CUEEP

M1 SEFA IUP

U.E : Analyse de lactivit

Mme Lucie Petit

Dossier de validation

Analyse de lactivit de deux techniciens de laboratoire de biologie

Prparation dune lame de microscope optique pour lanalyse dun fragment de tissu

Zeineb Ben Romdhane

Sommaire
Introduction.....3
I. Contexte.....4
II. Mthodologie et population choisie........5
1. Population.....5
2. Squence de travail analyser.....6
3. Mthodes choisies.....7

III. Analyse et interprtation des donnes8

IV. Interprtation selon le schme de Vergnaud13
Conclusion..16
Rfrences bibliographiques18
Annexes.19

Introduction
La biologie est par dfinition la science de la vie. Les expriences, manipulations et recherches
biologiques ne cessent dvoluer pour subvenir aux besoins de lhomme et essayer dlucider les
nigmes de la nature. Ltre humain sintresse de prs ou de loin ces volutions, aux rsultats
de la recherche scientifique dans ce domaine et leurs impacts sur la vie mais rarement aux
problmes et obstacles que rencontrent les chercheurs pour aboutir aux rsultats en question.
Dans un laboratoire de biologie, tout un dispositif doit tre mis en place pour la ralisation dune
seule exprience. Ce dispositif inclut des quipements, des ractifs, des techniciens et des
chercheurs. Mme si le chercheur est au cur de la recherche scientifique, il nen demeure pas
moins que le rle du technicien et ses comptences sont primordiales pour permettre au
biologiste chercheur de mener bien ses recherches. Dans ce contexte, je me suis intresse aux
activits des techniciens de laboratoire vu leur importance dans le bon droulement des
expriences menes. Parmi les activits des techniciens mon choix sest port sur la ralisation
de la technique histologique classique, une technique de routine dans le laboratoire danatomie et
de cytologie pathologique de linstitut Pasteur de Tunis. Cette technique ntant pas maitrise par
les chercheurs, cela me permettra dillustrer la pertinence de sa ralisation puisquelle reste la
base de chaque examen pratiqu au laboratoire. Les biopsies reues provenant des patients
malades sont en effet traites pour tre analyses avant dmettre un diagnostic et constituent
entre autres le matriel biologique des chercheurs. En tant quancienne tudiante linstitut
pasteur, jai men des recherches dans le cadre de mon projet de fin dtudes en immunologie,
Jappartenais lunit de recherche du laboratoire danatomie pathologique humaine et
exprimentale sans pour autant avoir mener mes recherches au sein de ce laboratoire. Je recevais
donc mon matriel biologique au service dimmunologie dans lequel jtais affect. Ce travail va
donc me permettre dapprendre beaucoup sur une activit qui ma beaucoup aid et que je nai
malheureusement pas eu loccasion de pratiquer.
Patients, chercheurs et mdecins ne se rendent gnralement pas compte de la complexit des
tapes pralables ncessaires pour faire de la biopsie une lame lisible au microscope optique. Les
patients rclament des rsultats fiables, les mdecins rclament une prparation microscopique
irrprochable pour lmission du diagnostic, et les chercheurs un matriel biologique de haute
qualit pour des tudes bien spcifiques.

Lanalyse de cette activit est donc particulirement intressante et peut susciter la curiosit de
plusieurs personnes du domaine, qui se contentent gnralement dinterprter des rsultats, ou
dautres personnes qui

ignorent les tapes ncessaires pour faire dune biopsie ou dun

prlvement une prparation microscopique sous forme de lame lisible au microscope.

Dans le cadre de mon master en sciences de lducation et de la formation des adultes, jai men
une petite enqute sur lactivit de deux techniciens (un professionnel et un novice) que jai
analyse dans le rapport qui suit : Une premire partie visant mettre le travail dans son contexte,
une deuxime partie prsentant la population et les squences de travail utilises pour lanalyse
ainsi que les obstacles rencontrs lors de lobservation et le recueil des donnes. La troisime
partie sera rserve la discussion et linterprtation des rsultats de lanalyse de lactivit,
pour enfin conclure et proposer des pistes dvelopper.

I. Contexte :
LInstitut Pasteur de Tunis fait partie du rseau international des Instituts Pasteur. Il sagit
du plus important et du plus ancien organisme de recherche scientifique en Tunisie, Il a t fond
en 1893. Il a pour mission d'effectuer des enqutes, des analyses, des tudes et des recherches
sous la direction du ministre de la sant publique et en collaboration avec le ministre de
lenseignement suprieur et de la recherche scientifique tel-que dtaill dans lannexe 1.
Linstitut compte actuellement 9 laboratoires de recherche et 18 laboratoires de diagnostic dont
le laboratoire danatomie pathologique humaine et exprimentale, au sein de ce laboratoire,
plusieurs examens sont pratiqus en routine.
La technique histologique fait partie des techniques anatomopathologiques pratiques
systmatiquement ds quun prlvement (biopsie) est reu au laboratoire. Cette technique
repose sur un ensemble dtapes manuelles ncessaires la transformation du prlvement en un
fragment de quelques microns pouvant adhrer une lamelle pour tre lu et interprt au
microscope optique. Ces tapes manuelles ncessitent une exprience, une prcision et un savoir
faire de la part du technicien de laboratoire, ils se rsument dans la dissection de la biopsie, son
traitement dans un automate, son inclusion en paraffine, la coupe du bloc de paraffine (aprs
refroidissement), ltalement des rubans de paraffine sur une lame et le montage de celle-ci aprs
coloration.
Cest une technique assez couteuse, sa totale maitrise est donc obligatoire pour viter le
gaspillage des ractifs et laltration de la biopsie. Ces biopsies proviennent trs souvent de
patients dans un tat critique haut risque infectieux, le prlvement dune deuxime biopsie

peut donc savrer trs pnible voire grave pour le patient. Il est aussi important de souligner que
le dlai danalyse des biopsies doit tre respect, vu que les rsultats sont dterminants dans le
pronostic des patients, ceci implique que lactivit exerce par le technicien doit tre ralise
dans un dlai minimum malgr les contraintes auxquelles il est confront. Ce dernier ralise
plusieurs autres examens en parallle, et en raison de leffectif limit des techniciens, une bonne
organisation est imprative.
Stress et pression sont donc grer surtout quant il sagit de patients dans des tats critiques. Le
laboratoire est aussi relativement petit, il est compos de trois salles de manipulation, un
secrtariat et une salle de lecture. Le personnel est compos de quatre mdecins, cinq chercheurs
et cinq techniciens : lorganisation nest donc pas une tche facile. La ralisation de lactivit
analyse, ncessite de se dplacer entre deux salles, ces dernires sont constamment occupes
par les autres membres de lquipe, il nest donc pas vident de raliser la technique histologique
dans les meilleures conditions. Les tapes ncessaires pour la ralisation de cette technique sont
clairement dfinies dans un manuel (annexe 2) rarement consult par les professionnels mais trs
souvent par les novices. Dautres rfrentiels quant aux normes dhygine et de scurit sont
censs tre disponibles au laboratoire mais ils sont hlas introuvables. Plusieurs ractifs et
quipements sont ncessaires pour raliser la technique histologique mme ci celle-ci repose sur
plusieurs tapes manuelles, il faut bien maitriser les tapes automatises telles-que lutilisation
de lautomate et le distributeur de paraffine.
La prsence dune hte, de gants et de matriel de dissection est aussi indispensable. Les
techniciennes veillent au respect des normes dhygine et suivre la technique histologique dans
toutes ses tapes. Ils doivent avoir les connaissances et les comptences pour agir dans le cas o
un problme survenait au laboratoire.

II. Mthodologie et population choisie :

1. Population :
Les deux personnes interroges sont de sexe fminin. La premire est une technicienne
professionnelle ge de 45 ans et travaille au laboratoire depuis 15 ans, elle a auparavant
travaill dans le laboratoire de cytologie dun hpital pendant 5 ans et titulaire dune maitrise
(4 annes dtudes suprieures aprs le baccalaurat) en cytomorphologie obtenue la facult
des sciences de Tunis. Elle a tout dabord t initie plusieurs techniques de laboratoire pour
se spcialiser en histologie et immunologie, elle pratique la technique histologique classique
depuis 10 ans. La deuxime est une technicienne suprieure novice, ge de 27 ans sans

aucune exprience professionnelle antrieure, elle est stagiaire au laboratoire depuis deux
mois et titulaire dune licence en anatomopathologique obtenue lcole de sant de Tunis.
2. Squence de travail analyser :
La prparation dune lame pour microscopie optique est clairement expose dans le protocole
de la technique histologique (annexe 2). Les tches prescrites sont un ensemble dtapes
raliser par le professionnel, la lecture de ce protocole ne nous renseigne pas plus sur les
comptences mobilises cet effet. Le choix de la squence analyser na donc pas pu tre
dtermine lors de la pr-enqute encore moins lors de la premire observation.
En effet, la rapidit de la manipulation lors dune premire observation oriente lobservateur
vers une analyse peu significative. Lactivit des techniciennes commence avec laide du
prparateur, et le suivi des premires tapes est relativement facile. Lobservateur a donc
limpression dassister la mise en place ou lapplication dun simple protocole, dune
formalit. Les gestes des techniciennes ne sont pas difficiles saisir, il y a une impression de
dj vu, de gestes ordinaires ou habituels, lanalyse de la premire partie et des premires
tapes ne ma donc pas interpell puisquelle ne ncessite pas un savoir faire rel, le
prparateur peut mme prendre le relais quand les biopsies sont dissques, on se retrouve
donc avec plusieurs intervenants : Le mdecin qui dissque la biopsie et le prparateur qui la
met dans diffrentes cassettes et qui rgle lautomate avec lassistance de la technicienne. Les
premires tapes ne mont donc pas sembl propres la technicienne, mme si cette dernire
les ralise le plus souvent individuellement.
Aprs avoir men ma pr-enqute et observ lactivit des techniciens plusieurs reprises,
mon attention sest donc porte sur la squence o les techniciennes ralisent le plus dtapes
manuelles, font le plus de gestes rapides et changent de salles. La squence choisie dbute
aprs les premires tapes dans la salle 1 quand les biopsies pralablement traites sont
recueillies de lautomate et prtes tre incluses en paraffine. Elle comprend la coupe du bloc
de paraffine, la confection dun ruban de et son talement sur une lame, cette squence est en
fait une succession dactions bien distinctes ; Ces actions ncessitent une maitrise du
protocole et un savoir faire. Les techniciennes sont les seules personnes autorises dans le
laboratoire couper un bloc de paraffine contenant la biopsie, elles sont de ce fait les seules
responsables de lendommagement de celui-ci.
Lors de la deuxime observation, jai remarqu que les techniciennes taient plus concentres
et moins loquaces dans laccomplissement de ces tches, tous ces lments ont donc orient
ma dcision dans le choix de la squence analyser.

Ds le dplacement des fragments de tissus dans des cassettes pour linclusion en paraffine,
les gestes des techniciennes sont plus minutieux, vient ensuite le rabotage des blocs de
paraffine refroidis, et mme si le principal but de ce rabotage est dliminer lexcs de
paraffine avant de procder la coupe, cette tape demande une certaine concentration. La
coupe et ltalement sont les tapes les plus rapides et les moins strotypes.
Pour finir, cest parce que cette squence est intrigante quant au savoir faire que son analyse
peut savrer dautant plus intressante, tant pour comprendre la manire avec laquelle les
diffrentes tapes sont ralises que pour vrifier sa conformit avec le guide des techniques
histologiques et les bonnes pratiques de laboratoire.
3. Mthodes choisies :
Pour analyser lactivit des deux techniciens de laboratoire, une premire observation a t
ncessaire pour avoir une ide gnrale, sur le personnel, les lieux ainsi que les diffrentes
tapes du travail. Cette observation sest droule sur une journe entire, elle ne ma pas
offert la chance de dceler les faits et gestes des techniciennes. Elle a t utile pour une prenqute.
Un court entretien avec le chef de service pour avoir son accord ma permis davoir une
approche globale de cette activit, des comptences requises pour lexercer. Il a charg la
surveillante du laboratoire de me fournir les documents utiles pour cette analyse notamment le
protocole de la technique histologique, le guide des bonnes pratiques de laboratoire ainsi que
le manuel dhygine et de scurit. Malheureusement la majorit des documents taient
introuvables, la surveillante ma donc donn accs aux cahiers de manipulations et
dexpriences des techniciennes, leurs notes et ma conseill de consulter des fiches ROME
sur internet. Aucun document na pu tre procur auprs du ministre de la sant publique.
Aprs avoir collect ces notes et ces documents, une recherche sur internet sest impose pour
avoir plus dinformations sur le mtier.
Une deuxime observation a t faite trois jours aprs et ma permis de me focaliser plus sur
les actions et de reprer les difficults auxquelles je serais confronte lors de la prise des
photos. Jai prpar une premire grille dobservations pour dlimiter les tapes et les actions.
Jai aussi not les gestes qui mont intrigue et qui ont le plus suscit ma curiosit. La
squence choisie prcdemment dcrite a t prdtermine lors de cette deuxime
observation.

La troisime observation a t suivie dune prise de photos. Jai procd au recueil des
donnes dans une grille dobservation contenant les gestes, les actions et les verbalisations des
deux techniciennes ainsi que les artefacts du milieu (annexe4).
Ces photos visionnes et analyses de plus prs mont aid prparer une trame dentretien ;
Aucune question prtablie mais uniquement quelques points soulever lors de lentretien
de lauto confrontation pour pouvoir analyser la squence choisie. Mme si jtais familire
lenvironnement des laboratoires, ma prsence en tant quobservatrice a chang la donne.
Pour commencer, les gestes trs rapides des techniciennes nont pas pu tre convenablement
photographi malgr le nombre important de prise. Les diffrentes postures des techniciennes
ont aussi constitu un obstacle ; un seule angle de photographie est possible quand les
techniciennes sont face la paillasse (les murs bordent les paillassent). Les tapes de la
ralisation de ta technique qui se font sous htes ne mont pas laiss une marge de manuvre
pour photographier sous diffrents angles. La prsence du reste du personnel de laboratoire
ma dconcentr vu lespace limit je ne dois en aucun cas drang les chercheurs et les
techniciens et se faire discrte na pas tait facile mais assez grable. Cette troisime journe a
donc t un peu plus complique que celles qui lont prcdes. Lors des premires
observations, je mattendais un recueil de donnes plus riches et des photos un peu plus
explicites. Les verbalisations enregistres en parallle ainsi que les remarques notes
pralablement mont cependant beaucoup apport dans lanalyse de cette activit.
Lapplication des mthodes prtablies ; quant aux diffrentes observations ; na pas t
suffisante pour que le recueil des donnes soit complet. Les donnes de la pr-enqute lont
cependant facilit et ont permis davoir plus de traces sur lactivit analyser. Lentretien a
complt ces donnes et ces informations et a t men sans aucune difficult. La
technicienne interroge tait cependant moins loquace et plus formelle dans ses rponses
compar aux premiers changes.

