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Laboratorio de Anlisis por Instrumentacin 2 1


ESPECTROFOTOMETRIA
I.

FUNDAMENTO DE LA TECNICA DE ANALISIS


El color aparente de la solucin es siempre el complemento del color absorbido. De modo que una solucin
que absorba en la regin del azul, aparecer como amarillo, la que absorbe en el verde aparecer como
morada, etc.
La importancia de las soluciones coloreadas descansa en el hecho de que la radiacin absorbida es
caracterstica del material que efecta la absorcin.
Es posible determinar una sustancia que sea incolora o muy poco coloreada al agregar un reactivo que la
convierta en un compuesto intensamente coloreado.
El trmino generalmente empleado en los anlisis qumicos, basado en la medida de la absorcin de la
radiacin es el de absorbancia. El trmino colorimetra debe aplicarse solamente en relacin a la regin del
espectro Visible. La espectrofotometra es una divisin de la absorbancia que se refiere especficamente al
uso del espectrofotmetro.

II.

DESCRIPCION DEL METODO DE ANALISIS


A. ANALISIS CUALITATIVO

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ESPECTROFOTOMETRIA
Los espectros de absorcin en el ultravioleta y en el visible son de gran utilidad en el conocimiento de la
estructura de compuestos orgnicos.
B. ANALISIS CUANTITATIVO
El anlisis de una sustancia absorbente puede llevarse a cabo directamente a travs de la ley de Beer, si no
hay otro material absorbente que interfiera o si el material que interfiere puede eliminarse o corregirse en el
resultado.
En muchos casos, las sustancias de absorcin despreciable pueden ser espectrofotomtricamente
determinadas siguiendo la adicin de un reactivo que produzca un complejo absorbente o uno cromforo.
Para efectuar el anlisis cuantitativo se sigue los siguientes pasos:
1. Obtencin de la max a partir de la grfica de Absorbancia vs. Longitud de onda (nm).
2. Obtencin del rango ptimo de concentracin (curva de RINGBOOM). Para ello preparamos una serie de
soluciones de concentraciones conocidas del analito, desde una bastante diluida hasta una bastante
concentrada, y graficando 100-%T vs. Logaritmo de la concentracin. Si se incluye un rango conveniente,
resulta siempre una curva en forma de S, conocida como grafica o curva de RINGBOOM. La curva
generalmente tiene una regin considerable en donde es casi recta. La extensin de esta porcin recta
indica directamente el rango ptimo de concentracin para un anlisis fotomtrico particular.
3. Obtencin de la curva de trabajo o curva patrn. Se prepara una serie de concentraciones del analito, los
cuales debern encontrarse dentro del rango ptimo de concentracin. Finalmente se grafica la
Absorbancia vs. Concentracin.
4. Preparacin de la solucin muestra, determine su absorbancia y se calcula su concentracin usando
grfico de patrones.
C. DETERMINACION SIMULTANEA DE DOS O MAS COMPONENTES
ADICION DE ABSORBANCIA: Cada especie absorbe como si las otras no estuvieran presentes, por tanto:

A t = Ai=b Ci
i

III.

DESCRIPCION DEL INSTRUMENTO EMPLEADO


ESPECTROFOTOMETRO SPECTRONIC 20 GENESYS

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ESPECTROFOTOMETRIA
ESPECIFICACIONES
Ancho ranura espectral

8 nm

Sistema optico

Rejilla de difraccin
1200 lneas/nm

Longitud de onda
Rango
Exactitud

325 a 1100 nm
2.0 nm

Pantalla

Cristal lquido, 20-caracteres, 2 lneas

Fotomtrico:
Rango

Corrimiento

0 a 125%T
-0.1 a 2.5 A
0 a 1999 C
0.003 A desde 0.0 a 0.3 A 3
1.0% desde 0.301 A a 2.5 A
0.001 A a 0 A
.002 A a 2 A
0.003 A/hora

Energa parasita radiante

0.1% T a 340 nm y 400 nm

Vida de la lmpara

Aproximadamente 1000 horas

Interfaces estndar

RS-232C y Centronica

Exactitud
Ruido (a 500 nm)

Lenguajes
Pantalla
Salida a impresora
Manual del operador

Requisitos elctricos

IV.

