MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

DE BIOLOGA CELULAR

TITULAR:
M.en C. FERNANDO CASTRO BARRAZA
GOMEZ PALACIO DGO., AGOSTO DE 2012.
1

PROGRAMA PRCTICO
DE
BIOLOGIA CELULAR

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO....................1

PROGRAMA PRCTICO.......................................2
PRACTICA No. 1...........................................3
NORMATIVIDAD Y BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO...........3
NOM 087 MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO
INFECCIOSOS..............................................3
PRACTICA No. 2...........................................4
MICROSCOPIO PTICO SU MANEJO Y SUS CUIDADOS..............4
PRACTICA No. 3...........................................5
DIFERENCIACIN DE CELULAS PROCARITICAS Y EUCARITICAS.. .5
PRACTICA

No. 4..........................................6

EFECTOS DE UNA SOLUCION HIPERTONICA, HIPOTNICA E

ISOTONICA................................................6
SOBRE

CELULAS...........................................6

PRACTICA No.5............................................8
PEROXISOMAS..............................................8
PRACTICA No. 6...........................................9
CELULAS EPITELIALES HUMANAS..............................9
PRACTICA No. 7..........................................10
DIVERSIDAD

CELULAR.....................................10

PRACTICA No. 8..........................................12

REPRODUCCIN CELULAR....................................12

PRACTICA No. 1
NORMATIVIDAD Y BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
NOM 087 MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO
INFECCIOSOS.
OBJETIVO.- Conocer y aplicar la normatividad vigente en el laboratorio
multidisciplinario, las buenas prcticas de laboratorio as como el manejo apropiado
de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos(RPBI).
PROCEDIMIENTO
1.- Anlisis (lectura previa) de las buenas prcticas de laboratorio aplicadas a todas las
reas de laboratorio.
2.- Investigacin referente a la NOM 087 para el manejo de RPBI.
3.- Implementacin de la NOM 087 en el laboratorio.
INVESTIGACIN PREVIA
1.- Lectura de las buenas prcticas de laboratorio (Gmazo, C. 2005)
2.- Investigar en internet la NOM 087: qu es un RPBI, objetivo de la norma,
cuadro de clasificacin de los residuos, pasos a seguir para el manejo de
residuos.

PRACTICA No. 2
MICROSCOPIO PTICO SU MANEJO Y SUS CUIDADOS.
OBJETIVO.- Conocer el manejo adecuado y los cuidados que se deben implementar
para el uso del microscopio ptico.
MATERIALES.- Microscopio ptico, papel especial para limpieza de objetivos, aceite
de inmersin, preparaciones permanentes diversas.
SOPORTE Y SISTEMA PTICO
A. SOPORTE
a. BASE
b. BRAZO
c. PLATINA
d. MICROMTRICO Y MACROMTRICO
B. SISTEMA PTICO
a. CONDENSADOR
b. OBJETIVOS
c. OCULAR
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO
Comprueba que las lentes del ocular y de los objetivos estn limpias: de no ser
as, lmpialas cuidadosamente con papel especial para ptica. No toques las
lentes con los dedos.
Coloca la preparacin sobre la platina, sujetndola con el dispositivo mvil
(pinza). Comprueba previamente que el objetivo de menor aumento est en
posicin de empleo.
Ilumina la preparacin bajando el condensador y con el diafragma abierto.
o Acerca al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando
para ello el macromtrico.
o Sube el tubo lentamente con el macromtrico observando por el ocular
hasta que obtengas un enfoque ntido.
Pasa al objetivo de 40 aumentos (X40). Sube ligeramente el condensador. La
imagen debe de estar casi enfocada: afina el foco con el micromtrico. Si la
imagen no est ni medianamente enfocada, es preferible volver a enfocar con
el objetivo de X10. El objetivo de X40 trabaja muy cerca de la preparacin y
por ello es susceptible de dos tipos de accidentes: ser clavado cuando se
descuidan las instrucciones descritas para su enfoque, tambin puede resultar
manchada con aceite de inmersin si se observa una preparacin ya usada con
este ltimo.
Empleo del objetivo de inmersin:
o Gira el revolver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio
camino entre ste y el objetivo de X40.
o Coloca una gota de aceite de inmersin sobre el punto de luz.
o Termina de girar suavemente el revolver hasta la posicin del objeto de
inmersin, asegurndose de que ste no toca la preparacin pero s la
gota de aceite.
o Enfoca cuidadosamente con el tornillo micromtrico.
o Finalizada la observacin de una preparacin y antes de retirarla de la
platina, se coloca el objetivo de menor aumento y se limpia
cuidadosamente el objetivo con papel especial para ptica.
Mantenimiento y precauciones:
o No se deben tocar nunca las lentes con las manos
o No dejar preparaciones en la platina si no se est usando el
microscopio.
o Para cambiar de objetivo emplee siempre el revolver
o Despus de utilizar el objetivo de inmersin se debe limpiar con papel
especial.
o No forzar los dispositivos giratorios del microscopio
( micro y macromtrico, platina, revolver y condensador).
o No cambie nunca el objetivo si est observando a travs del ocular.
o Al trmino de tu trabajo, coloca el objetivo de menos aumento en la

