Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Resumen: La inmovilizacin de enzimas permite obtener enzimas en forma insoluble que retienen su actividad cataltica y pueden
ser reutilizadas repetitivamente, lo que brinda a la industria procesos econmicamente rentables. La prctica tuvo como objetivo
la inmovilizacin de papana, mediante cromatografa de intercambio inico, para la cual se utiliz gel de Sepharosa, tampn
Fosfato y BApNA como sustrato. Se realizaron medidas de absorbancia a 280 y 400 nm, con el fin de evidenciar la actividad
cataltica que presenta la papana inmovilizada. Con los datos obtenido, se realiz un cromatograma de absorbancia versus
tiempo, a partir de ello se evidenci la inmovilizacin y la retencin de la actividad enzimtica rferebte a la papana. Por lo
tanto, esta tcnica evidenci una alta eficiencia de inmovilizacin a pesar de ciertos inconvenientes ocurridos a lo largo de la
prctica.
Palabras clave: Inmovilizacin, enzimas, papana, cromatografa, absorbancia.
Abstract: The enzyme immobilization allows for obtain enzyme in insoluble form which retain their catalytic activity and can be
reused repeatedly, providing cost-effective processes to industry. This practice had as objective immobilization of Papain, by
using ion exchange chromatography, for which Sepharose gel, phosphate buffer and BApNa was used as substrate. Absorbance
measurements at 280 and 400 nm were conducted, to demonstrate that the immobilized papain has catalytic activity. With the data
obtained was drawn a chromatogram of absorbance versus time, representing that if Papain immobilization was obtained, and
this retained its activity. Indeed, this technique despite some inconveniences occurred along practice showed a high efficiency of
immobilization.
Keywords: Immobilization, enzymes, Papain, chromatography, absorbance..
1. MATERIALES Y METODOLOGA
La preparacin de la columna cromatogrfica, la preparacin
de la muestra y la alimentacin de la muestra fueron los
principales procesos que se desarrollaron para la
inmovilizacin enzimtica.
Inicialmente se realiz la preparacin de la columna
cromatogrfica, para ello se tom 100 mL de DEAE Sepharosa
CL-6B y elimin la solucin de etanol presente, con ayuda de
un FRITA y una bomba de vaco. Caso seguido, se suspendi
el gel en agua destilada y agit por un lapso de tiempo de diez
minutos. Una vez realizado el paso anterior, se coloc el gel
en el FRITA con el fin de realizar tres lavados consecutivos de
con agua destilada y solucin tampn, cabe mencionar que se
utiliz solucin tampn fosfato a pH de 7.5 y concentracin
de 50 mM. Posteriormente, se suspendi el gel en la solucin
tampn y empac la suspensin prepara a 5 cm del extremo
superior en la columna, se coloc el segundo pistn. Al final
de esta etapa, se lav cuidadosamente durante 30 minutos el
sistema con la solucin tampn para evitar el agrietamiento en
la Sepharosa que se pueda producir.
La preparacin de la muestra es considerada como la siguiente
etapa del proceso de inmovilizacin enzimtica. Durante esta
etapa se determin, con ayuda de un conductmetro, la
conductividad del tampn utilizado para equilibrar la columna.
3. CLCULOS
3.2. Clculo del tiempo
3
= # 1
[Ec. 1]
Dnde:
t : Tiempo en (min)
# fraccin: nmero de tubos que se han tomado en la muestra
3
= 17 = 51
1
4.1. Resultados
1,2
1
Absorbancia
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
0,8
0,6
0,4
0,2
0
-0,2 0
20
40
Tiempo (min)
60