REFRESCAMIENTO, CARACTERIZACION Y EVALUACION DEL BANCO

GERMOPLASMA DE QUINUA. (Wilfredo Rojas. IBTA. Patacamaya-Bolivia).

DE

El programa de quinua del IBTA di-pone de un banco de germoplasma de 2032

entradas. Esta
Diversidad gentica comprende accesiones de toda la regin andina, desde el
Ecuador hasta el noreste Argentino, as como quinuas de nivel del mar
cultivadas en Chile.
Se caracteriz y evalu en su integridad todo material, los 35 descriptores
registrados estn relacionados con la morfologa de la planta y sobre todo con
las caractersticas ligadas al rendimiento.
El objetivo es determinar los patrones de variabilidad gentica en base a
caracteres observables y no observables. Adems identificar materiales con
potencial para encarar los futuros trabajos de investigacin.
El color de la panoja antes de la madurez fisiolgica fue Verde en 46% de las
accesiones, purpura en 39%, mixtura en 1 % y rojo en 14%. La forma de panoja
es glomerulada en 60% del Material, amarantiforme en 380/) a intermedia en
2%.
El periodo vegetativo esta entre 115 a 210 das entre precoces y tardas. Se
cuenta con 275 accesiones tolerantes al milidiu (0% de incidencia). En cuanto
al rendimiento se encontr accesiones que superan los 250 gr/planta.
El Altiplano Sur es considerado como zona potencialmente productora de
Quinua Real, la produccin se increment en los ltimos aos, debido a una
demanda por sus cualidades nutricionales, por el tamao grande del grano y su
valor estratgico para las condiciones ridas del altiplano, destacndose su
resistencia a heladas, salinidad y sequas predominantes que son factores
adversos de tipo abitico en las zonas altas de Los Andes.
A pesar de ser la regin Sudamrica el centro de origen de la quinua y contar
con gran variedad gentica y morfolgica, no se cuenta con variedades que
satisfagan las expectativas de los agricultores. Los ecotpos de quinua real han
sido domesticados y seleccionados por nuestros antepasados, por lo que se
encuentran adaptados a las condiciones adversas. Actualmente, para la
produccin de quinua real se emplea la semilla local, de ah la imperiosa
necesidad de continuar los trabajos destinados a seleccionar genotipos
superiores
a
los
actualmente
cultivados.
Como consecuencia del manejo tradicional de la semilla, junto a las
caractersticas genticas y biologa reproductiva de la quinua, los ecotpos de
quinua real presentan una variacin en cuanto a pureza en color de planta,
color de grano, forma de panoja, ciclo productivo, etc. Esta situacin conduce a
cierta heterogeneidad que dificulta el manejo del cultivo y pone en riesgo la
identidad de los ecotpos. Por tanto, es necesario desarrollar pautas tcnicas
para la produccin de semilla de los ecotpos comerciales de quinua real y de
esa forma ayudar a mantener la pureza y aprovechar de sus bondades como

cultivo y como producto, para lo cual se recurre al cultivo in vitro, que es una
herramienta que nos permite obtener plantas saneadas, manteniendo la
pureza varietal, las caractersticas morfolgicas y genticas idnticas al de la
planta madre en un corto tiempo; y como punto de partida es necesario
determinar un protocolo para la micropropagacin de los ecotpos de quinua
real.
Objetivo general:
Obtener un protocolo adecuado, para la produccin in vitro De ecotpos de
quinua Real.
Objetivos especficos
Determinar el estado fsico del medio de cultivo, lquido o semislido ms
adecuado para las fases del cultivo in vitro, Evaluar la influencia de los
reguladores de crecimiento, en el cultivo in vitro. Como hiptesis planteada
se tiene:
Ho = No existe diferencia estadsticamente significativa en la produccin de
vitro plantas con la aplicacin de diferentes medios de cultivo. 1 = 2 = 3
= 4
Ha = La produccin de vitro plantas es diferente con al menos una aplicacin
de
los
medios
de
cultivo.
1
=
2

4
La investigacin se realiz en el laboratorio de biotecnologa, que tuvo 3 fases
fundamentales, la fase (I) Establecimiento, Fase(II) Multiplicacin y fase (III) de
enraizamiento, para la iniciacin del cultivo in vitro, se prepararon medios de
cultivo segn composicin qumica requerida, utilizando los equipos y
materiales de laboratorio, posteriormente en la cmara de flujo laminar se
realiz la desinfeccin del material gentico, luego se sembraron en los
medios de cultivo y despus de un tiempo se realizaron 3 subcultivos o
repiques.
Los resultados obtenidos en la fase(I) fueron: un 0% de contaminacin, con una
concentracin de hipoclorito de sodio al 2%, con el medio de MS al 50% de su
concentracin, en estado lquido, durante 7 das, adecuado para el desarrollo
de las semillas de quinua, sobresaliendo los ecotipos: Pisankalla con los
reguladores B+A(BAP 5ml/l+AIA 5ml/l), el testigo tambin es adecuado para
obtener un buen porcentaje de sobrevivencia, y longitud vitro planta. En esta
fase (II) de multiplicacin, se realizaron 3 repiques con intervalos de: 30, 33 y
70 das. Se utiliz cantidades equilibradas entre auxinas y citoquininas, para la
multiplicacin de los propgulos. La combinacin de KIN+AIA a una
concentracin de 150 ppm, (6-furfuril ademina 7.5 ml/l + Acido indol-3-actico

