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ANALISIS BIOQUIMICOS

DE LIQUIDOS BIOLGICOS

Dr. Jose C. Jara Aguirre


Profesor
Escuela de Tecnologa Medica
Facultad de Medicina Alberto Hurtado
Universidad Peruana Cayetano Heredia

LIQUIDOS BIOLGICOS
EXTRAVASCULARES
z Liquido

Pleural
z Lquido Cefalorraquideo
z Lquido Ascitico
z Lquido Pericardico
z Lquido Sinovial

LIQUIDOS BIOLGICOS
z LA

DEFINICION DE FLUIDOS
SEROSOS SOLO SE RESTRINGE
LIQUIDO PLEURAL
LIQUIDO ASCITICO
LIQUIDO PERICARDICO

LIQUIDO PLEURAL
(LP)

Produccin y Reabsorcin de
Liquido Pleural
z Normalmente,

1 a 15 ml.
z Producido por la pleura parietal.
z Reabsorbido por la pleura visceral.
z Proceso continuo por filtracin del
endotelio capilar.

Produccin y Reabsorcin de
Liquido Pleural
z
z

Proceso continuo por filtracin del endotelio


capilar.
Velocidad depende de:
la presin hidrostatica capilar,
la presin onctica y
la permeabilidad capilar.

Es reabsorbido va capilares y linfticos.

Formacion del Liquido pleural


Espacio
pleural

Capilar
sistemico

PO 26

Presion
intrapleural

Capilar
pulmonar

PO 26

5 cm agua

linfaticos

PH 30
Pleura parietal

linfaticos

PH 11
Pleura visceral

OBTENCION DEL LIQUDIO


PLEURAL

TORACOCENTESIS

ASPECTO Y COLOR DEL


LIQUIDO PLEURAL

HEMATICO

QUILOSO

TRANSUDADO

Diferencia entre un
Transudados y Exudados

Transudados y Exudados
z Transudados

Producidos por incremento de la presin hidrosttica


en los capilares pleurales o disminucin de la
presin onctica del plasma.

Transudados
Los estados patolgicos que pueden generar
transudado pleural
CAUSA
PATOGENESIS
1. Insuficiencia
cardiaca congestiva
2. Cirrosis hepatica

3.Sndrome nefrtico

Hipertension sistemica y
pulmonar
Hipertension portal y cava
inferior
hipoalbuminemia
hipoalbuminemia

Trasudados y Exudados
z Exudados

Por incremento en la permeabilidad capilar


o una reduccin de la reabsorcin linftica.
.

Exudados
z

Ocurre en una variedad de enfermedades.


CAUSA
PATOGENESIS
1. Pancreatitis
2. AR
3. LES
4. Infecciones
(TBC, bacteriana,
Viral, fungica)

5. Infarto

- Inflamacion quimica secundaria


- Inflamacion de serosa
- Inflamacion de serosa
- Inflamacion secundaria a
microorganismo
- Inflamacion secundaria

(miocardio/pulmonar: embolia)

6. Neoplasia

- Incremento permeabilidad capilar


por implantes de tumor
- Obstruccion linfatica secundaria

EFUSION
PLEURAL

LIQUIDO PLEURAL :
EXUDADO O TRANSUDADO
z COMO

SE DEFINE UN LIQUIDO
PLEURAL COMO EXUDADO O
TRANSUDADO DESDE EL PUNTO DE
VISTA DE LABORATORIO CLINICO?

CRITERIOS DE LIGHTS
1. Proteinas totales
z
LP/SUERO > 0.5
2. LDH
LP/SUERO >0.6
3. LDH en el LP 2/3 superior al valor
referencial en suero
Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322

UTILIZACION DE LOS CRITERIOS DE


LIGHT PARA DEFINIR ENTRE UN
EXUDADO Y UN TRANSUDADO
Sensibilidad

99 %

Especificidad

98 %

Valor predictivo positivo

99%

Valor predictivo negativo

98%*

Ana C. Tarn. Biochemical analysis of pleural fluid. Ann Clin Bioch. 2001, 38:311-322