posicin de observacin.
INVESTIGACIN PREVIA: HACER UN DIAGRAMA DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO Y
SUS FUNCIONES.

PRACTICA No. 3
DIFERENCIACIN DE CELULAS PROCARITICAS Y
EUCARITICAS.
OBJETIVO.- Diferenciar clulas procariticas y eucariticas (animales y vegetales).
MATERIAL:
PARTE I
1 Microscopio con filtro, pipeta Pasteur, 10 portaobjetos y 10 cubreobjetos
Torundas con alcohol, pizeta, bistur, vaso de precipitado de 50 ml,
cloruro de sodio, papel, cabello, corcho, pipeta de 10 ml
PARTE II Tomate, epidermis de cebolla, Bacillus, preparaciones permanentes.
1 Microscopio con filtro, 2 portaobjetos y 2 cubreobjetos
Agujas de diseccin, navaja bistur, aceite de inmersin,
Pizeta, pipeta Pasteur.
PROCEDIMIENTO
PARTE I
1.- Disolver un poco de cloruro de sodio en agua y colocar una gota en un
portaobjetos. Dejar que seque y observar como se indica en el apartado 3.
2.- Cortar un pequeo trozo de papel y colocarlo encima de una gota de agua
sobre un portaobjetos, despus colocar el cubreobjetos. Observar.
3.- Sacar un cabello de raz y colocarlo encima de una gota de agua, colocar el
cubreobjetos. Observar.
4.- Hacer cortes finos de corcho con la ayuda de un bistur, colocarlos encima
de una gota de agua sobre un portaobjetos. Colocar el cubreobjetos. Observar.
PARTE II
1.- hacer cortes finos del tejido del tomate y colocarlos encima de una gota de
agua. Colocar el cubreobjetos y observar.
2.- Sacar la epidermis de la cebolla y colocar un trozo encima de una gota de
agua. Colocar el cubreobjetos y observar.
3.- Observar preparaciones permanentes de Bacillus y de otros tipos celulares
de inters.
Colocar el cubreobjetos y observar.
NOTA:

DIBUJAR A LAPIZ TODO LO OBSERVADO, SEALA SUS PARTES Y

CLASIFICALO DE ACUERDO AL TIPO CELULAR (SI SON PROCARITICAS O
EUCARITICAS VEGETAL O ANIMAL). ANOTAR TAMBIN EL AUMENTO
AL QUE SE EST OBSERVANDO (MXIMO 3 DIBUJOS EN CADA HOJA).
ELABORA UN LISTADO DE LOS TIPOS CELULARES ORGANIZADO POR
TAMAOS, YA SEA DE MENOR A MAYOR O DE MAYOR A MENOR.

CUESTIONARIO:
1. Qu es la especializacin celular ? Menciona cual es la especialidad
funcin de cada tipo celular observado.
2. Enlista las estructuras observadas en las clulas analizadas al
microscopio.
3. Adems de las caractersticas propias de las clulas eucariticas y
procariticas,
Qu otras diferencias de importancia clnica puedes mencionar? (3).
4. En el microscopio Cmo diferenciar si una clula es procaritica

eucaritica?