III. Analyse et interprtation des donnes :

1. Temps de lactivit :
La prparation dune lame de microscope optique pour lanalyse dun fragment de tissu par
un professionnel et un novice tient compte de plusieurs paramtres.
Aprs avoir recueilli les donnes, le premier point qui ma sembl important est le temps
allou cette activit, le graphe si dessous prsente la diffrence entre le professionnel et le
novice.

Dure de la squence choisie

Novice
Professionnel
Dure de toute l'activit

0 50 100 150 200 250 300 350 (en min)

Dure de lactivit

Pour commencer lanalyse les rsultats, il ma sembl intressant de comparer la dure de

squence du travail choisie par rapport

la dure de toute lactivit et ce pour le

professionnel et le technicien. Il est gnralement attendu quun novice mette plus de temps
dans laccomplissement de ses tches. La squence choisie est dautant plus intressante vu
que la diffrence de sa dure entre le professionnel et le novice (63 min) correspond
diffrence de dure de toute lactivit (65 min). Le novice met donc plus de temps
accomplir ses tches durant la squence choisie.
2. tapes de lactivit :
Les diffrentes tapes ont comme finalit deffectuer une prparation microscopique. Pour ce
faire, les techniciennes transforment une biopsie (produit initial) visible loeil nu en une
biopsie visible au microscope optique.
1-Dissection de la biopsie
2- en cassette de la biopsie
3-Rglage automate
4-Chargement des cassettes
5-Dchargement des cassettes
6-Mise en moule de paraffine
7-Interruption
8-Rabotage
9-Coupe
10-Confection de ruban
11-Immersion du ruban dans leau

12-Etalement sur lame

13-Mise de la lame sur plaque
14-Interruption
15-Immersion de la lame dans le colorant
16-Application du milieu de montage
17-Montage lame lamelle
18-Fixation de la lame la lamelle
19-Dposer pour schage
Lactivit se droule en 19 tapes manuelles, automatises et semi-automatises. Aprs avoir
observ les deux techniciennes et analyser lentretien jai essay de schmatiser les
principales tapes.
Ces tapes sont interrompues deux reprises. Cette interruption est obligatoire pour la
ralisation de la technique histologique. La technicienne questionne lors de lentretien dit
quelle profite de la deuxime pause pour djeuner (L131) ce qui est confirm lors de la prenqute et ce qui concide parfaitement avec les horaires de la ralisation de la technique.
Lors de lentretien la technicienne a eu le plus de difficult parler des tapes manuelles, elle
marquait des temps darrt, au dbut de lentretien ses rponses taient plus courtes et plus
rapides. La difficult des rpondre dans un second temps nest pas en rapport avec le fait que
cest tapes taient difficiles pour le technicienne ; vu son exprience et sa rapidit ; mais lie
au fait de devoir dcrire des gestes qui sont devenus des reflexes acquis. La technicienne
rpondait en affirmant ou infirmant quant il sagissait des tapes automatises ou qui
demandait moins de minutie. Ses rponses aux questions taient moins exactes et prcises
(non pas vraiment (L 29), je prfre(L 26) , gnralement (L17), on relativise (L73)). La
subjectivit de la professionnelle transparait aussi travers ses gestes lors de lentretien et le
changement de ton.
3. Les principales tapes
Les tapes principales sont aussi celles que seule la technicienne est autorise raliser.
Elles sont schmatises dans le logigramme qui suit :

Activits semi-automatises

Mise en en
moule

Biopsie
sur lame

Biopsie
Distributeur
de paraffine

Plaque
chauffante

Rabotage

Bloc de
paraffine

Coupe

Microtome

Ruban d e
paraffine

Bain marie

talement
sur lame

Immersion
dans leau
Bain marie

Produit

Confection
du ruban
Bain marie

Activits manuelles

Artefacts

Actions

Prparation dune lame de microscope optique pour lanalyse dun fragment de tissu

Mise en moule de paraffine : Cette tape a t mentionne automatiquement par la

technicienne lors de lentretien, elle na pas souligne limportance de cette inclusion,
il aurait tait plus judicieux de ma part de lui poser la question. En effet, selon le
protocole de technique, cette inclusion doit respecte plusieurs rgles, la biopsie doit
tre plate lors de linclusion et il faut tre sr que toute sa surface soit retrouve sur le
plan de coupe.
La technicienne a aussi enleve les gants avant de procder cette inclusion, daprs
ce qu dit la surveillante, les gants ne devront tre enlev quaprs linclusion cest
dire que tant que la biopsie nest pas sous forme de bloc il faut garder les
gants. Malheureusement vu que le manuel est introuvable, il est impossible de dire que

la technicienne ne respecte pas la tche prescrite. Le fait que le guide des bonnes
pratiques et dhygine et de scurit ne se trouve pas au laboratoire est inadmissible
dans un organisme affili au ministre de la sant public.

Rabotage et coupe : Cest deux tapes bien que distinctes seffectue successivement
avec le microtome, les deux techniciennes taient debout et ont demand clairement
ne pas tre perturbe. Cest une tape cruciale dans la manipulation. La russite de
lactivit repose sur la mise en uvre dun ensemble de connaissance et des
comptences. Les techniciennes sont particulirement concentres lors de la coupe. Il
ne faut ni endommager la coupe ni avoir des gestes brusques pour ne pas se blesser.
Le microtome est en effet dot dune lame coupante trs aiguise. Les photos de cette
tape sont malheureusement floues en raison de la distance par rapport lobjet
photographier.

Confection des rubans : La confection des rubans de paraffine est trs importante.
Elle demande de lapplication, un savoir faire et beaucoup de concentration. Cette
tape nest cependant dcrite dans un aucun document ou protocole. Il ma sembl trs
important de lvoquer car cest une opration particulirement difficile. Au fur et
mesure que les techniciennes coupaient le bloc de paraffine, elles tiraient lgrement
en haut

pour quun ruban soit confectionn tout en soufflant lgrement pour que

celui ci ne colle pas au microtome. Cest une tche qui nest pas prescrite mais qui est
automatiquement faite par les techniciennes et qui ncessite beaucoup de technicit.
La technicienne professionnelle a flicit la novice pour laccomplissement de cette
tche (annexe 4 tableau des recueils de donnes novice) . la novice tait assez crispe,
les sourcils froncs et na pas prononc aucune rplique une fois devant le microtome.
Cela peut tre du la remarque antrieure de la professionnelle quant au respect des
normes de scurit et la rapidit du rabotage ou tout simplement un manire de
sappliquer et se concentrer.

Immersion du ruban dans leau et talement sur lame : Cette tape est la fois trs
courte et trs dlicate vu lendommagement du ruban confectionne au moindre faux
geste. La technicienne a trs bien dveloppe cette tape par rapport aux autres lors de
lentretien, elle la fait spontanment et elle semblait fire en lexpliquant, plus
prcise dans la description.( annexe 5 L108-129). Ltalement sur lame est une suite
logique aprs la confection. Il ncessite pas autant de technicit masi cest le dernier
maillon de la chaine et il prsente le produit transforme avant la coloration.

4. Artefacts :
Les artefacts sont trs importants dans laccomplissement des diffrentes tches. En effet, la
majorit des tapes sont semi-automatiss et font donc intervenir plusieurs quipements et
ractifs. Le bon fonctionnement de ces quipements est donc indispensable pour le bon
droulement de cette activit. Le service de maintenance est contact au besoin. La
performance de ces quipements est aussi trs importante, ils doivent rpondre des normes
bien spcifiques et talonns rgulirement. Lors de la pr-enqute, une question a t pose
au chef de service ce sujet. Il ma fourni le cahier de maintenance qui confirme ses propos.

IV. Interprtation selon le schme de Vergnaud :

Lanalyse de lactivit dun professionnel a pour principal but de caractriser les
comptences requises pour la ralisation de cette activit. En effet , Le moyen le plus
efficace dans le dveloppement des comptences nest pas la reproduction de lexercice, mais
bien plutt lanalyse de laction (Pastr, 1991)
Le schme de Vergnaud tant un outil pour caractriser les comptences, je me propose
dinterprter les donnes de cette activit selon le concept de Vergnaud (2006, p.285)
1. Buts sous buts et anticipations :
Le principal but de la prparation dune lame de microscope optique, est danalyser celle ci
pour mettre un diagnostic. Mme si cette lame constitue le matriel biologique des
chercheurs, sa prparation dpend avant tout de la prsence dune biopsie et donc dun patient.
Le but de lactivit des techniciens est de venir avant tout en aide ces patients dont le
pronostic dpend de lactivit en question.
Suite une remarque sur la perte de temps, la technicienne souligne (L 70,71)
On a pas intrt a en perdre il y a des cas urgents et des patients malades derrire ses biopsies qui
attendent ces rsultats
La technicienne est donc consciente de limportance des dlais pour la ralisation de son activit.

Le but de cette activit est donc quelle soit ralise le plus rapidement possible. Aucun
document au laboratoire naborde le problme de dure, le protocole de la technique prcise
la dure de ses diffrentes tapes sans plus.
Lors de la pr-enqute, et donc de la premire observation, javais limpression que le lieu
ressemblait plus aux laboratoires de recherches auxquels jtais habitue. La diffrence entre

ces deux laboratoires devrait normalement se situer dans le fait quun laboratoire de
diagnostic tourne autour du patient et donc dune thique mdicale. En menant une petite
recherche sur le cursus acadmique des deux techniciennes, aucun cours dthique ou de
sensibilisation par rapport aux patients ne leurs a t donn. Le but de cette activit qui est
principalement de rendre service au patient implique tenir compte de bonnes connaissances en
thique mdicale. Sur la base de la trilogie de Katz R.L (1974) dans laquelle il spcifie ces
trois types de comptences : conceptuelles (savoir) ; techniques (savoir-faire ) et
humaines(savoir-tre) ; les comptences conceptuelles des techniciennes peut dans ce cas tre
souleve et dbattue.
2. Les rgles daction :
Plusieurs rgles daction ont permis de situer lactivit pour permettre de mener bien les
diffrentes oprations. En se basant sur lordre chronologique des tapes principales de
lactivit, les rgles dactions sont les suivantes :

Vrifier la temprature de la plaque avant de mettre les moules sur les plaques de
refroidissements.

Respecter les rgles de scurit avant de procder la coupe

Ne pas faire de gestes brusques quand on est poche du microtome

Vrifier la temprature du bain marie avant ltalement

Ne pas laisser le ruban de paraffine plus de quelques secondes dans leau.

Ces rgles sont clairement nonces par la professionnelle en sadressant la novice

(annexe4 : tableau de recueil des donnes Novice) et sont aussi expliciter lors de lentretien.
(L 127). Le respect de ses rgles daction traduit quun technicien doit faire preuve dun sens
du dtail aigue, dune bonne dextrit et de beaucoup de minutie. Il doit aussi dvelopper un
savoir faire et une dlicatesse afin de mener bien les manipulations et viter tout risque
daccident de travail.
3. Les interfrences en situation :
Les infrences permettent les adaptations locales, les contrles, les ajustements progressifs
(Vergnaud & Rcop, 2000) au cours dune activit.

Les interfrences en situation que jai pu observ ne sont pas nombreuses. Elles sont
essentiellement lies au produit. Le traitement de la biopsie malgr le respect des rgles de
manipulation, rserve bien souvent des surprises. La surveillante men a parl lors de la prenqute trs brivement pour me dire que la professionnelle navait pas de difficult quand un
bloc est endommag puisquelle avait sa propre technique de rcupration. Je mes suis
renseigne en consultant des sites sur ce type dincidents, dans le cas chant il fallait
recontact le patient pour une deuxime biopsie la charge du laboratoire.
Quand la charge de travail devient importante, les techniciennes procdent la lecture des
lettres de liaison accompagnant les biopsies afin de traiter les cas les plus urgents. Cette
opration ncessite de bonnes connaissances en physiopathologie pour pouvoir classer les cas
par ordre de priorit. Le technicien doit tre en mesure davoir un minimum de connaissances
scientifique afin de les mettre en uvre quand la situation lexige. Il doit tre capable de
travailler sous pression et de grer les situations durgence tant donn que cest du pronostic
parfois vital du patient quil sagit.
4. Les invariantes opratoires :
Les invariants opratoires sont des instruments de la pense qui servent aux humains
sadapter dans le monde et qui rendent celui-ci comprhensible pour eux. Ces invariants sont
construits par le sujet dans sa confrontation avec le rel. (Pastr et al, 2006 p.155)
En observant les techniciennes, jai constat que la prsence dun patient qui rclame des
rsultats au laboratoire les pousse travailler plus rapidement et donner le meilleur delles
mme. Le fait de se retrouver face un patient dans une situation critique, provoque en eux le
besoin de se hter afin de lui rendre service.
Les techniciennes sont aussi trs prudentes quand il sagit de patient souffrant de maladies
sexuellement transmissibles. Les biopsies de ces patients sont traites avec beaucoup de soin
dans le total respect des mesures de scurit. Normalement, toutes les biopsies devront tre
trait de la mme manire.