Lquidos Biolgicos
Procedimientos Anlticos
z
z
z
z
z
z

Exmen Fsico (Ph, color, aspecto, coagulacin,


aspecto del sobrenadante)
Exmen Citolgico
Exmen Qumico
Papanicolaou
Exmen Bacteriolgico (Directo, BK, Cultivo para
germenes comunes, cultivos para BK y hongos)
Otros exmenes (Tinta china, ADA, marcadores
tumorales, enzimas)

Toma de la muestra
z

Citologico : EDTA

Qumico: Tubo simple o tubo con anticoagulante


para enzimas -heparina

Bacteriolgico: Tubo o frasco esteril con heparina

Procedimiento preliminar
z

Tomar datos del


examen fsico
Color
Aspecto
Coagulo

Recuento diferencial
Tomar muestra para recuento.
z Azul de metileno nuevo
0.5% en solucin
fisiolgica.

Centrifugado
z
z
z
z

Centrifugar a 600g por


10 minutos.
Decantar el
sobrenadante.
Resuspender el
precipitado en vortex.
Hacer cuatro frotices y
fijar dos de ellos en
metanol o etanol.

Examen Bioqumico
z

LDH

Proteinas

ADA

OTROS

PROTEINAS TOTALES
z

1. Fundamento:

Metodo de Biuret-Proteinas Totales

Metodo qumico colorimetrico de punto final

Los enlaces peptidicos de las protenas reaccionan en un medio alcalino con


el in cprico del reactivo de Biuret, estabilizado por el tartrato, para formar
un complejo de color violeta cuya mxima absorcin se da a 540 nm.
NaOH

z
z
z

cobre + protenas LP

complejos cupro-proteicos
z540

nm.

Reactivo Biuret : Sulfato de cobre, NaOH, Tartrato de Sodio y Potasio


Estabilizante : Ioduro de potasio y EDTA

Lactato deshidrogenasa
(LDH)
z Metodo

segun Scandinavian Committe on Enzymes


z Metodo puntos multiples UV-Metodo de referencia
z Principio :
z
LDH
z Piruvato + NADH + H+
Lactato + NAD+
pH neutro

Abs : 340 nm

- Cuantifica el consumo de NADH+ H+

Anlisis de Liquido Pleural


Criterios

Transudate

Apariencia

Claro/amarillo pajizo

Densidad
Proteinas totales
Relac. Proteinas liquido/suero
LDH
Relac. LDH liquido/suero

< 1.016
<3.0
<0.5
<200
<0.6

Glucosa

Lechoso: quiloso
Rojizo: ver celulas abajo
Turbio: lipidos o GB
Purulento: empiema
Olor putrido: anaerobios
Sanguinolento: neoplasia
Pasta de anchoas: amebas
> 1.016
>3.0
>0.5*
>200*
<0.6*
<30: reumatoide
<60: TBC, empiema,
carcinoma
>2 en suero en pancreatitis,
ruptura esofgica, carcinoma

Amilasa
~7.4
pH

Lipidos
Celulas: Leucocitos

<1000

Celulas: Hematies

<10,000

Citologa
Etiologas

Exudate

ICC, sindrome
nefrotico, cirrosis

<7.3 infecciosa
> 7.3 en cancer
< 7.2 puede necesario tubo
+sudan, +trigliceridos:
quiloso
+sudan, +colesterol:
quiliforme
>1000
>10,000: neoplasia maligna,
infarto pleural, trauma, TBC
Positivo en neop. maligna
Neop. maligna, tuberculosis,
quiloso, etc.

LIQUIDO ASCITICO o
LIQUIDO PERITONEAL

TOMA DE MUESTRA

Anlisis de Lquido Ascitico


Criterios
Proteinas

Trasudado
<3.0 (30% o mas)

Exudado
>3.0

Relac. Proteinas liquido/suero

>0.5 sugiere neop. maligna

LDH

Incr en neop. maligna

Relac. LDH liquido/suero

>0.6 sugiere neop. maligna

ACE
Relac. ACE liquido/suero
Glucosa
Relaci. Glucosa liquido/suero
Amilasa
Lipasa

>10 sugiere neop. maligna


>2 sugiere neop. maligna
<60
<1
Incr en ascitis pancreatica
Incr en ascitis pancreatica

>1

pH

Puede estar bajo en infecc.

