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5. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS:
Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la
materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los
flotantes, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de
compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma
de corregir o ajustar los efectos de estos factores.
La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno como amoniaco y nitrgeno orgnico,
mediada por los microorganismos, ejercen una demanda nitrogencea, que ha sido
considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada
con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando se inhibe la demanda nitrogencea de
oxgeno, se reportan los resultados como demanda bioqumica de oxgeno carboncea
(DBOC5); cuando no se inhibe, se reportan los resultados como DBO5.
6. TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS:
Muestras simples. Si el anlisis se inicia en el intervalo de 2 h despus de la recoleccin
no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4C o menos.
Comenzar el anlisis dentro de las 6 horas de la recogida de la muestra, y cuando el
sitio de muestreo es distante del laboratorio y el anlisis no se puede comenzar
dentro de las 6 horas de la recogida se debe almacenar a 4C y reportar con los
resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento. En ningn caso iniciar el
anlisis despus de 24 horas de haber tomado la muestra.
Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4C o menos durante el proceso de
composicin, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las
muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del perodo de
composicin. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de
los resultados.
7. MATERIALES Y EQUIPOS
- Botellas Winkler de 300 mL de capacidad, lavadas con detergente, enjuagadas
varias veces, y escurridas antes de utilizarlas.
- Incubadora DBO HACH modelo 205, a 20 1 C.
- Probeta de 1000 mL para medir el agua de dilucin.
- Balones Clase A de volumen adecuado para medir las muestras y preparar diluciones
cuando se requiera.
- Pelcula y tapa plstica para botellas Winkler.
- Varias pipetas graduadas y aforadas, preferiblemente estriles, para dosificar los
nutrientes
- Frasco lavador con agua desionizada
- Balanza analtica
- pHmetro con termmetro
- Dispositivo oxigenador con manguera
- Buffer de fosfatos. Para un litro de solucin: Disolver 8,5 g KH 2PO4, 21,75 g de K2HPO4 ,
33,4 g Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g NH4Cl en unos 500 mL de agua destilada y diluir a 1
litro. El pH debe estar en 7,2 sin ms ajustes, debe almacenarse siempre en la nevera
a 4 C. Descartar cualquier reactivo si se ve alguna seal de crecimiento biolgico en la
botella stock. Alternativamente disolver 42.5 g de KH2PO4 y 1.7 g de NH4Cl en cerca
de 700 mL de agua destilada. Ajustar el pH a 7,2 con NaOH al 30% y diluir a 1 L. Para
preparar 500 mL: Disolver 4.25 KH 2PO4, 10.875 g de K 2HPO4, 16.7 g
Na2HPO4.7H2O, y 0,85 g NH4Cl en unos 250 mL de agua desionizada y diluir a 500 mL.
Alternativamente disolver 21.25 g de KH2PO4 y 0.85 g de NH4Cl en cerca de 350 mL de
agua destilada. Ajustar el pH a 7,2 con NaOH al 30% y diluir a 1 L.
- Solucin de Sulfato de magnesio. Para un litro de solucin, disolver 22,5 g MgSO 4.7H2O
en agua destilada y diluir a 1 litro. Para preparar 500 mL, disolver 11,25 g de
MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 500 mL.
- Solucin de Cloruro de calcio. Para un litro de solucin, disolver 27,5 g CaCl 2 en
agua destilada y diluir a 1 litro. Para preparar 500 mL, disolver 13.75 g de CaCl 2 en
agua destilada y diluir a 500 mL.
- Solucin de Cloruro frrico. Para un litro de solucin, disolver 0,25 g FeCl 3.6H2O
o 0,15 g FeCl3 en agua destilada y diluir a 1 litro. Para preparar 500 mL, disolver
0,125 g FeCl3.6H2O o 0,075 g FeCl3 en agua destilada y diluir a 500 mL.
- Solucin cida 1 N. Se utiliza para neutralizar las muestras en el rango de 6,5 7,5
unidades. Aada lentamente 28 mL de H2SO4 concentrado al agua destilada y diluya a
1litro.
- Solucin alcalina 1N. Se utiliza para neutralizar las muestras en el rango de 6,5 7,5
unidades. Disolver 40 g de NaOH en agua destilada y diluir a 1litro.
- Solucin de sulfito de sodio. Se utiliza para eliminar el cloro residual de las muestras.
Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1litro de agua destilada. Preparar diariamente, pues esta
solucin no es estable.
% de dilucin
0.01 a 1
mL de dilucin
0.03 - 3
1a5
3 - 15
5 a 25
15 - 75
25 a 100
75 - 300
Realizar al menos tres diluciones de la muestra con diferentes volmenes. Marcar cada
botella con el cdigo de muestra, la dilucin preparada y la fecha de lectura. Adicionar la
cantidad de muestra apropiada a cada botella. Llenar aproximadamente a dos tercios de
su capacidad total con agua de dilucin, luego adicionar 2 mL de suspensin con
microorganismos si es necesario (para muestras que no contengan una poblacin
microbiana suficiente, por ejemplo: efluentes industriales sin tratamiento, aguas
desinfectadas, efluentes con elevada temperatura o con valores extremos de pH; esta
suspensin puede ser agua residual domstica clarificada o superficial), en caso contrario
continuar llenado hasta la mitad del cuello de la botella para que al introducir el electrodo
y/o la tapa no haya prdida de muestra. Introducir sonda de oxgeno disuelto, evitando
prdida alguna de muestra, presionar el botn Enter del oxmetro YSI, esperar a que
estabilice la lectura y repetir hasta que el mismo valor sea reportado por el equipo dos
veces, registrar el volumen del inculo agregado, en el formato AM-FR-06 Determinacin
de DBO5 das y OD por electrodo de membrana SM 5210 B, 4500 O-G. Tapar botella,
sellar con pelcula y tapa plstica para evitar intercambio de oxgeno con el ambiente,
guardar en incubadora de DBO HACH modelo 205 a una temperatura de 20 1C por 5
das 6 h.
DB O5 , mg/L=
( D 1D2 )( S ) V s
P
Donde:
D1= OD de la muestra diluida al inicio, mg/L
D2 = OD de la muestra despus de 5 das de incubacin a 20C, mg/L
S = absorcin de oxgeno por los microorganismos, OD/ mL suspensin de
microorganismos adicionada por botella (S = 0 si las muestras no han sido sembradas).
Vs = Volumen de semilla en la respectiva botella, mL.
P = fraccin volumtrica de la muestra (1/P = factor de dilucin).
2. Si el consumo de OD es menor a 2 mg/L y la muestra no tiene dilucin (aunque
tenga inculo y soluciones), el clculo de la disminucin puede ser reportado como
su DBO.
3. Cuando todas las diluciones tienen un OD residual menor a 1 mg/L, seleccionar la
botella que tenga el ms bajo valor de OD (la mayor dilucin), realizar el clculo y
reportar como DBO > (mayor a) el clculo realizado con base en la ecuacin:
DB O 5 , mg /L>
( D 1D2 ) ( S ) V s
P
Reporte de resultados: Promediar el resultado de las pruebas para todas las botellas
calificadas dentro de cada serie de diluciones.