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Chromatographie en phase gazeuse (CPG)

La chromatographie en phase gazeuse est une technique de chromatographie trs rpandue,


extrmement sensible, dont les premires applications, qui remontent au dbut des annes 40, ont
concern le contrle des fractions lgres des raffineries de ptrole. La chromatographie en phase
gazeuse est une transposition de la chromatographie sur colonne dans laquelle la phase mobile
liquide a t remplace par un gaz. Cest une mthode de sparation des composs gazeux ou
susceptibles d'tre vaporiss par chauffage sans dcomposition. Elle permet ainsi l'analyse de
mlanges ventuellement trs complexes dont les constituants peuvent diffrer de faon
considrable par leur nature et leur volatilit.
1. Gnralits
La CPG gaz-solide est une chromatographie d'adsorption, la phase stationnaire tant un
solide adsorbant. Les constituants du mlange inject sont en quilibre entre la phase gazeuse et la
surface du solide o ils s'adsorbent. Le gaz qui vhicule les constituants du mlange (souvent
nomms soluts) constitue la phase mobile et est appel gaz vecteur. A l'instant initial, le mlange
sparer est inject l'entre de la colonne o il se dilue dans la phase mobile qui l'entrane le long
de celle-ci. Si la phase stationnaire a t bien choisie, les constituants du mlange sont ingalement
retenus par celle-ci lors de la traverse de la colonne. De ce phnomne nomm rtention , il
rsulte que les constituants du mlange inject se dplacent tous moins vite que la phase mobile et
que leurs vitesses de migration respectives sont ingales. De ce fait, les constituants du mlange
sortent de la colonne les uns aprs les autres au sein de la phase mobile. A la sortie de la colonne
se trouve un dtecteur reli un enregistreur. Lorsqu'un constituant du mlange arrive au niveau
du dtecteur, un pic apparat sur l'enregistreur. Le temps de sortie de chaque constituant tR,
nomm temps de rtention, caractrise de faon qualitative le constituant. L'aire du pic permet
de dterminer la concentration massique de chaque solut dans le mlange inject. L'analyse d'un
mlange peut donc tre quantitative.

Schma de principe d'un chromatographe gaz

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Chromatogramme d'un chantillon contenant un seul constituant

Chromatogramme dun mlange contenant au moins 22 constituants


2. Description de l'appareillage
2.1. Gaz vecteur
Le choix du gaz vecteur est conditionn par l'efficacit de la sparation et la sensibilit du
dtecteur. Le gaz vecteur doit tre pur, inerte (il ne doit pas ragir avec les constituants du mlange
sparer) et le moins miscible possible avec la phase stationnaire. Le choix du gaz vecteur est en
grande partie li la nature du dtecteur utilis : hydrogne ou azote avec un dtecteur
conductibilit thermique (catharomtre), azote ou hlium avec un dtecteur ionisation de flamme,
azote ou mlange argon-mthane avec un dtecteur capture d'lectrons.
2.2. Injecteur
Le systme d'injection joue plusieurs rles, que l'chantillon se trouve sous forme solide, liquide
ou gazeuse :
- rle d'interface qui permet d'introduire l'chantillon dans le chromatographe
- rle de systme de vaporisation (dans le cas d'un chantillon liquide ou solide)
- rle d'organe de transfert dans la colonne chromatographique
Les caractristiques des injecteurs, ainsi que les modes dinjection, diffrent suivant le type
de colonne auxquelles ils sont relis.
a) Injection par vaporisation directe
Le systme le plus courant est l'injecteur septum reprsent ci-dessous. Il sagit dun tube
mtallique, doubl dun chemisage de verre (insert), balay par le gaz vecteur et chauff une
temprature suprieure de 20 30 C au point d'bullition du constituant le moins volatil du
mlange analys de faon permettre une vaporisation immdiate de tous les constituants du
mlange.
Lune des extrmits de linjecteur est obture par une
pastille dlastomre silicon nomme septum pour permettre le
passage de laiguille de la microseringue qui contient lchantillon
injecter et lautre est relie la colonne. La totalit de lchantillon
inject est transfr dans la colonne.
L'introduction du mlange se fait par l'intermdiaire d'une
microseringue dont le volume varie gnralement de 1 10 L et
dont laiguille a un diamtre de lordre de 0,15 mm.