GENESYSTM 20
N de catlogo 4001

Seleccionable (Ingls, Espaol, Francs,


Alemn, Portugus, o Checo)
Seleccionable (Ingls, Espaol, Francs,
Alemn, Portugus, o Checo)
Ingls, Espaol, Francs, Alemn,
incluido
100 - 240 Volts 10%
50 60 Hz 10%

Dimensiones

30 cm (12) 33 cm (13) P x 19 cm (7) A

Peso

4.5 kg (10 lbs)

TABLA DE RESULTADOS

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ESPECTROFOTOMETRIA
A. CALIBRACION DE ESPECTROFOTOMETRO

A vs.
0.4
0.3
0.2
0.1
0
440

460

480

500

520

540

%T vs.
80.00
60.00
40.00
20.00
0.00
440

460

480

500

520

540

560

B. DETERMINACION SIMULTANEA DE COMPUESTOS POR ESPECTROFOTOMETRIA

560

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A vs.
0.8
0.6
0.4
0.2
0
390

410

430

450

470

490

1.

K2Cr2O7

A vs.C
0.2
0.15

f(x) = 0.42x - 0.06


R = 0.92

0.1
0.05
0
0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

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A vs.C
0.02
f(x) = 0.04x - 0
R = 1

0.02
0.01
0.01
0
0.1

0.2

0.3

2.

0.4

0.5

0.6

0.7

520

540

560

KMnO7

A vs.
0.4
0.3
0.2
0.1
0
440

460

480

500

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A vs.C
0.5
0.4
0.3

f(x) = 2.51x + 0.01


R = 0.92

0.2
0.1
0
0.05

0.07

0.09

0.11

0.13

0.15

0.17

0.19

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ESPECTROFOTOMETRIA

A vs.C
0.03
0.02

f(x) = 0.13x - 0
R = 0.99

0.02
0.01
0.01
0
0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0.14

0.16

0.18

0.2

MEZCLA:
Mezcla
K2Cr2O7
KMnO7

V(mL)
15
2

C (mM)
0.3
0.12

C(mM/50 mL)
0.09
0.0048

ECUACIONES:
A = 440 nm: 0.046 = 0.4243CDICR + 0.1343CPERMn
A = 530 nm: 0.071= 0.0374CDICR + 2.5076CPERMn

A ( =440)

A (= 530)

0.046

0.071

( =440)
0.4243
0.1343

( =530)
0.0374
2.5076

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CDICR = 0.0999 mM
CPERMn = 0.0268 mM
C. DETERMINACION CUANTITATIVA DE MANGANESO EN ACEROS, POR ESPECTROFOTOMETRIA

A vs.
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
440

460

480

500

520

540

560

D.

DETERMINACION DEL ESPECTRO DEL COLORANTE DEL MAIZ MORADO

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ESPECTROFOTOMETRIA

A vs.
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
0
0
0
390

410

430

450

470

490

510

530

1.

En H2O:

A vs.
0.04
0.03
0.03
0.02
0.02
0.01
0.01
0
440

2.
HCl:

460

480

500

520

540

560

580

EN

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V.

GRAFICOS DE LOS EXPERIMENTOS


A. CALIBRACIN DEL ESPECTROFOTMETRO: SPECTRONIC 20 GENESYS CON CoCl2 EN HCl AL 1%.

Fig. 1. Imagen del espectrofotmetro empleado en la calibracin con CoCl 2 en HCl


al 1% con el cual se realizaron las lecturas de absorbancia de los patrones y
muestras problema.

B. DETERMINACIN SIMULTNEA DE COMPUESTOS POR ESPECTROSCOPIA

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ESPECTROFOTOMETRIA

Fig.

2.

Fig. 3.
Fig.2. Soluciones preparadas de K 2Cr2O7, donde se tomaron datos de absorbancia de 400 a 490 nm. Fig.3.
Soluciones preparadas de KMnO4, donde se tomaron datos de absorbancia de 450 a 550 nm.

C. DETERMINACIN CUANTITATIVA DE MANGANESO EN ACEROS, POR ESPECTROFOTOMETRA

Fig. 4.

Fig. 5.

Fig. 4. Muestras para ser atacadas 4 de sal de Mohr y 3 de


acero. Fig.5. Ataque de muestras con mezcla de cidos y
luego con peryodato de potasio. Fig. 6. Muestras despus
del ataque son envasadas y enrasadas.