7.5ml/l) estimul la proliferacin de brotes, el alargamiento de los propgulos

y el rompimiento de la dominancia apical. Obtenindose mayor nmero de
brotes con los ecotipos, Real Blanco Punta (4) con 2.38 brotes/VTP. y una
media de 1.55 cm longitud/VTP`s con el ecotipo Real Blanco. La fase (III) de
enraizamiento tiene por finalidad el enraizamiento de las VTP`s, se utiliz el
medio MS y los reguladores (auxinas): IBA, ANA y la mezcla de ambos. donde
el regulador IBA a una concentracin de 100 ppm/l (cido indolbutrico 10ml/l)
fue
efectivo
para
la
induccin
de
races.

Se concluye que el medio adecuado es el propuesto por MS al 50% de su

concentracin para la fase I sin ningn regulador y 100% de su concentracin
en las fases II y III, el mejor estado es lquido en las fases I y III, y semislido
para la fase II, los reguladores mas adecuados son: KIN+AIA, BAP+AIA e IBA.
Se recomienda trabajar con el medio MS (1962) al 50% de su concentracin,
para las tres fases de laboratorio, y trabajar en la etapa de multiplicacin en
estado slido, es necesario experimentar para ajustar las concentraciones de
reguladores de crecimiento, de manera que se mejore la tasa de multiplicacin
y la produccin de vitroplantas uniformes, y trabajar con los ecotipos: Real
Blanco Punta, Kellu, Toledo, Real Blanco

Micropropagacion de cereales
Micropropagacin in vitro como tcnica utilizada en viveros. La
micropropagacin consiste en la obtencin de una descendencia de plantas
genticamente idnticas a partir de un fragmento de una planta (explante)
cultivado in vitro en un medio de cultivo (sales minerales, vitaminas y
reguladores de crecimiento) y condiciones ambientales adecuados . Como
explantes suelen utilizarse yemas o brotes de pequeo tamao que deben
desinfectarse antes de ser cultivadas para evitar contaminantes que proliferen
durante su establecimiento en el medio de cultivo. Las fases del proceso son: i)
establecimiento del cultivo in vitro; ii) fase de multiplicacin o proliferacin; iii)
fase de enraizamiento (que puede realizarse in vitro o ex vitro); y iv)
aclimatacin a suelo (Pierik, 1990). Esta tcnica se ha utilizado para la
multiplicacin de ornamentales, de genotipos generados en programas de
mejora gentica, as como de cualquier especie de la que se deseen obtener
plantas genticamente idnticas. En este sentido, la micropropagacin de
especies empleadas como patrones de frutales est jugando un papel
importante en viveros en los que la utilizacin del injerto como mtodo de
propagacin que se desarroll en la antigedad, probablemente en
Mesopotamia, presentaba limitaciones importantes debido a que la
multiplicacin por semilla de las especies utilizadas como patrones conllevaba
problemas asociados a la segregacin gentica de sus caracteres agronmicos.

Procesos

Preparacin de la planta madre

Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener
explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para
obtener estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre, es
decir la planta donante de yemas, durante un perodo que puede oscilar entre
unas semanas o varios meses en un invernadero bajo condiciones controladas.
En ese ambiente se cultiva la planta en condiciones sanitarias ptimas y con un
control de la nutricin y riego adecuados para permitir un crecimiento vigoroso
y libre de enfermedades.
Desinfeccin del material vegetal
Una vez elegida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de los
cuales se obtendrn los explantos. Los explantos pueden ser yemas, trozos de
hojas, porciones de races o semillas. Antes de extraer los explantos se har
una desinfeccin de los fragmentos de planta madre para eliminar los
contaminantes externos. Los contaminantes ms comunes son los hongos y
las bacterias que

habitan

en

forma

natural

en

el

ambiente.

Una

vez

desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia.