Dessin dune seringue de 10 L, couramment utilise en CPG


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Il existe des injecteurs automatiques pour liquides, automates qui rptent avec une excellente
reproductibilit la squence rinage de la seringue, prlvement de lchantillon et introduction de
celui-ci dans linjecteur. La reproductibilit des volumes injects est meilleure que 2%. Dans ce cas,
un passeur automatique d'chantillons est inclus dans l'appareil. Ce mode dinjection est utilis
pour les colonnes remplies et certaines colonnes capillaires.
b) Injection split/splitless
Il sagit dinjecteurs pouvant fonctionner suivant deux modes, avec ou sans division (encore
appels split ou splitless). En mode split, le gaz vecteur arrive avec un grand dbit dans la chambre
de vaporisation ; une vanne de fuite spare le courant gazeux en deux parties dont la plus petite est
la seule pntrer dans la colonne. Ce mode est utilis dans le cas des colonnes capillaires faible
dbit. Le mode splitless est rserv aux chantillons trs dilus.
2.3. Four
Le four est une enceinte thermostate dans lequel se trouve la colonne. La programmation de la
temprature du four est un facteur essentiel lobtention dune bonne sparation avec une dure
danalyse acceptable.
2.4. Colonne
On distingue trois types de colonnes.
a) Colonne remplissage galement appele colonne classique ou colonne remplie : existant
depuis les dbuts de la CPG, les colonnes analytiques classiques sont le plus souvent en acier ou
plus rarement en verre, de diamtre intrieur de 2 6 mm, ont une longueur comprise entre 1 et
3 m et sont enroules sous forme hlicodale. Elles sont remplies d'un support poreux (dimension
des particules : 100 200 m) imprgn de 5 20% de phase stationnaire (chromatographie gazliquide) ou sont remplies d'un adsorbant (chromatographie gaz-solide).
b) Colonne capillaire : en acier lorigine (1970) et maintenant en verre de silice, elles ont un
diamtre interne variant entre 0,05 et 0,35 mm et une longueur comprise entre 10 et 50 m. Pour
plus de robustesse, elles sont revtues dune couche de polymre ou dun film daluminium et sont
enroules sur un support mtallique cylindrique lger, en forme de cage. Il n'y a alors pas de
remplissage : la phase stationnaire ou l'adsorbant est dpos sur la paroi interne de la colonne. La
faible quantit de phase stationnaire permet des analyses rapides mais impose l'injection d'une
quantit trs faible d'chantillon.
c) Colonne semi-capillaire : plus rcentes que les colonnes capillaires (1983), elles sont
constitues dun tube de silice de 0,53 mm de diamtre interne et ont une longueur variant de 5
50 m. Elles remplacent, lheure actuelle, les colonnes remplissage sur les chromatographes
anciens, tout en conservant les mmes injecteurs et dtecteurs. Elle supporte linjection dune
quantit plus grande dchantillon quune colonne capillaire mais la rsolution est moins bonne
(plus le diamtre dune colonne est faible, meilleure est la rsolution). La colonne, enroule sous
forme hlicodale, est relie l'injecteur l'une de ses extrmits et au dtecteur l'autre. Elle est
dispose dans un four muni d'un systme de rgulation de temprature.

Reprsentation, la mme chelle, des trois types de colonnes de CPG : a. colonne remplie,
b. colonne semi-capillaire, c. colonne capillaire et d. dtail dune colonne capillaire
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Proprits et caractristiques de quelques colonnes de CPG


Type de colonne
Longueur / m
Diamtre interne / mm
Efficacit, plateaux / m
Masse de lchantillon / ng
Pression relative
Vitesse relative
Inertie chimique
Flexibilit mcanique

