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CENTRO DE CINCIAS DA SADE CCS

Departamento de Microbiologia e Parasitologia

Disciplina de Microbiologia Geral

CRESCIMENTO MICROBIANO. (2.4)


1. INTRODUO.
No reino animal, as clulas existem em um ambiente constante e quase timo;
elas esto banhadas em uma soluo isotnica que mantida em pH e temperatura
adequados. Diferentemente, os micrbios esto em contato ntimo com um ambiente que
pode mudar de repente e tornar-se ameaador; portanto, no devemos ficar surpresos com
o fato de que a maioria dos microorganismos desenvolveu um conjunto de mecanismos
para enfrentar estresses e mudanas ambientais.
Quando abordamos o tema crescimento microbiano, estamos nos referindo ao
nmero de clulas, no ao tamanho delas. Os microrganismos exibem os mais diversos
mecanismos nutricionais para o seu crescimento. Em relao aos procariotos (Bacteria e
Archaea), a nutrio ocorre predominantemente pela absoro, uma vez que a grande
maioria destes organismos possui uma espessa parede celular, impossibilitando a
realizao de fagocitose.
A nutrio microbiana pode ser definida como um mecanismo que fornece s
clulas as ferramentas qumicas necessrias sntese dos diversos monmeros para o seu
desenvolvimento. Essas ferramentas qumicas correspondem aos nutrientes. Nem todos
os nutrientes so necessrios nas mesmas quantidades; os macronutrientes so
necessrios em grandes quantidades. Em contrapartida, os micronutrientes ou elementos
traos so requeridos em menores quantidades.
Os fatores necessrios para o crescimento microbiano podem ser divididos em
duas categorias principais: fsicos e qumicos. Os fatores fsicos incluem temperatura, pH
e presso osmtica. Os fatores qumicos incluem fontes de carbono e nitrognio
(principais macronutrientes), enxofre, fsforo, potssio, magnsio, clcio e sdio (outros
macronutrientes), micronutrientes, fatores orgnicos de crescimento e oxignio.
2. FATORES FSICOS.
2.1 Temperatura:
A maioria dos microorganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres
humanos e animais. Contudo, certas bactrias so capazes de crescer em extremos de
temperatura que certamente impediriam a sobrevivncia de quase todos os organismos
eucariticos.
Os microorganismos so classificados em trs grupos principais, com base em sua
faixa preferida de temperatura: os psicrfilos, que crescem em baixas temperaturas (Fig.
02); os mesfilos, que crescem em temperaturas moderadas; e os termfilos, que crescem
em altas temperaturas.
Cada espcie bacteriana cresce a uma temperatura mnima, tima e mxima
especfica. A temperatura mnima de crescimento a menor temperatura na qual a
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espcie pode crescer. A temperatura tima de crescimento a temperatura na qual a


espcie cresce melhor. A temperatura mxima de crescimento a maior temperatura na
qual o crescimento possvel.

Fig. 02 Psychromonas ingrahamii o psicrfilo campeo,


crescendo a uma temperatura de 12 C.
A refrigerao o mtodo mais comum de preservao dos alimentos e tem como
base o princpio de que as velocidades de reproduo microbiana decrescem nas baixas
temperaturas, podendo ficar totalmente dormentes em temperaturas prximas do
congelamento. A temperatura dentro de um refrigerador bem ajustado retardar muito o
crescimento da maioria dos organismos deteriorantes, impedindo o crescimento da maior
parte das bactrias patognicas.
Os microorganismos mesfilos (temperatura de crescimento entre 25 e 40C) so
os microorganismos mais comumente encontrados. Os microorganismos que se
adaptaram a viver dentro dos corpos dos animais geralmente tm uma temperatura tima
prxima daquela de seus hospedeiros. A temperatura tima de crescimento para a maioria
das bactrias patognicas de cerca de 37C, e as estufas para culturas clnicas em geral
so ajustadas nessa temperatura. Os mesfilos incluem a maioria dos organismos
deteriorantes e patognicos.
Os termfilos so microorganismos capazes de crescer em temperaturas altas,
com uma temperatura tima de crescimento em torno de 50 a 60C. Os endofilosporos
formados por bactrias termfilas so anormalmente resistentes alta temperatura e
podem sobreviver ao tratamento trmico aplicado aos alimentos enlatados. Embora
temperaturas elevadas de estocagem possam causar a germinao e o crescimento desses
endsporos, levando a deteriorao dos alimentos, essas bactrias termfilas no so
consideradas um problema de sade pblica. Encontram-se usos industriais para as
protenas termoestveis de vrios termfilos. Por exemplo, proteases termoestveis so
amplamente usadas em detergentes de lavanderia, pois no somente apresentam uma vida
til maior, mas tambm possuem uma atividade mais alta, podendo ser utilizadas em
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quantidades menores. No laboratrio, as DNA polimerases termoestveis simplificam a