Trigliceridos

Incr en ascitis quilosa


<500
Mononuclear en cirrosis

Celulas: GB

Celulas: GR

Citologa

Etiologas

>500
PMNs en bacteriana aguda
Mononuclear en inf cronica,
Eosinofilos in enteritis
eosinofilica.
Abundantes sugieren neopl,
TBC, pancreatitis,
endometriosis, trombosis
mesenterica, trauma,
perforacin visceral
Positividad indica un 6090% especificidad en de
neoplasias malignas

ICC, pericarditis constrictiva


Neop maligna peritoneal,
pericarditis, obstruccion
peritonitis tuberculosa,
venosa, Budd-Chiari,
myxedema, ascitis
hipoproteinemia, sindrome
pancreatica, biliar,
nefrotico, cirrosis, sindrome
infecciosa, quilosa, qumica
de Meig's, vasculitis

LIQUIDO
CEFALORAQUIDEO
(LCR)

Formacin y Circulacin de
LCR

Formacin y Circulacin de
LCR

Circulacin de LCR

Circulacin de LCR
Adultos
150 mL total
30 ml cerebro
120 mL ESA
500 mL/d
4-6 horas se
renueva

Absorcin de LCR

FUNCIONES DEL LCR


z FUNCION

DE SOSTEN
z FUNCION DE DISMINUIR EL PESO
TOTAL CEREBRAL
z FUNCION DE DETOXIFICACION
CEREBRAL
z FUNCION DE TRASPORTE DE
SEGUNDOS MENSAJEROS Y
HOMEOSTASIS DEL SIST NERVIOSO

PUNCION LUMBAR

PUNCION LUMBAR

Toma de la muestra
z

TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO E


INMUNOLOGICO

TUBO 2: MICROBIOLOGICO

TUBO 3 : CITOLOGICO

Toma de la muestra
z

TUBO 1: ESTUDIO QUIMICO BASICO

-GLUCOSA

- PROTEINAS TOTALES

- IgG e Index Ig G

- ACIDO LACTICO

Metodos de laboratorio para cuantificar


Glucosa
Metodos Enzimatico de Punto final colorimetrico
z

Metodo de Glucosa Oxidasa /Trinder


Glucosa Oxidasa
Glucosa +02
1/3 alfa-d-glucosa
2/3 beta-d-glucosa

cido glucnico +
H202
mutarotasas

Trinder
Peroxidasa
H202+fenol+4-AF

VR : 2/3 del valor en suero

cromgeno coloreado
+ H20
510 nm

PROTEINAS TOTALES
El anlisis de protenas totales en LCR puede
clasificarse en 3 tipos de mtodos principales :
1. TURBIDIMETRICO :
a. Prueba de Acido Sulfusalicilico
+ sulfato de sodio
b. Prueba de Acido Tricloacetico12,5%
2. QUIMICO :
a. Biuret MODIFICADO
3. FIJACION DE COLORANTES
a. Azul brillante de Coomassie
b. Rojo de Pirangol
VR: 20-40 mg/dL

INDEX IgG

z Ig
z

G index = Ig G ( LCR) x albumina ( suero)


Ig G ( suero) x albumina ( LCR)

z VR:

0.25-0.85
z Ig G (LCR) :1-4 mg/dL

Proteinograma o Electroforesis
de proteinas
Fundamento:
z
Separa a las
Proteinas en
Funcion de
Su carga o
Punto
isolectrico

Electroforesis de proteinas
Albumina

Muestra :
LCR
Coloracion:
Coosmasie blue
Ponceu S

Globulinas

Electroforesis por inmunofijacion


de proteinas
Muestra 1

Albumina

Uso de Ab
Monoclonal
Contra las
Fracciones de
Ig (G, A, M y
Cadenas ligeras
Kappa y Lamda)

Globulinas

Anlisis de LCR
Enfermedad
Normal
Meningitis bateriana aguda
Abceso cerebral
Meningitis aseptica
Meningitis TBC
Meningitis por hongos
Criptococosis
Coccid/ Histo/Blasto
Sifilis
Amebas
Meningitis carcinomatosa
Tumor cerebral solitario
Meningitis quimica
Trombosis cerebral
Hemorragia cerebral

