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Practica N09
NUMERACION, AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ENTEROCOCCUS
I-INTRODUCCION
Los enterococos son bacterias esfricas que forman sus colonias en grupos o cadenas. Se
encuentran de manera natural en muchos organismos, incluidos los humanos, como parte de
su

flora

intestinal.

Son

microorganismos

muy

resistentes,

capaces

de

tolerar

concentraciones relativamente altas de sales y cidos.


En muchos estudios, los niveles de concentracin de los enterococos se relacionan con la
incidencia de enfermedades adquiridas por baistas y constituyen un indicador muy
importante de la contaminacin en las playas y de las aguas salobres.
Por presentar una mayor resistencia a la salinidad del agua marina y por el riesgo a la salud
que representan, tambin se cuantifican los enterococos.
Se han identificado ms de 22 especies del gnero enterococcus; una de las especies que lo
constituyen son E faecalis y E. faecium.
Estas especies son muy parecidas entre s, pero pueden diferenciarse mediante pruebas
fisiolgicas.

E. faecalis es resistente al calor y suele ser ms veces de prudencia humana, mientras que
E. faecium acta ms en vegetales.
Las bacterias de este grupo crecen tanto a 10 C como a 45 C. Los Enterococcus poseen
ciertas caractersticas en comn que los convierte en Enterococcus muy particulares, son:
termodricos resistiendo fcilmente a temperaturas de pasteurizacin de la leche o incluso
otros ms altos. Toleran un % de sal de 65% o superior, crecen a pH de 9,6. Se desarrollan
a un intervalo de T amplia, algunos desde los 5-8 C la mayora incluso pueden hacerlo a los
48-55 C.
Los enterococcus son cocos Gram. + De cadenas cortas o largas y que se diferencian de los
dems cocos Gram. + En que son Catalasa (-).
Los enterococcus al igual que los coliformes son de origen fecal y tambin estn presente
en vegetales, insectos y en el suelo.

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II-OBJETIVOS

Familiarizarse con la tcnica de aislamiento de Enterococcus a partir de aguas y


alimento deshidratado.

Determinar la numeracin e identificar Enterococcus a partir de aguas y alimentos


deshidratados.

Conocer la metodologa ms adecuada para anlisis.

III-FUNDAMENTO TEORICO

El recuento de Enterococcus en los alimentos se lleva a cabo, por lo general, como


medio para evaluar la eficacia de los mtodos de limpieza y desinfeccin en las
industrias de alimentos, en particular de superficies, para corroborar otras
indicaciones de contaminacin fecal y como ndice de calidad microbiolgica general

El procedimiento considerado de modo general como ms satisfactorio lleva


consigo tres fases o estadios:

a.

Recuento presuntivo utilizando Agar Sangre Azida Cristal Violetada de Packer y por
la tcnica de recuento Standard en placa por siembra en profundidad.

b. Identificacin confirmativa de las colonias sospechosas, previa purificacin, en agar


glucosa tetrazolium acetato de talio (TTC).

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IV-MATERIALES

Muestra biolgica: agua de acequia (Santa Rosa), leche en polvo a granel.

Medios de cultivo:

Medio para deteccin presuntiva: Caldo Glucosa Azida.


Medio de deteccin confirmativa: Caldo EVA.
Medio para aislamiento: Agar Enterococcus
Pruebas bioqumicas: Caldo triptosa para pH 9.6; NaCl 6.5%, supervivencia a
65C/35, crecimiento a 45C.

Diluyentes: agua estril (para la leche)


Tubos de dilucin
Placas Petri
Gradillas
Frascos
Tubos para pruebas bioqumicas
Pipetas de 1 y 10 mL.
Mechero
Balanza
Incubadora

V-PROCEDIMIENTO
Para Leche en polvo
1. Primero, pesar 10g y lo diluimos en 90 ml de agua destilada estril, obteniendo la
dilucin 10-3

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2. Luego, Realizamos diluciones hasta 10-3.

3. Sembrar

cada

dilucin
duplicado

por
en

una

placa con Agar selectivo para Enterococos por siembra


en profundidad (1 mL de inoculo).

4. Incubar a 35-38C por 24-48 horas.


5. Lectura: Deben observarse colonias rojas, con centro rojo o colonias blancas.
6. Luego realizar la identificacin de las colonias a travs de la tincion Gram y otras
pruebas como catalasa, crecimiento a 45 C, crecimiento en NaCl 6.5%, crecimiento
a pH 9.6, resistencia a 65C/ 35, entre otras.

PRUEBA CONFIRMATIVA

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Se siembra en medio TTC unas u colonias


Se hace las pruebas respectivas :
Creen a 45c
Crecimiento en bilis
Catalasa
pH 9.6

Para Agua de acequia


1. Para esta muestra, se utilizara el mtodo del NMP (agua) de 3 tubos.

2. Prueba presuntiva: Sembrar diferentes alcuotas de 10 mL, 1mL y 0.1mL en Caldo


Glucosa Azida.
3. Incubar a 37 C x 24-48 horas.
4. Prueba confirmativa: De los tubos positivos en deteccin presuntiva, sembrar una
asada en Caldo EVA (Confirmativo).
5. Incubar a 37 C x 24-48 horas.
6. Lectura: Observar crecimiento o presencia de turbidez con sedimento rojo ladrillo.
7. De los tubos turbios continuar el aislamiento llevando al Agar Enterococcus por
agotamiento y estra.
8. Realizar aislamiento y las pruebas de identificacin respectivas.

VI-RESULTADOS
Para la muestra de leche en polvo:

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10-1

10-2

10-3

No hubo crecimiento de
colonias en
ninguna de las placas de agar
Enterococcus sembradas con la muestra
de leche en polvo, lo que nos indica
ausencia de Enterococcus en la muestra.

Para la muestra de agua de acequia:

Prueba presuntiva:

Sedimento (+)
Se observ crecimiento con sedimento en los 3 primeros tubos de la primera
alcuota (10 mL). Por lo que la Numeracin es:
3-3-3
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Prueba confirmativa y Aislamiento

Tincin GRAM

Se observ crecimiento y precipitado en los tubos con caldo presuntivo, sembrados con la
muestra (agua de acequia, y finalmente al sembrar en agar enterococos desarrollaron
colonias blancas pequeas, y realizar tincin de GRAM se observ la morfologa propia de

Enterococcus sp. Por lo tanto esto nos indica que hay presencia de Enterococcus sp en la
muestra analizada.

VII-CONCLUSIONES

Se aprendi la Tcnica para el aislamiento de Enterococos a partir de Alimentos


(leche en polvo) y aguas (agua de acequia).

Se logr la numeracin en tubos con la muestra de agua de acequia.

Se logr la deteccin y aislamiento de Enterococcus sp a partir de la muestra de


agua de acequia.

No se pudo identificar la cepa de Enterococcus sp

por falta de las pruebas

bioqumicas necesarias.

La muestra de leche en polvo a granel no tiene presencia de Enterococcus sp por lo


tanto la muestra es apta para el consumo humano.

VIII-REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Medios de Cultivo en Microbiologa: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3


Edic. Lima.

http://es.wikipedia.org/wiki/Enterococcus

http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/contenido/capitulo13.html

Granados, R. 1997. Microbiologa. Bacteriologa, Medios de Cultivo y Pruebas


Bioqumicas. Micologa General. Parasitologa General. Editorial Paraninfo.

Aurazo de Zumaeta, Margarita. Lima. Per 2004. Manual Anlisis Bsicos de Calidad
del gua de Bebida.

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