Conclusion
Ma recherche a t faite au sein de linstitut Pasteur qui est lun des plus grands instituts de
recherche de Tunis. Il est toutefois noter quen dpit de sa notorit et de son et de
limportance de linstitution dans le domaine scientifique tunisien les disponibilits deffectifs,
despace et dquipements font dfaut. Dans ce contexte, je me suis intresse lactivit de
technicienne. Bien que ces acteurs ne soient pas au devant de la scne il nen demeure pas
moins que leur travail constitue une partie essentielle dans le processus de la recherche
scientifique. Je me suis intresse plus particulirement la prparation dune lame de
microscope optique pour lanalyse dun fragment de tissu par une professionnelle et une
novice. Au cours de mes observations jai pris connaissance des diffrentes tapes que
requiert lactivit. Il sagit dun processus la fois simple et complexe dcrit dans le manuel
de la technique histologique. Toutefois ce manuel ne suffit pas car le processus ncessite une
dextrit et habilit que seule lexprience peut renforcer.
La principale difficult rencontre lors de cette analyse et de pouvoir comparer entre la tche
prescrite et la tche relle, en effet plusieurs paramtres entrent en jeu. Labsence de guides et
manuels indispensables dans un laboratoire, na fait que compliqu cette analyse. Il aurait
tait possible de se rfrer la documentation prsente dans dautres laboratoires, cela aurait
peut-tre facilit linterprtation des donnes mais aurait confr un autre caractre ltude.
Il est aussi soulign que lincomptence des professionnels dans certaines oprations peut
tre due aux difficults que trouvent celle-ci dans ladaptation un milieu de travail qui ne
manque pas de failles. Le manque dorganisation et lespace trs limit dans lequel se droule
lactivit illustre bien la dfaillance de tout un systme.
Cette analyse ne peut tre considre complte, pour analyser lactivit dun technicien de
laboratoire, il faudrait beaucoup plus de temps dobservation et plus de donnes quant aux
rsultats de son activit. Cette analyse nous permet davoir une ide globale sur les

comptences requises pour tre un professionnel dans ce domaine, mais il est trs important
de connatre la finalit de lactivit et par loccurrence la qualit du produit prpar, ce qui a
t impossible dans ce cas. La qualit du produit dpend de lavis du mdecin pour chaque
lame prpare. Il serait intressant dlaborer un manuel un plus spcifique. Les bonnes
pratiques de laboratoire ne peuvent tre respecte que si le milieu de travail le permet.
Lagencement des salles de manipulation doit tenir compte des difficults des techniciennes.
Un systme informatis pour grer le stock de ractifs pour que le laboratoire soit muni de
tout ce qui est requis une bonne manipulation. Les rsultats de cette activit peuvent donc
servir une rorganisation des tches de travail de lactivit du technicien.

Rfrences bibliographiques

Katz R.L., Skills of an effective administrator, Harvard Business Review, Vol. 51, 1974
Pierre Pastr, Patrick Mayen et Grard Vergnaud (1996), La didactique professionnelle,
Revue franaise de pdagogie, n 154 France,155
Pastr, initiateur de la didactique professionnelle (1991)
Vergnaud, G., & Rcop, M. (2000). De Revault d'Allonnes une thorie du schme
aujourd'hui. Psychologie franaise, 45(1), 35-50.
Vergnaud, G, 1996, Au fond de laction, la conceptualisation. In BARBIER (dir). Savoirs
thoriques et savoirs dactions, Paris P.U.F. p.285


ANNEXES




ANNEXE 1

ANNEXE 2

Techniques immunologiques et
immunhistochimiques
Technique histologique :

Aprs avoir prlev des biopsies de peau, une tude morphologique est effectue afin de
dtecter les anomalies cellulaires. Pour cela, des tapes fondamentales que sont la fixation
et linclusion en paraffine sont ncessaires. En effet, les biopsies pralablement fixes (le
liquide fixateur utilis tant le formol) doivent subir une pr-inclusion dans lautomate (12
bains dalcool et de tolune permettant la dshydratation de la biopsie). Cette pr-inclusion
permet la prparation des fragments lenrobage par la paraffine fondue. On obtiendra
ainsi des biopsies incluses dans des blocs de paraffine prts tre rabots et coups. Ces
blocs peuvent tre aussi conservs et stocks.

La coupe :
La coupe est l'tape la plus dlicate du protocole histologique. Les coupes du bloc de
paraffine sont faites au microtome qui permet de raliser une coupe trs fine de 3 5
microns d'paisseur pour chaque prlvement. Cette paisseur permet aux rayons lumineux
du microscope de traverser le prlvement et d'viter les superpositions cellulaires.
Le bloc doit tre bien refroidi, et bien rabot au pralable. Le couteau doit tre rgl de
manire dresser la face de coupe nette et rabote.
La confection du ruban de coupes est par la suite effectue suivie dune tape d'talement
qui s'effectue en dplissant la coupe par flottaison la surface d'un bain marie d'eau distille.
La coupe est dpose et colle sur une lame en verre. De multiples coupes successives
peuvent tre faites dans un mme bloc.
Il est trs important que cette tape se fasse minutieusement pour ne pas crer des plis au
niveau des coupes et pour une bonne lecture.

Collage et schage :
Ladhrence et le schage de la biopsie sur la lame se fait par chauffage de la lame sur une
plaque chauffante 55
- pendant une demi-heure si les lames sont non silanises et ltape qui va
suivre est la coloration

- pendant une heure lorsque les lames utilises sont des lames silanises. Ce
sont les lames utilises en IFI et IH .


Coloration Hematoxyline osine:
Cest la coloration la plus utilise en anatomie pathologique. Le colorant basique,
lhmatoxyline, colore les structures acides en bleu violac. Le colorant acide, losine,
colore les structures basiques en rouge ou en rose. Donc, lorsque la coloration par lHE est
applique : les noyaux les ribosomes et le rticulum endoplasmique rugueux sont colores
en bleu violet tandis que les cytoplasmes et les protines cytoplasmiques sont colors en
rose ou rouge. Cette coloration permet donc de visualiser les diffrentes structures
histologiques de la biopsie avant de passer a lIH ou lIFI;


ETAPES
Dparaffinage
Rinage
Elimination des prcipits
dus la fixation
Hydratation

Coloration

Rinage

Diffrenciation
(bleuissement)
Rinage

Coloration

Rinage

Dshydratation

Eclaircissement

Montage

BAINS
2 bains de Tolune
1 bain dalcool absolu
1 bain dalcool 95
1 bain dalcool 70
Alcool ammoniacal

DUREE
5 mm chacun
5 mm
5 mm
5 mm
5 mn

Eau de robinet

10 mn

Hmatoxyline

5 mn

Eau de robinet

Quelques secondes

Eau carbonate

5 mn

Eau de robinet

10 mn

Eosine

5 mn

1er bain de chlorure de

calcium
e
2 bain de chlorure de
calcium
3 bains de mthanol

Quelques secondes

2 mn

2 bains de Tolune

5mn / bain

Milieu de montage ( Eukitt)

3mn/bain

Etapes de la coloration HE

Technique d immunohistochimie :

Dparaffinage et rhydratation :
Cette tape concerne les biopsies enrobes dans de la paraffine et est prcde par une
tape de coupe des biopsies grce un microtome raison de 4m par lame. Cette tape
consiste en de bains successifs de tolune pour le dparaffinage et dalcools de
concentrations dcroissantes pour la rhydratation des coupes.

Bains de Tolune 2 15 min
Bain dalcool 100 % 5 min
Bain dalcool 90 % 5 min
Bain dalcool 70 % 5 min
Bain deau distille 5 min

Dmasquage antignique :
Le dmasquage antignique par la chaleur 96 C se fait soit au bain marie soit au micro-
ondes. Dans cette tude, nous avons procd au dmasquage au bain marie pour une
meilleure prcision de la temprature. Cette tape est ncessaire pour les biopsies en
paraffine car elle permet de restaurer les pitopes masqus par la paraffine.
Les lames sont transfres dans le bac soit de solution de tampon citrate PH 6 soit de
solution de TE PH 9 suivant lanticorps utilis. Lincubation se fait 96C pendant 30 min.
Sortir le bac du bain marie et laisser refroidir sur la paillasse. 20 min
Transfrer le portoir dans un bac deau distille. 5 min
2 lavages en eau distill 5 min
Lavage en PBS 5 min

Immunomarquage :
Cercler les coupes avec le Dako Pen

 Blocage de la peroxydase endogne : se fait par une solution de H2O2 3%. 20 min
Rincer en eau distille.
Placer les lames dans un bain de PBS 1X propre.
Appliquer lanticorps primaire soit temprature ambiante soit 37C. 30 min
2 lavages PBS
Appliquer lanticorps secondaire : polymre marqu la peroxydase conjugu des
immunoglobulines anti-lapin et anti-souris (kit Novocastra, Novocastra). 30 min
2 lavages PBS 1X
Appliquer la DAB ou lEAC
Rincer en eau
Contre coloration avec lhmatoxyline de Mayer.
Rinage leau courante et montage des lames par un milieu de montage (glycergel,
Dakocytomation).
Les lames en IHC sont lues grce un Microscope optique.

2.4 Technique dimmunofluorescence indirecte :

Les tapes de dparaffinage et rhydratation et de Dmasquage antignique sont les mme
que pour lIHC.
Incubation de lanticorps primaire 37 C : la dure de lincubation varie selon lAC
(gnralement variant de 30 min 1h et demie) pour les coupes en paraffine.
2 lavages PBS 1 X
Incubation de lanticorps secondaire 37C : anti-IgG de lapin ou de souris couples
lisothiocyanate de fluorescine (FITC). 30 min
2 lavages PBS 1 X
Lavage en eau distille et montage par un milieu de montage (glycergel, Dakocytomation).
Les lames en IFI sont lues par microscopie fluorescence.

ANNEXE 3

A
REPUBLIQUE TUNISIENNE
****----****
MINISTERE
DE LA SANTE PUBLIQUE
****----****
UNITE DES LABORATOIRES
DE BIOLOGIE MEDICALE

PROJET DARRETE DU MINISTRE DE LA SANTE PUBLIQUE

FIXANT LES REGLES DE BONNE PRATIQUE DE
LABORATOIRE
Article premier :
La recherche de la qualit doit tre la proccupation constante de
tout biologiste. Lobservation des rgles de bonne pratique de laboratoire
est une des conditions dterminantes de cette qualit.
Article 2 :
Les rgles auxquelles doivent se conformer tous les laboratoires
danalyses mdicales quelle que soit la forme juridique de leur
exploitation, sont fixes dans le guide figurant en annexe au prsent
arrt.
Article 3 :
Les rgles de bonne pratique de laboratoire sont opposables :
* la direction des structures sanitaires ;
* aux instances dlibrantes et consultatives ;
* aux personnes travaillant au sein des laboratoires danalyses
mdicales toutes qualifications confondues ; chacune en ce qui la
concerne.

REPUBLIQUE TUNISIENNE
MINISTERE DE LA SANTE
PUBLIQUE
GUIDE DE BONNE PRATIQUE
DE LABORATOIRE
MAI 2004
REPUBLIQUE TUNISIENNE
****----****
MINISTERE
DE LA SANTE PUBLIQUE
****----****
UNITE DES LABORATOIRES
DE BIOLOGIE MEDICALE

Ce guide nonce les rgles auxquelles doivent

se conformer les laboratoires d'analyses mdicales
pour garantir la fiabilit des rsultats des analyses,
dont ils ont la charge, ainsi que leur rentabilit tout

en assurant la scurit du personnel et la protection

de l'environnement.
Ces rgles constituent une des conditions
dterminantes de la qualit des analyses et
s'adressent tout le personnel des laboratoires
d'analyses mdicales ; toutes qualifications
confondues.
Ce document est labor dans le cadre d'un projet de
coopration avec l'Organisation Mondiale de la Sant pour
promouvoir la qualit des prestations des laboratoires de sant.
On y trouve les rgles observer rigoureusement pour
garantir la fiabilit des rsultats d'analyses, donnes dcisives
pour le diagnostic mdical in-vitro le traitement et le suivi de
nombreuses affections.
Cette 2me dition est mise jour par le comit technique
de biologie mdicale.
I INTRODUCTION
I.1. OBJET
I.2. DEFINITION DES TERMES
I.2.1. Laboratoire danalyses mdicales
I.2.2. Echantillons
I.2.3. Personnel
I.2.4. Client
I.2.5. Systme analytique
I.2.6. Management de la qualit
I.2.7. Systme documentaire
I.2.8. Traabilit
I.2.9. Qualification
I.2.10. Transfrabilit
I.2.11. Valeurs de rfrence
I.2.12. Validation
I.2.13. Confidentialit
I.2.14. Sous-traitance
I.2.15. Groupement de moyens
II - REGLES DE FONCTIONNEMENT 10
II.1. ORGANISATION
II.1.1. Obligations de la direction et des responsables de
laboratoires des tablissements de Sant et des directeurs de

laboratoires dans lorganisation et lexcution des analyses

II.1.2. Obligations du personnel
II.2. INSTALLATION
II.2.1. Amnagement et entretien
II.2.2. Scurit
II.3. INSTRUMENTATION
II.4. PETIT MATERIEL ET REACTIFS
II.5. INFORMATIQUE
II.6. ELIMINATION DES DECHETS
III - EXECUTION DES ANALYSES : REGLES GENERALES 15
III.1. PROCEDURES ET MODES OPERATOIRES
III.2. PRELEVEMENT, IDENTIFICATION ET CONSERVATION
DES ECHANTILLONS
III.2.1. Prlvement des chantillons biologiques
III.2.2. Identification des chantillons
III.2.3. Transport et transmission des chantillons
III.2.4. Conservation des chantillons
III.3. VALIDATION DES RESULTATS
III.4. EXPRESSION DES RESULTATS ET COMPTES RENDUS
DANALYSES
III.5. TRANSMISSION DES RESULTATS
IV SYSTEME QUALIT 20
IV.1. MISSIONS DU RESPONSABLE QUALITE
IV.2. CONTROLE DE QUALITE INTERNE
IV.3. CONTROLE DE QUALITE EXTERNE
IV.3.1. Contrle de qualit national
IV.3.2. Autres contrles de qualit externes
IV.4. GESTION DE NON CONFORMITES
IV.5. TRAITEMENT DES RECLAMATIONS
V CONSERVATION DES ARCHIVES 23

