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Este informe fue elaborado por ICON-INSTITUT GmbH Private Sector, para el
Proyecto Asistencia Tcnica para los Planes Operativos Sectoriales (POS)
EuropeAid/124050/D/SER/PE, dentro del contrato N 042-2007-LIR2/UE-PERU
NDICE
1. Introduccin ................................................................................................................ 3
2. Actividades realizadas ................................................................................................ 5
2.1 Reunin de anlisis de los protocolos del Laboratorio de Cultivos Marinos ....... 5
2.2 Primera sesin terica ........................................................................................... 5
2.2.1 Sesiones prcticas .......................................................................................... 5
2.3 Segunda sesin terica .......................................................................................... 6
2.3.1 Sesines prcticas .......................................................................................... 6
2.4 Sesiones de revisin de literatura selecta .............................................................. 6
3. Diagnstico ................................................................................................................. 7
4. Trabajo efectuado........................................................................................................ 8
5. Resultados ................................................................................................................... 9
6. Instalaciones y servicios ............................................................................................. 9
7. Metodologas............................................................................................................. 16
8. Conclusiones Sugerencias y/o recomendaciones ...................................................... 16
9. Anexos ...................................................................................................................... 18
9.1.............................................................................................................................. 18
Presentacin CONTROL DE LA REPRODUCCIN: OVOGNESIS Y
ESPERMATOGENESIS .......................................................................................... 18
9.2.............................................................................................................................. 18
Presentacin CONTROL DE LA DETERMINACIN Y LA DIFERENCIACIN
SEXUAL EN PECES ............................................................................................... 18
9.3.............................................................................................................................. 18
REVISIN DE PUBLICACIONES SELECTAS .................................................... 18
9.3.1....................................................................................................................... 18
Presentacin 1. Lahnsteiner F., Urbanyi B., Horvath A y Weismann. 2001. Biomarkers for egg quality determination in cyprinid fish. Aquaculture. 195:331-352.
............................................................................................................................... 18
9.3.2....................................................................................................................... 18
Presentacin 2. Nigel F.R., Ostby C.G., Norberg B. And Jorgen F H. 2002. In
vivo oocyte hydration in Atlantic halibut (Hippoglosus hippoglosus); proteolytic
liberation of free amino acids, and ion transport, are driving forces for osmotic
water influx. J. Exp. Biol. 205:211-224. ............................................................... 18
9.3.3....................................................................................................................... 18
Presentacin 3. Yamamoto E. 1999. Studies on sex-manipulation and production
of cloned populations in hirame, Paralichthys olivaceus (Temminck et Schlegel).
Aquaculture. 173:235-246. ................................................................................... 18
9.4.............................................................................................................................. 18
Protocolo para la preparacin de implantes hormonales de liberacin prolongada.. 18
9.5.............................................................................................................................. 18
Protocolo y prctica de laboratorio Cuantificacin de estradiol con la tcnica
ELISA ....................................................................................................................... 18
1. Introduccin
El cultivo de los peces planos a escala mundial esta dominado por unas cuantas especies, sin
lugar a dudas, la especie que ms destaca por el esfuerzo de investigacin y por el desarrollo
de su cultivo, es el lenguado japons (Paralichthys olivaceus). Desde 1965, despus de un
periodo de investigacin y domesticacin de reproductores silvestres, se han logrado obtener
desoves en cautiverio en la Universidad de Kinki, Japn. Alrededor de 1980, se estableci la
produccin de alevines y actualmente se cultivan alrededor de 7000 toneladas. El desarrollo
del cultivo del lenguado japons tiene una historia de casi cinco dcadas, durante las cuales se
han refinado los protocolos de reproduccin, cultivo larvario y engorda a nivel comercial.
Recientemente, Yamamoto (1999), puso a disposicin de la comunidad acadmica
internacional algunos de los resultados de las investigaciones relativas al control de la
reproduccin durante las etapas tempranas del desarrollo. Estas experiencias tenan como
objetivo mejorar el crecimiento del lenguado japons en los cultivos comerciales, dado que se
tena el conocimiento que las hembras de esta especie alcanzaban una mayor longitud y peso
que los machos en un periodo de tiempo equivalente.
