Ao de la Diversificacin

Productiva y del Fortalecimiento de

la Educacin

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD
DE
INGENIERA
AGROINDUST
INGENIERA
RIAL
INFORME DE LABORATORIO
N 01

FOTOCOLORIMETRA
CURSO: Bioqumica.
DOCENTE:

Blga.

Carmen

Yzsiga

Barrera.
CICLO: III.
GRUPO: B.
INTEGRANTES:
1.
Anastacio Jurez Jorge Luis.
2.
Huincho Aquio Sonia Marisol.
3. Vsquez Villacorta Nelly Sofa.

2015
FOTOCOLORIMETRA

I.

INTRODUCCIN
Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la
absorcin de radiacin en la zona visible por sustancias
coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que
deseamos determinar no posee color por s misma; en tal
caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color
empleando reactivos que den lugar a sustancias
coloreadas con la muestra que interesa estudiar. La
colorimetra y fotocolorimetra no son en realidad
tcnicas distintas y la diferencia estriba en el tipo de
instrumental empleado, de forma que se denomina
colormetro a aquellos aparatos en los que la longitud de
onda con la que vamos a trabajar se selecciona por
medio de filtros pticos; en los fotocolormetros o
espectrofotmetros la longitud de onda se selecciona
mediante dispositivos mono-cromadores. Puede definirse
la espectrofotometra de absorcin, como la medida de la
atenuacin que el material a estudiar (muestra) efecta
sobre una radiacin incidente sobre el mismo con un
espectro definido. En general, las medidas se realizan
dentro del espectro comprendido entre 220 y 800 nm, y
este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias
zonas: la zona de la radiacin visible, situada por encima
de 380 nm, y la zona de la radiacin Ultravioleta situada
por debajo de estos 380 nm. La regin del infrarrojo se
sita por encima de los 800 nm. As es como cada
sustancia

coloreada

absorber

luz

determinada

longitud de onda, y la intensidad de la luz debe variar de

acuerdo a la concentracin de la sustancia en la
solucin, el color que se observa, como luz invisible es el
producto o resultado de la luz transmitida. La longitud de
onda es una medida de la energa que se necesita, para
1

la

transmisin,

su

intensidad

depender,

de

la

probabilidad de que la transicin se produzca, cuando

interaccione el sistema electrnico y la radiacin, y
tambin del estado excitado.
II.

MATERIALES Y MTODOS
II.1 EQUIPOS
II.1.1 Espectrofotmetro
II.2 MATERIALES Y REACTIVOS
II.2.1 Sulfato de cobre 10%
II.2.2 Dicromato de potasio 0,1%
II.2.3 Permanganato de potasio 0,01%
II.2.4 Agua destilada
II.2.5 Pipetas de 1-10ml
II.2.6 Tubos de ensayo
II.2.7 Rejillas
II.3 PROCEDIMIENTO
Se prepararon las soluciones de acuerdo a un
esquema

presentado

ms

adelante

en

los

resultados. Fue un total de ocho tubos de ensayo

utilizados para cada reactivo, en seis estaban las
soluciones preparadas, en uno se encontraba el
blanco, y en el otro, la muestra estndar. Cuando
las soluciones estaban listas, las llevamos al
espectrofotmetro

para

la

lectura

de

sus

absorbancias a una longitud de onda adecuada.

Luego de ello, calculamos las concentraciones de
las soluciones por la frmula de la dilucin, y
construimos las curvas de calibracin; despus
hallamos los Factores de Calibracin.

III.

RESULTADOS

IV.

DISCUSIN
En el artculo Curvas De Calibracin En Los Mtodos
Analticos hecho por Mara Dosal y Marcos Villanueva,
dice que: Cabe mencionar que en la prctica es muy
importante efectuar la medida del blanco. Se llaman
disoluciones blanco o simplemente blancos a las
disoluciones

que

contienen

todos

los

reactivos

disolventes usados en el anlisis, pero sin el analito. Los

blancos miden la respuesta del procedimiento analtico a
las impurezas o especies interferentes que existan en los
reactivos o, simplemente, a las especiales caractersticas
del instrumento de medida. En la prctica realizada,
nuestro blanco fue el agua destilada, y al medirla en el
espectrofotmetro,

nos

dimos

cuenta

de

que

su

absorbancia es cero, porque no tiene ninguna partcula

en suspensin, y en base a eso, pudimos seguir leyendo
las absorbancias de las soluciones.
Segn el artculo Introduccin a la Espectroscopa de
Absorcin Molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo
Cercano: Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer,
se debe realizar la curva de calibracin; absorbancia (A)
en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas
y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida. Si
es vlida la ley de Beer, para esa sustancia a esas
concentraciones, la relacin debe ser una recta, que pase
por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se
observan desviaciones debidas a diversos factores. En la
prctica, al momento de construir las curvas de
calibracin para los tres reactivos analizados: sulfato de
cobre, dicromato de potasio y permanganato de potasio,
8

se pudieron observar las desviaciones debidas, segn

nuestro parecer, a una incorrecta preparacin de las
soluciones, al momento de pipetear.
Al momento de comparar las absorbancias de cada
reactivo, se determin que la mayor de ellas le perteneca
al estndar, por ser el de mayor concentracin. Aunque
no hubo un aumento continuo de las absorbancias a
medida que aumentaba la concentracin.

V.

CONCLUSIONES
V.1 Se obtuvo el espectro de absorcin de una sustancia.
Se midieron las muestras a longitudes de onda
distintas. El sulfato de cobre se midi a una longitud
de onda de 600nm, mientras que el dicromato de
potasio se midi a 500nm y el permanganato de
potasio a 475nm.
V.2 Se prepar una curva de calibracin para una
sustancia coloreada. En esta prctica utilizamos tres
reactivos: sulfato de cobre 10%, dicromato de potasio
0,1% y permanganato de potasio 0,01%. En los
resultados se graficaron sus respectivas curvas de
calibracin, en las cuales se observaron algunos
errores, debido a una incorrecta preparacin de las
soluciones.
V.3 Se determin la concentracin de una muestra
problema mediante factor de calibracin y curva de
calibracin.