GUIDE DE BONNE PRATIQUE DE LABORATOIRE

I - INTRODUCTION :
I.1 - OBJET :
Les rsultats danalyses de biologie mdicale constituent des
donnes dcisives pour le diagnostic et la prescription des soins
appropris. A cet effet, la recherche de la qualit doit tre la
proccupation constante de tout biologiste. Lobservation des rgles de
bonne pratique de laboratoire, nonces dans le prsent guide, est une
des conditions dterminantes de cette qualit.
Ces rgles sadressent toutes les personnes travaillant au sein
des laboratoires danalyses mdicales ; toutes qualifications confondues.
Elles constituent le plus souvent un rappel de tout ce quil convient de se
procurer, dorganiser, de vrifier, de respecter, dtudier et de conserver

pour garantir la fiabilit des rsultats danalyses de biologie mdicale,

ainsi que leur rentabilit tout en assurant la scurit du personnel et la
protection de lenvironnement.
I.2 - DEFINITION DES TERMES 1 :
I.2.1 - Laboratoire danalyses mdicales :
Site o sont effectus les actes relatifs son objet par des
personnels, dans des locaux et avec un matriel conformes aux normes
dfinies par la lgislation et la rglementation en vigueur.
I.2.2 - Echantillons :
Un chantillon biologique est un chantillon obtenu par lacte de
prlvement et sur lequel vont tre effectues une ou plusieurs analyses
de biologie mdicale.
Un chantillon de calibrage est un chantillon de composition
dfinie qualitativement et quantitativement, adapt la mthode utilise,
pour un ou plusieurs constituants, souvent par rapport des talons de
rfrence et destin au calibrage des analyses utilises dans certaines
disciplines biologiques.
Un chantillon de contrle est un chantillon adapt la mthode
utilise, destin apprcier lexactitude et/ou la prcision des rsultats.
1 : rfrentiels : Dfinitions ISO 9000 et guide franais de bonne excution des
analyses

I.2.3 - Personnel :
Le personnel de laboratoire constitue lensemble des personnes
occupant rellement une fonction au sein du laboratoire. Il doit avoir une
qualification conforme aux textes rglementaires en vigueur. Il a le devoir
de se tenir constamment inform de lvolution de la biologie mdicale
en participant aussi rgulirement que possible aux confrences,
congrs, sminaires-ateliers organiss dans le cadre des actions de
formation continue.
Les responsables de laboratoires sont tenus dassurer la formation
permanente de leur personnel dans le domaine de la biologie mdicale.
Un biologiste est toute personne titulaire des diplmes
ncessaires, requis par la lgislation en vigueur, pour exercer sa
spcialit et/ou la direction dun laboratoire danalyses mdicales.
Les rsidents en biologie sont autoriss effectuer des actes de
biologie mdicale sous lautorit du responsable du laboratoire.
Un technicien est toute personne titulaire dun diplme ou dune
qualification reconnue rglementairement pour pratiquer des analyses de
biologie mdicale sous la responsabilit dun biologiste.
Un secrtaire est toute personne contribuant laccueil des clients
et la mise en forme des documents utiliss et tablis par le laboratoire.
Un ouvrier est toute personne effectuant les tches de nettoyage et
de dsinfection des locaux, de lavage et de strilisation du matriel de

laboratoire et de manutention
Tout le personnel des laboratoires danalyses mdicales est
soumis aux rgles du secret professionnel.
I.2.4 Client :
Organisme (= ensemble dinstallations et de personnes avec des
responsabilits, pouvoirs et relations) ou personne qui reoit un produit
(= rsultat dun processus) soit rsultat danalyse en biologie mdicale
I.2.5 Systme analytique :
Ensemble des moyens analytiques constitu dune mthode, dun
(ou plusieurs) appareil(s), dun (ou plusieurs) ractif (s), dun (ou
plusieurs) chantillon (s) de calibrage, dun (ou plusieurs) chantillon (s)
de contrle, qui permet de raliser la dtermination dun constituant
selon un mode opratoire dfini.
I.2.6 Management de la qualit :
La qualit est laptitude dun ensemble de caractristiques (=
traits distinctifs) intrinsques satisfaire des exigences (= besoins ou
attentes formuls habituellement implicites, ou imposs). Dans le
domaine de la biologie mdicale, cest ladquation entre les moyens mis
en oeuvre et les informations attendues par le mdecin prescripteur ainsi
que les attentes du client.
Le management de la qualit est lensemble des activits
coordonnes permettant dorienter et de contrler un organisme en
matire de qualit . Il inclut ltablissement dune politique qualit et
dobjectifs qualit, la planification de la qualit, la matrise de la qualit,
lassurance de la qualit et lamlioration de la qualit.
La planification de la qualit est la partie du management de la
qualit axe sur la dfinition des objectifs qualits et la spcification des
processus oprationnels et des ressources y affrentes, ncessaires
pour atteindre les objectifs qualit .
La matrise de la qualit est la partie du management de la
qualit axe sur la satisfaction des exigences (= besoins ou attentes
formuls, habituellement implicites, ou imposs) pour la qualit .
Lassurance de la qualit est la partie du management de la
qualit visant donner confiance en ce que les exigences pour la qualit
seront satisfaites . Dans le domaine de la biologie mdicale,
lassurance de la qualit est lensemble des actions prtablies et
systmatiques permettant de matriser lorganisation des tches
conduisant la qualit dans les 3 temps pr-analytique, analytique et
post-analytique.
-Le contrle de qualit interne constitue lensemble des procdures
mises en oeuvre dans un laboratoire en vue de contrler la qualit des
rsultats des analyses au fur et mesure de lexcution de ces
analyses.

-Le contrle de qualit externe correspond lvaluation, par un

organisme extrieur, de la qualit des rsultats fournis par un
laboratoire. Elle est rtrospective et permet une confrontation interlaboratoires
en vue damliorer la qualit des prestations de lensemble
des participants.
I.2.7 Systme documentaire :
Les documents relatifs au systme qualit dun organisme, cest
dire lensemble de lorganisation, des procdures, des processus et
des moyens ncessaires pour mettre en oeuvre le management de la
qualit sont principalement :
* le manuel qualit
* les procdures
* les diffrents documents oprationnels de mise en oeuvre
du systme qualit : instructions, modes opratoires, consignes,
spcifications, formulaires, etc
* les documents denregistrement
I.2.7.1 : Manuel qualit 2 :
Un manuel qualit doit dcrire le systme de management de la
qualit et la structure de la documentation de celui-ci. Le manuel qualit
doit inclure ou faire rfrence aux procdures de soutien, incluant les
procdures techniques. Il doit mettre en relief la structure de la
documentation du systme de management de la qualit. Le rle et les
responsabilits de la direction technique et du responsable qualit, y
compris leur responsabilit concernant lassurance de la conformit la
norme internationale ISO 15189 , doivent tre dfinis dans le manuel
qualit.
Lensemble du personnel doit tre form lutilisation et
lapplication du manuel qualit, de tous les documents rfrencs et des
exigences relatives leur mise en oeuvre. Le manuel qualit doit tre
tenu jour sous lautorit et la responsabilit dun responsable qualit
dsign par la direction du laboratoire.
I.2.7.2 : Processus :
Ensemble dactivits corrles ou interactives qui transforme des
lments dentre en lments de sortie . Dans le processus des
analyses de biologie mdicale, les chantillons biologiques constituent
des lments dentre et les rsultats danalyses y affrents des
lments de sortie.
I.2.7.3 : Procdures :
Manire spcifie deffectuer une activit ou un processus .
Une procdure crite comporte une activit, lobjet et le domaine
dapplication. Elle indique qui fait quoi, quand, o et comment, avec quel
matriel, quel document et comment ce qui est fait est matris et
enregistr.

I.2.7.4 : Document oprationnel :

Un document oprationnel ( ou mode opratoire) dfinit le dtail de
laction accomplir lorsque la procdure le ncessite et le prvoit.
I.2.7.5 : Document denregistrement :
Un document denregistrement permet de prouver quun produit ou
une opration dtermin est conforme aux exigences spcifies.
I.2.8 Traabilit :
Aptitude retrouver lhistorique, lutilisation ou la localisation
dune entit au moyen didentifications enregistres (ISO 8402).
Dans le domaine de la biologie mdicale, la traabilit consiste
pouvoir fournir tout moment les lments chiffrs et les documents qui
permettent de savoir comment un rsultat danalyse a t obtenu.
2 : Extrait de la norme internationale ISO 15189 relative aux exigences
particulires concernant la qualit et la comptence dans les laboratoires
danalyses mdicales.

I.2.9 Qualification :
Toute opration destine dmontrer quun systme analytique,
ou instrument, fonctionne correctement et donne rellement les rsultats
attendus.
I.2.10 - Transfrabilit :
Qualit dun procd analytique permettant celui-ci dtre utilis
dans un grand nombre de laboratoires.
Qualit dun rsultat analytique permettant de comparer celui-ci
avec ceux obtenus dans dautres laboratoires.
I.2.11 - Valeurs de rfrence :
Rsultats obtenus pour un constituant donn dans une population
de rfrence dont les individus sont exempts de pathologie ou de
traitement susceptibles de modifier ceux-ci.
Les valeurs de rfrence peuvent varier en fonction de lorigine
gographique, du sexe, de lge des individus ainsi que de la race et de
lespce pour les animaux. Elles sont exprimes gnralement en tenant
compte des limites infrieures et suprieures dtermines par tude
statistique. Elles peuvent tre tablies par le biologiste en fonction des
techniques analytiques quil utilise ou ventuellement vrifies lorsquil
emploie des donnes des publications scientifiques.
Lexpression Valeur de rfrence est prfrable celle de
Valeur usuelle ou Valeur normale .
I.2.12 - Validation :
Opration permettant dassurer quun rsultat a t obtenu dans
des conditions techniques satisfaisantes et quil est compatible avec le
dossier biologique du client.
Cette validation est la fois analytique et biologique.
La validation analytique consiste vrifier la conformit des

conditions dexcution aux procdures en tenant compte notamment des

rsultats obtenus sur les chantillons de contrle.
La validation biologique est le contrle de la vraisemblance et de la
cohrence de lensemble des rsultats des analyses effectues pour une
personne compte tenu de son tat clinique, des traitements subis et des
rsultats antrieurs.
I.2.13 Confidentialit :
Fait de protger toutes les informations relatives au client par le
secret professionnel.
I.2.14 - Sous-traitance :
Lorsquun laboratoire sous-traite des travaux, soit en raison de
circonstances imprvues (par exemple volume de travail, ncessit de
connaissances techniques supplmentaires ou incapacit momentane),
soit de faon suivie, les travaux en question doivent tre confis un
sous-traitant habilit.
Le laboratoire est responsable envers le client des travaux
effectus par le sous-traitant, lexclusion des analyses mdicales
vises larticle 5 de la loi N 2002-54 du 11 Juin 2002, relative aux
laboratoires danalyses mdicales.
Le laboratoire doit conserver un registre dans lequel sont
consignes toutes les rfrences des travaux sous-traits et des soustraitants
auxquels il a recours.
I.2.15 Groupement de moyens
Il sagit dune socit en participation cre par des responsables
de laboratoires privs danalyses mdicales, en vue dacqurir et
dutiliser en commun un quipement biotechnique particulier.
Ce matriel doit tre install dans les locaux du laboratoire dun
des associs sous le contrle duquel les analyses y affrentes seront
pratiques. Le directeur dudit laboratoire est tenu den informer les
services comptents du (des) ministre(s) de tutelle.
Cette socit ne peut exercer lactivit des laboratoires danalyses
mdicales en lieu et place des laboratoires des associs.
Les contrats et avenants relatifs au groupement de moyens doivent
tre soumis laccord pralable du ou des Ministres de tutelle aprs avis
du Comit technique de biologie mdicale lorsquil sagit dquipement
biomdical lourd tel que dfini par les dispositions lgislatives et
rglementaires en vigueur.