tecnologia da reao em cadeia da polimerase (PCR) usada para amplificar quantidades
minsculas de DNA. A PCR requer alternncia da mistura de reao entre temperaturas
altas e baixas, e o uso de uma polimerase termoestvel torna desnecessria a adio de
uma nova enzima aps cada ciclo de aquecimento.
Pode-se dizer que, entre os limites de temperatura mnima e mxima de
crescimento, os microorganismos sintetizam protenas especiais e ajustam a composio
de cidos graxos de suas membranas da melhor maneira possvel, ampliando ou
diminuindo a suas taxas de seu crescimento.
2.2 pH:
Os organismos devem manter um equilbrio constante entre cidos e bases para
permanecer saudvel. Se uma concentrao particular de cido ou base muito alta ou
muito baixa, as enzimas mudam de forma e no promovem de maneira eficiente as
reaes qumicas dentro da clula. No ambiente aquoso do interior dos organismos, os
cidos se dissociam em ons hidrognio (H+) e nions. As bases se dissociam em ons
hidrxido (OH) e ctions. Quanto mais ons hidrognio livres na soluo, mais cida ela
. Inversamente, quanto mais ons hidrxido esto livres na soluo, mais bsica ou
alcalina ela .
As reaes qumicas em sistemas vivos so extremamente sensveis mesmo nas
pequenas mudanas na acidez ou alcalinidade do ambiente no qual elas ocorrem.
Qualquer desvio em relao estreita faixa celular de concentraes normais de H+ e OH
pode modificar de forma drstica as funes celulares. Portanto, os cidos e as bases que
so continuamente formadas nos organismos devem ser mantidos em equilbrio.
A maioria das bactrias cresce melhor em uma faixa estreita de pH perto da
neutralidade, entre 6,5 e 7,5. Poucas bactrias crescem em um pH cido abaixo de 4. Essa
a razo pelas quais muitos alimentos como o chucrute, picles e muitos queijos so
protegidos da deteriorao pelos cidos produzidos pela fermentao bacteriana. No
entanto, algumas bactrias chamadas de acidfilas, so resistentes a acidez. Ex.
Helicobacter ssp., bactria responsvel por gastrite aguda, lceras (gstricas e duodenais),
dor abdominal e at cncer no homem e animais (Fig. 03).
Fig. 03 Helicobacter pylori
(esquerda) e H. felis (direita).
Bactrias gram-negativas, de forma
espiralada, que acometem humanos
e animais, colonizando o trato
digestrio superior, principalmente
estmago.

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As alcalfilas so bactrias que crescem em lagos de soda custica nos desertos do


