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Transcripción  

Consiste  en  la  síntesis  de  ARN  tomando  como  molde  ADN  y  significa  el  
paso  de  la  información  contenida  en  el  ADN  hacia  el  ARN.  
 

Se  puede  considerar  el  primer  paso  en  la  transferencia  de  
información  de  un  gen  a  un  producto  de  un  gen.  

Estructura  del  gen  y  el  mensajero  
procariota  

Introducción  a  la  transcripción  
•  Mediante  secuenciación,  los  cienDficos  pueden  esEmar  el  número  de  
genes  de  las  diferentes  especies  (E.  coli=3200,  S.  cerevisiae=  6300,  D.  
melanogaster=  13600).  
•  Humanos?  ~20000  genes.  
•  Corte  y  empalme  alternaEvo  permiten  que  estos  genes  codifiquen  
para  ~  100000  proteínas  
•  Genes  en  eucariotas  están  compuestos  de  secuencias  llamadas  
exones  (codificantes)  y  secuencias  llamadas  intrones  (no  
codificantes)  
•  En  eucariotas,  usualmente  una  fracción  pequeña  (~2%)  del  genoma  
codifica  para  proteína.  En  procariotas  hay  una  alta  densidad  de  genes  
por  genoma.  
 

•  En  las  bacterias  la  transcripción  y  la  traducción  Eenen  lugar  en  el  
citoplasma  bacteriano  y  al  mismo  Eempo,  son  simultáneas.  Sin  
embargo,  en  eucariotas  la  transcripción  Eene  lugar  en  el  núcleo  y  la  
traducción  en  el  citoplasma.  
•  En  eucariotas,  antes  de  que  los  RNA  estén  listos  para  ser  
transportado  al  citoplasma  para  la  traducción,  debe  ser  procesado  
extensivamente  lo  que  incluye  la  eleminación  de  intrones  y  la  
adición  de  un  casquete  en  el  extremo  5’  y  una  cola  de  múlEples  
adeninas  en  el  extremo  3’  
•  Un  RNA  completamente  procesado  llamado  RNAm  es  el  
intermediario  en  la  síntesis  de  proteína  
•  Ambos  procariotas  y  eucariotas  Eenen  otros  Epos  de  RNA  (ncRNA)  
que  nunca  son  traducidos,  pero  que  llevan  a  cabo  roles  importantes  
en  la  célula  
 
•  Las  interacciones  de  DNA  y  RNA  se  llevan  a  cabo  especialmente  
debido  a  complementariedad  de  bases  y  la  unión  de  varias  
proteínas  a  siEos  específicos  del  DNA  o  RNA  

1  

 mediante  los  procesos  de  transcripción.  La  información  contenida  en  el  ADN  se  expresa   dando  lugar  a  proteínas.  se  empareja  con  Adenina.  RNA  mensajero  (mRNA):  conMene  la  información  para  síntesis   de  proteínas   2.   Modificaciones  del  "Dogma  Central  de  la  Biología  Molecular"   Propiedades  del  RNA   -­‐Una  cadena.  no  doble  hélice.  paso  por  el   que  la  información  se  transfiere  a  una  molécula  de  ARN  mensajero  (ARN-­‐m)  y.     -­‐Catalizador  biológico  -­‐>  Ribozima.4/9/14   “Dogma  Central  de  la  Biología  Molecular”   La  información  genéEca  contenida  en  el  ADN  se  manEene  mediante  su   capacidad  de  replicación.   Diferencias  entre  DNA  y  RNA   Las  moléculas  de  RNA  pueden  ser  divididas  en   dos  categorías     1.  Apareamiento  intramolecular.  Moléculas  de  RNA  que   funcionan  como  enzimas   En  una  ciencia  como  la  GenéEca  no  debería  emplearse  la  palabra  "dogma"  ya  que   como  se  puede  ver  en  muy  poco  Eempo  el  fundamento  central  de  la  Biología   Molecular  propuesto  por  Crick  tuvo  que  ser  modificado.  RNA  funcional     -­‐RNA  de  transferencia  (tRNA):  responsables  de  llevar  el  aminoácido  (aa)   correcto  al  RNAm  durante  la  traducción   -­‐RNA  ribosómico  (rRNA):  Componente  principal  de  los  ribosomas  que  es   donde  se  lleva  a  cabo  el  ensamblaje  de  aa  por  el  RNAm  y  RNAt   -­‐RNA  nuclear  pequeño  (snRNA):  Procesamiento  de  transcritos  de  RNA  en   eucariotas   -­‐MicroRNA  (miRNA):  regulación  de  producción  de  proteínas  en  eucariotas   -­‐RNA  de  interferencia  pequeño  (siRNA)  y  piRNA:  protegen  la  integridad  de   genomas  de  plantas  y  animales   -­‐RNA  no  codificante  largos  (ncRNA):  Su  función  esta  bajo  invesEgación   2   .     -­‐Azúcar  ribosa  (OH  en  el  carbono  2’)  en  vez  de  desoxiribosa     -­‐Esqueleto  azúcar-­‐fosfato  en  posiciones  5’-­‐3’  del  azúcar  como   DNA     -­‐Uracilo  en  vez  de  Timina.   mediante  el  proceso  de  la  traducción  el  mensaje  transportado  por  el  ARN-­‐m  se   traduce  a  proteína.