Siguiendo la experiencia del desarrollo del cultivo del lenguado japons, en la costa noreste del
continente americano se han investigado principalmente al lenguado de verano, P. dentatus y
el lenguado del sur, P. lethostigma y en la costa noroeste el lenguado de California, P.
californicus. El inters por el estudio de los peces planos es motivado por diferentes factores,
entre los que destacan el estatus de sus pesqueras y el valor comercial de estas especies, que
por la calidad de su carne, alcanzan precios superiores a los de muchas otras especies de peces
marinos.
Cabe destacar aqu que desde el punto de vista pesquero, se ha estimado que desde el ao
2005, alrededor de un cuarto de los stocks pesqueros monitoreados por la FAO estuvieron
subexplotados o moderadamente explotados y podran producir ms, mientras que
aproximadamente la mitad de los stocks estaban totalmente explotados y por lo tanto producan
capturas que eran o estaban cercanas al lmite mximo sostenible, sin posibilidad de expansin
futura. El resto de los stocks (25%), se encontraban sobreexplotados, agotados o en proceso de
recuperacin del agotamiento, por lo que su rendimiento se encontraba por debajo de su
mximo potencial (FAO, 2006).
De la informacin precedente se puede concluir que para el desarrollo exitoso del cultivo de un
pez marino, un requisito indispensable es conocer su biologa reproductiva, a partir de este
conocimiento, la reproduccin en cautiverio es un hecho predecible y reproducible, que
asegura el desarrollo posterior de las diferentes etapas del cultivo: produccin de juveniles
(dominio del cultivo larvario) y la engorda a nivel comercial.
2. Actividades realizadas
2.1 Reunin de anlisis de los protocolos del Laboratorio de Cultivos Marinos
Con el propsito de diagnosticar el nivel de conocimientos relacionados con la reproduccin de
peces y de conocer los protocolos que el grupo de investigadores aplica actualmente en el
Laboratorio de Cultivos Marinos del IMARPE, se llev a cabo una entrevista con la Maestra
Rosario Cisneros y con la Ing. Lili Carrera. Tambin se realiz un recorrido por la sala de
reproduccin (actualmente en proceso de instalacin) y por el Laboratorio de Cultivos
Marinos, con la finalidad de evaluar su capacidad instrumental. Cabe destacar que el suscrito
consultor, Dr. Benjamin Barn Sevilla, ha venido colaborando con el Laboratorio de Biologa
Experimental Felipe Ancieta Caldern, del Instituto del Mar del Per (IMARPE), por
lo que tiene un conocimiento previo del equipo con que cuentan este y otros laboratorios, a
partir de este conocimiento se prepararon algunas de las prcticas que se realizaron durante la
consultora.
Se analizaron los principios del anlisis ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), para
cuantificar la concentracin de esteroides sexuales en plasma, particularmente se hizo
referencia a la cuantificacin de estradiol.
Nigel F.R., Ostby C.G., Norberg B. And Jorgen F H. 2002. In vivo oocyte hydration in
Atlantic halibut (Hippoglosus hippoglosus); proteolytic liberation of free amino acids, and ion
transport, are driving forces for osmotic water influx. J. Exp. Biol. 205:211-224.
3. Diagnstico
Como producto de la entrevista con las investigadoras responsables de las actividades del
Laboratorio de Cultivos Marinos me pude percatar de que los conocimientos en torno a la
reproduccin de peces y particularmente de los peces marinos, son limitados. Considerando
que el estado del conocimiento de las especies con las que este grupo de investigadores esta
trabajando, es muy escasa, es muy importante hacer un balance entre el grado de desarrollo
emprico de sus cultivos (FONDEPES, laboratorio de Morro Sama, IMARPE y empresas
privadas como Pacific Deep Frozen S. A.) y las necesidades y problemas detectados, con el fin
de orientar los futuros experimentos y la generacin de conocimiento. Es evidente que uno de
los quehaceres inmediatos est relacionado con la reproduccin, pero tambin es evidente que
los factores que la afectan son mltiples, por lo que ser necesario establecer prioridades. Tal
como se coment en las entrevistas con el grupo de trabajo, la evidencia circunstancial apunta
hacia problemas de nutricin en los reproductores, en el refinamiento de los protocolos de
control de la maduracin y del manejo de los desoves. Con una visin de mediano plazo, y
partiendo del conocimiento que se tiene de la diferencia en el crecimiento entre los sexos para
las especies del gnero Paralichthys, ser deseable iniciar los estudios encaminados al control
del sexo, ya sea por medio de la temperatura, esteroides sexuales o mediante el control
cromosmico (ginognesis).
