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Informe:
Mecanismos de resistencia
antimicrobianos en biopelculas.
Alumnos
Rolando Casanova
Nataly Hernndez
Valentina Moneti
Docente
Marlen Barreto Roa
NDICE
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1. Introduccin.
2. Generalidades.
2.1.
Mecanismos de resistencia.
2.1.1. Resistencia Intrnseca.
2.1.2. Resistencia Adquirida.
2.2.
Mecanismos de resistencia.
3. Biopelculas.
3.1.
Papel del Biofilm en la infeccin y la resistencia.
3.2.
Mecanismos de resistencia del biofilm.
4. Riesgos de resistencia antimicrobiana en el rea Odontolgica.
4.1.
Endocarditis Bacteriana.
4.2.
Periodontitis.
4.3.
Endodoncia.
4.4.
Resistencia general en placa dental.
5. Conclusin.
6. Bibliografa.
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INTRODUCCIN
Las biopelculas o biofilm son una poblacin de clulas que crecen unidas a una superficie
envueltas en una matriz de exopolisacaridos que las protege del ataque de los
antibiticos. Ms del 60 % de todas las infecciones microbianas son causadas por
Mecanismos de resistencia a antimicrobianos en biopelculas.
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GENERALIDADES
MECANISMOS DE RESISTENCIA
Uno de los factores que limita la utilizacin de los antimicrobianos es la presencia de mecanismos
de resistencia en el microorganismo. Un microorganismo es sensible a la accin de un
antimicrobiano cuando se inhibe su crecimiento o se produce la muerte celular. Por el contrario, la
resistencia implica la ausencia del efecto inhibitorio o letal. Los mecanismos de resistencia ayuda
tanto a la deteccin de los fenotipos de resistencia in vitro, como el diseo de nuevos
antimicrobianos.
La resistencia bacteriana puede ser intrnseca o adquirida.
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Resistencia Intrnseca
Se habla de resistencia intrnseca cuando la concentracin mnima inhibitoria de un antibitico
frente a esa especie bacteriana es superior a la que inhibe normalmente a otras bacterias de
caractersticas similares. Esto puede deberse a las caractersticas del antimicrobiano o de la
bacteria que impiden el acceso normal del frmaco al lugar especfico de accin, a modificaciones
naturales de la diana de accin o cuando toda una poblacin bacteriana produce de modo natural
un mecanismo de resistencia.
Un ejemplo sera el de la resistencia de los Enterococos a las cefalosporinas, debido a que sus
protenas fijadoras de penicilinas (PBPs) tienen baja afinidad por estos beta-lactmicos, y en
consecuencia no pueden ejercer su accin.
No debe confundirse la resistencia intrnseca con la resistencia natural o resistencia constitucional
que implica la insensibilidad de la bacteria por carecer de la estructura sobre la cual ha de actuar el
antibitico.
Resistencia Adquirida.
En contraposicin al concepto de resistencia intrnseca est el de resistencia adquirida, que implica
el desarrollo o adquisicin de un mecanismo de resistencia en un microorganismo que carece de
l, y por tanto, solamente estar presente en ciertas cepas o ciertas especies de un gnero. La
resistencia adquirida puede producirse por la mutacin de genes cromosmicos ya existentes, por
la adquisicin de material gentico ajeno (plsmidos o transposones) o por la mutacin del material
gentico adquirido.
Los mecanismos de resistencia pueden ser especficos de un solo antimicrobiano o afectar a ms
de un frmaco, bien de la misma familia o a varios antimicrobianos estructuralmente no
relacionados entre s. Los ejemplos del primer caso no son frecuentes, y entre ellos destaca la
resistencia a cloranfenicol por la produccin del enzimacloranfenicol-acetil transferasa, o la
resistencia debida a la fosfotransferasa APH(3) que afecta exclusivamente a la estreptomicina y no
a otros aminoglucsidos. Sin embargo, es ms frecuente que la resistencia afecte a varios
antimicrobianos de una misma familia, a lo que se denomina resistencia cruzada. Por ejemplo, la
resistencia de E. coli a las aminopenicilinas por la produccin de la beta-lactamasa TEM-1 afecta
tambin a las carboxipenicilinas y a lasureidopenicilinas.