II - REGLES DE FONCTIONNEMENT :
II. 1 - ORGANISATION :
II.1.1 - Obligations de la direction et des responsables de
laboratoires des tablissements de sant et des directeurs de
laboratoires dans lorganisation et lexcution des analyses :
Le biologiste doit veiller lapplication des rgles de bonne

pratique dans le laboratoire. Il est notamment tenu de :

- Concernant le personnel :
* tablir un organigramme du laboratoire ;
* sassurer que le personnel est apte aux tches qui lui sont
confies et assurer la formation ncessaire cet effet ;
* mettre la disposition du personnel les procdures et
modes opratoires ainsi que le prsent guide ;
* informer le personnel de la mise en place de toute nouvelle
procdure et de leurs modifications ultrieures ventuelles ;
*superviser le personnel en formation.
- Concernant les procdures et modes opratoires :
* sassurer que les procdures et modes opratoires en
vigueur vrifies, approuves et dates sont mises en oeuvre par le
personnel ;
* sassurer que toute modification justifie de procdure est
crite, approuve, enregistre, date, communique et que tout le
personnel est form lapplication de cette modification ;
* sassurer que le prescripteur est inform, sur les comptes
rendus danalyses, de toute modification de procdure susceptible de
changer le libell ou la remise des rsultats afin dviter des
interprtations errones ;
* conserver un fichier chronologique de tous les procdures
et modes opratoires ;
* procder, en cas de dysfonctionnement toutes les
oprations susceptibles de corriger les anomalies, sassurer de
lenregistrement des mesures correctives entreprises et valuer leurs
rsultats ;
* sassurer de la gestion rglementaire des archives.
- Concernant les installations, lquipement, linstrumentation, les
produits consommables et les ractifs :
* sassurer que les installations, lquipement et
linstrumentation du laboratoire sont fonctionnels ;
* sassurer que les produits consommables sont appropris ;
* sassurer que les ractifs sont disponibles, non prims et
conservs dans les conditions fixes par le fabricant ;
* sassurer que les installations, lquipement,
linstrumentation, les produits consommables et les ractifs sont adapts
lvolution des connaissances scientifiques et des donnes
techniques ;
* sassurer que les conditions ambiantes ne sont pas
susceptibles daffecter les rsultats et/ou de perturber le fonctionnement
des appareils.
- Concernant la scurit du personnel :

* sassurer que les mesures concernant la sant et la

scurit du personnel ainsi que la protection de lenvironnement sont
appliques conformment la lgislation et la rglementation en
vigueur ;
* manipuler, conserver et liminer les dchets en prenant
toutes les prcautions ncessaires pour viter les contaminations.
II.1.2 - Obligations du personnel :
Le personnel doit participer la mise en place du systme qualit
du laboratoire et se conformer toutes les procdures en vigueur.
Le personnel a lobligation dappliquer les rgles de bonne pratique
de laboratoire nonces dans le prsent guide.
II.2 - INSTALLATION. :
II.2.1 - Amnagement et entretien:
Les locaux abritant le laboratoire doivent tre conformes aux
normes dfinies par la rglementation en vigueur.
Laccs au laboratoire est organis selon une procdure.
Lamnagement du laboratoire doit tre conu pour permettre
disoler les activits susceptibles dentraner une contamination du
personnel et/ou de lanalyse et pour viter toute pollution. Il est impratif
de mettre en oeuvre des procdures permettant dviter les croisements
spatio-temporels de produits incompatibles dans le laboratoire
(chantillons biologiques, consommables, dchets).
Il doit exister des zones de stockage diffrentes tempratures
pour les matires premires, les ractifs et les consommables. La
conservation des chantillons biologiques doit viter tout risque de
contamination.
Les produits toxiques ou potentiellement dangereux doivent tre
stocks part dans des zones rpondant aux normes de scurit
requise.
Des zones particulires pour le nettoyage du matriel contamin
ou polluant doivent exister dans la laverie du laboratoire.
Des instructions doivent prciser lentretien des locaux (frquence,
produits de nettoyage, mode demploi).
Le nettoyage du matriel et le tri des dchets doivent se faire dans
des conditions de scurit pour le personnel et pour la qualit des
analyses.
II.2.2 - Scurit :
Toutes les dispositions ncessaires doivent tre prises pour
respecter les obligations rglementaires contre les risques dincendie et
dexplosion.
Les installations de gaz combustible doivent tre conformes la
rglementation en vigueur et rgulirement vrifies par une personne
ou un organisme habilit cet effet.

Les produits inflammables, radioactifs ou combustibles doivent tre

conservs dans les conditions rglementaires.
Les produits toxiques doivent tre maintenus dans leur emballage
dorigine avant leur utilisation. Quand ils entrent dans la composition de
ractifs, lemballage de ceux-ci doit porter clairement, selon les cas, les
mentions corrosif, irritant ou toxique.
II.3 - INSTRUMENTATION :
Tout laboratoire danalyses mdicales doit tre quip
conformment aux normes dfinies par la rglementation en vigueur. Il
doit disposer du matriel adapt aux analyses quil dclare effectuer.
Les systmes analytiques utiliss pour lobtention des rsultats
doivent tre choisis en fonction des performances souhaites et des
rsultats des expertises ralises indpendamment du fabricant ou du
vendeur. Si le systme analytique choisi na pas fait lobjet dexpertise
indpendante du fabricant ou du vendeur, le biologiste doit sassurer que
les rsultats fournis sont conformes aux exigences attendues.
Une fiche signaltique doit tre tablie pour chaque appareil.
Les manuels dutilisation et de maintenance des appareils doivent
tre mis en permanence la disposition du personnel utilisateur et
respects. Le fonctionnement des appareils doit tre vrifi selon la
frquence prconise par le fabricant. Le laboratoire doit disposer du
matriel ncessaire cet effet.
Lensemble de ces oprations ainsi que les visites dentretien ou
de rparation de lorganisme de maintenance doivent tre consignes
dans les fiches de maintenance affectes chaque instrument.
Il est vivement recommand dtablir des contrats de maintenance
des automates et des quipements biotechniques lourds.
Des procdures alternatives doivent tre prvues en cas de
dysfonctionnement dun appareil (automate notamment).
Le biologiste doit sassurer du respect des modalits dinstallation,
de fonctionnement et dentretien prconises dans la notice du fabricant
des matriels et des automates prsents dans le laboratoire. Il doit en
particulier sassurer que les versions des logiciels de gestion du
laboratoire possdent des capacits suffisantes et sont compatibles avec
les automates utiliss. Dans le cas dautomates permettant deffectuer
des analyses autres que celles prvues par le fabricant ou utilisant des
ractifs non fournis par celui-ci, toute extension dutilisation non valide
par le fournisseur de ractifs engage la responsabilit du biologiste.
II.4- PETIT MATRIEL ET RACTIFS :
Le petit matriel et ractifs ncessaires au fonctionnement des
appareils doivent tre conformes aux normes dfinies par les
constructeurs et doivent tre utiliss uniquement selon lusage et les
modalits prvus dans la notice.

Les ractifs prpars ou reconstitus au laboratoire doivent porter

la date de leur prparation ou reconstitution ainsi que celle de leur
premption. Ces manipulations doivent faire lobjet de procdures et
modes opratoires concernant la prparation et le contrle des ractifs
ainsi obtenus. Chaque fabrication dun lot doit tre consigne dans un
document qui est archiv avec le rsultat du contrle correspondant. Le
biologiste doit pouvoir justifier que les rsultats obtenus grce
lutilisation des ractifs ainsi prpars sont de mme qualit que ceux
fournis par les ractifs de fabrication industrielle quand ils existent.
Les ractifs dorigine industrielle doivent comporter, en outre, la
date de leur rception au laboratoire. Les instructions prcises sur leurs
conditions de stockage doivent tre strictement appliques.
Tout ractif prim ne doit pas tre utilis aux fins danalyse
mdicale pour les besoins des clients.
Les ractifs prsentant un caractre toxique et/ou potentiellement
infectieux doivent tre stocks dans des conditions particulires. Le
personnel doit tre inform de cette particularit et des mesures
prendre pour viter tout risque et de la procdure suivre en cas
dincident.
II.5 INFORMATIQUE :
Pour les laboratoires possdant un traitement automatis
dinformations nominatives, celui-ci doit tre conu et ralis et utilis de
faon respecter la confidentialit, viter les erreurs ou les pertes de
donnes. Une procdure doit tre tablie pour viter la perte des
informations en cas de panne du systme informatique.
Laccs total ou partiel aux donnes doit tre limit au personnel
autoris. Le systme informatique doit comprendre des dispositifs
efficaces de protection contre toute tentative daccs par des personnes
non autorises.
Toute modification des informations ou des programmes ne peut
tre effectue que par une personne autorise et identifie. La trace
dune modification dun programme doit tre conserve.
Le responsable du laboratoire ou ltablissement dont il dpend,
doivent prendre toutes les dispositions utiles pour assurer
convenablement la maintenance du systme informatique.
II.6- ELIMINATION DES DCHETS :
Llimination des dchets doit tre conduite de manire ne pas
compromettre la sant des personnels du laboratoire et du personnel
charg de la collecte des dchets et ne pas polluer lenvironnement.
Les dchets gnrs par les actes de prlvement et les analyses
doivent tre spars en dchets risque et en dchets ordinaires.
Les dchets risque comprennent 3 groupes :
* dchets potentiellement infectieux, dchets anatomiques,

dchets piquants ou tranchants ;

* produits chimiques toxiques ;
* produits radioactifs.
Pour chaque groupe, une filire dlimination doit tre mise en
place avec des modalits de conditionnement, de stockage, de transport
et de traitement spcifiques et ce, conformment aux dispositions
lgislatives et rglementaires en vigueur.
Les dchets ordinaires sont conserver dans des conteneurs en
vue de leur limination par le circuit des ordures mnagres.

III- EXECUTION DES ANALYSES : RGLES GENERALES :

III.1- PROCDURES ET MODES OPERATOIRES :
Le laboratoire doit disposer dune procdure de gestion du
systme documentaire.
Dans chaque zone dactivit spcifique du laboratoire, les
procdures, les modes opratoires et les documents denregistrement
garants de la traabilit et relatifs aux actes qui y sont raliss doivent
tre disponibles, crits, dats, techniquement valids et approuvs. Ils
doivent tre adapts lvolution des connaissances et des donnes
techniques.
Toute modification dune procdure et/ou dun mode opratoire doit
tre crite, approuve par le responsable du laboratoire et faire lobjet
dune information et dune formation du personnel.
La ralisation des analyses doit respecter les obligations
techniques prvues dans la nomenclature officielle des actes de biologie
mdicale.
La priode dutilisation au laboratoire de chaque lot de ractif doit
tre consigne, de sorte quen cas de besoin, on puisse rapprocher un
rsultat avec les ractifs ayant permis de les obtenir.
Les procdures et modes opratoires disponibles concernent
notamment :
* Lhygine et la scurit du laboratoire ;
* le prlvement ;
* lidentification du client et de lchantillon ;
* le traitement pralable de lchantillon ;
* les interfrences des mdicaments et/ou des aliments
susceptibles de modifier les rsultats de lanalyse ;
* les modalits de transport de lchantillon ;
* la conservation de lchantillon avant et aprs lanalyse ;
* lquipement (utilisation, entretien, talonnage, suivi de bon
fonctionnement) ;
* les ractifs (prparation/reconstitution, utilisation,
premption, conservation) ;
* lanalyse (description de la mthode utilise) : la mthode

choisie doit tre adapte aux connaissances et donnes techniques du

moment et suivre, dans la mesure du possible, les recommandations des
socits savantes de biologie mdicale ;
* les rgles de validation des rsultats danalyses ;
* la transmission des rsultats danalyse ;
* le systme qualit ;
* la gestion du systme informatique ventuel ;
* la gestion des dchets de laboratoire.
III.2- PRELEVEMENT, IDENTIFICATION ET CONSERVATION
DES ECHANTILLONS :
III.2.1- Prlvement des chantillons biologiques :
Le biologiste fournit aux mdecins prescripteurs toutes les
prcisions utiles aux conditions de prlvement, de transport et de
conservation des chantillons. Les chantillons doivent tre associs
une fiche de demande danalyse comportant tous les renseignements
ncessaires la bonne excution des analyses et linterprtation des
rsultats.
Le prlvement est effectu par un personnel qualifi et autoris.
Ces personnes doivent tre formes aux procdures de prlvement du
laboratoire et informes des risques derreur sur les rsultats danalyses,
conscutifs la ralisation dfectueuse du prlvement et la ncessit
de prciser au biologiste responsable tout incident survenu au cours du
prlvement.
Le biologiste vrifie la conformit des chantillons biologiques
accepts dans son laboratoire. Il doit refuser tout chantillon prlev ou
transmis dans des conditions non conformes aux procdures techniques
et rglementaires. Le motif de ce refus sera port la connaissance du
mdecin prescripteur. Lorsquil sagit dun prlvement difficile ou
unique, les critres dacceptation doivent tre apprcis avec
circonspection ; le rsultat doit faire mention de ces ventuelles rserves
si cela est ncessaire. Chaque fois que cela est possible, il est
souhaitable que le prlvement soit effectu au laboratoire.
Tout prlvement doit tre ralis dans les conditions dasepsie
requise. Le prlvement sanguin doit tre pratiqu avec du matriel
strile usage unique. Le rcipient destin contenir lchantillon doit
tre adapt la nature de lchantillon et celle des analyses. La nature
du rcipient et de son systme de fermeture ainsi que la nature et la
concentration des substances adjuvantes quil peut contenir doivent tre
connues et prcises en fonction de lchantillon auquel il est destin.
Le rcipient doit tre conu pour viter tout risque de
contamination et de pollution.
Des prcautions doivent tre prises pour le stockage et
llimination sans danger des aiguilles usages.

La date et lheure du prlvement doivent tre connues pour viter

les erreurs dinterprtation de rsultats lies au statut digestif, au rythme
nycthmral, labsorption de mdicament ...
III.2.2- Identification des chantillons :
Ltiquetage des rcipients contenant lchantillon biologique doit
tre fait au moment du prlvement par le prleveur et conu pour viter
toute erreur sur lidentit et lorigine de lchantillon.
La fiche de demande doit tre rdige par le mdecin prescripteur
ou toute autre personne habilite pour la ralisation correcte de
lanalyse, sa validation et son interprtation. Elle doit notamment
comporter, pour la ralisation correcte de lanalyse sa validation et son
interprtation, les donnes suivantes :
- lidentit univoque du client et du prescripteur lgalement
habilit ;
- lge et le sexe du patient ou lge, le sexe, la race et lespce de
lanimal et le cas chant le nombre dchantillons ;
- la date, lheure et la nature du prlvement et le site anatomique
dorigine, le cas chant ;
- la nature de lanalyse demande.
III.2.3- Transport et transmission des chantillons :
Le transport des chantillons doit respecter des rgles qui assurent
lintgrit de lchantillon et la scurit du personnel. Des procdures et
modes opratoires crits par le laboratoire qui effectue lanalyse doivent
fixer les conditions particulires de dlai de transport, de temprature de
conservation et dintgrit de lemballage des chantillons biologiques.
Des indicateurs de dure de transmission et de rupture de la chane du
froid doivent tre mis en place lorsque les modalits de lanalyse le
prvoient. Lexpditeur doit sassurer du respect de ces conditions.
Le transport des chantillons biologiques doit seffectuer le plus
rapidement possible au laboratoire en prenant toutes les prcautions
pour viter les risques de contamination et de dgradation des
constituants. Dans des cas particuliers, le ou les rcipients tanches
contenant les chantillons biologiques doivent tre insrs dans une
bote tanche, tapisse par un matriau absorbant et lensemble plac
dans un emballage extrieur rsistant, portant les noms et adresses du
laboratoire destinataire et de lexpditeur.
Pour les chantillons destins tre transmis un autre
laboratoire, inscrire sur la fiche de suivi les nom et prnom du client, la
date et lheure du prlvement et du pr-traitement ventuel ainsi que
les conditions de stockage et de transport et les incidents ventuels, y
joindre la fiche de demande.
Le laboratoire destinataire doit noter la date et lheure de la
rception de lchantillon. Le biologiste peut ne pas pratiquer les