 T-­‐A     2.  G-­‐C.  UNIÓN  DE  PROTEÍNAS  ESPECIFICAS  AL  DNA  (RNA   Polimerasa  y  otras  proteínas  que  actúan  como  factores   de  transcripción).  C-­‐G.  COMPLEMENTARIEDAD  ENTRE  BASES                                  A-­‐U. no es un propiedad del cromosoma.   Orientación y nomenclatura de las cadenas en relación a la transcripción ¿Qué cadena de la doble hélice es la codificadora? (5)’ CGCTATAGCG (3’) à cadena codificadora del DNA (3’) GCGATATCGC (5’) à cadena molde del DNA (5’) CGCUAUAGCG (3’) à transcrito de RNA Depende de cada gen.4/9/14   TRANSCRIPCIÓN Propiedades  que  hacen  posible  la    síntesis   del  transcrito  de  RNA   Nomenclatura de las cadenas en relación a la transcripción 1. Orientación de la transcripción cadena codificadora del DNA   cadena molde del DNA   transcrito de RNA 3   .

  •  El  cofactor  σ  Eene  la  propiedad  de  disociarse  del  resto  de   subunidades  durante  el  proceso  dejando  el  núcleo  central   de  la  enzima  al  descubierto.  σ  ayuda  a  desdoblar  el  DNA. E. rRNA 5S PROCARIOTAS     APOENZIMA  =  4  subunidades   RNA  polimerasa   • 2  subunidades  α  =  ensamblan  el  enzima  y   promueven  interacciones   • β  =  acEvidad  catalíEca   • β’  =  se  une  al  DNA   • ω  =  ensamblaje  y  regulación  expresión   • σ  =  Se  une  a  las  regiones  promotoras  y  posicional   a  la  holoenzima  en  el  siEo  de  inicio   Holoenzima  RNA  polimerasa     PROCARIOTAS     •  En  procariotas  una  sola  polimerasa  (RNA  Polimerasa)  se   encarga  de  transcribir  el    DNA  en  las  diferentes  clases  de   RNA   ESTRUCTURA  (E.4/9/14   RNA  polimerasa     • Enzima compleja. Coli : factor sigma iniciación + CORE (holoenzima) Eucariotas: 3 tipos I -> rRNA II -> mRNA III -> tRNA. no requiere primer (cebador). Con múltiples subunidades. snRNA.  ω. no funciona la corrección de errores • Procariotas: sólo un tipo.  coli)   •  Se  compone  de  5  subunidades:  2  subunidades  α  idénEcas.  β’.  más  subunidad  factor  sigma  (σ).  coli  y  otras  bacterias  Eenen  varios  factores  σ  que   reconocen  diferentes  promotores   Etapas  de  la  transcripción     • Iniciación: • Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa) • Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb) y región -35 pb • Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb) • Elongación: • 5’->3’ • Enrollamiento aguas arriba (5’) y desenrollamiento aguas abajo (3’) del DNA • Terminación: • Dependiente del factor Rho • Independiente de Rho 4   .   •   HOLOENZIMA  =  5  subunidades  (con  cofactor  σ)                  à   ACTIVA   •  APOENZIMA  =  4  subunidades  (  el  cofactor  σ  disociado)  à   INACTIVA   •  E.   β.

  Posiciones  río  arriba  son  desiganadas  en  negaEvo  (-­‐)  y  río  abajo  en  posiEvo   (+)   Regiones  promotoras    para  siete  genes  de  E.  coli   Regiones  -­‐35  y  -­‐10  (Pribnow)   Etapas  de  la  transcripción     • Iniciación: • Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa) • Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb aguas arriba) y región -35 pb Regiones  consenso   La  holoenzima  RNA  polimerasa  se  une  a  los  promotores  y  desdobla  la  doble  helice  de   DNA  lo  que  permite  la  síntesis  de  una  cadena  de  RNA   Note  que  la  parte  del  gen  que  codifica  para  proteína  usualmente  comienza  con   ATG.  El  promotor  se  encuentra  en  la  región  regulatoria  5’.  pero  el  siEo  de  iniciación.         • Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb) 5   .4/9/14   Iniciación  de  la  transcripción  en   procariotas   •  La  RNA  polimerasa  se  une  a  un  siEo  específica  llamado  promotor  localizado   cerca  del  siEo  de  inicio  de  la  transcripción.  El   promotor  se  dice  que  está  río  arriba  (upstream)    del  siEo  de  iniciación  y  a  la   derecha  del  siEo  de  iniciación  se  le  refiere  como  río  abajo  (downstream)     •  Por  convención.   Por  convención  5’  se  escribe  a  la  izquierda  y  3’  a  la  derecha.  la  primera  base  en  ser  trnascrita  se  conoce  como  +1.  El  promotor  es  una  importante   región  regulatoria  del  gen   •  La  síntesis  de  un  transcrito  de  RNA  comienza  en  su  extremo  5’  y  conEnúa   en  dirección  5’  a  3’.   Iniciación     •  La  ARN  polimerasa  se  une  al  ADN  y  separa  las  hebras   de  ADN  en  colaboración  con  otros  cofactores   permitiendo.  de  esta  manera.  donde  la  transcripción  comienza  está  usualmente   bastante  arriba  de  esta  secuencia.  el  acceso  de  la  ARN   polimerasa  al  molde  de  ADN  de  cadena  simple   •  La  primera  base  transcrita  se  encuentra  siempre  en  la  misma  posición.

