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II.
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Laboratorio de Anlisis por Instrumentacin 2 2
ESPECTROFOTOMETRIA
Los espectros de absorcin en el ultravioleta y en el visible son de gran utilidad en el conocimiento de la
estructura de compuestos orgnicos.
B. ANALISIS CUANTITATIVO
El anlisis de una sustancia absorbente puede llevarse a cabo directamente a travs de la ley de Beer, si no
hay otro material absorbente que interfiera o si el material que interfiere puede eliminarse o corregirse en el
resultado.
En muchos casos, las sustancias de absorcin despreciable pueden ser espectrofotomtricamente
determinadas siguiendo la adicin de un reactivo que produzca un complejo absorbente o uno cromforo.
Para efectuar el anlisis cuantitativo se sigue los siguientes pasos:
1. Obtencin de la max a partir de la grfica de Absorbancia vs. Longitud de onda (nm).
2. Obtencin del rango ptimo de concentracin (curva de RINGBOOM). Para ello preparamos una serie de
soluciones de concentraciones conocidas del analito, desde una bastante diluida hasta una bastante
concentrada, y graficando 100-%T vs. Logaritmo de la concentracin. Si se incluye un rango conveniente,
resulta siempre una curva en forma de S, conocida como grafica o curva de RINGBOOM. La curva
generalmente tiene una regin considerable en donde es casi recta. La extensin de esta porcin recta
indica directamente el rango ptimo de concentracin para un anlisis fotomtrico particular.
3. Obtencin de la curva de trabajo o curva patrn. Se prepara una serie de concentraciones del analito, los
cuales debern encontrarse dentro del rango ptimo de concentracin. Finalmente se grafica la
Absorbancia vs. Concentracin.
4. Preparacin de la solucin muestra, determine su absorbancia y se calcula su concentracin usando
grfico de patrones.
C. DETERMINACION SIMULTANEA DE DOS O MAS COMPONENTES
ADICION DE ABSORBANCIA: Cada especie absorbe como si las otras no estuvieran presentes, por tanto:
A t = Ai=b Ci
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III.
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ESPECTROFOTOMETRIA
ESPECIFICACIONES
Ancho ranura espectral
8 nm
Sistema optico
Rejilla de difraccin
1200 lneas/nm
Longitud de onda
Rango
Exactitud
325 a 1100 nm
2.0 nm
Pantalla
Fotomtrico:
Rango
Corrimiento
0 a 125%T
-0.1 a 2.5 A
0 a 1999 C
0.003 A desde 0.0 a 0.3 A 3
1.0% desde 0.301 A a 2.5 A
0.001 A a 0 A
.002 A a 2 A
0.003 A/hora
Vida de la lmpara
Interfaces estndar
RS-232C y Centronica
Exactitud
Ruido (a 500 nm)
Lenguajes
Pantalla
Salida a impresora
Manual del operador
Requisitos elctricos
IV.
GENESYSTM 20
N de catlogo 4001
Dimensiones
Peso
TABLA DE RESULTADOS
4
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ESPECTROFOTOMETRIA
A. CALIBRACION DE ESPECTROFOTOMETRO
A vs.
0.4
0.3
0.2
0.1
0
440
460
480
500
520
540
%T vs.
80.00
60.00
40.00
20.00
0.00
440
460
480
500
520
540
560
560
5
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ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.
0.8
0.6
0.4
0.2
0
390
410
430
450
470
490
1.
K2Cr2O7
A vs.C
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
6
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ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.C
0.02
f(x) = 0.04x - 0
R = 1
0.02
0.01
0.01
0
0.1
0.2
0.3
2.
0.4
0.5
0.6
0.7
520
540
560
KMnO7
A vs.