Oeste americano, em pH 11,5.
Os procariotos em vez de se adaptarem ao pH desfavorvel, como fazem em
relao temperatura desfavorvel, eles resistem ao mesmo bombeando prtons para
dentro ou para fora de suas clulas, mantendo, com isso, um pH interno quase constante.
2.3 Presso osmtica:
O homem adiciona sal a sua comida a fim de conserv-la, muito antes de saber
que o sal possua a propriedade de inibir o crescimento dos microorganismos que
estragam os alimentos.
No sculo XIX, a carne de porco salgada era o principal produto consumido pelos
marinheiros em longas viagens. Concentraes altas de sal interrompem completamente o
crescimento de microorganismos que esto presentes nos alimentos.
Um ambiente com uma alta presso osmtica apresenta dois desafios a um
microorganismo: (1) remove a gua necessria para as clulas, efetivamente dessecandoas, e (2) altera a presso de turgor da clula pela diferena de presso osmtica entre o
exterior e interior. Quando uma clula microbiana encontra-se em uma soluo cuja
concentrao de solutos mais elevada que dentro da clula (ambiente hipertnico), a
gua atravessa a membrana celular para o meio com a contrao mais elevada de solutos.
Essa perda osmtica de gua pode causar uma plasmlise, ou encolhimento do
citoplasma celular.
A importncia desse fenmeno que o crescimento da clula inibido assim que
a membrana plasmtica se separa da parede celular. Portanto, a adio de sais (ou outros
solutos) em uma soluo, e o aumento resultante da presso osmtica, pode ser utilizada
para preservar alimentos. Peixe salgado, mel e leite condensado so preservados por esse
mecanismo, sendo que as concentraes elevadas de sal e acar removem a gua fora de
qualquer clula microbiana presente e, consequentemente, impedem seu crescimento.
Alguns microorganismos, chamados de halfilos extremos, so to adaptados a
concentraes elevadas de sais que acabam requerendo a sua presena para que ocorra seu
crescimento. Nesse caso eles podem ser denominados de halfilos obrigatrios. Os mais
comumente encontrados so os halfilos facultativos, que no requerem concentraes
elevadas de sal, mas so capazes de crescer em concentraes de at 2% de sal, o que
inibe o crescimento de muitos microorganismos.
Se a presso osmtica anormalmente baixa (ambiente hipotnico), tal como a
gua destilada, por exemplo, a gua tende a entrar na clula microbiana em vez de sair.
Alguns microorganismos que apresentam uma parede celular relativamente frgil podem
ser lisados com esse processo.
2.4 Presso hidrosttica:
Presses hidrostticas altas (como aquelas encontradas nas grandes profundidades
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dos oceanos) podem esmagar e matar as plantas e os animais, mas no os micrbios. A


maioria dos microorganismos se protege da morte por esmagamento porque sua barreira
celular externa, incluindo a membrana celular, livremente permevel gua. Por meio
desse mecanismo, a presso dentro da clula microbiana rapidamente se equilibra com a
presso externa. Alguns procariotos so denominados barfilos, pois crescem mais
rapidamente em presses elevadas.
3. FATORES QUMICOS.
A terra realmente um planeta de microorganismos. As populaes microbianas
so to difundidas que se pode dizer que elas definem a extenso da biosfera: onde existe
vida, existem micrbios; onde no existem micrbios, no existe vida.
Uma caracterstica chave dos microorganismos corresponde sua capacidade de
realizar reaes qumicas e de organizar as molculas em estruturas especficas. O
resultado final dessa organizao o crescimento (replicao). Antes que a replicao
celular ocorra, uma variedade de reaes qumicas deve ser realizada pela clula, o
conjunto dessas reaes qumicas denominado metabolismo.
As reaes metablicas envolvem tanto a liberao de energia, denominadas
reaes catablicas, como o consumo de energia, denominadas reaes anablicas.
Passaremos agora a abordar agora os principais nutrientes para o desenvolvimento
microbiano.
3.1 Carbono:
Alm da gua, um dos fatores mais importantes para o crescimento microbiano o
carbono. O carbono o esqueleto estrutural da matria viva; ele necessrio para todos
compostos orgnicos que constituem uma clula viva. Metade do peso seco de uma clula
bacteriana composta de carbono. Estudos demonstram que as bactrias podem assimilar
vrios compostos orgnicos de carbono, utilizando-os na sntese de novos materiais
celulares. Aminocidos, cidos graxos, cidos orgnicos, aucares, bases nitrogenadas,
compostos aromticos e outros inumerveis compostos orgnicos podem ser utilizados
por uma ou outra bactria.
Alguns procariotos so autotrficos, isto , so capazes de sintetizar todas as suas
estruturas orgnicas a partir do dixido de carbono (CO2).
3.2 Nitrognio, enxofre e fsforo:
Alm do carbono, os microorganismos necessitam de outros elementos para
sintetizar o material celular. Por exemplo, a sntese de protenas requer quantidades
considerveis de nitrognio e enxofre.
Aps o carbono, o elemento mais abundante nas clulas o nitrognio. Uma
clula bacteriana tpica composta por cerca de 14% do seu peso seco de nitrognio. O
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nitrognio um importante elemento constituinte de protenas (aminocidos), cidos