FSOT

WCOT

SCOT

Remplie

10-100
0,1-0,3
2000-4000
10-75
faible
rapide
la meilleure
oui

10-100
0,25-0,75
1000-4000
10-1000
faible
rapide

non

10-100
0,5
600-1200
10-1000
faible
rapide

non

1-6
2-4
500-1000
10-106
leve
lente
la moins bonne
non

2.5. Dtecteur
Il existe plusieurs types de dtecteurs dont deux utiliss le plus couramment.
a) Dtecteur conductibilit thermique (catharomtre) : ce fut le dtecteur le plus rpandu aux
dbuts de la chromatographie en phase gazeuse. Son principe repose sur le fait que la rsistance
d'un mtal parcouru par un courant d'intensit constante varie lorsqu'il est soumis un gradient
de temprature : la rsistance dun thermistor suit une loi du type R = R0(1 + T).

Le catharomtre comporte deux thermistors identiques, placs dans deux petites cavits tailles
dans un bloc mtallique thermostat une temprature lgrement suprieure celle de la
colonne. Lun deux est baign par le gaz vecteur prlev en amont de linjecteur et lautre par le gaz
vecteur sortant de la colonne. En rgime stationnaire, il stablit un quilibre de temprature, donc
de rsistance, fonction de la conductibilit thermique du gaz vecteur et de lintensit I. Lorsquun
solut est lu, le changement de composition de la phase mobile entrane une variation de la
conductibilit. Lquilibre thermique est alors rompu et il en rsulte une variation de la rsistance
du filament, proportionnelle la concentration du compos lu pour les grandes dilutions. Ces
thermistors sont intgrs dans un montage type pont de Wheastone, aliment en tension continue.
Le catharomtre prsente l'avantage de ne pas dtruire les substances analyses d'o son
utilisation en CPG prparative. Mais son principal inconvnient provient de sa faible sensibilit (de
lordre du microgramme).

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b) Dtecteur ionisation de flamme (FID) : c'est le


dtecteur le plus utilis en CPG. Le courant gazeux issu
de la colonne pntre dans un petit brleur dont la
flamme est alimente par un mlange dhydrogne et
dair. La combustion des composs organiques lus
produit des ions qui sont collects au moyen de deux
lectrodes. Le courant trs faible qui en rsulte est
transform en une tension qui est enregistre.

Il existe d'autres types de dtecteurs, comme le dtecteur thermoionique (NPD) spcifique des
composs azots et phosphors, celui capture d'lectrons (CED) particulirement sensible aux
composs halogns et celui photomtrie de flamme spcifique des composs contenant du soufre
et du phosphore. Habituellement, on fixe la temprature du dtecteur sensiblement la mme
valeur que celle de l'injecteur.
3. Facteurs dont dpend la sparation
3.1. Temprature
Gnralement, si les constituants du mlange sparer ont des polarits voisines, les
composs les plus volatils sont les plus rapidement entrans. Si la temprature de la colonne est
trop basse, la vitesse d'change entre la phase stationnaire et le gaz vecteur est lente, la diffusion
devient importante, le temps de rtention de certains composs trop long et les pics correspondants
sont dissymtriques ou dforms. Si la temprature de la colonne est trop leve, l'quilibre de
chaque constituant entre les deux phases mobile et stationnaire n'a pas le temps de s'tablir et
tous les constituants apparaissent la sortie de la colonne en mme temps. Lorsque l'cart entre
les points d'bullition des constituants du mlange sparer est grand, il est souvent prfrable
d'augmenter la temprature du four. Un programmateur lectronique, mis en route l'injection, fait
varier la temprature du four selon un profil choisi. Exemple : les deux chromatogrammes cidessous sont ceux de lanalyse dun mlange desters mthyliques dacides gras (RCO2CH3).

