con resultados positivos o

negativos a los sustratos y tablas con resultados

expresados en porcentajes.

E. coli

Enterobact
er spp.

Serratia
spp

Pantoea
agglomeran
s

Roja

Roja

Incolora

A/Ag

A/Ag

A/A,
A/Ag
K/A,K/Ag

A/A, K/A

LIA

K/K

K/A,
K/K(E.aero
g)

K/K

VP

Negativ
o

Positivo

CITRAT
O

Negativ
o

INDOL

Prueba
s
MC
(Colonia
)

Klebsiella

Citrobacter

pneumoni
ae

oxytoca

frunc

otro

Roja

Roja

Roja
tardia

Roja

A/Ag

A/Ag

A/Ag(K/
A

K/A

K/K

K/K

K/A

Positivo

Positivo

Positivo

negativo

Negativ
o

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

positivo

Positivo

Positivo

Negativo

Negativo

Negativo

negativo

Positivo

negativo

Positivo

ROJO
METILO

Positivo

Negativo

Negativo

Negativo

Negativ
o

positivo

Positivo

Movilida
d

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Negativo

Negativ
o

positivo

Positivo

UREASA

Negativ
o

Negativo

Negativo

Negativo

positiv
o

V(lento)

TSI

A/Ag

K/A

CARACTERISTICAS GENERALES

Bacilos cortos Gram negativos.

No esporulados.

Mtiles (flagelos pertricos) o

no.

Capsulados o no

Presencia de pilis.

BIOQUMICA

Anaerobios facultativos.

Catalasa positiva.

Oxidasa negativa.

Fermentan glucosa y/o lactosa

Reducen nitratos a nitritos.

MEDIOS DE CULTIVO

Medios No Selectivos
Agar Sangre

Medios Selectivos/Diferenciales:
Agar Mc Konkey
Agar EMB
Agar TSI
Mc Konkey: Colonias rosadas (fermentan
lactosa) y colonias transparentes (no
fermentan lactosa).
Agar EMB: Colonias azules (fermentan lactosa)
y colonias transparentes (no fermentan
lactosa).

MEDIOS DE CULTIVO

Medios Altamente Selectivos:

Agar SS
Agar XLD
Agar Hektoen Entrico.

Agar XLD

Agar SS

PRUEBA TSI
Permite determinar las siguientes

pruebas bioqumicas:

Fermentacin de Lactosa

Fermentacin de Glucosa

Formacin de H2S

Formacin de Gas

PRUEBA TSI
Resultados en Superficie inclinada/fondo:
Alcalina/alcalina: Lactosa (-), Glucosa (-)
Pseudomonas

Acida/Acida: Lactosa (+) y Glucosa (+)

E. coli, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter,
etc.

Alcalina/Acida: Lactosa (-) y Glucosa (+)

Salmonella (H2S+), Shigella (H2S -), Yersinia.

PRUEBA TSI
Resultados en Superficie inclinada/fondo:

Produccin de H2S
Produccin de pigmento negro: H2S (+)
No pigmento negro: H2S (-)

Produccin de Gas
Presencia de burbujas: Gas (+)

No burbujas: Gas (-)

OTRAS PRUEBAS BIOQUIMICAS:

Produccin de ureasa

Produccin de indol

Utilizacin del citrato

Motilidad

Descarboxilacin de lisina, arginina,

ornitina

Produccin de fenilalanina
desaminasa

Prueba de la Oxidasa
El reactivo de la oxidasa ms recomendado es la

Esta prueba sirve para determinar la

solucin acuosa al 1% de diclorhidrato de

presencia de enzimas oxidasas.

tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de

Kovacs).

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo

para
Identificar todas las especies de
Neisseria (+)
Diferenciar Pseudomonas de los
miembros oxidasa negativos de las
enterobacterias.

Realizacin de la prueba:
1.Mtodo en placa directa

Agregar directamente 2-3 gotas de

reactivo a algunas colonias. No inundar
toda la placa y no invertirla.
Observar los cambios de color. Con el
reactivo de Kovacs la reaccin se produce
en unos 10-15 segundos.

Prueba del Citrato

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono y
compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del
medio. Entre las enterobacterias estas caractersticas se dan en los siguientes gneros: Enterobacter, Klebsiella,
Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y
Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.
Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio
contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono
y de nitrgeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de
pH. Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn
multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con la
eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte basificacin del
medio que ser aparente por un cambio de color del indicador de pH, de
verde a azul.

Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de
carbono y energa.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente
de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol
es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente
de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del
cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en
presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato
permeasa.

Prueba del Indol

Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la
degradacin del aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa.
Para la realizacin de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona con NaCl al

0,5% (la triptona presenta abundante triptfano). Para la posterior deteccin del indol se usa el reactivo de Kovacs
Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las ms convenientes son Escherichia
coli (indol+) y todas las especies de Klebsiella (indol-).
Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al aadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs, se producir un anillo

de color rojo en la superficie del caldo y la prueba ser considerada positiva. Si esto ocurre despus de 24 horas, la
prueba se considera completa, pero si es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es
conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado sino en una porcin de unos 2ml que se retira de l
aspticamente.

SIM Medio

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un

mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede
ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen
alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a
un pH mayor a 7.2.

Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin
recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de
profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados

Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.

Limitaciones

-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie,

la movilidad puede ser difcil de observar.
-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii,
pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el
color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.

Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar
citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato
de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es
cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de
bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de
cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como
nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la
consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato
permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino,
da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la produccin de citrato permeasa.

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar
en superficie un inculo ligero , usando una ansa sin
arrastrar el agar.

Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4
das de incubacin.

Resultados

-Positivo: crecimiento y color azul en el pico,

alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde
debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay
cambio de color

Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarilloamarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un
resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de
inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia
orgnica puede originar resultados falsos positivos.

Caractersticas del medio

Medio preparado: verde.