PRACTICA No. 4
EFECTOS DE UNA SOLUCION HIPERTONICA, HIPOTNICA E ISOTONICA
SOBRE CELULAS.
PARTE II CELULAS VEGETALES
OBJETIVO:
Realizar observaciones sobre el efecto de colorantes vitales en clulas
vegetales. Investigar la accin de las soluciones hiper hipo e isotnica sobre las
clulas.
MATERIAL:
Soluciones de NaCl: al 10%, y Agua destilada
3 tubos de ensaye
1 gradilla
3 Portaobjetos3 Cubreobjetos
Navaja o bistur
3 Pipetas Pasteur c/bulbo
1 microscopio ptico 3 pipetas de 5 ml
Hojas de Elodea.
METODO:
1.- Dispn de 3 tubos de ensaye de la siguiente forma:
TUBOS
1
2
3
NaCl 10%
4 ml
------Agua
---4 ml
---Agua destilada -------4 ml
2.- Coloca 5 hojas de Elodea en cada uno de los tubos cuidando que queden
completamente sumergidas durante 10 min., no excedas de ese tiempo.
3.- Observa al microscopio con el objetivo de 40X, colocando una de las cinco
hojas en un portaobjetos y poner el cubreobjetos.
4.- Repite lo anterior para cada uno de los tubos restantes.
RESULTADOS:
Describe los resultados por medio de dibujos para cada preparacin de cada
uno de los tubos y elabora con ellos una tabla.
CUESTIONARIO :
1. Explica los diferentes procesos de movimiento de sustancias
en el medio celular, especificando que material es el que se
mueve.
2. Qu padecimientos pueden presentarse como resultado de
un dao en las membranas celulares ?
3. Cmo son afectadas las membranas por las drogas y
sustancias extraas ?
4. Menciona al menos tres funciones de la endocitosis y de la
exocitosis dentro de la clula.

PRACTICA No. 4
EFECTOS DE UNA SOLUCION HIPERTONICA, HIPOTNICA E ISOTONICA
SOBRE CELULAS.
PARTE II CELULAS ANIMALES
OBJETIVO:
Realizar observaciones sobre el efecto de colorantes vitales en eritrocitos.
Investigar la accin de las soluciones hiper hipo e isotnica sobre las clulas.
MATERIAL:
Soluciones de suero fisiolgico al 0.9%, solucin de NaCl al 3, 5 y 8 %, agua
bidestilada.
3 tubos de ensaye
1 gradilla
3 Portaobjetos3 Cubreobjetos
Equipo para venopuncin
3 Pipetas Pasteur c/bulbo
1 microscopio ptico 3 pipetas de 5 ml
Tubo con sangre heparinizada.
METODO:
1.- Dispn de 3 tubos de ensaye de la siguiente forma:
TUBOS
1
2
3
4
5
NaCl 3%
2 ml
NaCl 5%
2 ml
----------------NaCl 8%
2 ml
Suero fisiol.
---2 ml
---Agua destilada -------2 ml
2.- Coloca 3 gotas de sangre en el tubo No. 1. Observa con 10X y con 40X.
3.- Repite lo anterior para cada uno de los tubos restantes. Dibuja lo observado
en cada tubo.
RESULTADOS:
Describe los resultados por medio de dibujos para cada preparacin de cada
uno de los tubos y elabora con ellos una tabla.
CUESTIONARIO:
1. Explica los diferentes procesos de movimiento de sustancias
en el medio celular, especificando que material es el que se
mueve.
2. Qu padecimientos pueden presentarse como resultado de
un dao en las membranas celulares ?
3. Cmo son afectadas las membranas por las drogas y
sustancias extraas ?
4. Menciona al menos tres funciones de la endocitosis y de la
exocitosis dentro de la clula.

PRACTICA No.5
PEROXISOMAS
OBJETIVO:
Observar de manera indirecta la accin enzimtica de los peroxisomas.
MATERIAL:
MUESTRAS BIOLGICAS
8 tubos de ensaye(18X150)
100 gr de corazn
(p/equipo)
4 vidrios de reloj
100 gr de hgado de pollo
Pizeta, y vaso de ppdo 500 ml
100 gr de zanahoria
Bistur, 1 pipeta de 5 ml
100 gr de papa
2 pinzas para tubo de ensaye
Solucin de perxido de hidrogeno al 6%
Gradilla
Mechero Bumsen, tela asbesto y tripi
Pinzas para diseccin
Aplicadores de madera
Cinta masking, pipeta de 10 ml.