Presin
7-18 cm
Elevada or nl
Elevada or nl
nl
Elevada or nl
Nl or elevada
Nl or elevada
Nl or elevada
Nl or elevada
Elevada or nl
Nl or elevada
Elevada or nl
Nl or elevada
Nl or elevada
Elevada or nl

GB Totales
0-10
5-miles
5-miles
May-00
5-500
5-800
5-800
5-200
5-1500
400-20,000
5-1000
5-150
5-miles
5-50
Sangre

Cel. Predom.
Mononucleares
PMNs
Linfos/PMNs
Linfocitos
Linfocitos
Linfocitos
Linfocitos
Linfocitos
Linfocitos
PMNs & GRs
Mononucleares
Mononucleares
PMNs
Sangre

Glucosa
Proteinas
45-80
15-45
<45
50-1500
Nl a bajo
Alto
Nl a bajo
20-200
10-45
45-500
Nl o disminuido Nl o elevado
Mod disminuido Hasta 500
Frec disminuido
Elevado
Nl or disminuido
25-300
Disminuido or nl
Elevado
Nl o disminuido Hasta 500
Nl
Hasta 500
Nl
Elevado
Nl
Hasta 100
Nl
Hasta 2000

ADENOSINA DEAMINASA
z Es

una enzima del grupo de las hidrolasas,


involucrada en el catabolismo de las bases
purnicas.

La adenosina es un nucleosido endgeno


encontrado en cantidades pequeas a travs del
cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .

Adenosina Deaminasa (ADA)


z Es

un marcador de inmunidad celular,


cuya actividad plasmatica est
aumentada en enfermedades donde la
respuesta inmune tiene una mediacin
celular.
z Se encuentra presente en los linfocitos T
activados.

Adenosina Deaminasa (ADA)


z Presente

en linfocitos T activados
z Presente en liquidos biolgicos de procesos
inflamatorios mediados por inmunidad
celular
z Micosis TBC
z Alta sensibilidad y especificidad en TBC
pleural, pericardica, meningea, articular y
peritoneal

Isoenzimas de ADA
z

La Adenosina Deaminasa presenta tres


isoenzimas:

ADA 1

ADA 2 est relacionada a procesos de actividad


linfocitos T y en especial en tuberculosis
menngea, pleural.

MTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA


DETERMINACIN DE ADA
z

Fundamento

Adenosina

Adenosina
+ H 2O
deaminasa

Inosina

+ NH

El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a


37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como
catalizador) para formar indofenol de color azul intenso,
que es medido a 640 nm.

SIGNIFICADO CLINICO
*Aumento:
Enfermedades hepticas
Mononucleosis infecciosa
Fiebre tifoidea
Leucemia aguda
Micosis TBC
En la tuberculosis pulmonar activa se ha
encontrado una elevacin srica de ADA. As
mismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se
observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.

VALORES DE REFERENCIA
z

z
z

Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de


tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o
pericardio.
Valores referencia :
- L Pleural
:
0 45 U/L
LCR
:
0 6 U/L
L asctico
:
0 40 U/L
L. pericardico:
0 20 U/L

LIQUIDO SINOVIAL

- Es un dializado del plasma rico


en acido hialuronico
-99% mucoproteinas (acetil
glucosamina +ac. Glucoronico)

Anlisis de Lquido Sinovial


Criterios

Normal
Claro o amarillo
palido

No inflamatorio

Aspecto

Transparente

Transparente

Viscosidad
Coagulacin c/mucina
Coagulacin espontanea
GB
PMNs
GR
Examen de cristales*

Muy alto
Buena
Ninguna
150
25%
-

Alto
Pobre a buena
Frecuente
3000
25%
Puede ser +

Color

Etiologias

Xantocromico

Inflamatorio
Xantocromico a
blanco
Translucido u
opaco
Bajo
Pobre a buena
Frecuente
3000-50K
70%
Puede ser +

Purulento

Hemorragico

Blanco

Sanguinolento

Opaco

Opaco

Muy bajo
Pobre
Frecuente
50K-300K
90%
-

+++
-

Osteoartritis, AR
AR, Reiter, aguda
temprana, trauma,
por cristales,
deterioro/cronico,
sinovitis, artritis
Bacteriana, TBC,
sinovitis por cristales,
psoriatica, (enf
por hongos.
LES, poliartritis,
inflam. de Bowel),
escleodermia,
viral artritis, fiebre
necrosis aseptica,
reumatic.
etc.