Si la temprature de la colonne est constante (chromatographie isotherme ; la temprature


du four est constante, gale 200 C), le chromatogramme se prsente comme une suite de pics de
plus en plus espacs (cas A). Si on effectue une programmation de la temprature du four, le
chromatogramme prsente alors des carts beaucoup plus faibles entre les diffrents pics (cas B).
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3.2. Dbit du gaz vecteur


Il doit tre tel que les diffrents constituants du mlange puissent s'quilibrer entre les deux
phases mobile et stationnaire. Si le dbit est trop rapide, la sparation des pics est mdiocre. Sil est
trop lent, les pics perdent leur finesse par suite d'une diffusion trop importante des constituants
dans le gaz vecteur. Quand le dbit est bien rgl, on a intrt augmenter la temprature du four
pour amliorer la finesse des pics (voir exemple ci-dessus).
3.3. Longueur de la colonne
De faon gnrale, on accrot l'efficacit de la sparation en augmentant la longueur de la
colonne mais ceci se fait au dtriment de la finesse des pics. De plus, la longueur des colonnes est
limite par le fait qu'une colonne trop longue exige une trop forte pression du gaz vecteur.
3.4. Nature de la phase stationnaire
Le liquide qui constitue la phase stationnaire est, selon les cas, un hydrocarbure ramifi tel
que le squalane de polarit nulle, un polyalkylsiloxane peu polaire, un polyther polaire ou un
polyester trs polaire.
CH3
H C

CH3
(CH2)3

CH3

Si
CH3

HO

(CH2)3

CH3
H3C

CH3

Si

(CH2)4

CH3
O

squalane

(CH2)3

CH3

C
CH3

CH3
(CH2)3 C H
CH3

CH3
O

Si O CH3

R = CH3 ou C6H5 ou C2H4F3

CH3
polydialkylsiloxane
n

CH2CH2O H
n
polyther

O C CH2CH2
O

C O CH2CH2 O CH2CH2
O

polyester

Ce liquide doit tre chimiquement inerte vis vis des composants du mlange sparer. De plus,
on ne doit l'utiliser que dans les limites de tempratures pour lequel il est prvu : si la temprature
devient trop basse, la phase stationnaire devient visqueuse, ce qui diminue considrablement la
vitesse d'change entre le gaz vecteur et la phase stationnaire ; si la temprature devient trop
leve, il y a perte de la phase stationnaire par vaporisation. Le principe gnral qui doit servir de
guide au choix de la phase stationnaire est le suivant : les structures de polarits voisines ont
des affinits entre elles. Ainsi, pour sparer des substances polaires, on utilise une phase fixe
polaire car ces substances sont fortement retenues par la phase fixe ; dans ce cas, lordre de sortie
des composs dune srie homologue est lordre croissant de leur point dbullition. Si des
composs peu polaires se trouvent dans le mlange analys, ils sont peu retenus par la phase
stationnaire polaire et sont lus avant les composs polaires ayant mme point dbullition. Si la
phase stationnaire est apolaire, cest linverse qui se produit : les composs non polaires sont bien
retenus et sont lus selon lordre de leur point dbullition croissant dans une srie homologue et
un compos polaire est lu avant un compos non polaire ayant mme point dbullition.
Ordre dlution des constituants dun mlange sur une phase polaire
Compos

Propan-1-ol

Butan-1-ol

Pentan-1-ol

Heptane

Teb / C

97

117

137

98

Ordre de sortie

Ordre dlution des constituants dun mlange sur une phase apolaire
Compos
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Heptane

Octane

Nonane

Propan-1-ol
6/9

Teb / C

98

126

151

97

Ordre de sortie

La polarit dune phase est donne par la constante de McReynolds : plus le nombre est
lev, plus la phase est polaire.
4. Prcautions gnrales prendre pour effectuer une CPG
- lchantillon analyser doit toujours avoir subi un traitement minimum de purification :
limination des goudrons, de leau et des particules en suspension
- contrle de la nature de la phase stationnaire de la colonne
- ne jamais utiliser la colonne en dehors des limites de tempratures indiques par le fabricant
- la seringue doit tre rince plusieurs fois avec lchantillon avant linjection
- il faut prendre soin de ne pas courber laiguille au moment de son introduction travers le
septum de linjecteur
- le septum doit tre chang rgulirement (toutes les 50 injections environ)
- il faut injecter le mlange ds que laiguille est enfonce
5. Influence des conditions opratoires en CPG
Tous les chromatogrammes tudis sont ceux dun mme mlange doctane (Teb = 126 C), de
nonane (Teb = 151 C) et de dcane (Teb = 174 C), en quantits sensiblement quimas-siques,
effectus dans des conditions de chromatographie diffrentes.
5.1. Influence de la temprature du four
La temprature de linjecteur et du dtecteur sont identiques (220 C). La colonne utilise est
une colonne HP1, apolaire. Le volume inject est sensiblement gal 0,5 L. La pression du gaz
vecteur (dihydrogne) est gale 1 bar.
a) Temprature du four constante, gale 60 C
tR (octane) = 0,580 min. 35 s ; le pic correspondant
prsente un petite dformation, il nest pas tout fait
symtrique
tR (nonane) = 1,250 min. 1 min. 15 s ; le pic
correspondant montre une dformation importante
tR (dcane) = 2,774 min. 2 min. 46 s ; le pic
correspondant est trs dform ; une temprature trop
basse du four induit une telle dformation : le
compos trane sur la colonne.

