In situ sensores

In situ los sensores deben ser capaces de funcionamiento sin ensuciar durante los
perodos prolongados de tiempo, p. ej. durante el tiempo entero necesario para la
terminacin del bioprocess. Los problemas comunes relacionados con in situ sondas
ensucian y el flujo de base debido a la precipitacin de protenas y/o otro biomaterial
sobre la superficie de contacto. Un sensor debe aguantar condiciones bastante extremas
durante la esterilizacin y la permanencia calibrada. El margen dinmico de un sensor
debe cubrir la gama de variacin del parmetro de proceso moderado, que es a menudo
un problema. Si fuera necesario, un in situ el sensor debe ser capaz de ser calibrado de
nuevo sin comprometer el asepticity del reactor. Hay un nmero de tcnicas propuestas
que encuentran estas condiciones, pero slo pocos son comercializados y extensamente
aceptados y usados
Clsico electroqumico y cables para medir la tempertatura
In situ, autoclavable sensores para la temperatura, el pH, y pO2 estn disponibles sobre
el mercado y rutinariamente usados en el laboratorio y bioreactors industrial. Los cables
para medir la tempertatura estn basados en el detector de temperatura de resistencia
platino (RTD). El mtodo est basado en las medidas de resistencia elctrica de cable de
Punto, que es proporcional a la temperatura. Las medidas de pH son realizadas con un
estndar potentiometric el ion el electrodo selectivo de cristal.
Clark amperometric el electrodo est acostumbrado para medidas de oxgeno disueltas.
Juntos con medidas de densidad en lnea manuales pticas y aireacin y la tarifa de
agitacin, ellos son, por lo general, el medio de supervisin de proceso y control. Por lo
general, estos son los datos de parmetro de proceso en los cuales un biotechnologist
confa para determinar que pasa dentro del reactor.
Estas conclusiones indirectas estn basadas en la experiencia y el conocimiento
especfico juntado(recogido) en en tiempo diferido los anlisis del proceso. A menudo
ellos son sistematizados en los modelos matemticos que relacionan parmetros
moderados con variables de proceso importantes. El modelado matemtico es limitado
por el hecho que trata el estado es un complejo, la multivariante la funcin no lineal de
las variables que normalmente son controladas [2]. Por lo tanto hay una necesidad
fuerte de nuevos sensores capaces de las medidas en lnea de nuevas variables de
proceso importantes
Disuelto CO2 es a menudo importante en culturas de clula de animal que por
lo general requieren la suplementacin CO2 durante su cultivacin.
Severinghaus electrodos de tipo a veces son usados para el in situ CO2 supervisin. Ellos
son bsicamente electrodos de pH rodeados por el parachoques de carbonato separado
de la muestra por de correo tetra fluoro el etileno (PTFE) la membrana que es toCO2
permeable. La membrana puede ser esterilizada pero la solucin parachoques no puede
que complicar su puesta en prctica. Severinghaus electrodos de tipo puede contaminar
el caldo de fsicamente ser daado, y tener el tiempo de respuesta largo (5-15 minuto) y
la gama de medicin limitada [3].
Apossible la alternativa a glasspHelectrode es descrito en [4].
Esto es un lantano de litio titanate el ion de cermica el electrodo selectivo.

Esta sonda es mecnicamente ms resistente y ms thermoresistant que el electrodo de

cristal, y tiene el mismo tiempo de respuesta. La necesidad de medir analitos ms all
del pH, pO2, y la temperatura condujo a la investigacin intensiva de novela sensoring
sistemas.

