Evaluacin Curso de Biologa Celular y Molecular.

MDULO I
1) En la clula eucariota el gen esta constituido por una regin reguladora y otra regin
estructural, encargada de portar la informacin necesaria para codificar la protena.

2)

El valor C es el nmero de ADN existente en un genoma haploide y no guarda

relacin directa con la cantidad de informacin gentica, pues es solo una porcin
del ADN la que codifica, razn por la cual muchas especies, menos complejas como
las algas, insectos o gusanos pueden tener un ADN de cadena ms larga, sin que
esto implique mayor complejidad, es decir no existe conexin entre el tamao del
genoma y su complejidad.

3) La expresin gnica en determinadas etapas de desarrollo o en determinados tipos

celulares, est regulada en su expresin a travs de factores y elementos (sistemas)
que actan activando su expresin o silencindolo, que se realiza a nivel del control
de la transcripcin.
Cuando se expresan actan en posicin Cis, promotores, enhancers y elementos
activadores.
Cuando no se expresan lo hacen en trans, por accin de silencers y elementos
represores, inhibiendo as la transcripcin.
MODULO II
1- Para la secuenciacin de un gen podemos usar la tcnica del PCR (reaccin en
cadena de polimerasa), Tcnica desarrollada por Kary Mullis en 1983, que se
basa en la replicacin del ADN por accin de una ADNpolimerasa, estas
enzimas realizan la sntesis de cadena complementaria del ADN y permiten
ampliar ms de mil millones de veces, siempre en sentido 5-3, usando como
molde la cadena sencilla. Cuyos pasos son los siguientes

Paso 1- Diluir la muestra de ADN en un Buffer que contiene: MgCl, DNTPS,

con los primers previamente diseados y la Taq Polimerasa.
Paso 2- Programacin cclica: 1) Desnaturalizacin a 95 2) Hibridacin 60 3)
Amplificacin a 72.
2- En la tcnica de la PCR se deben usar 2 primers, cebadores o aceleradores,
constituidos por 20 pares de bases de longitud, cuyas secuencias corresponden a
las extremos de las cadenas de ADN que se quiere reproducir.
3- Annealing, en su traduccin literal significa: recocido, proceso de templado por
calefaccin y refrigeracin. Y se trata del proceso a travs del cual el ADN se
lleva a 95 luego se lo baja a 60 para forzar la hibridacin o
complementacin de los primers.
MDULO III.
1) Describa brevemente en qu consiste el sistema de vectores de clonacin que utilizan la
tecnologa Gateway. Cul sera la ventaja del mtodo?
1) El sistema de clonado Gateway es una herramienta de Invitrogen basada en la
recombinacin sitio especfica del fago . sta permite la transferencia de segmentos de
ADN, entre los vectores Gateway o cualquiera que sea convertido, manteniendo la
orientacin y el marco de lectura, sin necesidad de digestin con enzimas de restriccin,
purificacin por gel y ligacin. La mezcla de enzimas conocida bajo el nombre LR
Clonase II es una mezcla de enzimas constituida por 3 protenas recombinantes, la
integrasa (Int) y excisasa (Xis) de bacterifago lambda y un factor de integracin en el
hospedador (IHF) de E. coli. Una vez que la secuencia de inters se clona en el vector de
entrada al sistema Gateway, sta queda flanqueada por los sitios de recombinacin attL1 y
attL2. Por otro lado cada uno de los vectores destino posee los sitios de recombinacin
attR1 y attR2 flanqueando el gen ccdB. De este modo, cuando se incuba el vector de
entrada con cualquiera de los vectores destino (en la reaccin denominada LR) los sitios
att1 y att2 recombinan y ocurre un intercambio de secuencias entre los vectores,
conservando orientacin y especificidad, debido a que attL1 slo reacciona con attR1, y
attL2 con attR2. Luego del evento de recombinacin se obtiene el plsmido destino con la
secuencia de inters (con los sitios attR convertidos en attB) y un producto secundario: el
vector pENTR con el gen ccdB. Luego de transformar las bacterias, para seleccionar el
plsmido deseado basta con hacer crecer en placa con antibiotico (resistencia conferida por
los vectores destinos). De este modo, , eliminan los vectores originales y el producto
secundario es reconocido.Las ventajas del sistema Gateway radican en que permite la
clonacin en vectores sin necesidad de digestin y ligacin, adems permite la transferencia
de los insertos generados a diferente tipo de vectores dependiendo de los intereses del
investigador.