de

pollo

METODO:
1.- Pesa 5 gr del tejido y cortalo en trozos pequeos (dos muestras de cada tejido).
2.- Coloca 4 tubos en la gradilla, agregales 10 ml de agua y etiquetalos: corazn
hervido, hgado hervido, para hervida y zanahoria hervida (coloca los 5 gr de cada
tejido en cada tubo segn corresponda). Coloca la pinza en el tubo e inclnalo sobre
el mechero Bumsen, permite que hierva de 6 a 8 min. Retira el agua y dejalo enfriar.
3.- Coloca los 4 tubos restantes y etiquetalos: corazn crudo, hgado crudo, papa
cruda y zanahoria cruda, agrega los tejidos correspondientes a cada tubo.
4.- Agrega 5 ml de la solucin de perxido de H. en los tubos por pares, por ejemplo
corazn crudo-corazn hervido, hgado hervido-higado crudo, hasta terminar con los
cuatro tejidos.(cuida que los tubos hervidos ya estn frios).
5.- Anota la intensidad del burbujeo y si hay cambio aparente en la temperatura de
los tubos. Prepara una lista decreciente de esta actividad.
6.- Si alguno de los tejidos hervidos presenta actividad, colocarla en un vidrio de
reloj y analizar su zona ms interna, puede que no est bien cocido.
CUESTIONARIO:
A. Describe el proceso de detoxificacin, menciona en cuales tipos celulares se
lleva a cabo y que ocurrira si no se efectuara este proceso.
B. Enlista 10 sustancias nocivas y su peligrosidad para la clula y para el
organismo.
C. Menciona al menos tres usos generales del perxido de hidrgeno.
D. Porqu es txico el perxido de hidrgeno para la clula ?

PRACTICA No. 6
CELULAS EPITELIALES HUMANAS
OBJETIVO.- Describir la estructura de las clulas epiteliales orales y vaginales.
MATERIALES:
1 MICROSCOPIO PTICO
2 ABATELENGUAS
2 PORTAOBJETOS
2 CUBREOBJETOS
TORUNDAS CON ALCOHOL
ALCOHOL ETLICO
AZL DE METILENO
ACEITE DE INMERSIN
PROCEDIMIENTO:
Tomar un abatelenguas de madera y obtener un raspado de la parte interna de
la mejilla (epitelio).
Coloca la muestra en un portaobjetos con un poco de saliva y observa. Realiza
una preparacin adicional y aade unas gotas de alcohol etlico 70%, durante
2 min., tie con una gota de azul de metileno (2 min). Muy cuidadosamente,
colocar un cubreobjetos en un extremo de la gota de agua y bajarlo
lentamente para que no se formen burbujas. Observa.
Examina la muestra cuidadosamente y revisa si puedes identificar
formas
bacterianas. Reporta todo lo observado y los aumentos a los que hiciste las
observaciones.
Observa laminillas de epitelio vaginal que te proporcionar el titular, utiliza el
objetivo de inmersin de 100X.
CUESTIONARIO
1. Cul es la funcin de las clulas epiteliales en el organismo humano ?
2. Describe la estructura y funcin de las partes celulares observadas
3. Qu es la microbiota ? Investiga cules son los gneros bacterianos
que se encuentran comnmente en el organismo humano.
4. A nivel digestivo Cul es la importancia de mantener una microbiota
sana ?

PRACTICA No. 7
DIVERSIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Observar y comparar los caracteres morfolgicos comunes a los diferentes
tipos celulares, as como aquellos que son particulares para cada uno. Diferenciar las
clulas procariticas de las eucariticas.
MATERIAL
Cristal violeta, azl de metileno, colorante Wright, alcohol 70 %, safranina,
cultivo bacteriano, levadura en polvo (S. cereviceae), cultivo de hongo filamentoso,
torundas con alcohol, abatelenguas, lanceta estril, 3 pipetas Pasteur con bulbo, 1
microscopio con filtro, aceite de inmersin, asa de siembra, mechero Bumsen, vaso de
precipitado de 100 ml. con cloro.
MTODO
Precauciones: No dejes secar las preparaciones frescas, aade lquido a medida
que observes que se va secando. Observa primero en 10X y despus a mayores
aumentos. Usa el objetivo de inmersin y el aceite, solamente cuando ests seguro de
que lo necesitas. Si as lo haces o no, limpia con papel suave todos los objetivos, lente
de condensador y oculares, antes de regresar los microscopios al almacn.
PREPARACION DE LAS MUESTRAS.VIRUS Y BACTERIAS: Busca diagramas que muestren estos organismos,
tomadas con microscopio electrnico, con lo cual es posible determinar el tamao
comparativo del virus y la bacteria.
HONGOS: Toma una muestra de micelio (cultivo de hongo filamentoso), con
una asa estril, colocala sobre una gota de agua en un portaobjetos y pon sobre esto
un cubreobjetos y observa. Realiza una preparacin adicional y tiela agregando una
gota de azl de metileno, observa.
LEVADURAS: Coloca una asada de la solucin previamente elaborada con el
polvo de levaduras S. cereviceae (disolver un polvo de la levadura en un vaso de
precipitado con agua destilada) sobre un portaobjetos limpio, sobre este coloca un
cubreobjetos y observa. Realiza una preparacin adicional y tiela con una gota de
cristal violeta.
PROTOZOARIOS: Toma una gota del agua de charco con una pipeta Pasteur,
tratando de sacarla del fondo del recipiente, colocala sobre un portaobjetos limpio, en
otra preparacin coloca una gota de azul de metileno y observa.
TEJIDO SANGUINEO: Pica con una lanceta estril la yema de tu dedo pulgar;
presiona para obtener una gota de sangre y colocala en un lado del portaobjetos
limpio extiendela inmediatamente con otro portaobjetos. Te tu frotis con unas gotas
de colorante Wright durante 5 min. y lava con goteo de agua corriente. Observa.
CELULAS EPIDERMICAS DE VEGETALES: Extrae una porcin de epidermis
de una hoja, colcala en un portaobjetos extendindola sobre una gota de agua.
Realiza una preparacin adicional y tiela con azul de metileno durante 5 minutos
retira el colorante por absorcin con papel higinico y lava con unas gotas de agua,
coloca sobre la misma epidermis una gota de safranina durante 5 minutos retira el
colorante y adiciona agua. Observa.
TEJIDOS ANIMALES: Observa preparaciones permanentes que se te
proporcionarn.
BACTERIAS: Toma una muestra del cultivo bacteriano, con una asa de siembra
previamente esterilizada, extiendela sobre una gota de agua colocada en un
cubreobjetos limpio, cubriendo un dimetro aproximado de un centmetro. Deja secar.
Pasa la preparacin lentamente sobre la flama del mechero; probando con el
dorso de la mano que la temperatura no sea muy intensa.
Aplica una gota de colorante (cristal violeta o safranina), sobre el frotis, durante
un minuto, escurre y lava a goteo de agua, deja secar al aire y observa. Es
recomendable observar primero con 10X y colocar el aceite de inmersin para
observar con 100X.