nuclicos e vrios outros compostos celulares. Pode ser encontrado na natureza na forma
inorgnica (amnia NH3, nitrato NO3- ou N2) ou orgnica (compostos orgnicos
nitrogenados aminocidos e bases nitrogenadas dos nucleotdeos).
Algumas bactrias importantes, como muitas das cianobactrias fotossintticas
utilizam o nitrognio gasoso (N2) diretamente da atmosfera. Esse processo chamado de
fixao do nitrognio, e utilizado por microorganismos de vida livre, do solo e nas
razes das plantas leguminosas.
O enxofre necessrio devido ao seu papel estrutural nos aminocidos, cistena e
metionina, e tambm por estar presente em uma srie de vitaminas, como a tiamina,
biotina, cido liplico e na coenzima A. O enxofre sofre vrias transformaes qumicas
na natureza, muitas das quais realizadas exclusivamente por microorganismos, tornandose disponvel aos organismos sob vrias formas. Fontes importantes de enxofre incluem o
on sulfato (SO42-), o sulfeto (HS-) e os aminocidos contendo enxofre.
O fsforo essencial para a sntese de dos cidos nuclicos e dos fosfolipdeos
das membranas celulares. tambm encontrado nas ligaes de energia do ATP.
3.3 Outros macronutrientes (K, Mg, Ca e Na):
Todos os organismos requerem potssio (K), incluindo uma variedade de enzimas
envolvidas na sntese de protenas. O magnsio (Mg) possui importante papel na
estabilizao de ribossomos, membranas celulares e cidos nuclicos, alm da atuar
ativamente em muitas enzimas. O clcio (Ca) auxilia na estabilizao da parede celular e
desempenha papel-chave na termoestabilidade dos endsporos. O sdio (Na) requerido
apenas por alguns microorganismos, dependendo da influncia do hbitat no qual se
desenvolve. Ex.: microorganismos marinhos geralmente requerem sdio para o seu
crescimento.
3.4 Elementos traos (micronutrientes):
Os microorganismos requerem quantidades muito pequenas de elementos traos
(micronutrientes), como ferro, cobre, molibdnio e zinco. Embora necessrios em
pequenssimas quantidades, os elementos traos so fundamentais para o funcionamento
celular adequado dos macronutrientes, desempenhando papel estrutural em varias
enzimas.
Se um meio de cultura for confeccionado pela adio de compostos qumicos
altamente purificados e dissolvidos em gua destilada altamente purificada, poder haver
a deficincia de um ou mais elementos traos, prejudicando o desenvolvimento
bacteriano.

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3.5 Fatores de crescimento:


Os fatores de crescimento incluem vitaminas, aminocidos, purinas e pirimidinas.
Embora a maioria dos microorganismos seja capaz de sintetizar todos esses compostos,
no dependendo de fontes externas, alguns microorganismos os requerem pr-formados a
partir do meio. As vitaminas correspondem ao fator de crescimento mais comumente
requerido, como a tiamina (vitamina B1), biotina, piridoxina (vitamina B6) e colabamina
(vitamina B12).
3.6 Oxignio:
Estamos acostumados a pensar no oxignio (O2) como um elemento necessrio
para a vida, mas, em algumas circunstncias, esse elemento pode ser considerado um gs
txico. Houve pouco oxignio na atmosfera durante a maior parte da histria da terra,
sendo bem possvel que a vida no tivesse surgido se houvesse oxignio. Contudo, muitas
formas comuns de vida tm sistemas metablicos que requerem oxignio para a
respirao aerbica.
Os microorganismos que utilizam o oxignio molecular (aerbicos) produzem
mais energia a partir dos nutrientes que os microorganismos que no utilizam o oxignio
(anaerbicos). Os microorganismos que necessitam oxignio para viver so chamados de
aerbicos obrigatrios.
Os aerbicos obrigatrios tm uma desvantagem j que o oxignio pouco
solvel na gua, fazendo com que muitas bactrias desenvolvam ou mantenham a
capacidade de continuar a crescer na ausncia de oxignio. Tais microorganismos so
chamados de anaerbicos facultativos. Ex.: Escherichia coli
Em suma, os anaerbicos facultativos podem utilizar o oxignio quando ele est
presente, mas so capazes de continuar a crescer utilizando a fermentao ou respirao
anaerbica quando o oxignio no est disponvel. Contudo a sua eficcia em produzir
energia reduzida na ausncia do oxignio.
Os anaerbicos obrigatrios so bactrias incapazes de utilizar o oxignio
molecular para as reaes produtoras de energia. De fato, sendo prejudicial para muitos
deles. Ex.: Gnero Clostridium que provocam doenas como o ttano e o botulismo.
Os anaerbicos aerotolerantes no podem utilizar o oxignio para crescimento,
mas o toleram relativamente bem. Ex.: Lactobacilos utilizados na produo de alimentos
cidos fermentados, como queijos e picles.
Poucas bactrias so microaerfilas, as quais requerem oxignio, mas s crescem
em concentraes de oxignio inferiores a do ar. Em um tubo teste de meio nutritivo
slido, essas bactrias crescem apenas no fundo, onde somente pequenas quantidades de
oxignio difundiram-se no meio.

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4. MEIOS DE CULTURA.
Os meios de cultura correspondem a solues nutrientes utilizadas para promover
o crescimento dos microorganismos em laboratrio. Os microorganismos introduzidos
em um meio de cultura para iniciar o crescimento so chamados de inculo. Os
microorganismos que crescem e se multiplicam dentro ou sobre um meio de cultura so
denominados cultura.
Existem duas grandes classes de meios de cultura utilizados em microbiologia: os
quimicamente definidos e os indefinidos (complexos). Os meios quimicamente
definidos so preparados pela adio de quantidades precisas de compostos qumicos
inorgnicos ou orgnicos altamente purificados a uma determinada quantidade de gua
destilada. Assim sendo, a exata composio qumica de um meio definido conhecida.
Os meios complexos frequentemente empregam produtos da digesto de casena,
de carne, de soja, de leveduras ou de vrias outras substncias nutritivas. Tais produtos
encontram-se disponveis comercialmente na forma de ps, que podem ser pesados e
prontamente dissolvidos em gua destilada originando um meio de cultura, no qual a
composio qumica varia um pouco de acordo com o lote.
Os meios de cultura podem ser slidos ou lquidos. Os meios de cultura de
consistncia semi-solida so frequentemente preparados pela adio de um agente
gelificante aos meios lquidos. Tais meios de cultura slidos imobilizam as clulas,
permitindo que cresam e dem origem a massas isoladas, visveis, denominadas
colnias. As colnias bacterianas podem apresentar varias formas e tamanhos,
dependendo do microorganismo, das condies de cultivo, dos nutrientes fornecidos, da
quantidade de oxignio presente, alm de vrios outros parmetros fisiolgicos. Algumas
bactrias produzem pigmentos que tornam a colnia colorida. As colnias permitem ao
microbiologista analisar a pureza da cultura. Placas que contm mais de um tipo colonial
no so oriundas de uma cultura pura.

SUGESTO DE LEITURA:
MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M., PARKER, J. Microbiologia de Brock. So
Paulo: Pearson Education do Brasil, 2004, 608p.
SCHAECHTER, M., INGRAHAM, J.L., NEIDHARDT, F.C. Micrbio: uma viso
geral. Porto Alegre: Artmed, 2006. 547p.
TORTORA, G.J., FUNKE, B.R., CASE, C.L. Microbiologia. 10ed. Porto Alegre:
Artmed, 2012, 934p.

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