Con el propsito de que los resultados de las investigaciones que emprender el grupo de
trabajo tengan un valor cientfico y atendiendo a la premisa sealada arriba, al respecto de la
identificacin de problemas relevantes, en todo momento y con el propsito de orientar los
esfuerzos, se debern formular hiptesis cientficas, adoptando un enfoque experimental que
tenga como base el mtodo cientfico y se deber incorporar la metodologa estadstica
adecuada para la interpretacin objetiva de los resultados.
Se realiz una revisin del sistema de filtracin y del depsito de agua de mar que abastece al
Laboratorio de Cultivos Marinos, se emitieron recomendaciones generales para su mejora.
4. Trabajo efectuado
La consultora se dividi en tres etapas, la primera requiri de treinta das, durante los cuales se
prepararon los materiales necesarios para la segunda etapa. Durante la segunda etapa, de 14
das, se impartieron un total de 40 horas de clases tericas relacionadas con la fisiologa del
sexo y sobre los mtodos de control y tcnicas para evaluar diferentes aspectos de la
sexualidad de los peces. Se dedicaron un total aproximado de 20 horas de
practica en
5. Resultados
Antes de iniciar los trabajos de la consultora, el grupo de investigadores y asistentes (cuatro
Invesigadores y tres Practicantes) tenian un nivel de conocimientos de los diferentes aspectos
de la reproduccin de peces del Laboratorio de Cultivos Marinos muy heterogeneo, desde
algunas nociones, hasta conocimientos profundos en algunos aspectos particulares de la
reproduccin. Como resultado de la consultora, el grupo adquiri una vision integral y
profunda de los diferentes aspectos de la fisiologa de la reproduccin, de la histologa de las
gnadas, as como de algunas tcnicas fundamentales para el estudio de la reproduccin y para
el control de la reproduccin. Con esta visin, el grupo podr orientar sus esfuerzos de
investigacin hacia la solucin de problemas especficos de la reproduccin del lenguado
peruano y tambien podr abordar el estudio de otras especies marinas y dulcacucolas. Los
conocimientos adquiridos tambien les permitir abordar la literatura especializada con mayor
facilidad. Como parte de esta consultora, se entreg una gran cantidad de literatura
especializada, as como una coleccin de publicaciones relacionadas con la acuicultura.
6. Instalaciones y servicios
Con las prcticas desarrolladas durante la consultora, ahora se tiene una mejor idea del equipo
disponible en la institucin y de las capacidades y posibilidades para el desarrollo de los
trabajos de investigacin que se debern llevar a cabo para generar el conocimiento necesario
pare el desarrollo de los protocolos exitosos y reproducibles, que aseguren la reproduccin de
los peces marinos.
Como resultado de la revisin, anlisis y discusin de los diferentes aspectos de los equipos y
del diseo de la sala de reproductores, el grupo de investigadores tiene una mejor comprensin
de la operacin y de las capacidades del sistema.
El volumen mximo de agua de mar que contiene el sistema de cultivo es de 7500 l, por lo que
en el intervalo de operacin de la motobomba Iwaki PM28 y en el intervalo de presiones
comprendidas entre el inicio de operaciones del filtro (sin colonizar, 5.5 psi) y la carga mxima
(10 psi), el nmero de veces que se recambiar el agua de cada tanque es de 17 a 20 veces.
Esta tasa de recambio es suficiente para eliminar los slidos suspendidos y los desechos
nitrogenados que se producirn como consecuencia de la alimentacin y el metabolismo de los
reproductores de lenguado que se confinarn en los tanques.
La capacidad mxima de retencin de los filtros es del 100 % del material particulado con un
dimetro mayor a 50 m y del 48% de las partculas en el intervalo de 5 a 10 m en cada paso
a travs del filtro. Considerando que el volumen total de cada tanque circular a travs del
filtro entre 17 y 20 veces diariamente, la cantidad de partculas superiores a 5 micras sern
removidas en forma eficiente y oportuna. Cabe aclarar que aquellas partculas con un dimetro
inferior a 5 m, as como las sustancias disueltas, sern eliminadas por el fraccionador de
espuma, no obstante, si en el futuro se presentaran este tipo de sustancias en los estanque de
cultivo, ser necesario incrementar la capacidad de estos dispositivos.