En

la

prctica,

se

determin

la

concentracin de una muestra problema ploteando

su lectura en el grfico y en el punto de interseccin
se traz una perpendicular al eje de las abscisas
donde se ley su concentracin.
V.4 Se determin que el reactivo cuya absorbancia era la
mayor, fue el estndar, ya que estuvo mayor
concentrado con respecto a las dems soluciones.
De esa manera se comprob que mientras ms
concentrada sea una solucin, mayor ser la
absorbancia. A pesar de haber tenido algunas
desviaciones en la curva de calibracin.

10

11

VI.

RECOMENDACIONES

Es necesario utilizar siempre un guardapolvo para el

laboratorio; ya que este proteger nuestra ropa y
nuestra piel del contacto con reactivos.

Tener mucho cuidado al momento de realizar el

pipeteo, y ms cuando se usa sustancias peligrosas,
ser guiados por la docente a cargo de la prctica.

Nunca debemos de llevarnos las manos a la cara,

los ojos, la boca, etc. mientras se est trabajando en
el laboratorio; as se evitaran posibles daos.

No mezclar las pipetas usadas con una sustancia a

otra, pues muchas veces, nuestros resultados
pueden variar o salir errneos; sin embargo en esta
prctica tuvimos pipetas para cada sustancia que el
laboratorio nos otorg.

Debemos de tener mucho cuidado con los equipos

de laboratorio, ya que cualquier dao causado es el
grupo de prctica quien se hace cargo de los gastos.
Es

necesario

que

aprendamos

usarlos

adecuadamente con la ayuda de nuestra docente,

siguiendo paso a paso las instrucciones dadas.

Nuestros

laboratorios

deberan

de

estar

bien

implementados, con los equipos necesarios para

realizar nuestros trabajos; as como tambin los
docentes, ingenieros y bilogos lo necesitan. Cabe
mencionar que esta prctica de fotocolorimetra
tuvimos que realizarla en el laboratorio de Biologa
en Acuicultura debido a que el laboratorio de
Ciencias no cuenta con el equipo necesario.
12

Al terminar cualquier experimento o trabajo todos los

instrumentos utilizados deben quedar limpios y en el
lugar destinados para ellos.

13

VII.

REFERENCIAS
VII.1 Albert, R. y F. Daniela. 1989. Fisicoqumica, 2
Reimpresin. Continental S.A. de CV. Mxico, 1970.
VII.2 Ayres, G. 1970. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2
edicin. Harla. Mxico.
VII.3 Horna, E. La clula. Mdulo I de Bioqumica.
Chimbote. Universidad Nacional del Santa. 1988.
VII.4 Harris Daniel C. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2
edicin. Editorial Reverte, Espaa. 2001.
VII.5 Carlos

Brunatti

Introduccin

la

Ana

Mara

Espectroscopa

Martn.
de

2005.

Absorcin

Molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano.

Espaa.
VII.6 Skoog A. D, Holler J F, Nieman T. A. Principios de
Anlisis instrumental. 5 edicin. Grupo editorial Mc
Graw

Hill/

Interamericana

de

Espaa,

Aravaca

(Madrid), 2001.
VII.7 Mara Antonia Dosal y Marcos Villanueva. 2008.
Curvas De Calibracin En Los Mtodos Analticos.
Mxico.

14

VIII.

CUESTIONARIO
8.1Cul crees que es el mtodo ms exacto
para obtener la concentracin de una muestra
problema, el grfico o el analtico? Por qu?
El mtodo ms exacto y usado frecuentemente es el
mtodo grfico. Este mtodo consiste en preparar
soluciones estndar de diferente concentracin y
construir un grfico en un sistema de coordenadas.
Se construye la curva de calibracin, que se emplea
para medir la concentracin de una sustancia, su
uso es necesario en los trabajos cuantitativos para
calcular la concentracin del absorbente.
8.2Qu factores alteran la ley de LAMBER Y
BEER?
La ley de Beer-Lambert slo se cumple para
concentraciones

bajas,

partir

de

una

concentracin 0,01M empieza a haber desviaciones

de la linealidad. Adems, si la radiacin utilizada no
es monocromtica, tambin puede haber errores.
La existencia de otros equilibrios qumicos en
disolucin, como cido-base, de precipitacin, de
formacin de complejos, aunque no modifican la ley
en

misma,

concentracin

s
de

que
la

pueden

sustancia

modificar
que

la

estamos

midiendo, y puede producir un error en el resultado.

8.3El color que exhibe una sustancia est
determinada por la luz que transmite o que
absorbe?
El color que exhibe una sustancia est determinada
por la luz que transmite mas no por la luz que
absorbe. Por ejemplo, la clorofila, el pigmento que
hace que las hojas sean verdes, absorbe la luz en el
15

espectro violeta y azul y tambin en el rojo, pero

puesto que transmite y refleja la luz verde, su
aspecto es verde.

8.4A fin de probar la validez de la ley de BEER en

la determinacin de la vitamina A, se prepararon
soluciones de concentracin conocida y se
trataron por un procedimiento normalizado con
tricloruro de antimonio en cloroformo para
producir una coloracin azul. El porcentaje de
transmisin de la luz incidente filtrada para cada
concentracin, expresada en g

ml-1, fue el

siguiente:
Concentracin g ml-1
Transmisin, %

16

1,0
66,8

2,0
44,7

3,0
29,2

4,0
19,9

5,0
13,3