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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL

PER
ESCUELA DE POST GRADO

MAESTR
A EN DIDCTICA Y GESTIN EDUCATIVA

BIORREACTORES

ESCRITO POR:

PROFESOR ENRIQUE GREGORIO NEZ YAPIAS

TARMA, JULIO DE 2013

INDICE
I.

BIORREACTORES.............................................................................................. 3
1.1.

DEFINICIN................................................................................................. 3

1.2.

CLASIFICACIN:.......................................................................................... 3

1.2.1.

DE ACUERDO A SUS FASES:..................................................................3

1.2.2.

DE ACUERDO AL METABOLISMO (CLASIFICACIN BIOLGICA)...............3

1.2.3.

DE ACUERDO A SU PROCESO DE OPERACIN:......................................4

1.2.4.

DE ACUERDO A LA MEZCLA:..................................................................4

1.3.

ELECCIN DEL TIPO DE REACTOR:..............................................................4

1.4.

DISEO DE BIORREACTORES......................................................................4

PRINCIPIOS EN EL DISEO DE BIORREACTORES...............................................5


DESVENTAJAS:................................................................................................. 5
DESVENTAJAS:................................................................................................. 6
VENTAJAS:........................................................................................................ 6
VENTAJAS:........................................................................................................ 6
DESVENTAJAS:................................................................................................. 6
1.5.

CULTIVOS Y FERMENTACIONES...................................................................7

1.6.

BIORREACTORES Y TIPOS DE CULTIVO.......................................................8

A.

CLULAS Y MICROORGANISMOS ANAERBICOS.........................................8

B.

CLULAS Y MICROORGANISMOS FACULTATIVOS.........................................8

C.

CLULAS Y MICROORGANISMOS AERBICOS...........................................9

1.7.

TIPOS DE CULTIVO QUE SE PUEDEN REALIZAR:..........................................9

CULTIVOS MICROBIANOS ANAERBICOS FERMENTADOR BACTERIAL


(CO2).................................................................................................................. 9

CULTIVOS MICROBIANOS FACULTATIVOS FERMENTADOR BACTERIAL.......9

CULTIVOS MICROBIANOS AERBICOS FERMENTADOR BACTERIAL (O2).. .9

CULTIVOS CELULARES AERBICOS Y FACULTATIVOS FERMENTADOR


MICTICO (CO2)................................................................................................ 9

CULTIVOS CELULARES AERBICOS ESTRICTOS FERMENTADOR CON


AIREACIN (O2)................................................................................................. 9

CLULAS VEGETALES EN SUSPENSIN BIORREACTOR DE ELEVAMIENTO


POR AIRE (O2) EN RGIMEN TURBULENTO (Re 3000).....................................10


PROTOPLASTOS VEGETALES BIORREACTOR DE LEVATAMIENTO POR AIRE
(O2) EN RGIMEN LAMINAR (Re 2300)............................................................10

CLULAS ANIMALES BIORREACTOR DE LECHO FLUIDIZADO (O2)............10

CLULAS INMOBILIZADAS BIORREACTOR DE FIBRA HUECA (O2).............10

CLULAS EMPAQUETADAS BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO (O2).. .11

CULTIVOS ENZIMTICOS REACTORES DE LECHO CATALTICO.................11

1.8.

MODO DE OPERACIN Y SISTEMAS DE CULTIVO......................................11

1.8.1.

DISCONTINUO (batch)..........................................................................12

1.8.2.

SEMICONTINUO (Fed batch)...............................................................12

1.8.3.

CONTINUO.......................................................................................... 12

1.9.

BALANCES Y ECUACIONES........................................................................12

1.9.1.

BALANCE GENERAL BIOMASA.............................................................12

1.9.2.

BALANCE GENERAL POR COMPONENTE.............................................13

1.9.3.
BALANCE GENERAL POR COMPONENTE PARA CADA MODO DE
OPERACIN..................................................................................................... 13
1.9.4.
II.

BALANCES INDIVIDUALES...................................................................15

TECNOLOGIA ENZIMTICA............................................................................... 17
2.1.

LAS ENZIMAS COMO CATALIZADORES.......................................................17

2.2.

APLICACIONES INDUSTRIALES..................................................................17

2.2.1.

ALIMENTOS......................................................................................... 18

2.2.2.

INDUSTRIAS LCTEAS.........................................................................18

2.2.3.

PANADERA......................................................................................... 19

2.2.4.

CERVECERA...................................................................................... 19

2.2.5.

FABRICACIN DE ZUMOS....................................................................19

2.2.6.

FABRICACIN DE GLUCOSA Y FRUCTOSA A PARTIR DEL MAZ..............19

2.2.7.

ENERGA............................................................................................. 20

2.2.8.

PRODUCTOS MDICOS Y FARMACUTICOS........................................20

2.3.

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS Y CLULAS.................................................20

MTODOS UTILIZADOS PARA LA INMOVILIZACIN DE ENZIMAS........................21


BIBLIOGRAFA.................................................................................................. 21

I.

BIORREACTORES

I.1.DEFINICIN.
Es un recipiente o sistema que mantiene un ambiente biolgicamente activo. En algunos casos,
un biorreactor es un recipiente en el que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra
organismos o sustancias bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos, se lleva a
cabo una reaccin catalizada por enzimas o clulas, libres o inmovilizadas. Este proceso puede
ser aerbico o anaerbico. Estos biorreactores son comnmente cilndricos, variando en tamao
desde algunos mililitros hasta metros cbicos y son usualmente fabricados en acero inoxidable.
El biorreactor busca mantener ciertas condiciones ambientales propias (PH, temperatura,
concentracin de oxgeno) al organismo o sustancia qumica que se cultiva. En funcin de los
flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres puntos distintos:

Lote (batch).
Lote alimentado (fed batch).
Continuo o quimiostato.

I.2.CLASIFICACIN:
I.2.1.

DE ACUERDO A SUS FASES:

Homogneos.
Heterogneos.

I.2.2.