10

RESULTADOS
Mediante tus observaciones realiza un cuadro en al cual puedas localizar el tipo
celular, tamao relativo por comparacin, presencia de ncleo, nucleolo, cloroplastos,
membrana plasmtica, pared celular, y otros organelos que estn presentes en la
observacin. Sin dejar de esquematizar la morfologa (forma) observada.
Evala la ventaja de la tincin realizada, con respecto a las no teidas.

CUESTIONARIO PREVIO
1.- Cules son las unidades que se utilizan para medir a las clulas ? Investiga
los tamaos celulares de las clulas eucariticas y procariticas.
2.- Menciona 10 tipos celulares humanos, dibuja su estructura y funcin.
3.- Cules son las estructuras bsicas de una clula ? Cules estructuras
pueden variar de acuerdo con la especializacin de las clulas ?

11

PRACTICA No. 8
REPRODUCCIN CELULAR
OBJETIVO:
Identificar las diferentes fases de la mitosis en clulas de raz de cebolla, as como
las yemas de la gemacin en levaduras y esporas en hongos filamentosos.
MATERIAL:
Microscopio con filtro
Pipeta Pasteur con bulbo
Cristal violeta
Vaso de precipitado de 100 ml
4 portaobjetos 4 cubreobjetos bistur
Caja de Petri
Estereoscopio
Aguja de diseccin
pipeta
MTODO:
I.-ESPORULACIN.(hongos filamentosos)
1.- Realiza una primera observacin del material con hongos en el
estereoscopio (luz de arriba). Dibuja lo observado.
2.- Con una hoja de bistur, realiza un corte fino del hongo y colcalo en una
gota de agua sobre un portaobjetos, coloca el cubreobjetos y con la aguja de
diseccin separa cuidadosamente el material. Observa con 10X y 40X. Dibuja las
estructuras que observas.
II.- GEMACIN.
1.- Realiza una rehidratacin de Sacharomyces cereviceae. Agrega un poco
de azcar y espera 10 min. En un vaso de precipitado y con una pipeta Pasteur
coloca una gota de la suspensin sobre un portaobjetos, adiciona una gota de
cristal violeta y coloca el cubreobjetos. Observa y dibuja lo observado.
III.- MITOSIS.
1.- En la preparacin permanente que se te proporciona busca las etapas de
la mitosis y dibuja cada una.
CONTESTA:
A. Investiga qu es la variabilidad biolgica y que proceso ayuda a que se
cumpla.
B. Qu son las mutaciones y como afectan a la clula y al organismo ?
C. Menciona cuatro ventajas y cuatro desventajas de la reproduccin sexual y
asexual
D. Qu es una clula haploide y que es una clula diploide ? Cuando no se
cumple con la constancia numrica en humanos se generan problemas de
sndromes, explica tres sndromes diferentes y lo que ocurre con los
cromosomas.

12