Fractura,
articulacin de
Charcot, hemofilia,
tumor,
condrocalcinosis,
anticoagulantes, n
rx, protesis artic,
enf cel falciformes.

ADENOSINA DEAMINASA
z Es

una enzima del grupo de las hidrolasas,


involucrada en el catabolismo de las bases
purnicas.

La adenosina es un nucleosido endgeno


encontrado en cantidades pequeas a travs del
cuerpo. Su frmula qumico es C l0 H 13 N 5 O 4 .

Adenosina Deaminasa (ADA)


z Es

un marcador de inmunidad celular,


cuya actividad plasmatica est
aumentada en enfermedades donde la
respuesta inmune tiene una mediacin
celular.
z Se encuentra presente en los linfocitos T
activados.

Adenosina Deaminasa (ADA)


z Presente

en linfocitos T activados
z Presente en liquidos biolgicos de procesos
inflamatorios mediados por inmunidad
celular
z Micosis TBC
z Alta sensibilidad y especificidad en TBC
pleural, pericardica, meningea, articular y
peritoneal

Isoenzimas de ADA
z

La Adenosina Deaminasa presenta tres


isoenzimas:

ADA 1

ADA 2 est relacionada a procesos de actividad


linfocitos T y en especial en tuberculosis
menngea, pleural.

MTODO DE GALANTI Y GIUSTI PARA


DETERMINACIN DE ADA
z

Fundamento

Adenosina

Adenosina
+ H 2O
deaminasa

Inosina

+ NH

El NH3 reacciona con el hipoclorito de sodio y fenol a


37oC (con nitroprusiato de sodio en medio alcalino como
catalizador) para formar indofenol de color azul intenso,
que es medido a 640 nm.

SIGNIFICADO CLINICO
*Aumento:
Enfermedades hepticas
Mononucleosis infecciosa
Fiebre tifoidea
Leucemia aguda
Micosis TBC
En la tuberculosis pulmonar activa se ha
encontrado una elevacin srica de ADA. As
mismo en meningitis y peritonitis tuberculosa se
observa de ADA en LCR y lquido peritoneal.

VALORES DE REFERENCIA
z

z
z

Es un gran mtodo auxiliar en el diagnstico de


tuberculosis de serosas, pleura, peritoneo o
pericardio.
Valores referencia :
- L Pleural
:
0 45 U/L
LCR
:
0 6 U/L
L asctico
:
0 40 U/L
L. pericardico:
0 20 U/L

LIQUIDO SINOVIAL

- Es un dializado del plasma rico


en acido hialuronico
-99% mucoproteinas (acetil
glucosamina +ac. Glucoronico)

Anlisis de Lquido Sinovial


Criterios

Normal
Claro o amarillo
palido

No inflamatorio

Aspecto

Transparente

Transparente

Viscosidad
Coagulacin c/mucina
Coagulacin espontanea
GB
PMNs
GR
Examen de cristales*

Muy alto
Buena
Ninguna
150
25%
-

Alto
Pobre a buena
Frecuente
3000
25%
Puede ser +

Color

Etiologias

Xantocromico

Inflamatorio
Xantocromico a
blanco
Translucido u
opaco
Bajo
Pobre a buena
Frecuente
3000-50K
70%
Puede ser +

Purulento

Hemorragico

Blanco

Sanguinolento

Opaco

Opaco

Muy bajo
Pobre
Frecuente
50K-300K
90%
-

+++
-

Osteoartritis, AR
AR, Reiter, aguda
temprana, trauma,
por cristales,
deterioro/cronico,
sinovitis, artritis
Bacteriana, TBC,
sinovitis por cristales,
psoriatica, (enf
por hongos.
LES, poliartritis,
inflam. de Bowel),
escleodermia,
viral artritis, fiebre
necrosis aseptica,
reumatic.
etc.

Fractura,
articulacin de
Charcot, hemofilia,
tumor,
condrocalcinosis,
anticoagulantes, n
rx, protesis artic,
enf cel falciformes.

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