A efectos de obtener tales condiciones, se trabaja en cabinas de flujo laminar
para extraer los explantos a partir del material vegetal. Estos explantes se
introducirn en un tubo de cultivo conteniendo medio de cultivo para poder
controlar la sanidad y la viabilidad, luego de realizar la desinfeccin del
material con hipoclorito de sodio (agua clorada comercial), pura o diluido
durante un perodo de 5 a 15 minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en agua
esterilizada.
Introduccin del material in vitro
Luego de la desinfeccin superficial, las semillas o las yemas dependiendo del
material seleccionado, se ponen en medio de cultivo estril. En un perodo de
una semana o quince das, comienza el proceso de germinacin o regeneracin
de nuevos tejidos vegetales, iniciando el ciclo de cultivo in vitro.
Multiplicacin de los brotes
Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron las fases
anteriores originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas.
En la base de cada hoja hay una yema que se desarrollar luego de ser puesta
en contacto con el medio de cultivo. Peridicamente estos nuevos brotes se
deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en

tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan

en la bolsa de flujo laminar o en un lugar aislado que nos permita mantener las
condiciones de asepsia. De esta forma aumenta el nmero de plantas en cada
repique o divisin de las plantas. El nmero de plantas que se obtiene
depender de la especie vegetal y de las condiciones del medio de cultivo. El
nmero de plantas que se obtiene por la va de la micropropagacin permite
alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los factores que
afectan el crecimiento hayan sido optimizados.
Eleccin de un medio de enraizamiento de los explantos
Para enraizar los explantos se utilizan principalmente plantines individuales de
un tamao aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos durante la fase de
multiplicacin se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento o
que solo contenga hormonas del tipo de las auxinas. Algunas especies de
plantas no necesitan pasar por esta etapa y emiten sus races en el mismo
medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de
multiplicacin y enraizamiento transcurren en forma simultnea.
Aclimatacin de los explantos enraizados
Los explantos recin enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales,
de manera que el xito o el fracaso de todo el proceso depende de la
aclimatacin. En esta etapa las plantas sufrirn cambios de diferente tipo que
permitirn la adaptacin de las mismas a vivir en condiciones naturales. En el
momento en que se extraen los explantos o plantines enraizados de los
frascos, estn poco adaptados a crecer en un invernculo, ya que estos
explantes han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa
muy elevada y generalmente tienen estomas (estructuras responsables de
regular la transpiracin y prdida de agua en la planta) que no son
completamente funcionales frente a descensos de la humedad relativa, y por lo
tanto demasiado lentos para evitar la desecacin del explante. Por otra parte,
crecer en ambientes tan hmedos tambin suele implicar la falta de una
cutcula con cera bien desarrollada, que representa la barrera fsica para evitar
la prdida de agua a lo largo de toda la superficie de la planta. Los plantines
enraizados, deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del
invernadero

disminuyendo

progresivamente

la

humedad

relativa

incrementando progresivamente la intensidad de luz. Estos plantines se

plantarn en contenedores (almacigueras) cubiertos por un plstico, para
mantener la humedad relativa elevada. La eleccin de un sustrato con buenas
caractersticas fsicas, es clave para el xito de esta etapa. Para el trasplante,

elegimos un sustrato suelto, poroso, con mezcla de arena turba, cscara de

arroz quemad , para permitir un desarrollo y crecimiento de races muy rpido.
Las mezclas son diferentes y muy variadas de acuerdo a la especie con la que
estamos trabajando. Luego de retirar cuidadosamente el agar de las races
para evitar daarlas, los plantines se enjuagan y se colocan en almacigueras
con la mezcla de sustratos seleccionada y cubiertos con nylon. Todos los das
se debe controlar el nivel de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se
aplica un riego con una pulverizadora manual, para mantener un ambiente
hmedo a nivel del sustrato. A los 15 das del trasplante, se puede comenzar a
levantar la cobertura de nylon en las horas de menor calor( temprano en la
maana o en la ltima hora de la tarde). Al comienzo las plantas se dejan
media hora por da destapadas. A la semana siguiente se dejan destapadas
durante una hora. Al mes del trasplante, se dejan tapadas durante la noche y si
hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden permanecer destapadas.
Las condiciones del cultivo in vitro , generan cambios en algunos aspectos
anatmicos y fisiolgicos de las plantas, por esta causa, durante la
aclimatacin, los cambios deben ser muy graduales, para minimizar el estrs y
tener mayor tasa de sobrevivencia.

REFERENCIAS

Villalobos, V. M. (1989). PERSPECTIVAS DE LA BIOTECNOLOGA PARA

EL MEJORAMIENTO GENTICO Y LA PROPAGACION VEGETAL EN
AMERICA CENTRAL. Oportunidades de Las Biotecnologas Agropecuarias
en Amrica Central, 71.

Melgarejo, P., Romagosa, I., & Duran, N. (2014). Biotecnologa

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Copa Romero, M.(2014). Protocolos en la produccin invitro de 6 ecotipos
de la quinua real chenopiun quinoa, will en el centro de investigacin en
biotecnologa y recursos filogenticos. Universidad tcnica de Oruro
facultad de ciencias agrcolas pecuarias y veterinarias carrera de fitotecnia
Gordo, D. A. M., Gonzalez, O. C., & Pacheco, J. C. (2015). Sustancias
utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo
para propagacin in vitro. Revista de Investigacin Agraria y Ambiental
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