DE ACUERDO AL METABOLISMO (CLASIFICACIN BIOLGICA).

Los sistemas biolgicos deben interaccionar con el ambiente externo para poder crecer y
desarrollarse, es por eso que los biorreactores se clasifican biolgicamente de acuerdo al
metabolismo procesal del sistema: ANAERBICO, FACULTATIVO, AERBICO.
Los bioprocesos de cultivo y las fermentaciones estn basados en el metabolismo celular del
cultivo. El metabolismo define los parmetros y caractersticas operativas biolgicas de
diseo y de operacin del biorreactor. Estas caractersticas son las que intervienen en la parte
biolgica del sistema y tienen que ver con el crecimiento, productividad y rendimiento del
cultivo; por lo que , definen la clasificacin biolgica . procesal del sistema de cultivo.

I.2.3.

DE ACUERDO A SU PROCESO DE OPERACIN:


Continuos.
Semicontinuo.
Discontinuos.

Esta es una clasificacin operativa y se aplica a cualquier reactor, sea qumico o biolgico
(biorreactor). En los reactores biolgicos el modo de operacin define el sistema de cultivo
que es el mismo y delimita la clasificacin procesal productiva del bioproceso (cultivo). Al
operar un biorreactor en una determinada categora (discontinuo, semicontinuo, continuo),
automticamente queda determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los
parmetros y las caractersticas operativas y de diseo que intervienen en el proceso
productivo del sistema.
I.2.4.

DE ACUERDO A LA MEZCLA:
Biorreactor discontinuo de mezcla completa.
Biorreactor continuo de mezcla completa.
Biorreactor continuo de flujo de pistn.
Biorreactor reactores de lecho fluidizado.

I.3.ELECCIN DEL TIPO DE REACTOR:

Control de PH y temperatura.
Exigencias de suministro o eliminacin de reactores gaseosos.
Presencia de partculas slidas deseadas o indeseadas en la alimentacin.
Estabilidad qumica y/o biolgica de sustratos y productos.
Sustitucin del catalizador.
Inhibicin por sustratos y/o productos.
Escala de operacin.
Destinos del producto.

I.4.DISEO DE BIORREACTORES.
Es una tarea de ingeniera bastante compleja, los organismos o clulas son capaces de realizar
su funcin deseada con gran eficiencia bajo condiciones ptimas. Las condiciones ambientales
de un biorreactor tales como flujo de gases (por ejemplo; oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono,
etc.), temperatura, PH, oxgeno disuelto y velocidad de agitacin o circulacin, deben ser
cuidadosamente monitoreadas y controladas.
La mayora de los fabricantes industriales de biorreactores usan recipientes, sensores,
controladores y un sistema de control interconectados para su funcionamiento en el sistema
biorreaccin.
La misma propagacin celular puede afectar la esterilidad y eficiencia del biorreactor,
especialmente en los intercambiadores de calor. Para evitar esto, el biorreactor debe ser
fcilmente limpiable y con acabados lo ms sanitario posible (de ah sus formas redondeadas).

Se requiere de un intercambiador de calor para mantener el bioproceso a temperatura constante.


La fermentacin biolgica es una fuente importante de calor, por lo que en la mayor parte de los
casos, los biorreactores requieren de agua de enfriamiento. Pueden ser refrigerados con una
chaqueta externa o, para recipientes sumamente grandes, con serpentines internos.
En un proceso aerobio, la transferencia ptima de oxgeno es tal vez la tarea ms difcil de lograr.
El oxgeno se disuelve poco en agua (y an menos en caldos fermentados) y es relativamente
escaso en el aire (20,8 %). La transferencia de oxgeno usualmente se facilita por la agitacin
que se requiere tambin para mezclar los nutrientes y mantener la fermentacin homognea. Sin
embargo, existen lmites para la velocidad de agitacin, debidos tanto al alto consumo de energa
( que es proporcional al cubo de la velocidad del motor) como al dao

ocasionado a los

organismos debido a un esfuerzo de corte excesivo.


Los biorreactores industriales usualmente emplean bacterias u otros organismos simples que
pueden resistir la fuerza de agitacin. Tambin son fciles de mantener ya que requieren solo
soluciones simples de nutrientes y pueden crecer a grandes velocidades.
En los biorreactores utilizados

para crecer clulas o tejidos, el diseo es significativamente

distinto al de los biorreactores industriales. Muchas clulas y tejidos, especialmente de mamfero,


requieren una superficie u otro soporte estructural para poder crecer y los ambientes agitados son
comnmente dainos para estos tipos de clulas y tejidos. Los organismos superiores tambin
requieren medios de cultivo ms complejos.
PRINCIPIOS EN EL DISEO DE BIORREACTORES.

A. BIORREACTOR DISCONTINUO DE MEZCLA COMPLETA.


Variacin de forma continua.
Constante a travs del reactor.
Empleo de enzimas solubles.
Volumen pequeo de produccin.
DESVENTAJAS:
Cambios en las condiciones de operacin.
Grado de mezcla en reactores a gran escala.

B. BIORREACTOR CONTINUO DE MEZCLA COMPLETA.


Composicin uniforme.
Verstiles y baratos.
Facilidad de control de PH, temperatura, etc.
DESVENTAJAS:
Gastos energticos elevados.

C. BIORREACTOR DE FLUJO EN PISTN.


Invariable a lo largo del tiempo.
Vara a travs del reactor.
Clulas o enzimas libres (inoculacin).
Clulas o enzimas inmovilizados.
VENTAJAS:
Ms eficaces que los de mezcla completa.
Simples y fciles de manejar y automatizar.

D.