Mecanismos de resistencia
Desde el punto de vista molecular y bioqumico existen bsicamente tres mecanismos por medio
de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al efecto del antibitico, a saber:
Inactivacin del antibitico.
Se trata de un sistema enzimtico amplio, comn y eficiente de resistencia frecuentemente
producidas por bacterias Gram negativas, para las cuales se han elaborado mltiples
clasificaciones, siendo la ms aceptada la de Bush. Se realiza mediante la produccin de enzimas
que hidrolizan el antobitico. Son ejemplos de esta la produccin de B-lactamasa, B-lactamasa
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La percepcin de la bacteria como una forma de vida unicelular, la cual podemos cultivar en un
medio lquido y analizar su comportamiento, es el mtodo ms usado para el estudio de muchas
actividades bacterianas como la patognesis y la fisiologa microbiana entre otras, pero la realidad
es que el crecimiento microbiano puro es poco comn, las bacterias frecuentemente se desarrollan
en complejas comunidades y son las responsables del mantenimiento biogeoqumico de la
biosfera. Ahora como son estructuras ms complejas, sus niveles de resistencia tambin lo sern.
BIOPELCULAS
El biofilm o Biopelculas es una poblacin de clulas que crecen unidas a una superficie envueltas
en una matriz de exopolisacaridos que las protege del ataque de los antibiticos. Ms del 60% de
todas las infecciones microbianas son causadas por biofilms.
En la Figura 2 se ilustra el proceso de formacin del biofilm: unin a la superficie, adherencia con
otras clulas, formacin de microcolonias y maduracin dentro de una capa de exopolisacarido.
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De igual forma, el papel del biofilm en la contaminacin de los implantes mdicos ha sido bien
establecido en vlvulas cardiacas, catteres de lnea central, intravenosos y urinarios que pueden
conducir a bacteremia o sepsis.
La infeccin por biofilm es dificil de erradicar dada su resistencia, definida como la habilidad de un
microorganismo para crecer en presencia de una elevada concentracin de antimicrobiano o un
pequeo grupo de cepas, en las cuales la concentracin mnima inhibitoria (MIC) se ha
incrementado.
Los mecanismos por los cuales se hacen resistentes an no son completamente claros, pero se
han considerado: la inactivacin de antibiticos por polmeros extracelulares o modificaciones
enzimticas, la baja disponibilidad de nutrientes lo que contribuye a una baja tasa de crecimiento,
los cambios fenotpicos que adquiere la poblacin bacteriana dentro del biofilm y la persistencia
bacteriana; solos o en combinacin estos factores son usados para explicar la supervivencia de las
bacterias dentro de estas comunidades.
Las bacterias biofilm presentan una organizacin estructural que las hace resistentes a los
mecanismos de defensa del husped. Los biofilms, revestidos con SPE y conteniendo mltiples
microcolonias bacterianas en su interior, se convierten en estructuras demasiado grandes como
para ser fagocitadas, reduciendo la accesibilidad del sistema inmune a las bacterias. Por
aadidura, el biofilm provee de una barrera fsica que aumenta la resistencia de patgenos a las
defensas del husped, como opsonizacin, lisis por complemento, y fagocitosis.
En rigor, los biofilms provocan respuestas inmunes celular y humoral, demostradas por la
identificacin de citoquinas liberadas por leucocitos expuestos a biofilm. Sin embargo, debido a su
aislamiento del entorno por la matriz y su reducido estado metablico, esta respuesta sistmica es
muy pequea.
Otra ventaja, extremadamente importante desde el punto de vista clnico, es que las bacterias
biofilms son muy resistentes a los antibiticos, siendo capaces de sobrevivir frente a
concentraciones antibiticas miles de veces mayor respecto a las bacterias planctnicas. Por
ejemplo, una cepa de Klebsiella pneumoniae en estado planctnico tiene una concentracin
inhibitoria mnima de 2 g/ml a la ampicilina. Esta misma cepa, al crecer como biofilm, exhibe 66%
de sobrevida luego de terapia con 5.000 ng/ml de ampicilina.