b) Temprature du four
constante, gale 80 C
tR (octane) 18 s ; le pic
correspondant
est
presque
symtrique
tR (nonane) 33 s ; le pic
correspondant est encore un
peu large
tR (dcane) = 1 min. 6s ; le pic
correspondant est encore trs dform (non symtrique ; pour lamliorer, il faudrait une
temprature du four plus leve).
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c) Temprature du four constante, gale 100 C

les pics correspondants sont pratiquement symtriques et sont bien


rsolus ; cette temprature du four est convenable pour sparer
correctement les deux composs.
tR (dcane) 38,5 s ; le pic correspondant est encore non symtrique ; cette temprature du four
nest pas assez leve pour le dcane.
tR (octane) 11 s
tR (nonane) 18 s

d) Temprature du four constante, gale 120 C

les pics correspondants sont bien symtriques mais ils ne sont pas tout
fait rsolus ; la temprature du four est un peu trop leve pour bien
sparer les deux composs
tR (dcane) 17 s ; le pic correspondant est pratiquement symtrique ; cette temprature du four
convient pratiquement pour le dcane
tR (octane) 7,5 s
tR (nonane) 11 s

e) Temprature du four constante, gale 140 C

les pics correspondants sont bien symtriques mais ils ne sont pas
rsolus ; la temprature du four est trop leve pour bien sparer les deux
composs
tR (dcane) 10,5 s ; le pic correspondant est symtrique ; cette temprature du four convient
pratiquement pour le dcane mais il nest pas parfaitement rsolu (le dcane commence sortir
alors que le nonane na pas tout fait fini de sortir)
tR (octane) 6 s
tR (nonane) 7,5 s

f) Conclusion
Avec le mlange tudi, effectuer la chromatographie en isotherme (temprature du four constante
pendant toute la dure de llution) donne de mauvais rsultats. Pour amliorer la qualit de la
chromatographie, on effectue une variation programme de la temprature du four.
g) Temprature du four variant au cours du temps

tR (octane) 27 s
tR (nonane) 43,5 s
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les pics sont bien spars mais celui du dcane nest pas tout fait
symtrique ; tR (dcane) 1 min. 3,5 s
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5.2. Influence de la pression du gaz vecteur


La temprature de linjecteur et du dtecteur sont identiques (220 C). Le volume inject est
sensiblement gal 0,5 L. La temprature du four est programme de faon semblable au cas 1.7.
a) Pression du dihydrogne : 0,5 bar

b) Pression du dihydrogne : 1 bar. Cest le cas vu prcdemment.


c) Pression du dihydrogne : 1,5 bar

d) Conclusion
Plus la pression du gaz vecteur est faible, plus les temps de rtention sont levs et plus les
pics sont larges.
5.3. Influence de la nature de la phase stationnaire
La temprature de linjecteur et du dtecteur sont identiques (220 C). Le volume inject est
sensiblement gal 0,5 L. La pression du gaz vecteur est de 1 bar. La temprature du four est
programme de faon semblable au cas 1.7.
a) Colonne semi-capillaire apolaire. Cest le cas 1.7.
b) Colonne semi-capillaire polaire

Les trois alcanes sortent tous en mme temps : une colonne polaire ne permet pas de sparer
de faon efficace des composs apolaires.

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