BIORREACTOR DE LECHO FLUIDIZADO


Fluidizacin: winkler (1921).
De lecho fluido o turbulento.
Biocatalizador o en suspensin.
Flujo de sustrato.
VENTAJAS:
Buen control de PH, T, gas, etc.
Gran rea de interaccin.
Facilidad de hacer trabajo en continuo.
DESVENTAJAS:
Tcnica de trabajo cara.
El diseo en bioingeniera no es solo la aplicacin de conceptos bsicos y tericos que
conlleven a lograr un prototipo; para la realizacin integra de un modelo, otra gran parte, trata
de la adaptacin creativa y de la utilizacin del ingenio propio para lograr el objetivo de
conjuntar el ambiente biolgico de un cultivo vivo con el ambiente artificial de un dispositivo
controlado; este es el resultado denominado biorreactor o reactor biolgico. Un biorreactor es
por tanto un dispositivo biotecnolgico que debe proveer internamente un ambiente controlado
que garantice y maximice la produccin y el crecimiento de un cultivo vivo; esa es la parte
biolgica. Externamente el biorreactor es la frontera que protege ese cultivo del ambiente
externo: contaminado y no controlado. El biorreactor debe por tanto suministrar los controles
necesarios para que la operacin o proceso (bioproceso) se lleve a cabo con economa, alto
rendimiento (productividad) y en el menor tiempo posible; esa es la parte tecnolgica.
El biorreactor es un sistema totalmente cerrado para la recepcin y tratamiento de las aguas
residuales, residuos agrcolas y de cualquier otro tipo de residuos orgnicos biodegradables,
donde son convertidos en abono biolgico formulado, libre de todo patgeno, y genera un gas,
llamado biogs, el cual se purifica hasta llevarlo a metano puro en la mayor proporcin posible
para ser utilizado en cualquier sistema de combustin, motores o cualquier otro tipo de equipo
que opere con gas natural, incluyendo los vehculos particulares convertidos a gas natural
pues tiene un alto porcentaje de metano de no menos del 91% y su composicin, poder
calorfico, etc. Es casi idntico a la del gas natural, debido a que se purifica hasta su punto
ptimo.

I.5.CULTIVOS Y FERMENTACIONES.
Lo primero que hay que entender en el diseo de reactores biolgicos es que contrario a los
qumicos, su cintica no est determinada exclusivamente por la velocidad de reaccin y las
variables que la determinan. Aunque se puede describir de manera similar a la qumica, la
cintica biolgica tambin depende de caractersticas intrnsecas del organismo o cultivo tales
como crecimiento y tasa de divisin celular, as como del tipo de operacin que se lleve a cabo.
Por eso, lo primero que se define en el diseo de un biorreactor es el propsito de utilizacin; es
decir, qu tipo de cultivo se va utilizar, el modo de operar y/o el proceso de cultivo. El biorreactor
sistema de cultivo debe cumplir con los siguientes objetivos:
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.

Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo.


Mantener constante y homognea la temperatura.
Minimizar los gradientes de concentracin de nutrientes.
Prevenir la sedimentacin y la floculacin.
Permitir la difusin de gases nutrientes a la velocidad requerida por el cultivo.
Mantener el cultivo puro.
Mantener un ambiente asptico.
Maximizar el rendimiento y la produccin.
Minimizar el gasto y los costos de produccin.
Reducir al mximo el tiempo.

Una fermentacin es un proceso biolgico o bioproceso que consiste en la descomposicin de la


materia orgnica por microorganismos fermentadores (bacterias y hongos).

Un cultivo tambin es un bioproceso; pero generalmente se asocia a organismos o


microorganismos superiores (en orden jerrquico) a las bacterias; los cultivos son casi todos del
reino Eucariota.
I.6.BIORREACTORES Y TIPOS DE CULTIVO
Los sistemas biolgicos que determinan el metabolismos celular de cultivo y el modo procesal
biolgico del sistema son:
A. CLULAS Y MICROORGANISMOS ANAERBICOS.
Bacterias en su gran mayora, son microorganismos de metabolismos degradativo
(catablico);

generalmente

unicelulares,

estos

microorganismos

son

autnomos

nutricionalmente independientes ( auttrofos); sus clulas (cuerpos) no respiran (no utilizan la


gluclisis para la respiracin celular), en cambio, utilizan vas alternas, donde una molcula
orgnica, producida durante el proceso metablico (catabolismos), es utilizada como aceptor
de electrones, en un proceso bioqumico como respiracin oxidativa; esta molcula es
reducida a producto orgnico en un proceso comnmente denominado fermentacin.
B. CLULAS Y MICROORGANISMOS FACULTATIVOS.
Son ambivalentes, tienen la capacidad de vivir o sobrevivir entre ambientes: aerbico y
anaerbico; microorganismos de metabolismos mixto por lo que, pueden tanto degradar
(catabolismo) como construir (anabolismos) materia orgnica, a partir de diferentes sustratos
(materia prima), tanto orgnicos como inorgnicos. Pese a su versatilidad, sus mayores
representantes son microorganismos que presentan relaciones parsitas o simbiontes tales
como; hongos y levaduras, por lo que son muy extensos.
C. CLULAS Y MICROORGANISMOS AERBICOS.
Pertenecen en su mayora al reino Eucariota (pero tambin hay procariotas) son
microorganismos y clulas que respiran (utilizan la gluclisis como forma de respiracin
celular); por lo que su metabolismo es constructivo (anablico) y deben obtener sus nutrientes
de diferentes fuentes. Sus principales grupos estn representados por: bacterias y
microorganismos aerbicos, plantas y animales; cuyas clulas se pueden cultivar en
suspensiones celulares o bien, en diferentes arreglos artificiales o modificadas.

I.7.TIPOS DE CULTIVO QUE SE PUEDEN REALIZAR:

CULTIVOS MICROBIANOS ANAERBICOS FERMENTADOR BACTERIAL (CO 2).


Los microorganismos de metabolismos anaerbico son los ms simples de todos, tan solo
necesitan de un medio de cultivo adecuado, agitacin vigorosa y cierta cantidad de CO 2
disuelto para crecer y multiplicarse.

CULTIVOS MICROBIANOS FACULTATIVOS FERMENTADOR BACTERIAL.

Los microorganismos facultativos toleran la presencia de oxgeno en bajas concentraciones y


adems de un sustrato adecuado, slo requieren agitacin moderada y un medio de cultivo
para crecer y desarrollarse.