Para intentar explicar esta resistencia se han planteado diversas hiptesis:
(a) Penetracin lenta o incompleta del antibitico en el biofilm: Se debera a que la matriz de
exopolisacridos constituye una barrera impidiendo este ingreso. Si bien estudios in
vitro muestran que algunos antibiticos logran ingresar con cierta facilidad, debido a que no
existira una barrera genrica a su difusin a travs de la matriz, se postula que si el antibitico
logra ser desactivado en sta por accin de polmeros extracelulares, puede tener tan slo una
difusin limitada dentro del biofilm.
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(b) Causas metablicas: Una baja actividad metablica de las bacterias biofilm por limitacin de
oxgeno y nutrientes puede causar que ingresen en un estado de lentificacin o cese de su
mitosis, especialmente aqullas situadas ms profundamente, con lo cual dejan de ser
susceptibles a los antimicrobianos. Adems, se ha descrito la formacin de nichos anaerbicos
en zonas profundas de biofilms debido a consumo completo del oxgeno en las capas
superficiales. Algunos antibiticos, vgr: aminoglicsidos, son comprobadamente menos
eficaces contra la misma bacteria en condiciones anaerbicas que aerbicas. Finalmente, una
eventual acumulacin de productos cidos en el biofilm puede conducir a diferencias
significativas de pH entre el exterior y el interior de ste, interfiriendo con la accin del
antibitico.
(c) Cambios genticos: Se produciran modificaciones en la fisiologa de las bacterias biofilm y
aparicin de genes especficos, producto de cambios genticos, que potenciaran mecanismos
de resistencia a mltiples antibiticos. Segn diversos investigadores, esta resistencia se
debera principalmente a modificaciones fenotipos en las bacterias biofilm, las que seran de
tipo protectoras, especialmente al generar cese de la mitosis. No obstante existir un respaldo
mayoritario a esta hiptesis, Stewart y Costerton 24 expresan sus dudas al respecto, sealando
que cuando las bacterias son dispersadas desde un biofilm, con frecuencia se tornan
rpidamente susceptibles a antibiticos, lo que sugerira que tal resistencia no sera adquirida
va mutaciones o elementos genticamente movibles.
(d) Formacin de esporas: Esta hiptesis plantea la posibilidad de gnesis de una sub-poblacin
de bacterias biofilm con un estado fenotpico muy especial y altamente protegido, con una
diferenciacin smil esporas. Este planteamiento es apoyado por investigaciones que muestran
resistencia en biofilms recientemente formados, aun cuando estos son demasiado delgados
para constituir una barrera a la penetracin de agentes antimicrobianos.
Es preciso tener presente que los antibiticos utilizados rutinariamente en clnica han sido
seleccionados por su actividad frente a bacterias planctnicas. Lo anterior debido a que los
estudios de sensibilidad o antibiogramas que se realizan habitualmente estn diseados para
medir la susceptibilidad de la bacteria crecida de forma planctnica, sin tener en cuenta que los
resultados obtenidos pueden no extrapolarse a esa misma bacteria cuando lo hace en el interior de
un biofilm. Las mismas propiedades que hacen a las bacterias biofilms resistentes a antibiticos y
al sistema inmune, tambin las tornan difciles de cultivar in vitro. Incluso, su estado metablico
dentro del biofilm puede imposibilitar por completo su cultivo.
Las bacterias en respuesta y acoplamiento a fluctuaciones ambientales como cambios de
temperatura, oxidacin, poco oxgeno, dao en el DNA o pH, expresan genes los cuales se
transfieren mediante conjugacin, logrando un mecanismo de supervivencia especfico que explica
su notable resistencia al ataque de un gran nmero de agentes. La sensibilidad de la bacteria es
usualmente restablecida cuando es separada del biofilm. Esta reversin rpida sugiere un
mecanismo adaptativo de resistencia ms que una alteracin gnica.