D.

DETERMINACIN DEL ESPECTRO DEL COLORANTE


DEL MAZ MORADO

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ESPECTROFOTOMETRIA

Fig. 7.

de

Fig. 8.

Fig.7. Extraccin de antocianinas a partir de coronta de maz morado.


Fig.8. Preparacin de muestra concentrada de antocianinas. A partir
esta se prepararon dos soluciones en H2O y HCl, las cuales se
realizaron las respectivas medidas de absorbancia. Fig. 9. De manera
adicional se prepar una solucin de mezcla de K2Cr2O4 y KMnO4.

Fig. 9.

VI. DISCUSION DEL METODO EMPLEADO


EL mtodo de anlisis en espectroscopia visible es similar en espectroscopia ultravioleta, ya que tanto las dos
tcnicas realizan anlisis cualitativos y cuantitativos de muestras problema. Sus diferencias radican en el tipo
de energa radiante y el rango de longitud de onda que a cada una le corresponde.

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En espectroscopia visible se utiliz a diferencia del ultravioleta el equipo emplea una lmpara de haz simple,
no emplea un software en el anlisis, cuenta con un solo compartimento de muestra por lo que el blanco no
que da fijo en la porta muestra. Las celdas empleadas en este mtodo son hechas de vidrio a diferencia de
las hechas en silicio para las cubetas del espectrofotmetro ultravioleta.
Finalmente lo resaltante es el tipo de muestra. En la espectroscopia visible podemos realizar mediciones de
absorbancia y transmitancia tanto para sustancias coloreadas como para sustancias no coloreadas con ayuda
de compuestos que cuenten en su estructura con grupos cromforos.

VII. DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS


En el caso de la determinacin simultnea de compuestos se observ que tanto para el dicromato de potasio
y el permanganato de potasio no son linealmente dependientes con la concentracin en la longitud de onda
mxima obtenida luego de graficar A vs. . Se observa dependencia lineal en mayor rango estadstico cuando
se hacen las lecturas de absorbancia a un valor intercambiado de longitud de onda.
En la determinacin de Mn de muestras de acero se determin cantidad de manganeso presente en poca
proporcin en la muestra analizada. Cabe mencionar que esto radico desde el ataque de muestra y la
preparacin de las soluciones patrn. Esto se debi a la mezcla de cidos cuyos componentes sirvieron uno

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como oxidante fuerte y otro formando complejo con el hierro. Finalmente el peryodato de potasio al reaccionar
con la muestra se evidencio una solucin de color violeta con la cual se prepararon patrones de mediciones
de absorbancia.

VIII.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

1. Al igual que la espectroscopia ultravioleta la espectrofotometra en el rango del visible puede realizar
anlisis cualitativos y determinaciones cuantitativas.
2. La espectrofotometra emplea en el equipo una lmpara de haz simple como fuente de energa radiante.
3. Su tcnica consta en el equipo cuenta con un solo compartimento lo cual no mantiene fijo el blanco antes
de tomar lecturas de absorbancia o trasmitancia.
4. Se utilizaron sustancias como el peryodato de potasio quien otorgo color debido una reaccin con las
muestras patrn y problema antes de la toma de medidas.
5. Se recomienda que antes de cualquier lectura de absorbancia se debe realizar la calibracin, ya que se
recuerda que el equipo cuenta con un solo compartimento.
6. El llenado de las cubetas no debe exceder los del volumen de estas.
7. Antes de cualquier lectura de equipo las cunetas de vidrio deben estar kimpias.

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IX. BIBLIOGRAFIA
1. SKOOG D., HOLLER J., NIEMAN, T. (2001). PRINCIPIOS DE ANALISIS INSTRUMENTAL. Espaa: Mc
Graw Hill.
2. Divisin Analtica GII. (17/01/01). IZASA LAB. LA REVISTA ANALITICA DE IZASA, 2/01, 12. 12/06/15, De
www.izasa.es Base de datos.
3. Mercers Row. (2005). Espectrofotometro GENESYS 20. 01/2005, de Thermo Spectronic Sitio web:
http://quimica.izt.uam.mx/mexperimental/documentos/Spectronic20GenesysSpn.pdf.

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