CULTIVOS MICROBIANOS AERBICOS FERMENTADOR BACTERIAL (O2).


Los microorganismos aerbicos necesariamente requieren la presencia de oxgeno disuelto
(OD) para sobrevivir; adems, agitacin moderada y un medio de cultivo rico en nutrientes
para poder crecer y desarrollarse.

CULTIVOS CELULARES AERBICOS Y FACULTATIVOS FERMENTADOR MICTICO


(CO2).
Los cultivos celulares se diferencian

de los bacteriales (microbios) en que

o son

microorganismos procariotas, son eucariotas. Son microorganismos aerbicos o facultativos


pertenecientes al reino fungi (hongos y levaduras), generalmente llamados micticos,
requieren de la presencia de CO 2 disuelto en el medio como sustrato limitante de la velocidad
de reaccin y generan estructuras reproductivas muy particulares.

CULTIVOS CELULARES AERBICOS ESTRICTOS FERMENTADOR CON AIREACIN


(O2).
El cultivo de microorganismos celulares (no bacteriales) aerbicos estrictos requieren la
presencia de oxgeno disuelto en el medio de cultivo para el metabolismo celular; as como
una adecuada agitacin.

CLULAS VEGETALES EN SUSPENSIN BIORREACTOR DE ELEVAMIENTO POR


AIRE (O2) EN RGIMEN TURBULENTO (Re 3000).
Las clulas vegetales pueden ser cultivadas en suspensiones celulares: pequeos agregados
celulares que se suspenden en el medio de cultivo mediante agitacin. Dado que las clulas
vegetales, el diseo del biorreactor debe incorporar una lnea de aireacin (aire) para
suministrar oxgeno disuelto (OD) al medio de cultivo. El diseo debe contar con agitacin
vigorosa, pues los agregados celulares vegetales tienden a agruparse (clusters) y de alcanzar
gran tamao y peso, precipitaran. Por eso, la operacin de este tipo de biorreactores debe
ser en rgimen turbulento (Re 3000). Los biorreactores para clulas vegetales en
suspensin generalmente son diseados con un mecanismo de levantamiento por aire que
combina una agitacin vigorosa (turbulenta) con una adecuada aireacin (oxgeno disuelto)
del medio de cultivo.

PROTOPLASTOS VEGETALES BIORREACTOR DE LEVATAMIENTO POR AIRE (O2) EN


RGIMEN LAMINAR (Re 2300).
Los protoplastos son clulas vegetales desprovistas de su pared celular, esto se logra
utilizando enzimas proteolticas (proteasas y lipasas) que degradan la pared celular.

Actualmente, el cultivo de protoplastos no es muy comn, pero de realizarse, requiere de una


cama de aire (burbujas muy finas) que opere en rgimen laminar (Re 2300), para evitar que
los esfuerzos cortantes (esquileo) e hidrodinmicos (agitacin) generados en el medio de
cultivo daen (lisis celular) las clulas en suspensin. Tambin es indispensable que el medio
de cultivo contenga las proteasas y lipasas necesarias para evitar la regeneracin de la pared
celular.

CLULAS ANIMALES BIORREACTOR DE LECHO FLUIDIZADO (O2).


Los cultivos de las clulas animales requieren de proximidad mutua y de un soporte slido
(anclaje) para interactuar (comunicacin clula clula) y poder metabolizar (producir); esto
por cuanto, las clulas animales, por lo general, no son independientes y deben estar unidas a
un sistema (por ejemplo heptico) para funcionar adecuadamente. Par suministrar esa
proximidad y el soporte necesario, los diseos de biorreactores para clulas animales deben
aumentar la densidad celular (concentrar) de las clulas en cultivo. Una forma de hacerlo es
incorporar un lecho fluidizado formado por cantidad de microesferas acarreadoras hechas de
material cermico poros inerte que, por su tamao (micromtrico) forman una interfase con el
medio de cultivo (fluido) que permite la transferencia de masa (nutrientes y OD), energa
(calor) y momentun (agitacin) entre el medio de cultivo y las clulas en cultivo; lo que es
llamado lecho fluidizado. Los cultivos celulares animales, por la delicada naturaleza de las
membranas plasmticas requieren adems de oxgeno disuelto (OD) en el medio de cultivo y
de un rgimen de agitacin laminar (Re 2300).

CLULAS INMOBILIZADAS BIORREACTOR DE FIBRA HUECA (O2).


La inmovilizacin celular es otra forma de lograr proximidad celular y aumentar la densidad
celular y la concentracin de metabolitos dentro de las clulas. La inmovilizacin es un
mtodo mucho ms eficiente y logra rendimientos muy superiores a los del lecho fluidizado.
Pero, los fenmenos de transferencia (masa, momentun y energa) se ven muy limitados por
la inmovilidad. Esto es especialmente crtico en cultivos de clulas de mamfero por cuanto la
clula no recibe la nutricin adecuada.
Los reactores de fibra hueca son los dispositivos ms utilizados para inmovilizar y concentrar
cultivos celulares animales. Su diseo consiste en una batera de fibras huecas y porosas en
su interior, colocadas en paralelo. Las clulas se concentran y aumenta la densidad celular, en
los intersticios de las fibras huecas. El medio de cultivo fluye en contrasentido desde el
exterior del reactor o a travs de una carcasa como si fuera un intercambiador de calor de
doble tubo. Para solventar el problema de la escasa transferencia de masa (nutrientes y OD)
dentro de la fibra hueca, un diseo novedoso es el tambor rotativo en el cual, el tambor
externo rota sobre la batera de fibras huecas, generando una circulacin constante de masa y
de momentun, aumentando las tazas de transferencia.

CLULAS EMPAQUETADAS BIORREACTOR DE LECHO EMPACADO (O2).