El ltimo factor considerado recientemente es la persistencia y la tolerancia. Ya se conoce que los
antibiticos bactericidas no eliminan la totalidad de las bacterias an en crecimiento activo.
Conforme pasa el tiempo, el rango de eliminacin declina en fraccin sustancial de la poblacin
bacteriana que sobrevive al encuentro con ese frmaco. Este fenmeno se denomina persistencia
bacteriana, resistencia adaptativa o tolerancia fenotpica.
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Endodoncia.
Los nuevos conceptos de resistencia bacteriana en endodoncia estn mostrando el importante
papel del Enterococcus faecalis y de la Cndida albicans. Cuando analizada la microbiota de
canales radiculares con infecciones persistentes, los Enterococcus fueron encontrados con mayor
frecuencia. El hidrxido de calcio puede ser ineficiente contra ese grupo de bacterias, por eso se
ha sugerido el uso de antibiticos como la tetraciclina para tratar infecciones persistentes
relacionadas a esta bacteria. Sin embargo, la vancomicina y la eritromicina tambin son efectivas
contra estes microorganismos a pesar de que ya estn surgiendo Enterococcus vancomicino
resistentes.
La Cndida albicans, dentro de la amplia variedad de hongos presentes en la microbiota oral, es la
ms comn, siendo que los conductos radiculares tambin son un local de colonizacin de estos
hongos. Su participacin ya fue demostrada en infecciones en las endodoncias, teniendo
participacin como organismo oportunista en infecciones peri radiculares. La adaptabilidad a
variados ambientes as como la adhesin a varios tipos de superficies, produccin de enzimas
hidrolticas (proteinasas, fosfolipasas, aminopeptidasas, glucosaminidasas, hialuronidasa),
formacin de biofilme y la inmuno-modulacin de la defensa del husped son los principales
mecanismos que justifican la patogenicidad de estos hongos. La Cndida albicans tambin tiene
capacidad de congregar a bacterias bucales como Fusobacterium, Actinomyces, Eubacterium e
Enterococcus faecalis formando comunidades mixtas extremamente daosas a la cavidad oral.
Este mecanismo de congregacin o co-aglutinacin ocurre en funcin de protenas presentes en la
superficie de la Cndida que pueden interactuar con carbohidratos presentes en las bacterias. La
susceptibilidad a los antimicrobianos de esta microbiota intracanal ha sido ampliamente discutida.
Resistencia general en placa dental.
Segn un estudio realizado en Reino Unido a un grupo de nios menores de 12 aos, se
obtuvieron los siguientes resultados: que la mayora de los nios (98%) present niveles
detectables de bacterias orales resistentes a tetraciclina, a pesar de que por su edad no recibieron
este antibitico, dado que en el Reino Unido no se utiliza en menores de 12 aos. Es probable que
los microorganismos aislados resistentes a tetraciclina hayan provenido de los padres o hermanos.
Una vez que estas bacterias resistentes a tetraciclina aparecen en la cavidad oral, posiblemente se
mantengan debido a la co-seleccin por exposicin a otros antibiticos como la eritromicina. En
este ensayo, muchos de los aislamientos fueron resistentes a eritromicina y tetraciclina y se
demostr previamente que los genes de resistencia a ambos antibiticos por lo general se
encuentran en el mismo elemento gentico.
En conclusin, con respecto a este estudio realizado, sealan los expertos, que se hall una
elevada prevalencia de bacterias resistentes a penicilina, ampicilina, eritromicina y tetraciclina en la
placa dental de los nios de diferentes grupos tnicos [1].
Estos casos son en aspectos generales, pero que constantemente segn la manipulacin
constante de frmacos, las bacterias aumentaran su capacidad de crear resistencia, algo que se
debe tener en consideracin a futuro para poder actuar de forma ntegra en la resolucin de algn
caso clnico, tanto en Odontologa o en el rea de Medicina General.
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CONCLUSIN
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BIBLIOGRAFA
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