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UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

Departamento de Biologia Celular e Molecular
Disciplina de Bioqumica - Turma: Farmcia

Estudo da Cintica enzimtica

Instituto de Biologia
22/05/2015

UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

Departamento de Biologia Celular e Molecular
Disciplina de Bioqumica - Turma: Farmcia

Estudo da Cintica enzimtica

Relatrio de prtica da disciplina de Bioqumica

Curso de Farmcia.
Orientao: Prof. Sdio Werdes Machado
Realizado pelos alunos(as) :
1- Kelly Alessandra Segabinazzi
2-Brena da Costa Campos Rangel

Instituto de Biologia

22/05/2015
1. INTRODUO
Enzimas so protenas que catalisam uma reao qumica especfica e em
sua maioria so conjugadas, estando associadas a grupos no-proticos. Sua
atividade cataltica depende da conservao da sua estrutura original e qualquer
variao nessa estrutura altera significativamente sua atividade. Uma caracterstica
comum de todas as enzimas a presena e uma fenda em sua estrutura, formada
principalmente por resduos de aminocidos hidrofbicos dentro dos quais se fixam
o substrato. Certos resduos de aminocidos que so responsveis pela interao
estrica com o substrato e, portanto, pela especificidade do sistema, esto
localizados nesta fenda, bem como os aminocidos envolvidos no aspecto cataltico
da reao. Na maioria dos casos estes resduos so do tipo inico e mais reativo.
Alm disso, a unio dos ons precedentes da soluo podem tambm cooperar na
presena do substrato na catlise da reao.
A cintica enzmica um ramo da Bioqumica que estuda as enzimas em
ao; a sua atividade cataltica. No entanto, pode tambm ser encarada como um
ramo da cintica qumica que estuda as propriedades catalticas das enzimas. O
estudo cintico de uma enzima visa primariamente caracterizar, ou seja descrever, a
atividade dessa enzima. In vitro estuda-se a atividade da enzima procurando saber
que tipo de reaes pode catalisar, com que substratos pode interatuar e como se
modifica essa atividade (qualitativa e/ou quantitativamente) quando se fazem variar
as condies em que ensaiada. O valor de pH, a temperatura, o tempo de
incubao, as concentraes dos substratos, de cofactores ou de outras substncias
(inibidores ou ativadores) so exemplos de condies de ensaio que podem ser
modificadas com o objetivo de observar como varia a atividade da enzima, ou seja,
como varia a velocidade da converso ou converses que esta catalisa.
2.

MATERIAIS E MTODOS

Reagentes
- 1 batata inglesa mdia ( cerca de 110g)
- Substrato : Para-Nitrofenilfosfato de sdio (soluo fresca)
- NaOH 0,02 N
- Liquidificador
- Pipetas volumtricas
- Tubos de ensaio
Mtodos

Influncia do tempo de reao

Tubo 1 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado + 2 ml de

NaOH
( Branco)

Tubo 2 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado + esperar 2

minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 3 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado+ esperar 5
minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 4 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado + esperar
10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 5 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado + esperar
20 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 6 3 ml do substrato + 2 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado + esperar
30 minutos e adicionar 2 ml de NaOH

Influncia da Concentrao da enzima

Tubo 7 3 ml do substrato + 1 ml de gua + 0,0 ml do homogeneizado + 2 ml de

NaOH
( Branco)
Tubo 8 3 ml do substrato + 0,9 ml de gua + 0,1 ml do homogeneizado + esperar
5 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 9 3 ml do substrato + 0,5 ml de gua + 0,5 ml do homogeneizado+ esperar
5 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 10 3 ml do substrato + 0,0 ml de gua + 1 ml do homogeneizado + esperar
5 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Influncia

da Concentrao do substrato

Tubo 11 0,0 uM de substrato + 0,0 ml do substrato + 5,0 ml de gua + 0,5 ml do

homogeneizado + esperar 10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
( Branco)
Tubo 12 54,5 uM de substrato + 0,3 ml do substrato + 4,7 ml de gua + 0,5 ml do
homogeneizado + esperar 10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 13 163,0 uM de substrato + 0,9 ml do substrato + 4,1 ml de gua + 0,5 ml
do homogeneizado+ esperar 10 minutos e adicionar 2ml de NaOH
Tubo 14 272,0 uM de substrato + 1,5 ml do substrato + 3,5 ml de gua + 0,5 ml
do homogeneizado + esperar 10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH
Tubo 15 545,0 uM de substrato + 3,0ml do substrato + 2,0 ml de gua + 0,5 ml do
homogeneizado + esperar 10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH

Tubo 16 909,0 uM de substrato + 5,0 ml do substrato + 0,0 ml de gua + 0,5 ml do

homogeneizado + esperar 10 minutos e adicionar 2 ml de NaOH

3.

RESULTADOS E DISCUSSO

Influncia do tempo de reao

Com o passar do tempo obtivemos maior formao de produto observado
pela colorao mais amarelada no ultimo tubo e amarelo mais claro nos primeiros
tubos.
Influncia da Concentrao da enzima
Quanto maior a quantidade de enzima no meio reacional mais rpida ocorre
a reao, isso foi observado no ultimo tubo que continha 3 ml do homogeneizado e a
colorao ficou bem amarelada e nos primeiros tubos os 3 ml de substrato estavam
diludos em gua, obtendo-se dessa forma uma colorao amarela mias clara.
Influncia da Concentrao do substrato
Quanto maior a concentrao do substrato maior a formao de produto, e
ocorrendo a reao mais rpida. Novamente observada essa proporcionalidade,
medida que se adiciona concentraes maiores dele, mais amarelado vai ficando o
meio reacional at atingir o seu limite de saturao, ou seja, at um ponto certo.
OBS: Os fatores que afetam a velocidade da reao fazendo com que esta
ocorra mais rapidamente e tenha-se uma maior formao de produto esta
relacionada diretamente a temperatura, pH, tempo, e concentrao do substrato e
enzima. Resumindo, esses fatores fazem com que a energia de ativao da reao
seja menor e assim a reao ocorra de forma ajustada e consequentemente mais
rpida.

E + S ES E + P

4.

CONCLUSES

Pode-se concluir que junto com o monitor e todos os aparelhos e reagentes

utilizados, a prtica foi concluda com sucesso e seus objetivos alcanados. Tudo de
acordo com a literatura.

5.

REFERNCIA
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAvq4AB/relatorio-cinetica-enzimatica
Acessado em 06 de Maio. 2015
http://sistemas.eel.usp.br/docentes/arquivos/5840494/383/6Cineticaenzimatica.pdf Acessado em 06 de Maio. 2015
http://users.med.up.pt/ruifonte/PDFs/PDFs_arquivados_anos_anteriores/201
1-2012/cinetica_enzimica_2011_vs02.pdfAcessado em 06 de Maio. 2015
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAJiEAJ/cinetica-enzimatica
Acessado em 06 de Maio. 2015