El empaquetamiento celular es una forma menos drstica de inmovilizacin; pues sta es


parcial. Tambin tiene el objetivo de aumentar la concentracin y la densidad celular; pero al
no estar enclaustradas las clulas, la transferencia de masa es mayor, aunque siempre
limitada. Un lecho empacado es una matriz de soporte slido que retiene las clulas, bien por
geometra (dentro de los intersticios o espacios huecos de la matriz), bien por afinidad (paso o
adherencia selectiva). Un biorreactor con este propsito debe contener un lecho de soporte
slido, sumergido en el medio de cultivo. La oxigenacin generalmente se realiza en el
exterior del lecho, a travs del medio de cultivo.

CULTIVOS ENZIMTICOS REACTORES DE LECHO CATALTICO.


Los cultivos enzimticos se comportan en algunos aspectos como cultivos celulares y en otros
como reactivos qumicos. Debido a que un sustrato enzimtico es un cataltico de una
reaccin biolgica, la cintica de estos reactores puede simularse como la qumica, pero sin
olvidar que el compuesto es biolgico. Los sustratos enzimticos deben estar anclados a un
lecho semislido o a un semifluido (segn sea el caso) dependiendo de la naturaleza
enzimtica del sustrato; que por la naturaleza de la enzimas se conocen como lechos
catalticos. Muchas veces el medio de cultivo, adems de la enzima, requiere, para un
sustrato determinado, su respectivo precursor metablico llamado cofactor, ms algn
componente especial que agilice el proceso metablico.

I.8.MODO DE OPERACIN Y SISTEMAS DE CULTIVO.


El modo de operacin de un sistema de cultivo, es sinnimo del modo de operar del biorreactor o
fermentador. ste no solo influye en el diseo propio del reactor, tambin, en el modelo cintico de
crecimiento del cultivo y en el proceso de produccin. Existen tres modos de cultivo aunados a
tres modos bsicos de operacin:
I.8.1.

DISCONTINUO (batch).

Por lotes o tandas, sin alimentacin (F); se coloca dentro del biorreactor la carga total de cada
proceso (tanda o lote) de cultivo o fermentacin y se deja que se lleve a cabo el proceso
productivo o la fermentacin por el tiempo que sea necesario; el cual se denomina tiempo de
retencin.
Las clulas se cultivan en biorreactor con una concentracin inicial, sin que esta sea alterada
por nutrientes adicionales o el lavado, por lo que el volumen permanece constante y slo las
condiciones ambientales del medio (PH, temperatura, velocidad de agitacin) son controladas
por el operador. Es proceso finaliza cuando todo el sustrato es consumido por la biomasa.
I.8.2.

SEMICONTINUO (Fed batch).

Por lotes alimentados, con alimentacin de entrada (F1); se alimenta una lnea de entrada o
alimentacin (F1) para que el sistema de cultivo tenga un producto (biomasa) con mximo
crecimiento (exponencial) y aumente la productividad.

Los nutrientes son alimentados al

biorreactor de forma semicontinua o continua, mientras que no hay efluente en el sistema. La

adicin intermitente del sustrato mejora la productividad de la fermentacin manteniendo baja


la concentracin del sustrato. Este proceso est restringido por la capacidad volumtrica del
reactor.
I.8.3.

CONTINUO.

Por quimioestato, se alimenta una lnea de entrada F1 con nutrientes de manera continua y
se drena una salida F2 o lavado; de manera que los flujos o caudales de ambas lneas sean
iguales y la produccin sea continua.

I.9.

BALANCES Y ECUACIONES
La parte terica del diseo consiste en modelar; es decir, poner en ecuaciones el proceso
biolgico (bioproceso) que se lleva a cabo, para que, a partir de esas ecuaciones, dimensionar
(dar dimensiones) y simular el comportamiento terico de un modelo prototipo.
I.9.1.

BALANCE GENERAL BIOMASA

Velocidad de Acumulacin = Velocidad de Entrada Velocidad de Salida + Velocidad de


Formacin Velocidad de Consumo.

VELOCIDAD DE
ACUMULACIN

I.9.2.

VELOCIDAD DE
ENTRADA

VELOCIDAD DE
SALIDA

VELOCIDAD DE
FORMACIN

VELOCIDAD DE
CONSUMO

BALANCE GENERAL POR COMPONENTE

Una vez dado el balance general de biomasa, debe tomarse en cuenta que, en un sistema de
cultivo, existen muchos componentes: sustratos, productos, compuestos metablicos que
conforman el caldo de cultivo (medio interno); incluso la biomasa, se considera un
componente en s misma. A partir del balance general, debe establecerse un balance general
para cada componente

del cultivo o la biomasa.

d ( VC i )=F 1 .C oi F 2 . C i+V r if V r ci
Velocidad de
Acumulacin

Donde:

Velocidad
de
Entrada

Velocidad
de Salida

. Ec.1
Velocidad
de
Formacin

Velocidad
de
Consumo

d ( VC i ) :

Velocidad de acumulacin del componente

Volumen del cultivo (m).

F1

Flujo o caudal de entrada (m/s).

Ci

Concentracin inicial del componente

F2

Flujo o caudal de salida (m/s).

Ci

Concentracin del componente

ri

Velocidad de formacin del componente

r ci

Velocidad de consumo del componente

i .

i . (kg/m).

i . (kg/m).
i . (kg/ms).

i . (kg/ms).

Respecto a las velocidades de formacin y consumo:


Si se trata de un componente metablico, responden a la acumulacin (formacin) del
componente dentro de la clula y al consumo del metabolito por parte de la clula (consumo).
Si se trata de biomasa, formacin corresponde a la generacin de biomasa y el consumo al
consumo de biomasa durante el bioproceso; esto es, a la produccin metablica en el primer
caso y a la produccin o productividad en el segundo.
I.9.3.