4/9/14   Etapas  de  la  transcripción     • Iniciación: • Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa) • Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb) y región -35 pb • Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb) Elongación   •  La  RNA  polimerasa  tiene  la   capacidad  de  desenrollar  y   volver  a  enrollar  el  DNA.  cataliza   la  unión  de  nuevos   nucleótidos  y  puede   reiniciar  la  síntesis  de  RNA   en  caso  de  que  se  detenga   • Elongación: • 5’->3’ • Enrollamiento aguas arriba (5’) y desenrollamiento aguas abajo (3’) del DNA • Terminación: • Dependiente del factor Rho • Independiente de Rho Terminación:  mecanismo   intrínseco  -­‐>  DNA   Palíndrome.     estructura  tallo-­‐bucle   La  subunidad  σ  posiciona  la  RNA  polimerasa   procarita  para  iniciar  la  transcripción   Región  3’  no  traducida    de  ~  40  bases  (3’UTR)   6   .   mantener  las  cadenas   separadas  de  DNA  y  el   producto  de  RNA.

 La  región   de  transcripción  acEva  se  conoce  como  burbuja  de   transcripción.  dando  lugar  a  una  iniciación  abortada.  se   debe  deshacer  el  complejo  del  promotor  para  que   quede  limpio  para  volver  a  funcionar  de  nuevo.  Una   vez  que  la  cadena  transcrita  alcanza  una  longitud  de   unos  23  nucleótidos.   En  este  diagrama  se  muestra  uno  de  dos  mecanismos   de  terminación  principales  de  E.   En  este  esquema  las  5  subunidades  de  la  RNA   polimerasa  se  representan  como  una  elipse.   •  RNAs  with  rho-­‐dependent  terminaEon  signals  do  not  have  the  string  of   U  residues  at  their  3  end  and  usually  do  not  have  hairpin  loops.   •  The  transcripEon  of  an  individual  gene  conEnues  beyond   the  protein-­‐encoding  segment  of  the  gene.  el  complejo  ya  no  se  desliza  y   da  lugar  a  la  siguiente  fase.   Durante  esta  fase  hay  una  tendencia  a  desprenderse   el  transcrito  inicial  de  ARN  y  producir  transcritos   truncados.   Terminación   •  La  ARN  polimerasa  se  mueve  a  lo  largo  del  molde   sintetizando  RNA  hasta  que  encuentra  una  secuencia   terminadora.  Instead.   they  have  a  sequence  of  about  40  to  60  nucleoEdes  that  is  rich  in  C   residues  and  poor  in  G  residues  and  includes  an  upstream  segment   called  the  rut  (rho  u2liza2on)  site.  En  este  punto  se  deja  de  añadir  nucleótidos  a   la  cadena  naciente  de  ARN  liberando  el  producto  completo   que  se  disocia  del  ADN.4/9/14   Separación  del  promotor   •  Una  vez  sintetizado  el  primer  enlace  fosfodiéster.  la  elongación   Elongación:  síntesis  de  RNA  que  es  complementaria  a   la  hebra  molde  de  DNA  y  ocurre  en  dirección  5’  a  3’.     •        7   .   Otro  mecanismo  de  terminación  es  el  dependiente  del   factor  rho.   común  tanto  en  procariotas  como  eucariotas.  coli  y  otras   bacterias:  la  terminación  intrínseca.  creaEng  a  3   untranslated  region  (3  UTR)  at  the  end  of  the  transcript.en  la  cual  el  RNA   sinteEzado  adquiere  una  conformación  cabeza  de   alfiler  que  hace  que  la  RNA  polimerasa  se  desprenda   del  DNA  y  se  pare  la  transcripción.

 la  II  y  la  III   •  RNA   polimerasa   I.  -­‐>  Síntesis  de  RNAm  y  microARN.4/9/14   Transcripción  Eucariotas     RNA  Polimerasa  en  Eucariotas     •  A  diferencia  de  procariotas  donde  solo  hay  una  RNA   polimerasa  que  cataliza  la  síntesis  de  todos  los  Mpos  de   RNA.   •  RNA  polimerasa  II.     •  RNA   polimerasa   III.   Se   localiza   en   el   núcleo  y    en  el  nucleolo.  en  eucariotas  existen  tres  Mpos  de  RNA   polimerasa.  -­‐>  Síntesis  de  rARN  45S.   Se   localiza   en   el   nucleoplasma.   La  I.    12  subunidades.   13   subunidades.   8   .  Se  localiza  en  el   nucleoplasma.  -­‐>  Síntesis  rRNA  5S  y  tRNA.   17   subunidades.

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