analyses transmises si la qualit et/ou les conditions de transport et de

pr-traitement du prlvement sont juges inadquates.
III.2.4- Conservation des chantillons :
Les conditions de conservation doivent tre conformes aux rgles
de scurit et dhygine en vigueur.
Les chantillons de calibrage et de contrle doivent tre conservs
dans les conditions prcises par le fabricant. La priode de validit doit
tre respecte en particulier pour les chantillons reconstitus partir de
substances lyophilises, qui doivent porter la date et lheure de leur
reconstitution. Toutes les prcautions doivent tre prises pour viter les
phnomnes dvaporation et de contamination.
Avant lexcution des analyses, si celles-ci sont diffres, les
chantillons et leurs aliquotes doivent tre conservs dans des
conditions qui prservent leur qualit.
La conglation de fractions aliquotes obtenues aprs reconstitution
dchantillons lyophiliss engage la responsabilit du biologiste.
Aprs lexcution des analyses, les chantillons peuvent tre
conservs pour un ventuel contrle ultrieur. La dure de conservation
pour chaque cas doit, si elle nest pas rglementaire, tre fixe par le
biologiste et inscrite sur les fiches de procdures.
III.3 - VALIDATION DES RSULTATS :
Les rsultats sont soumis une double validation.
La validation technique doit tre effectue par le personnel
dexcution sous la responsabilit du biologiste, aprs avoir vrifi les
indicateurs de bon fonctionnement de lquipement biotechnique et pris
connaissance des rsultats du contrle de qualit interne, selon des
instructions prcises crites.
La validation biologique, pour sassurer de la compatibilit des
rsultats de lensemble des analyses pratiques pour le mme client, est
de la seule comptence du biologiste.
III.4 - EXPRESSION DES RSULTATS ET COMPTES RENDUS
DANALYSES :
Lexpression des rsultats doit tre prcise, univoque et consigne
en units SI ou en units traables par rapport aux units SI si
ncessaire.
Les valeurs de rfrence doivent tre indiques. La mthode
danalyse et/ou les ractifs utilis(e)(s) doivent tre mentionn(e)(s)
chaque fois quils peuvent influer sur lexpression du rsultat ou que la
rglementation lexige.
Les comptes rendus danalyses aprs validation doivent chacun
comporter :
- Lidentification du laboratoire
- lidentit univoque du malade pour les analyses mdicales

humaines ;
- lidentification et la provenance du ou des animaux pour les
analyses mdicales vtrinaires ;
- la nature et la date du prlvement et/ou du dpt du
produit analys ;
- les rsultats danalyses et leur interprtation si ncessaire ;
- la date de la remise du compte rendu ;
- la signature manuscrite du biologiste.
III.5 - TRANSMISSION DES RSULTATS :
Elle doit se conformer la lgislation et la rglementation en
vigueur et assurer le respect du secret professionnel.
Les rsultats danalyses sont remis au client en main propre ou lui
sont envoys sous pli cachet, son nom et ladresse quil
communique.
Les rsultats danalyses peuvent galement tre transmis au
mdecin prescripteur du client sauf opposition de ce dernier. Les
rsultats peuvent tre remis une tierce personne dment mandate par
le client. Lorsque le client est hospitalis, les rsultats sont adresss au
mdecin prescripteur et remis au client selon la rglementation en
vigueur.
Le biologiste dun tablissement de sant doit pouvoir sassurer
que le dispositif mis en place pour lacheminement des comptes rendus
vers les units de soins rpond aux critres de confidentialit et de
conformit tablis en coordination avec les cliniciens et lquipe de
direction.
Si le mdecin prescripteur peut consulter le serveur du laboratoire
ou un serveur destin acheminer les rsultats du laboratoire, ceux-ci
doivent tre conus pour garder la trace de la consultation.
Si les rsultats sont transmis par un procd tlmatique un
autre laboratoire ou au mdecin prescripteur, le biologiste doit utiliser un
systme de transmission fiable qui garantit la conformit des rsultats
transmis et le respect du secret professionnel. Le systme de rception
des comptes rendus danalyses doit respecter la confidentialit des
donnes mdicales. Les rsultats sont confidentiels et ne doivent en
aucun cas parvenir dans un lieu accessible au public.
Sils sont adresss dans une salle dopration ou dans une salle de
ranimation, ils peuvent tre transmis en flux continu de faon tre
accessibles directement aux chirurgiens, anesthsistes et ranimateurs.
Sils sont adresss dans un service dhospitalisation ou de
consultation, le systme ne doit permettre leur visualisation ou leur
impression que sur demande du prescripteur, matrialise par
lutilisation dun code secret et dun support matriel personnel.
Un rsultat laissant prsager un pronostic grave ou fatal ne doit

tre rvl quavec la plus grande circonspection. Le biologiste doit

prendre contact dans les meilleurs dlais avec le mdecin prescripteur.
Si les rsultats ne peuvent pas tre communiqus au mdecin
prescripteur (changement de mdecin, analyses effectues linitiative
du biologiste ou ajoutes la demande du client), le biologiste doit
demander au client de lui dsigner le mdecin, qui il souhaiterait voir
remettre les rsultats avec dautant plus de prudence et sensibilit que
les rsultats sont proccupants.
Tout rsultat proccupant, soit pour le client soit au regard de la
sant publique, que le biologiste est amen remettre, ne peut tre
communiqu au client quen main propre et au cours dun entretien
particulier. Le biologiste doit alors inciter le client consulter un mdecin
traitant le plus rapidement possible.
Les comptes rendus des analyses destines tablir un diagnostic
prnatal ne peuvent tre remis la femme enceinte que par
lintermdiaire du mdecin prescripteur.
Les comptes rendus des analyses effectues sur rquisition
judiciaire ne peuvent tre adresss qu lautorit requrante dans des
conditions garantissant la confidentialit.
Les comptes rendus des analyses, prescrites par le mdecin du
travail dans le cadre de sa mission (avis daptitude notamment), lui sont
directement communiqus par le laboratoire qui les a effectus. Le
mdecin du travail informe le salari des rsultats.
Un biologiste ne peut pas rpondre une demande de
renseignements faite par une compagnie dassurance concernant une
analyse, mme si cette demande mane du mdecin de la compagnie.
Les rsultats danalyses destins des compagnies dassurances ne
peuvent tre remis quau client en main propre, lequel reste libre den
faire lusage quil dsire.
Les responsables de laboratoires danalyses mdicales sont tenus
de notifier aux services comptents du(es) Ministre(s) de tutelle les cas
confirms des maladies transmissibles dclaration obligatoire.

IV- SYSTEME QUALITE :

Tout laboratoire danalyses mdicales doit disposer dun systme
qualit bas sur des procdures et modes opratoires crits couvrant les
diffrentes tapes des analyses. Ce systme doit tre permanent et
soumis des valuations internes et externes.
Toute lquipe du laboratoire est concerne par ce systme qui est
plac sous lautorit du responsable du laboratoire ou dun des
biologistes assistants.
IV- 1. MISSIONS DU RESPONSABLE QUALITE :
La personne charge du systme qualit est responsable :
a) quant au personnel :

- de llaboration du systme documentaire

(procdures, modes opratoires, instructions et enregistrements) ;
- de la mise en oeuvre des procdures et instructions
concernant lhygine et la scurit du personnel ;
- de la ralisation de chaque opration au laboratoire
par un excutant prsentant la qualification, la formation et lexprience
appropries ;
- de la sensibilisation du personnel la notion de
"qualit" et de sa formation pour la mise en oeuvre des pratiques
qualit .
b) quant aux procdures et modes opratoires :
- de leur validation ;
- de leur mise en oeuvre ;
- de linformation et, au besoin, de la formation du
personnel de toute modification de procdures chacun en ce qui le
concerne. Cette modification, doit tre approuve par le directeur ou le
chef de service du laboratoire ou de dpartement, crite et date.
- de leur conservation dans un fichier chronologique.
c) quant au contrle de qualit :
- de la gestion du programme de contrle de qualit
(externe et interne) ;
- de la bonne utilisation des donnes fournies par le
contrle de qualit et de la correction des anomalies ;
- de linformation du directeur ou du responsable du
service ou du dpartement des constatations et des observations
relatives au systme dassurance de qualit ;
- de lapplication des mesures conscutives un
retrait ventuel de ractifs par les services comptents du ministre de la
sant publique ;
- de la maintenance et du bon fonctionnement des
appareillages ;
- de la bonne tenue des documents qui concourent
la traabilit, notamment ceux concernant les ractifs et la priode
dutilisation de chaque lot ;
- dun systme dassurance de qualit au moins
quivalent auprs des laboratoires travaillant en collaboration avec le
laboratoire et auxquels sont transmis des chantillons aux fins
danalyses ;
d) quant au systme informatique :
- de la mise en oeuvre des procdures et instructions
concernant la scurit des donnes ;
- de la confidentialit et du respect des instructions
daccs ;

- du respect de la rglementation et de linformation

des clients ;
- du respect des procdures de tlcommunication et
transmissions lectroniques ;
- de la conservation des registres et fichiers des
traces du systme informatique.
IV.2 - CONTRLE DE QUALITE INTERNE
Le contrle de qualit interne permet de dceler les anomalies et
les erreurs de mesure pour y remdier immdiatement et en viter la
rptition. En effet, il consiste faire passer dans les sries journalires
danalyse des chantillons de contrle connus. Ces derniers ne doivent
pas tre traits dune faon particulire pour optimiser artificiellement
leurs rsultats.
Les chantillons de contrle ne peuvent en aucun cas se substituer
aux chantillons de calibrage et vice versa.
Les modes opratoires doivent prciser la frquence de passage
des chantillons de contrle, les valeurs limites acceptables pour chaque
lment et les mesures prendre en cas danomalies constates.
Le laboratoire doit disposer de souches de rfrence pour le
contrle de qualit interne des tapes didentification, dantibiogramme
et/ou danti-fongigramme des micro-organismes isols des produits
pathologiques.
Dans les disciplines mettant en oeuvre un examen
macroscopique et/ou microscopique, il est utile de conserver les pices
pathologiques ayant servi au diagnostic pouvant constituer un lment
de rfrence consulter priodiquement.
IV.3 -: CONTRLE DE QUALITE EXTERNE :
IV.3.1 - Contrle de qualit national :
Le contrle de qualit national des analyses est organis par les
services comptents du ou des Ministres de tutelle. Il sagit dun outil
dvaluation des techniques danalyses et des procdures dassurance
de qualit mises en oeuvre dans les laboratoires.
Les rsultats individuels du contrle sont confidentiels.
La participation au contrle de qualit national est obligatoire.
Une participation loyale, refltant la pratique du laboratoire, est
indispensable pour lutilit de cette valuation. Les rsultats de celle-ci
seront en effet trs importants pour lapprciation de ltat de lart au
niveau national.
Les rsultats individuels et globaux du contrle de qualit national
doivent tre analyss par toute lquipe du laboratoire afin de corriger les
erreurs susceptibles dtre rvles.
Une trace des dcisions ventuellement induites par les rsultats
du contrle de qualit national doit tre conserve en mme temps que

les comptes rendus individuels du laboratoire pendant 5 ans.

IV.3.2 - Autres contrles de qualit externes :
Il est recommand que le laboratoire participe des contrles de
qualit externes organiss par des socits scientifiques, des
groupements de biologistes ou tout autre organisme prsentant les
garanties ncessaires.
IV.4 - GESTION DES NON CONFORMITES :
Le responsable du laboratoire doit mettre en place une procdure
suivre en cas de non-conformit des analyses, dont il a la charge, aux
exigences techniques y affrentes. Il doit notamment :
- interrompre les analyses et en informer les cliniciens
prescripteurs dans le cas o les rsultats des analyses non-conformes
leur seraient dj communiqus ;
- entreprendre les actions correctives ;
- refaire les analyses ;
- enregistrer chaque non-conformit et les actions correctives
entreprises ;
- mettre en place des actions prventives.
IV.5 - TRAITEMENT DES RECLAMATIONS :
Le laboratoire doit mettre en place des procdures pour le
traitement des rclamations de la part des clients ou autres parties. Des
enregistrements des rclamations et des actions correctives entreprises
doivent tre conservs au laboratoire.

V - CONSERVATION DES ARCHIVES :

Les archives du laboratoire doivent tre entreposes dans un local
permettant la conservation des documents sans altration et ce, sous la
responsabilit dune personne dsigne cet effet par le responsable du
laboratoire. Toutes les mesures propres assurer la confidentialit des
rsultats nominatifs doivent tre prises.
La procdure de stockage des documents conservs sous forme
informatique doit tre tablie pour viter toute perte accidentelle des
informations. Ces dernires doivent tre dupliques sur 2 supports
distincts (lun servant la consultation et lautre tant gard en rserve).
Les archives doivent comporter les documents suivants :
- le relev chronologique des analyses pratiques par le
laboratoire, prcisant la date dexcution de lanalyse, son numro
dordre, les nom et prnom du client, pour les analyses de biologie
mdicale humaine, lidentification et la provenance du ou des animaux
malades, pour les analyses vtrinaires, les nom et prnom du mdecin
prescripteur, la nature et les rsultats des analyses excutes. Ces
rfrences doivent tre conserves, dans le respect de la confidentialit,
pendant une priode minimale de 5 ans ;
- les rsultats des analyses excutes dans le cadre du contrle de

qualit national. Ces rsultats sont conserver pendant 5 ans ;

- les rsultats du contrle de qualit interne, conserver pour une
priode minimale dun an ;
- un exemplaire des procdures, modes opratoires et instructions,
comportant la date de leur mise en oeuvre, conserver pendant la dure
de leur utilisation et au moins 2 ans aprs la fin de leur utilisation ;
- les documents relatifs aux instruments, conserver pendant la
dure dutilisation de ce matriel ;
- les documents relatifs aux ractifs et au matriel consommable,
conserver pendant la dure dutilisation.
- En ce qui concerne les laboratoires danatomie et cytologie
pathologiques, leurs archives doivent comporter, outre les documents
sus-indiqus, les talements, les coupes et les blocs dinclusion ayant
fait lobjet danalyse. Le relev chronologique des examens danatomie
et cytologie pathologiques humaines, les talements ainsi que les
coupes et les blocs dinclusion sy rapportant doivent tre conservs,
dans le respect de la confidentialit, et ce, pendant une priode de 10
ans.