BALANCE GENERAL POR COMPONENTE PARA CADA MODO DE OPERACIN

La ecuacin de balance general por componente Ec. 1, por ser general, se define para una
operacin continua. La condicin fundamental de toda operacin continua es:
En una operacin continua el flujo de entrada (F1) debe ser igual al flujo de salida (F2):
F1 = F2
Esta condicin se conoce como flujo en estado estacionario (FEE). Para modelar el
comportamiento de la biomasa del cultivo en el estado estacionario (EE) adems de la
condicin de flujo (FEE) debe haber equilibrio en la densidad o concentracin de sta. Esto se
conoce como quimioestsis o equilibrio quimioesttico y es por eso que a los sistemas de
cultivo continuo se les llama quimioestatos. Est condicin est dada por la ecuacin:

dV
=F1F 2
dt

Ec. 2.

Bajo la condicin de FEE y suponiendo que la densidad del cultivo y de la alimentacin son
iguales (Ec.2, quimioestsis) la Ec.1 se reduce a la ecuacin de balance para una
operacin continua en estado estacionario.

d Ci
=F ( Ci 1C i ) +V (r fi r ci )
dt

..

Ec. 3.

De no existir el estado estacionario (EE) se produciran dentro del biorreactor dos condiciones
de flujo indeseables:
Si F1 > F2 se produce el rebalse o desborde del biorreactor, condicin que se da cuando el
flujo de entrada sobrepasa la capacidad del reactor.
Si F2 > F1 se produce el lavado o drenado de producto o biomasa, condicin que se da
cuando el flujo de salida sobrepasa la capacidad del reactor.
Cuando el modo de operacin es semicontinuo (fed-batch) el caudal de salida F2 es nulo
(F2 = 0) por lo que, el volumen V aumentar con el tiempo en funcin del caudal de entrada:

dV
=F
dt

Ec.4.

Y en el balance de materia se anula el trmino

d (VC i)
=F .C oi +V (r if r ci )
dt

F2 .C i

resultando:

.. Ec.5.

Observe que el volumen que permanece dentro del operador diferencial es porque vara con el
tiempo (Ec.4), en tanto que el otro no lo hace (Ec.3). Esa es la razn por la que una operacin
semicontinua tiene duracin limitada en el tiempo (el volumen no puede incrementarse ms
all del volumen de trabajo o volumen til del biorreactor). El tiempo que dura una operacin
semicontinua se conoce como tiempo de residencia (tr) y es el tiempo que dura el cultivo o
bioproceso en un sistema semicontinuo.
Cuando el modo de operacin es discontinuo (batch) ambos caudales son nulos
F1 = F2 = 0
Por lo que, el volumen es constante y se anulan los trminos

F1 .C i

F2 .C i

en la

Ec.1. Eso da como resultado:

d (Ci ) f c
=r i r i Ec.6.
dt
La duracin de un cultivo discontinuo (batch) es tambin, limitada en el tiempo, pero se
diferencia de la del cultivo semicontinuo (fed-batch) en que depende nicamente de las

condiciones iniciales del cultivo; esto por cuanto, no existe alimentacin (F1). Una vez cargado
el biorreactor e inoculado el medio de cultivo, la concentracin de la biomasa aumenta gracias
a los nutrientes, pero una vez que el sustrato que limita el crecimiento se haya agotado, el
crecimiento ya no es posible y finaliza el cultivo. Por este motivo, el tiempo que dura el cultivo
dentro de un biorreactor con un modo de operacin discontinuo se llama tiempo de cultivo (tc).
I.9.4.

BALANCES INDIVIDUALES

Los principales balances por componente en su forma individual son:

Balance de Biomasa:
d (VX) / dt = FiXi + VrgX FoXo VrcX

Velocidad de crecimiento celular


rgX = X

velocidad de muerte celular


rcX = kdX

Balance de Sustrato:
d (VS) / dt = FiSi FoSo VrcS
rcS = qSX / YX/S = X / YG + m X + qPX / YP

Balance de producto:
d (VP) / dt = FiPi FoPo VrgP
rgP = qP X

Balance de Oxgeno:
d (VCL) / dt = FiCLi FoCLo VrcO2 + VNiO2

Balance de Anhdrido Carbnico:


d(VCCO2) / dt = FiCCO2i FoCCO2o + VrgCO2 VNoCO2

NOMENCLATURA

V: Volumen del lquido en el biorreactor, L

t: Tiempo, h

y: Concentracin del componente y en el lquido dentro del biorreactor, g/L

X: Concentracin de biomasa en el lquido dentro del biorreactor, g/L

S: Concentracin de sustrato en el lquido dentro del biorreactor, g/L

P: Concentracin de producto en el lquido dentro del biorreactor, g/L

CL: Concentracin de oxgeno en el lquido dentro del biorreactor, g/L

C*: Concentracin de oxgeno en el lquido en equilibrio con el gas, g/L

CCO2: Concentracin de CO2 en el lquido dentro del biorreactor, g/L

F: Velocidad de flujo de lquido, L/h

Ni: Velocidad de transferencia de un componente del gas al lquido, g/Lh

No: Velocidad de transferencia de un componente del lquido al gas, g/Lh

rg: Velocidad de generacin, formacin o produccin, g/Lh

rc: Velocidad de consumo o utilizacin, g/Lh

: Velocidad especfica de crecimiento celular, h-1

qS: Velocidad especfica de consumo de sustrato, g/gh

qP: Velocidad especfica de formacin de producto, g/gh

m: Velocidad especfica de consumo de sustrato para mantenimiento celular, g/gh

Kd: Velocidad especfica de muerte o declinacin celular, h-1

YP: Coeficiente (estequiomtrico) de rendimiento de producto basado en el consumo


de sustrato consumido para formacin de producto, g/g

YP/S: Coeficiente de rendimiento de producto basado en el consumo total de sustrato,


g/g

YG: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo de sustrato para


crecimiento, g/g

YX/S: Coeficiente de rendimiento de biomasa basado en el consumo total de sustrato,


g/g

kLa: Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, h-1

SUBNDICES

i = Ingreso

o = Salida

S = Sustrato

P = Producto

O2 = Oxgeno

CO2 = Anhdrido carbnico

II. TECNOLOGIA ENZIMTICA


La tecnologa enzimtica tiene como objetivo la superacin de todos aquellos inconvenientes que
parecen retrasar la aplicacin de las enzimas en estos procesos a escala industrial, las enzimas son

protenas cuya funcin biolgica es catalizar las reacciones que suceden en las clulas. Esta rea
tiene aplicaciones desde tiempos remotos como la fermentacin, actualmente en diferentes industrias
a diferentes niveles, ya que implica la utilizacin de sistemas enzimticos diversos que optimizan el
procesamiento en la obtencin de detergente, aditivos alimenticios, productos qumicos y
farmacuticos. La tecnologa enzimtica se presenta como alternativa biotecnolgica basada en que
las industrias desarrollen productos de calidad homognea, aprovechen ptimamente sus materias
primas, aceleren sus procesos de produccin, minimicen desperdicios y disminuyan el deterioro del
medio ambiente.