10
11
4a
4
4b
2
4c
QuickTime and a
decompressor
are needed to see this picture.
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Los volmenes de aire recomendados por el fabricante se calculan con la siguiente ecuacin:
En la tabla 1 se resumen los volmenes de ire requeridos para retrolavar el filtro con diferentes
frecuencias. Cabe destacar que de acuerdo con el fabricante del filtro DF-3, cuando el filtro se
opera al mximo de su capacidad de carga (estimada en 1.5 kg de alimento por da), se
recomienda realizar 12 retrolavados por da.
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Frecuencia
retrolavado
del Intervalo
retrolavado (Horas)
SCFH
LPM
0.25
96
0.0469
0.022
0.29
84
0.0536
0.025
0.33
72
0.0625
0.029
0.40
60
0.0750
0.035
0.50
48
0.0938
0.044
0.67
36
0.1250
0.059
24
0.1875
0.088
12
0.3750
0.177
0.5625
0.265
0.7500
0.354
1.1250
0.531
1.5000
0.708
12
2.2500
1.062
24
4.5000
2.124
(por da)
Cuando el sistema se opera con una tasa de recirculacin muy baja (utilizacin del circuito
corto, compuesto por las tuberas 1, 2, 6 y 8 y resaltado en color rojo en la figura 2), producto
de la apertura total o parcial de la vlvula a (Fig 1, letra a), es posible que ingrese aire a la
motobomba por la tee X (Figura 1, letra X), este aire se conducir a travs de los tubos 4a, 4b,
4c y 3, solo cuando uno o todos los tubos difusores de agua que se encuentran en los estanques,
quede expuesto al aire. En esta condicin (vlvula a abierta), el vaco que genera la
motobomba puede ser suficiente para succionar agua de los tanques, a travs de la tubera 5 y
aire a travs de cualquiera de las tuberas 4 (Figura 1, 4a, 4b y 4c).
14
QuickTime and a
decompressor
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15
7. Metodologas
Control ambiental de la maduracin sexual (vitelogenesis)
Cuantificacin de la densidad espermtica
Cuantificacin de la motilidad espermtica
Cuantificacin de la presin osmtica del fluido seminal
Control hormonal de la maduracin final y del desove
Peparacin de implantes de liberacin prolongada para la aplicacin de terapias hormonales
para el control de la maduacin final y el desove.
Cuantificacin de estradiol por medio de un kit elisa (Neogen #402110)
Control hormonal de la diferenciacin sexual
Control cromosmico de la proporcin sexual
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Es importante destacar que para asegurar un avance sin contratiempos ni repeticiones, el grupo
deber realizar un diagnostico preciso del estado del conocimiento de la reproduccin de las
especies objetivo (lenguado, cabrilla, cojinoba, etc), entonces deber formular preguntas
relevantes que conduzcan al desarrollo de protocolos adecuados para la reproduccin en
cautiverio.
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9. Anexos
Presentacin CONTROL DE LA REPRODUCCIN: OVOGNESIS Y
ESPERMATOGENESIS
9.2
Presentacin CONTROL DE LA DETERMINACIN Y LA
DIFERENCIACIN SEXUAL EN PECES
9.3
REVISIN DE PUBLICACIONES SELECTAS
9.3.1 Presentacin 1. Lahnsteiner F., Urbanyi B., Horvath A y Weismann. 2001. Biomarkers for egg quality determination in cyprinid fish. Aquaculture. 195:331352.
9.3.2 Presentacin 2. Nigel F.R., Ostby C.G., Norberg B. And Jorgen F H. 2002. In
vivo oocyte hydration in Atlantic halibut (Hippoglosus hippoglosus); proteolytic
liberation of free amino acids, and ion transport, are driving forces for osmotic
water influx. J. Exp. Biol. 205:211-224.
9.3.3 Presentacin 3. Yamamoto E. 1999. Studies on sex-manipulation and production
of cloned populations in hirame, Paralichthys olivaceus (Temminck et Schlegel).
Aquaculture. 173:235-246.
9.4
Protocolo para la preparacin de implantes hormonales de liberacin prolongada
9.5
Protocolo y prctica de laboratorio Cuantificacin de estradiol con la tcnica
ELISA
9.1
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