Lenguas electrnicas

Lenguas electrnicas (ET), juntos con sistemas de nariz electrnicos, son un

nuevo concepto en el anlisis qumico. Normalmente un sensor es querido para ser
tan especfico como posible a su analito de modo que medido(moderado) sealen slo
depende de la concentracin de analito. Esto es una tarea bastante difcil que considera
el nmero de compuestos que uno podra querer medir, y la complejidad de interferents
y los fenmenos entrometidos que son por lo general el presente(regalo) en la muestra.
Un modo de evitar este problema es la preparacin de la muestra en la cual el analito es
separado de la matriz compleja de la muestra y puede ser analizado aislado.
La lengua electrnica (y la nariz electrnica) el acercamiento est basado en el
principio de que, como se cree, es el mecanismo de funcin de sentido olfativo
de animal. En vez de medir cada compuesto separadamente, el sentido es
compuesto de multitud de sensores enfadados sensibles, y la seal es un
modelo de combinacin de las respuestas de cada sensor individual ms bien
que la intensidad de respuesta de una unidad de sentir sola. La combinacin
de respuestas puede ser usada para anlisis cualitativos y cuantitativos.
Anlisis cualitativo,
p. ej. la identificacin de la muestra, en bioindustry puede ser til para la temprana
deteccin de defectos(culpas) en un proceso, o el reconocimiento de materia(asunto)
mala principal. El anlisis cuantitativo podra ser usado para la supervisin de proceso en
tiempo real.
Hasta ahora, lenguas electrnicas no han sido usadas para in situ bioprocess la
supervisin aunque ellos hayan sido demostrados tiles en la supervisin de proceso. In
situ el uso es la consideracin bastante factible que los sensores enfadados sensibles
son compuestos de sensores conocidos autoclavable.
Tornero et al. [5] present un uso de una lengua electrnica que consiste en una serie de
21 sensores potentiometric con membranas de PVC chalcogenide de cristal y
plastificadas para supervisar de fermentaciones de hornada. Ellos satisfactoriamente
tuvieron correlacin
La seal del ET a densidad de clula y contenido de acetato. El tiempo de anlisis es
tpicamente 3 minuto. Esbensen et al. [6] demostr ETS factible para la supervisin de
fermentacin. Ellos usaron una serie de 30 sensores no especficos potentiometric y
satisfactoriamente crearon el control de procedimiento traza lo que puede ser usado
para la deteccin de anormalidades en el proceso de cultivacin de una cultura de
partida para la produccin de queso en una temprana etapa. Legin et al. [7] las redes
neuronales usadas et PARA la respuesta modelan el reconocimiento. El error de

prediccin medio para el amonio, el citrato y oxalate era inferior que el 8 % en las
muestras simuladas modelas.
La investigacin hacia la puesta en prctica de ET para en lnea y tarde o temprano para
in situ la supervisin es en curso. Los resultados demuestran ETS para ser un nuevo
instrumento prometedor en el control de bioprocess.
3.3. Ion transistor de efecto selectivo de campaa (ISFET) sensores
Los avances en el pH y sensores pO2 han sido hechos con sensores de efecto de
campaa. Voigt et al. [8] describi un transistor de efecto de campaa con el diamante
amorfo como el carbn como el pH que siente la capa. Adaptacin de ISFET para sentir
otra especie qumica como O2
CO2 puede ser hecho ello dos modales: (a) dos transduccin de paso, en la cual el
transductor reacciona el analito para producir un cambio del pH que puede ser medido
por un ISFET, por ejemplo el electrodo de tipo de Clark que reduce O2 a Ah - los iones
que es medido por ISFET [9]; (y b) que cubre el ISFET con una membrana semipermeable
por la cual el analito pasa y causa un cambio de pH moderado por ISFET (Severinghausescribir el sensor CO2 en [10]). La desventaja intrnseca del oxgeno de electrodo de
Clark ISFET es que esto consume el oxgeno disuelto, que podra representar un
problema para el volumen bajo bioreactors. CO2 escriben sensores ISFET basados sufren
de las mismas desventajas que Severinghaus el electrodo (p. ej. el tiempo de respuesta
prolongado, el flujo de base).
Sensores de efecto de campaa estn por lo general basados en xidos metlicos
revisores semi ("MOSFET"). El principio trabajador es la adsorcin de gases con
propiedades diferentes oxidative que el oxgeno a la superficie de semiconductor, que en
la vuelta produce un cambio de las propiedades elctricas del semiconductor. MOSFET
sensores son usado para usos de nariz electrnicos debido a su sensibilidad enfadada.
La temperatura trabajador es alta (400? C tpicamente) para reducir tiempo de
respuesta. Esto limita esta clase de uso de sensores en in situ bioprocess la supervisin
al anlisis de gases de escape. Sin embargo, el principio de sensibilidad enfadado es
bastante un acercamiento prometedor al anlisis complejo de la muestra y
probablemente seguir desarrollndose con tipos de sensor otros que MOSFET, como el
sensor basado en la conduccin de polmeros o sensores piezoelctricos [11].