0.4
0.3
0.2
0.1
0
440
460
480
500
7
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ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.C
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0.05
0.07
0.09
0.11
0.13
0.15
0.17
0.19
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ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.C
0.03
0.02
f(x) = 0.13x - 0
R = 0.99
0.02
0.01
0.01
0
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0.2
MEZCLA:
Mezcla
K2Cr2O7
KMnO7
V(mL)
15
2
C (mM)
0.3
0.12
C(mM/50 mL)
0.09
0.0048
ECUACIONES:
A = 440 nm: 0.046 = 0.4243CDICR + 0.1343CPERMn
A = 530 nm: 0.071= 0.0374CDICR + 2.5076CPERMn
A ( =440)
A (= 530)
0.046
0.071
( =440)
0.4243
0.1343
( =530)
0.0374
2.5076
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ESPECTROFOTOMETRIA
CDICR = 0.0999 mM
CPERMn = 0.0268 mM
C. DETERMINACION CUANTITATIVA DE MANGANESO EN ACEROS, POR ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
440
460
480
500
520
540
560
D.
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ESPECTROFOTOMETRIA
A vs.
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
0
0
0
390
410
430
450
470
490
510
530
1.
En H2O:
A vs.
0.04
0.03
0.03
0.02
0.02
0.01
0.01
0
440
2.
HCl:
460
480
500
520
540
560
580
EN
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V.
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Fig.
2.
Fig. 3.
Fig.2. Soluciones preparadas de K 2Cr2O7, donde se tomaron datos de absorbancia de 400 a 490 nm. Fig.3.
Soluciones preparadas de KMnO4, donde se tomaron datos de absorbancia de 450 a 550 nm.
Fig. 4.
Fig. 5.
D.
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Fig. 7.
de
Fig. 8.
Fig. 9.
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ESPECTROFOTOMETRIA
En espectroscopia visible se utiliz a diferencia del ultravioleta el equipo emplea una lmpara de haz simple,
no emplea un software en el anlisis, cuenta con un solo compartimento de muestra por lo que el blanco no
que da fijo en la porta muestra. Las celdas empleadas en este mtodo son hechas de vidrio a diferencia de
las hechas en silicio para las cubetas del espectrofotmetro ultravioleta.
Finalmente lo resaltante es el tipo de muestra. En la espectroscopia visible podemos realizar mediciones de
absorbancia y transmitancia tanto para sustancias coloreadas como para sustancias no coloreadas con ayuda
de compuestos que cuenten en su estructura con grupos cromforos.
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como oxidante fuerte y otro formando complejo con el hierro. Finalmente el peryodato de potasio al reaccionar
con la muestra se evidencio una solucin de color violeta con la cual se prepararon patrones de mediciones
de absorbancia.
VIII.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
1. Al igual que la espectroscopia ultravioleta la espectrofotometra en el rango del visible puede realizar
anlisis cualitativos y determinaciones cuantitativas.
2. La espectrofotometra emplea en el equipo una lmpara de haz simple como fuente de energa radiante.
3. Su tcnica consta en el equipo cuenta con un solo compartimento lo cual no mantiene fijo el blanco antes
de tomar lecturas de absorbancia o trasmitancia.
4. Se utilizaron sustancias como el peryodato de potasio quien otorgo color debido una reaccin con las
muestras patrn y problema antes de la toma de medidas.
5. Se recomienda que antes de cualquier lectura de absorbancia se debe realizar la calibracin, ya que se
recuerda que el equipo cuenta con un solo compartimento.
6. El llenado de las cubetas no debe exceder los del volumen de estas.
7. Antes de cualquier lectura de equipo las cunetas de vidrio deben estar kimpias.
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IX. BIBLIOGRAFIA
1. SKOOG D., HOLLER J., NIEMAN, T. (2001). PRINCIPIOS DE ANALISIS INSTRUMENTAL. Espaa: Mc
Graw Hill.
2. Divisin Analtica GII. (17/01/01). IZASA LAB. LA REVISTA ANALITICA DE IZASA, 2/01, 12. 12/06/15, De
www.izasa.es Base de datos.
3. Mercers Row. (2005). Espectrofotometro GENESYS 20. 01/2005, de Thermo Spectronic Sitio web:
http://quimica.izt.uam.mx/mexperimental/documentos/Spectronic20GenesysSpn.pdf.