2) Cules son los vectores de clonacin que permiten insertar fragmentos de

mayor tamao? Porqu han sido superados por otro tipo de vectores? Cules son
estos ltimos?
2) Los vectores de clonacin utilizados para insertar fragmentos de mayor
tamao son los YACs (cromosomas artificiales de levaduras) con capacidad de
albergar 200kb-3000kb, que debido a su gran inestabilidad han sido superados y
reemplazados por los BACs (Cromosomas artificiales bacterianos)
3 El proyecto Rosita ISA desarrollado por el INTA es un ejemplo de clonacin
y doble transgnesis que nos puede ilustrar con precisin sobre estos procesos:
Objetivo del experimento
En general podemos decir que se trata de insertar en el ncleo de una clula
genes que expresen caractersticas deseadas y clonarla luego para que el animal
tenga una propiedad buscada. En este caso en particular se trata de generar una
transgnesis y clonar una vaca capaz de segregar leche maternizada(con
Lisozimas y Lactoferrinas) para consumo humano.
Origen y funcin del fragmento de inters a clonar: genes generadores de
Lisozima y Lactoferrina, extrada de clulas humanas.
Tipo y vector de clonacin que va a utilizar: En el caso de Rosita ISA se
utiliz un concepto innovador en el que el vector (vehculo gentico) debi
construirse especialmente por mtodos de ingeniera gentica para permitir la
expresin de dos protenas humanas en un mismo ARN mensajero (los
organismos eucariotas en su gran mayora expresan una protena por cada ARN
mensajero).
Tipo de clulas receptora del vector recombinante: se hicieron en cultivo de
fibroblastos provenientes de clulas de piel de la oreja de una vaca donante de
raza Jersey, en donde a travs del vector portador del material gentico se
transafectaron al ncleo de estas clulas, en el siguiente paso se realiz
transferencia nuclear a un ovocito.
Mdulo IV. Marcadores moleculares. Describa tipos de marcadores
moleculares.
La primer gran divisin de marcadores es la de Marcadores morfolgicos y
Marcadores moleculares, los primeros han sido usados por el hombre desde la
antiguedad.
Se consideran marcadores morfolgicos a los caracteres de un individuo que se
expresan en un ambiente especfico y que el hombre identifica con un objetivo
determinado son de base emprica y responden a la asociacin de ciertas
caractersticas con ciertas aptitudes. Por ejemplo, en los rboles de pino
podemos usar como marcadores morfolgicos el peso o tamao de la semillas,
pues se ha visto que dicha caracterstica se asocia en la mayora de las
poblaciones con la supervivencia, el crecimiento y la reproduccin.

Por otro lado los marcadores moleculares corresponden a cualquier gen cuya
expresin permite un efecto cuantificable u observable (caractersticas
fenotpicas), que adems puede detectarse fcilmente. Este tipo de marcadores
pueden evaluarse desde que los individuos estn en sus primeros estadios de
desarrollo y se pueden aplicar usando a todo el individuo o slo parte de l. Se
habla de marcadores genticos cuando se transmiten segn las leyes bsicas de
la herencia mendeliana, por lo que es importante destacar que no todos los
marcadores moleculares pueden considerarse como genticos, por otro lado
estn los marcadores fenotpicos que a su vez pueden ser morfolgicos o
biqumicos.
Como se detectan los marcadores genotpicos? Existen varias tcnicas para
identificar marcadores de ADN, las que se pueden agrupar en tres categoras: las
de hibridacin tipo Southern, las de reaccin de polimerizacin en cadena (PCR)
y las que combinan PCR o sus productos de ADN con la hibridacin tipo
Southern.
MODULO V.1) Mediante que tcnica validara los resultados obtenidos de un
anlisis de transcriptnica por RNAseq?
1 )A travs del anlisis de transcriptmica por RNA seq. es posible la caracterizacin
completa y el anlisis global de la expresin gnica de una clula o tejido, aun sin ninguna
informacin genmica previa. El RNA-seq da una cobertura completa de transcriptos,
genera informacin no solo de la secuencia, sino tambin de la estructura de exones y
posibles eventos de splicing alternativo. La informacin de esta manera puede ser integrada
e interpretada, y se constituye de gran utilidad para vislumbrar procesos biolgicos y
mecanismos de coexpresin. Al igual que con los microarray se pueden validar sus
resultados a travs de Real Time PCR (qPCR) que puede amplificar y cuantificar
simultneamente el producto de la amplificacin. Al contar con una sustancia marcada con
un fluorforo, el ciclador con sensores mide la fluorescencia emitida permitiendo as medir
la tasa de generacin de uno o ms productos especficos.
Dicha medicin, se realiza luego de cada ciclo de amplificacin.

MODULO VI- Preguntas del mdulo de transgnicos.

1)Defina animal transgnico: Se refiere a un animal en cuyas clulas se ha introducido un
fragmento de ADN exgeno o extrao en su genoma de modo tal que se mantenga estable,
que sea capaz de transmitirse a su progenie de forma hereditaria. Ya se han obtenido ranas ,
ratones, cerdos, ovejas y vacas transgnicas, entre otras especies.

Microinyeccin de ADN en cigotas: Se somete a las hembras a un tratamiento hormonal

para provocar una superovulacin en el que se aslan un nmero grande de vulos
fertilizados, luego se realiza la fertilizacin de estos vulos que puede hacerse in vitro o in
vivo. En el paso siguiente los cigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una
micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene el ADN que interesa
transafectar, stos vulos fecundados son insertados por transplante embrionario en
hembras nodrizas que realizan la gestacin, luego de nacidos se chequean para constatar si
la transgnesis fu exitosa.
Microinyeccin de ADN en clulas madre: Implica la introduccin de ADN extrao en
clulas embrionarias madres (clulas EM), son clulas que se toman del interior de una
blstula en desarrollo y se pasan a un medio donde se frena su diferenciacin y se
mantienen en estado embrionario, con el ADN extrao se realiza la transfeccin en las
clulas madres que son reintroducidas en una blstula y reimplantadas en una hembra
gestante. Los neonatos resultantes de esta tcnica se denominan quimeras porque sus
tejidos estn constitudos por clulas de origen distinto.
4) Cual es la diferencia entre clonar un gen y la clonacin biolgica.
Clonar un gen es aislar y replicar secuencias determinadas de una zona o regin del
ADN, la clonacin biolgica en cambio implica la clonacin completa del genoma
de un organismo vivo.