II.1.

LAS ENZIMAS COMO CATALIZADORES


Las enzimas son catalizadores de origen biolgico que parecen cumplir muchos de los requisitos
necesarios para impulsar esta nueva industria qumica. Son catalizadores muy activos en medios
acuosos y en condiciones muy suaves de temperatura, presin, pH, etc. Son catalizadores muy
especficos: pueden modificar un nico substrato en una mezcla de substratos muy similares e
incluso pueden discernir entre dos ismeros de una mezcla racmica de un compuesto quiral,
Son catalizadores muy selectivos: pueden modificar un nico enlace o un nico grupo funcional
en una molcula que tenga varias posiciones modificables.

II.2.

APLICACIONES INDUSTRIALES
En relacin con las enzimas, la tecnologa moderna contribuye al ahorro. Por ejemplo, permite la
utilizacin del excedente de suero derivado de la fabricacin del queso. La lactosa transforma el
azcar del suero en una mezcla de glucosa y galactosa con un sabor ms dulce. As, se refina el
producto y se concentra en una especie de jarabe cuyo sabor recuerda el de la miel, con lo que
las aplicaciones en el sector de la confitera industrial se hacen innumerables. Se usan tambin
muchos otros tratamientos de las enzimas en la produccin de edulcorantes modernos. Por
ejemplo, EE.UU. se puede constatar que el jarabe del almidn de maz tiene un alto contenido en
fructosa, razn por la cual ha llegado a eclipsado a la sacarosa.
Las enzimas presentan muchsimas aplicaciones. Con los procedimientos modernos de
fabricacin de alimentos, benefician tanto a los sectores industriales como a los consumidores.
Sus caractersticas especficas permiten a los industriales ejercer un control de calidad ms
estricto. Con un menor consumo de energa y unas condiciones de tratamiento ms ligeras, su
eficacia favorece el entorno. Pueden utilizarse para tratar los desechos biolgicos resultantes de
la fabricacin de alimentos, puesto que las propias enzimas son biodegradables. Mediante una
rpida absorcin natural, las enzimas son el tpico ejemplo de "tecnologa verde".
II.2.1.

ALIMENTOS

La utilizacin emprica de preparaciones enzimticas en la elaboracin de alimentos es muy


antigua. El cuajo, por ejemplo, se utiliza en la elaboracin de quesos desde la prehistoria,
mientras que las civilizaciones precolombinas ya utilizaban el zumo de la papaya.
Los enzimas son piezas esenciales en el funcionamiento de todos los organismos vivos,
actuando como catalizadores de las reacciones de sntesis y degradacin que tienen lugar en
ellos.
La utilizacin de enzimas en los alimentos presenta una serie de ventajas, adems de las de
ndole econmica o tecnolgica. La gran especificidad de accin que tienen los enzimas hace
que no se produzcan reacciones laterales imprevistas.
Para garantizar la seguridad de su uso deben tenerse en cuenta no obstante algunas
consideraciones: en aquellos enzimas que sean producidos por microorganismos, estos no
deben ser patgenos ni sintetizar a la vez toxinas, antibiticos, etc. Los microorganismos
ideales son aquellos que tienen ya una larga tradicin de uso en los alimentos (levaduras de la
industria cervecera, fermentos lcticos, etc.). Adems, tanto los materiales de partida como el
procesado y conservacin del producto final deben ser acordes con las prcticas habituales de
la industria alimentara por lo que respecta a pureza, ausencia de contaminantes, higiene, etc.
II.2.2.

INDUSTRIAS LCTEAS

El cuajo, que est formado por la mezcla de dos enzimas digestivos (quimosina y pepsina) y
se obtiene del cuajar de las terneras jvenes. Estos enzimas rompen la casena de la leche y
producen su coagulacin.
Actualmente empieza a ser importante tambin la lactasa, un enzima que rompe la lactosa,
que es el azcar de la leche. Muchas personas no pueden digerir este azcar, por lo que la
leche les causa trastornos intestinales.
II.2.3.

PANADERA

En panadera se utiliza la lipoxidasa, simultneamente como blanqueante de la harina y para


mejorar su comportamiento en el amasado. La forma en la que se aade es usualmente como
harina de soja o de otras leguminosas, que la contienen en abundancia. Para facilitar la accin
de la levadura, se aade amilasa, normalmente en forma de harina de malta, aunque en
algunos pases se utilizan enzimas procedentes de mohos ya que la adicin de malta altera
algo el color del pan.
A veces se utilizan tambin proteasas para romper la estructura del gluten y mejorar la
plasticidad de la masa. Este tratamiento es importante en la fabricacin de bizcochos.
II.2.4.

CERVECERA

Un proceso fundamental de la fabricacin de la cerveza, la rotura del almidn para formar


azcares sencillos que luego sern fermentados por las levaduras, lo realizan las amilasas
presentes en la malta, que pueden aadirse procedentes de fuentes externas, aunque lo usual
es lo contrario, que la actividad propia de la malta permita transformar an ms almidn del
que contiene. Cuando esto es as, las industrias cerveceras aaden almidn de patata o de
arroz para aprovechar al mximo la actividad enzimtica.
II.2.5.