Ce guide nonce les rgles auxquelles doivent

se conformer les laboratoires d'analyses mdicales
pour garantir la fiabilit des rsultats des analyses,
dont ils ont la charge, ainsi que leur rentabilit tout
en assurant la scurit du personnel et la protection
de l'environnement.
Ces rgles constituent une des conditions
dterminantes de la qualit des analyses et
s'adressent tout le personnel des laboratoires
d'analyses mdicales ; toutes qualifications
confondues.

ANNEXE 4

*
Nom$du$chier$
photo$$

Rendu*2:*Tableau*de*recueil*de*donnes*
*

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

*Par*Ben*Romdhane*Zeineb*

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*suprieur*de*laboratoire*danatomopathologie*15*ans*dexprience*
Ac<vit:*prpara<on*dune*lame*de*microcopie*op<que*pour*analyser*un*fragment*de*<ssu.*
Dissec<on_biops
ie_1.jpg*

9HF09H.05*

T*(professionnel:*t*
echnicien)*
commence*la*
manipula<on*par*la*
dissec<on*du*
matriel*biologique*
*analyser*

S(surveillant*du*
laboratoire)**T:*le*
mdecin*a*prfr*
dissquer*la*biopsie*
car*elle*est*un*peu*
dlicate*

T*trouve*la*consigne*
du*mdecin*par*
rapport**la*
dissec<on.*

CasseNe_biopsie
_2.jpg*

9h.05F9h30*

T*met*les*lments*
du*<ssu*dissqu*
dans*des*casseNes.*

T**P(prparatoire*du*
labo):*met*les*
casseNes*dans*le*
support*de*
lautomate,*jai*
presque*termin.*Et*
pose*ceux*dhier*sur*la*
paillasse*2.**

P*prend*les*
casseNes*au*fur*et**
mesure*et*les*mets*
dans*un*support.**
*

Reglage_automa
te_3.jpg*

9h30F9h33*

Rglage*de*
lautomate*pour*un*
cycle*de*lavage*
avant*linclusion*en*
parane.*

Ouvrir_automat
e_4.jpg*

9h.33F9h33*

Ouverture*de*
lautomate*pour*
poser*le*support*
contenant*les*
casseNes*

T**P:*donne*moi*le*
support,*tu*na*pas*
ni*?*
P**T:*si*

Chargement_aut
omate_5.jpg*

9h.33F9h35*

Charger*le*support*
rempli*de*casseNe*
dans*lautomate.**

T:*et*voil*!*
*T**P:*vrie*la*
temprature*parce*
que*la*dernire*fois*il*
y*avait*un*pe<t*souci.*
Mais*bon*je*ne*suis*
pas*sre.***
*

T*a*chang*les*gants*
avant*de*rgler*
lautomate.*

Photo*prise*de*
dessus,*aucun*autre*
angle*possible*
prsence*de*p**
droite*et*dune*
paillasse**gauche.*
*
Changement*de*
salle*(vers*la*salle*2)***
*

Nom$du$chier$
photo$$

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*de*laboratoire*danatomopathologie*2*
Ouvert_casse=
e_6.jpg*

9H40E10h*

T*ouvre*les*
casse=es(sorIe
s*par*P*de*
lautomate)*une*
*une*.*

T**P:*met*la*
parane*dans*
les*moules.*
P**T:*Il*y*en*a*
assez*dans*le*
bac*regarde**

Inclus_paran
e_7.jpg*

10hE10h30*

T*dplace*les*
fragments*de*
Issus*des*
casse=es*vers*
les*moules*
remplies*de*
parane.**

T**P:*Vrie*la*
temprature*de*
la*plaque*de*
refroidissement*
P**T:*cest*
correct*

Rabotage_8.jp
g*

11h30E11.32h*

Rabotage*des*
blocs*de*
parane*dj*
refroidis*pour*
enlever*lexcs*
avant*la*coupe*
des*fragments*
avec*le*
microtome.*

coupe_9.jpg*

11h.33E11.40*

Coupe*des*
blocs*de*
parane*
rabots*
contenant*le*
Issu*aplani.*

Ruban_para
_10.jpg*

11h.40.11h.42*

Prlvement*du*
T:*et*voil*!*
ruban*de*
*T**P:*vrie*la*
parane*
temprature*
contenant*
parce*que*la*
plusieurs*
dernire*fois*il*y*
images*du**
avait*un*peIt*
fragment**avec* souci.*Mais*bon*
une*pince*.*
je*ne*suis*pas*
sre.***
*

Geste*un*peu*trop*
rapide.*

Image*un*peu*ou,*pas*
possible*de*sapprocher*
encore*plus*et*zoom*
impossible*vu*que*le*
geste*manuel*est*trs*
rapide.*

Photo*un*peu*sombre*
malgr*les**retouches.*


Nom$du$chier$
photo$$

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*de*laboratoire*danatomopathologie*2*
etal_ruban_11
.jpg*

11h.42?11h.45*

T*immerge*
dlicatement*le*
ruban*de*
parane*dans*
leau.*

T**P*:*prpare*
moi*les*lames*
stp.*

Ruban_lame_1
2.jpg*

11.45h?11h.47*

ColoraJon_13.
jpg*

13h?13h05*

T*tale*le*ruban* T**P:*vrie*la*
sur*la*lame*en* temprature*de*
limmergeant*
la*plaque*
dans*leau.*Et*la* chauante,*je*
pose*la*lame*
vais*djeuner.*
sur*la*plaque*
pour*adhrence*
du*Jssu*durant*
une*heure..*
Immersion*de*la*
lame*dans*un*
bain*de*
colorant*
pendant*5min.*

n_coloraJon
_14.jpg*

13.05?13h.10*

Lavage*de*la*
lame**leau*de*
robinet:*n*d*la*
coloraJon.*

Milieu_monta
ge_15.jpg*

13h.15?13h18*

ApplicaJon*du*
milieu*de*
montage*sur*la*
lame*dj*
sche.*

T**P*:*prpare*
moi*le*milieu*de*
montage*si*il*
ny*en*a*plus.*
P**T:*cest**
sous*la*hoVe.**
T**P:*bien*sre.*
P**T*non*je*
voulais*dire*
quil*y*est.*

Image*ou:*impossible*
de*photographier*sous*
un*autre*angle*
prsence*de*P.*

1er*geste*trs*rapide:*
impossible*de*bien*
photographier**
*
*
*

Salle*1**
T*a*chang*les*gants*
avant*de*rgler*
lautomate.*

Prise*de*la*photo*un*
peu*dicile.*Travail*
sous*lhoVe.*

Nom$du$chier$
photo$$

Descrip2on$de$
lac2on$

Temps$$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*de*laboratoire*danatomopathologie*2*

Lame_lamelle_
15.jpg*

13h20A13hA21*

Montage*de*la*
lamelle*sur*la*
lame.*

T**P:*jai*
limpression*
que*le*milieu*de*
montage*est*un*
peu*trop*
liquide.*a*
glisse.*

Montage_16.j
pg*

13h22A13h.25*

T*appuie*sur*la*
lamelle*pour*la*
xer**la*lame.*

P**T:*le*
mdecin*
taJends*il*est*
dj*dans*la*
salle*de*lecture.*

*
*
*

Secahge_18.jp
g*

13h25A13h.25*

Dposer*la*lame*
pour*un*
schage**lair*
ambiant.*

T:*voil*tu*peux*
les*prendre*
enn*dans*cinq*
minutes.*

*le*geste*est*trs*rapide*
image*un*peu*ou.*

(
Nom$du$chier$
photo$$

Rendu(2:(Tableau(de(recueil(de(donnes(
(

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

(Par(Ben(Romdhane(Zeineb(

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Novice:(technicien(suprieur(stagiaire(de(laboratoire(danatomopathologie((
Ac9vit:(prpara9on(dune(lame(de(microcopie(op9que(pour(analyser(un(fragment(de(9ssu.(
Dissec9on_biops
ie_1.jpg(

9HD09H.10(

N(technicien:(
novice)(commence(
la(manipula9on(par(
la(dissec9on(du(
matriel(biologique(
(analyser(

CasseJe_biopsie
_2.jpg(

9h.10D9hD20(

N(met(les(lments(
du(9ssu(dissqu(
dans(des(casseJes.(

((

N(dpose(les(
casseJes(dans(le(
support(de(
lautomate:(support(
au(fond(de(la(
paillasse(sous(la(
hoJes(impossible(
de(le(
photographier.(
(

Reglage_automa
te_3.jpg(

9h20D9h22(

Rglage(de(
lautomate(pour(un(
cycle(de(lavage(
avant(linclusion(en(
parane.(

T(technicien(
professionnel)((N:(tu(
dois(changer(les(gants(
tu(oublies(toujours.(

N(enlve(les(gants(
aprs(la(
programma9on.(

Ouvrir_automat
e_4.jpg(

9h22D9h23(

Ouverture(de(
lautomate(pour(
poser(le(support(
contenant(les(
casseJes(

T((N:(ne(touche(pas(
la(por9re(sans(gants(
a(peut(tre(sep9que.(
N((T:(dsol(
T((N:(met(tes(gants(je(
vais(dposer(le(
support.(
(

T(et(N((bougent(en(
mme(temps(
devant(lautomate.(
Impossible(de(
photographier(
lac9vit.((

Chargement_aut
omate_5.jpg(

9h.25D9hD35(

Charger(le(support(
rempli(de(casseJe(
dans(lautomate.((

T((N:(vrie(la(
temprature(noublie(
pas.(

Changement(de(
salle((vers(la(salle(2)(((
(

Nom$du$chier$
photo$$

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

technicien'stagiaire'de'laboratoire'danatomopathologie'2'
Ouvert_casse8
e_6.jpg'

9H35@9h55h'

N'ouvre'les'
casse8es'de'la'
veille'(sorCes'
par'P'de'
lautomate)''
laide'de'la'
pince.'

Inclus_paran
e_7.jpg'

10h@10h@15'

N'dplace'les'
fragments'de'
Cssus'des'
casse8es'vers'
les'moules'
remplies'de'
parane.''

T''N:'il'faut'
Vrier'la'
temprature'de'
la'plaque'de'
refroidissement'
avant'
linclusion'

Rabotage_8.jp
g'

11h15@12h'

Rabotage'des'
blocs'de'
parane'dj'
refroidis'pour'
enlever'lexcs'
avant'la'coupe'
des'fragments'
avec'le'
microtome.'

T''N:'tu'ne'
respectes'pas'
les'rgles'de'
scurit'
convenablemen
t'et'tu'es'trs'
proche'du'
microtome.'

coupe_9.jpg'

12h@12h.20'

Coupe'des'
blocs'de'
parane'
rabots'
contenant'le'
Cssu'aplani.'

T''N:'moins'
vite''
'

Ruban_para
_10.jpg'

12h20@12@22'

Prlvement'du'
ruban'de'
parane'
contenant'
plusieurs'
images'du''
fragment''avec'
une'pince'.'

T''N':'bravo'tu'
as'pu'avoir'ce'
quil'faut'du'
Cssu.'

Geste'manuel'trs'
rapide.'

.'

Nom$du$chier$
photo$$

Temps$$

Descrip2on$de$
lac2on$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*de*laboratoire*danatomopathologie*2*
etal_ruban_11
.jpg*

12h.22>12h.25*

N*immerge*
dlicatement*le*
ruban*de*
parane*dans*
leau*et*prends*
les*lames*avec*
sa*deuxime*
main,*

Ruban_lame_1
2.jpg*

12h.25>12h45*

ColoraHon_13.
jpg*

14h>14h10*

N*tale*le*ruban*
sur*la*lame*en*
limmergeant*
dans*leau*pour*
a*pose*la*lame*
sur*la*plaque*
pour*adhrence*
du*Hssu*durant*
une*heure..*
Immersion*de*la*
lame*dans*un*
bain*de*
colorant*
pendant*5min.*

n_coloraHon
_14.jpg*

14h10>14h15*

Lavage*de*la*
lame**contenu*
dans*un*bac.*

Milieu_monta
ge_15.jpg*

14h.15>14h20*

ApplicaHon*du*
milieu*de*
montage*sur*la*
lame*dj*
sche.*

*
*
*

Salle*1**

T**N:*pourquoi*tu*
nuHlises*pas*leau*du*
robinet.*Est*ce*que*
ce*bac*vient*dtre*
chang*
N**T*:*non*
T**N:*tu*risques*de*
salir*tes*lames*
surtout*que*tu*ne*
portes*pas*de*gants*

Toute*lacHon*se*
droule*avec*N*qui*
sadresse**P.*

Prise*de*la*photo*un*
peu*dicile.*Travail*
sous*lhoVe.*

Nom$du$chier$
photo$$

Descrip2on$de$
lac2on$

Temps$$

verbalisa2ons$

Photo$en$vigne;e$

Remarques$

Professionnel*expriment:*technicien*de*laboratoire*danatomopathologie*2*

Lame_lamelle_
15.jpg*

14h20A14h23*

Montage*de*la*
lamelle*sur*la*
lame.*

T**N:*aHenIon*
*ne*pas*crer*
des*bulles*dair*

Montage_16.j
pg*

14h25A14h.27*

N*appuie*sur*la*
lamelle*pour*la*
xer**la*lame.*

T**N:*ni*trop*
fort*ni*trop*peu.*

*
*
*

Secahge_18.jp
g*

14h27A14h.30*

Dposer*la*lame*
pour*un*
schage**lair*
ambiant.*

T**N:bravo.*

**

Nom$du$chier$
photo$$

Descrip1on$

Photo$en$vigne6e$

Remarques$

Artefacts)et)contexte)

biopsie_1ssu_
19.jpg)

Les)biopsies)reues)au)laboratoire)dans)leur)milieu)
de)xa1on)avec)le)numro)du)pa1ent.)Avant)e)
procder))la)dissec1on)P)les)fait)juste)sor1r)de)leur)
milieu.)