FABRICACIN DE ZUMOS

A veces la pulpa de las frutas hace que los zumos sean turbios y demasiado viscosos,
producindose tambin ocasionalmente problemas en la extraccin y en su eventual
concentracin. Esto es debido a la presencia de pectinas, que pueden destruirse por la accin
de enzimas presentes en el propio zumo o bien por enzimas aadidas obtenidas de fuentes
externas. Esta destruccin requiere la actuacin de varios enzimas distintos, uno de los cuales
produce metanol, que es txico, aunque la cantidad producida no llegue a ser preocupante
para la salud.
II.2.6.

FABRICACIN DE GLUCOSA Y FRUCTOSA A PARTIR DEL MAZ.

Una industria en franca expansin es la obtencin de jarabes de glucosa o fructosa a partir de


almidn de maz. Estos jarabes se utilizan en la elaboracin de bebidas refrescantes,
conservas de frutas, repostera, etc. en lugar del azcar de caa o de remolacha. Se obtiene
por hidrlisis enzimtica, que permite obtener un jarabe de glucosa de mucha mayor calidad y
a un costo muy competitivo.
Los enzimas utilizados son las alfa-amilasas y las amiloglucosidasas. La glucosa formada
puede transformarse luego en fructosa, otro azcar ms dulce, utilizando el enzima glucosasomeraza, usualmente inmovilizado en un soporte slido.
II.2.7.

ENERGA.

Un ejemplo clsico de biocombustible es el alcohol obtenido por fermentacin de material rico


en azcares y almidn, o de residuos orgnicos varios, incluyendo los forestales. El principal
obstculo para la viabilidad de esta propuesta es el costo, puesto que el petrleo sigue siendo
ms barato. Sin embargo, los avances tecnolgicos estn permitiendo acortar la brecha.
II.2.8.

II.3.

PRODUCTOS MDICOS Y FARMACUTICOS

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS Y CLULAS.

El uso de enzimas suspendidas libremente tiene las desventajas siguientes:


Muchas de las enzimas son lbiles bajo las condiciones normales de operacin y por ello
tienen una vida muy limitada.

Debido a que las enzimas son solubles en agua, son difciles de separar en sus sustratos y

productos, por lo que su reutilizacin es difcil. Esto aumenta los costos de produccin.
La utilizacin de un proceso de enzimas inmovilizadas tendr las siguientes ventajas:
Se ha mostrado que la inmovilizacin de una enzima en partculas insolubles en agua

aumenta su estabilidad considerablemente.


La capacidad para separar con facilidad la enzima de los productos y sustratos permite su
reutilizacin, o bien, el establecimiento de un proceso continuo con el que se logra mejorar la
economa.
Las desventajas de las enzimas inmovilizadas es que la naturaleza heterognea de un
catalizador como ste impone limitaciones de difusin que reducen y alteran su actividad.
El uso de clulas inmovilizadas en lugar de aquellas cultivadas en un proceso intermitente

normal tiene ventajas similares a las de las enzimas inmovilizadas.


Las fermentaciones en lote se pueden reemplazar por reacciones continuas.
Las clulas inmovilizadas permiten el uso de una densidad celular considerablemente mayor,

con lo que se logra la intensificacin del proceso.


Muchas enzimas o metabolitos solo son activos en la fase celular estacionaria o de reposo; en
un sistema de inmovilizacin las clulas se pueden retener en este estado.
Las desventajas de las clulas inmovilizadas son similares a las de las enzimas
inmovilizadas, donde el sistema impone las limitaciones de difusin.
Las ventajas y desventajas de las enzimas inmovilizadas comparadas con las clulas

inmovilizadas dependen del sistema en cuestin, pero pueden ser las siguientes:
El uso de clulas inmovilizadas elimina la necesidad de extraer y purificar la enzima.
A menudo el sistema celular completo es menos sensible a cambios en las condiciones de

operacin como el PH.


Las clulas inmovilizadas permiten una carga alta de soporte, que con las enzimas aisladas,

puede reducir la actividad debido a las interacciones protena protena.


Si el sistema de reaccin utilizado necesita muchas enzimas y tambin la renovacin del
cofactor, el sistema celular inmovilizado es la mejor opcin.
La desventaja del sistema celular inmovilizado es que impone barreras difusionales
adicionales (pared celular) de modo que se puede requerir de la permeabilizacin de las
clulas. En este caso, puede ser difcil el mantenimiento de la integridad celular.

MTODOS UTILIZADOS PARA LA INMOVILIZACIN DE ENZIMAS.


A. UNIN COVALENTE A SOPORTES SLIDOS.
Las enzimas se inmovilizan unindolas covalentemente a soportes insolubles. Se ha usado
una variedad de materiales soporte incluyendo vidrio poroso, cermicos, acero inoxidable,
arena, carbn, celulosa, polmeros sintticos (nylon) y xidos metlicos.
La inmovilizacin utiliza dos grupos amino o carboxilo presentes en la protena enzimtica. En
la mayora de los casos la inmovilizacin consiste en por lo menos dos etapas: la activacin
del soporte y la reaccin de acoplamiento especfica.

B. ADSORCIN EN SOPORTES SLIDOS.


Fue la primera tcnica usada en la inmovilizacin donde la alumina y el carbn eran usadas
como soporte. Los intercambiadores de iones absorben rpidamente la mayora de las
protenas y se han usado para la purificacin de enzimas. Soportes como los
intercambiadores de aniones dietilamino etil celulosa o el intercambiador catinico
carboximetil celulosa se han usado para la absorcin de enzimas.

C. CAPTURA EN UNA RED TRIDIMENSIONAL DE POLMEROS.


Las enzimas se pueden inmovilizar dentro de una red de polmeros mediante la adicin de las
enzimas a los monmeros antes de la formacin del gel. Los polmeros usados para la
formacin de los geles pueden ser orgnicos naturales o sintticos, por ejemplo; agar
agarosa, colgeno, gelatina, quitosano, celulosa.

BIBLIOGRAFA

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