Photo)prise)de)dessus))
lintrieur)de)lhoDe).))

ou1ls_dissec1
_20.jpg)

Les)ou1ls)de)dissec1on:)rgle)pour)mesurer)les)
pices)et)scalpel)pour)les)dissquer.))

Photo)prise)de)dessus))
lintrieur)de)lhoDe).))
)

support_casse
De_21.jpg)

Support)que)P)charge)en)casseDe)dans)lautomate.)

Photo)prise)au)moment)
de)louverture)de)
lautomate.)

automate_22.j
pg)

Automate:)cycles)de)lavages)des)casseDes)24h.))Les)
casseDes)sont)dposes)aprs)la)dissec1on)et)ceux)
de)la)veille)sont)ressor1es)pour)la)manipula1on):)
travail)con1nu.)

moule_para
ne_23.jpg)

Moule)remplies)de)parane)o)les)fragments)sont)
immergs)avant)dtre)refroidis.)

Photo$en$vigne3e$

Nom$du$chier$
photo$$

Remarques$

artefacts(
dstrbteur_para
_24.jpg(

Distributeur(de(Parane(u9lis(par(P(pour(remplir(
les(moules.(

auto_parran_
25.jpg(

Automate(de(prpara9on(d'chan9llons(par(
inclusion(en(parane(
(

pince_inclusio
n_26.jpg(

Pince(dinclusion(des(fragments(de(9ssus(en(
parane.(

plaque_refroid
is_27.jpg(

Plaque(refroidissante((contenu(dans(lautomate(de(
parane(:(chaque(casseHe(contenant(le(numro(de(
pa9ent(est(mise(sur(le(bloc((

microtome_28
.jpg(

Microtome(rglable(en(hauteur(pour(rabotage(et(
coupe(des(blocs(de(parane(contenant(le(9ssu.(

(
(
(

Photo$en$vigne3e$

Nom$du$chier$
photo$$

Remarques$

Artefacts)et)contexte)
bac_eau_29.jp
g)

Bain)marie)pour)talement)des)rubans)de)parane)
dans)leau.)

plaque_chau
ant_30.jpg)

Plaque)chauante)o)T)met)la)lame)avec)ruban)de)
parane)contenant)le)Gssu)pour)adhsion)du)Gssu))
la)lame)

milieu_coloraG
on_31.jpg)

Bain)de)colorants)pour)colorer)les)Gssus)dj)xs)
aux)lames.)

robinet_32.jpg)

Robinet)pour)lavage)aprs)coloraGon.)

reacGf_monta
ge_33.jpg)

RacGfs)ncessaires)au)montage)sous)hoMe.)

)
)
)

Nom$du$chier$
photo$$

Photo$en$vigne6e$

Descrip1on$

Remarques$

Artefacts)et)contexte)
milieu_montag
e_34.jpg)

Milieu)de)montage)de)la)lame))la)lamelle)
indispensable)pour)la)lecture)au)microscope)et)la)
conserva=on)du)=ssu)entre)lame)et)lamelle.)

lame_montes
_35.jpg)

Ensemble)de)lames)avec)lamelle)en)cours)de)
schage.)

lame_support
_36.jpg)

Support)contenant)les)lame)prte))la)lecture)au)
microscope.)

salle1_37.jpg)

Salle)1):)dissec=on,)montage)colora=on)

salle2_38.jpg)

Salle)2:)rabotage,)inclusion)en)parane.)

)
)
)

ANNEXE 5

Retranscription de lentretien dautoconfrontation

Zeineb : euuhm voil alors Bon pour commencer merci davoir accepte cet entretien. On commence

euh est ce que vous pouvez commencer par une brve prsentation

Professionnel: bhein tout d abord je vous en prie, une brve prsentation par ou commencer ? bon

bhein comme vous le savez je suis technicienne suprieure de laboratoire , je suis titulaire dune

licence en cytologie et je travaille dans ce labo depuis 15 ans dj jai deux tches la premire tant

lactivit que vous avez pass la journe photographier et lautre qui est ltude cytologique cest

dire des cellules et non tes tissus

Z : (rire) voil donc je voulais vous poser des questions par rapport lactivit que jai photographi

et comme vous pouvez le voir il y a ici les photos voil il y a les photos

10

P : je ne risque pas de ne pas le voir

11

Z : (rire) alors en gros votre travail consiste prparer partir des biopsies analyser des lames qui

12

peuvent tre lu au microscope otique

13

P : bon alors tout dabord ce nest pas vraiment toute la biopsie mais la partie qui est intressante

14

analyser

15

Z : et comment reconnaissez cette partie ?

16

P : en fait c est lors de lanalyse macroscopique loeil nu quand je dissque la biopsie qui est

17

gnralement pas saine cest a dire quelle provient d un patient

18

Z : d un patient malade quoi

19

P : oui en effet donc comme je le disais je la dissque et ensuite il y a un ensemble de traitement

20

faire pour l avoir sur lame

21

Z : oui avant que ne passiez l sur la photo, vous avez trouv la biopsie dissqu dj vous avez d

22

ailleurs la consignes vous voyez

23

P : euf comment dire il arrive parfois que ca nous dpasse et donc c est le mdecin qui procde la

24

dissection

25

Z : et pour vous c est la mme chose

26

P : ben cest sur je prfre faire tout moi mme (rire) mais non voil des fois cest des biopsies

27

dlicates eh voil

28

Z : est ce que cela vous drange ?

29

P : ah non non non pas vraiment

30

Z : et aprs cette dissection donc vous mettez les fragments dans des cassettes

31

P : oui des fois c est moi des fois c est le prparateur

32

Z : ah donc vous ne voulez pas toujours faire tout toute seule hein

33

P : (rire ) mais non cest quil doit bien les disposer dans le support de lautomate en attendant que je

34

le rgle en fait c est pour gagner du temps cest pour tre plus efficace.

35

Z : ah ok

36

P : aprs bon cest moi qui rgle les paramtres de lautomate

37

Z : et entre temps vous changez de gants

38

P : bein oui cest normal parce que forcment cest aseptique et il y a des tissus pathologiques mme

39

si la dissection se fait sous la hotte mais bon on nest jamais trop prudent

40

Z : et vous en remettez aprs alors vous les remettez les gants

41

P : bhein en fait parce que lautomate contient aussi ces tissus et c est aussi une prcaution de plus

42

prendre

43

Z : donc sur cette photo aprs le rglage de lautomate vous rentrer le support qui contient les

44

cassettes

45

P : eeeuh mmm en fait sous la hotte le prparateur dispsose les cassette avec les numros du

46

patient bon cela peut tre plusieurs patients tout dpend

47

Z : ah et donc a c est avant le rglage

48

T : oui parce que le prparateur les prpare la veille il les met sous la hotte avec ltiquette du

49

patient et puis quand je mets les fragments et que je ferme la cassette il les ordonnes

50

Z : et vous rglez l automate

51

T : oui voil

52

Z : et vous le rglez selon quels critres bien dtermins

53

T : on peut pas vraiment parler des critres mais des paramtres en fait c est presque toujours la

54

mme choses des fois il y a plus de cassette des fois moins donc voil on ladapte au nombre de

55

cassettes en gros

56

Z : et vous le lancez pour 24h c est a dire que les rglages dure 24h

57

T : oui des fois moins aussi si le tissu ne ncessite pas autant de lavage et de traitement plutt de

58

ractifs, pas la peine de le mettre 24h mais bon dun autre cot a nous arrange parce que a ne

59

lendommage pas

60

Z : quest ce qui vous arrange dans tout cela

61

T : ben comment dire ce qui nous arrange c est que notre travail soit organis c et dire toute les

62

24h on a une manip

63

Z : humm, donc cest en fait..

64

T : donc je vais vous expliquer par exemple cette photo avec les fragments dissqus nont pas pu

65

tre inclus en paraffine et coup le jour o vous avez photographi mais plutt le lendemain

66

Z : et en fait moi la manipulation que jai photographi elle provient des fragments que vous avez

67

dissqu la veille

68

P : exactement

69

Z : bien bien , donc en gros vous vous ne perdez pas votre temps (rire)

70

P : bhein le tps c est de largent on a pas intrt a en perdre il a des cas urgents et des patients

71

malades derrire ses biopsies qui attendent ces rsultats

72

Z: oui je vois

73

P : bon aprs on relativise

74

Z : sur cette photo vous, vous dposer le support dans lautomate

75

P : oui je dpose le support dans lautomate parce que le prparateur a dj sorti les autres

76

Z : ceux de la veille

77

P : oui ceux de la veille, comme je vous lexpliquez et il passe lautre salle pour commencer

78

linclusion des fragments que le prparateur a sorti

79

Z : et pourquoi vous changez de salle

80

P : bhein je change de salle parce quil le faut bien (rire) non au fait c est parce que lautomate

81

dinclusion est dans lautre salle

82

Z : oblig

83

P : je nai pas trop le choix parce que ce que a salle 1 est plus aseptique

84

Z : OK et donc sur cette phot vous commencer linclusion cest sa

85

P : oui enfin avant

86

Z : vous ouvrez les cassettes comme sur cette photo

87

P : oui des fois c est le prparateur qui les ouvre aussi en mme temps quil rempli les moules avec la

88

paraffine

89

Z : comme sur cette photo

90

P : ah vous avez pris une photo des moules c est bien sa

91

Z : oui a fait partie des artefacts de lactivit

92

P : enfin, une fois ces cassettes ouvertes je prlve le fragment et je linclus dans la paraffine

93

Z : oui comme sur cette photo et sans gants

94

P : oui sans gants parce que du moment ou il sont dj sortis de lautomate tout est septique a ne

95

sert rien de porter des gants enfin les porter serait c est un plus

96

Z : et aprs

97

P : aprs ce il faut les laisser reposer sur une plaque refroidissante pour que la paraffine se solidifie

98

Z : et vous passez la coupe

99

P : bhein je m assure avant que le prparateur a bien placer les cassettes enfin la moiti des

100

cassettes contenant le numro du patient sur les moules pour pouvoir les identifier et je les laisse

101

reposer

102

Z : humm donc vous laissez reposer

103

P : aprs gnralement aprs une petite heure le tour est jou

104

Z : par magie (rire)

105

Z : Vous passez aprs au microtome

106

P: et je passe au microtome

107

Z : c est ce qui va vous permettre de couper le bloc

108

P : non plutt d avoir des rubans de paraffine contenant des images du fragment analyser

109

Z : comme sur cette photo

110

P : voil la par exemple je prend le ruban de paraffine et je ltale dans le bain marie

111

Z : oui mais avant comment vous le couper au juste, l sur cette photo vous tes debout pour

112

manipuler le microtome

113

P : en fait je prfre tre debout je suis plus concentre et cette tape est importante et demande de

114

la concentration et de la minutie

115

Z : pourquoi elle est aussi importante que cela

116

P : comment dire elle est importante parce que il ne faut pas endommag le bloc qui contient le

117

fragment et parce que le ruban coup doit tre fin

118

Z : fin cest dire ?

119

P : ben si il pais il nadhre pas la lame

120

Z : donc ladhsion dpend de lpaisseur du ruban

121

P : non pas vraiment ladhsion dpens de lpaisseur certes mais aussi du temps de la mise sur la

122

plaque

123

Z : mhhh

124

P : donc je prends le ruban e paraffine je les mets avec la pince la surface de leau et je lattrape

125

avec la lame dlicatement

126

Z : et vous tiez un peu rapide regardez la photo elle est flou vu la rapidit de votre geste

127

P : bein vous voyer il le faut bien vous savez il ne faut pas laissez le ruban trs longtemps il risque de

128

fondre non en fait c est comme si immerger un carton dan leau vous devez la rcuprer en une

129

seconde pour pas quil se perde on va dire

130

Z : et vous vous le soulever avec la lame et vous le posez sur la plaque comme sur cette photo

131

P : bein oui cEst cela et on gnral je profite pour djeuner

132

Z : et vous la laisser combien de temps

133

P : en fait a ne drange pas parce que a facilite ladhsion

134

Z : et l on voit sur la photo que vous retournez la salle 1

135

P : oui en effet la fameuse salle 1 parce que le bain de colorant se trouve dans cette salle

136

Z : et a drange pas pour lasepsie parce que tout a l heur vous avez parl de plus septique plus

137

aseptique

138

P : non pas vraiment parce quils sont rgulirement chang

139

Z : et la coloration cest juste dposer la lame dans le colorant

140

P : oui sa consiste dposer la lame dans le colorant et ensuite la laver

141

Z : sur cette photo donc vous lavez les lames

142

P : oui dans leurs supports pour faciliter ce st le prparateur qui les mets dans le support

143

Z : ok et ensuite vous rester dans la mme salle

144

P : en fait ensuite je commence le montage sous la hotte parce que les ractifs du montage sont

145

cancrignes

146

Z : do le choix de la salle

147

P : exactement et la japplique le milieu de montage sur la lame et comme vous voyez trs vite je

148

mets dessus la lamelle pour quelle se fixe c est une sorte de colle, voil qui permet la lamelle de se

149

fixer la lame tout en conservant le tissu

150

Z : et aprs pour finir vous laisser scher l air ambiant cest sa

151

P : exactement la manip est termin et les lames sont prtes aller en salle de lecture, le mdecin

152

pourra commencer sa lecture avec le microscope pour au final savoir de quel pathologie il sagit

153

enfin si il y en a bref c est du cas par cas

154

Z : et juste une dernire question si vous permettez en quoi tout a est il compliqu selon vous

155

P : sincrement ce nest pas compliqu il faut avoir la main et sy habitu

156

Z : et vous vous l avez

157

P : jespre bien lavoir aprs 15 ans

158

Z : bhein merci pour cet entretien a sera tout, merci de mavoir accorder un peu de votre tems

159

P : non cest rien j espre que je vous ai aide

160

Z : oui oui bien videmment merci