Mtodos pticos
Varios mtodos pticos han sido desarrollados para in situ la supervisin. Ellos son no
invasivos, no destructivos, ellos no interfieren con el metabolismo o el microentorno(el
micromedio ambiente) de cultura, no consuma el analito, y ellos no requieren el
muestreo, as reduciendo el riesgo de contaminacin. Problemas principales que
conciernen mtodos pticos son la sensibilidad frente al ensuciamiento debido a la
adherencia de material, turbiedad que puede cambiarse durante el proceso, la dispersin
ligera(de luz) sobre ruinas de clula y burbujas de gas e interferencias similares a lo
largo del camino ligero(de luz). En general, el ruido de medida para mtodos pticos es
ms alto que en otros mtodos. Mtodos pticos para la supervisin de bioprocess han

sido repasados en [12].

Una fibra ptica alumbra(enciende) al revisor puede ser usado conducir el rayo de
incidente al reactor y conducir la seal del bioreactor as que toma la esterilizacin el
detector sensible del bioreactor. Esto tambin puede ser usado para la espectroscopia de
onda(ola) evanescente.
Este causado avances en varios usos de mtodos pticos para in situ supervisin.

3.4.1. Densidad ptica

La medida de densidad ptica es el mtodo ms usado para la supervisin de biomasa.
Ha sido determinado in situ por una sonda de gua de luz de fibra ptica. Escotilla y
Veilleux [13] cultivacin de levadura de panaderos supervisada con una sonda de
densidad in situ ptica.
Zanzotto et al. [14] supervis Escherichia coli la biomasa en un microbiorector por
midiendo la transmitancia en 600 nm con una naranja la fuente luminosa CONDUCIDA y
una lente collimating.
Sondas comerciales estn disponibles sobre el mercado, por ejemplo de Optek-Danulat
GmbH, Essen, Alemania. Esta sonda de autoclavable encaja en un estndar bioreactor el
puerto, y contiene un hbrido
La emisin de fuente luminosa CONDUCIDA en cerca de la zona infrarroja que demostr
ser ms exacta que otras regiones de longitudes de onda.
Sondas de densidad in situ pticas por lo general sufren de la gama de medicin
limitada. Mltiples culturas de tipo de clula y culturas con cambios de morfologa y
agregaciones de clula producen resultados errneos. Sondas de densidad pticas son
sensibles a burbujas y alimentos slidos suspendidos. Otra limitacin es la inhabilidad de
distinguirse entre clulas viables y no viables, y ruinas de clula.

UV-VIS spectrophotometry
La medicin de la intensidad en color de un tinte de pHsensitive adsorbido sobre una
punta(un consejo) de una luz que conduce la fibra ptica puede servir como el pH in situ
el sensor (el pH optode). El ms con frecuencia, un tinte fluorescente es escogido para
medidas de pH como en [15]. Si el caldo de fermentacin contiene un indicador de pH
como, por ejemplo, el fenol rojo que con frecuencia es usado en culturas de clula de
animal, el pH puede ser supervisado por midiendo la absorcin especfica por la fibra
ptica la onda luminosa conducida como descrito en [16]. La modificacin de sistema
Severinghaus para la sonda de pH ptica ha sido desarrollada por Uttamlal
Walt [17], y puede estar acostumbrado como CO2 el sensor. Este sistema est basado en
la deteccin ptica de cambio de pH del parachoques de carbonato separado del caldo
por la membrana CO2 permeable, y puede ser el vapor esterilizado. La desventaja del
CO2 optodes (el tiempo de respuesta largo, sobre todo en el sentido de reduccin de
seal) es la misma como
Severinghaus electrodos, debido a la presencia de membrana de gas permeable. Ellos

tienen una gama de medicin limitada por el tinte escogido. La debilidad general de este
acercamiento fotoblanquea. Pueden reducir(obligar) el flujo de lnea bajo causado por el
fotoblanqueo medidas ratiometric [17].
La espectroscopia de UV es dificultada para in situ el anlisis por interferencias.
Sin embargo, recientemente un espectrmetro de UV de alta resolucin nuevo en lnea
fue descrito y usado para bioprocess la supervisin [18]. Est basado en un detector
CCD, esto puede registrar hasta 16 espectros / la s, contiene partes de nomoving. El
apparatuswas us forRNA, protena y la agregacin de ruinas de clula con
polyethyleneimine la supervisin durante el tratamiento ro abajo de Saccharomyces
cerevisiae homogenate. Probablemente ser adaptado para in situ medidas en el futuro.
3.4.3. IR
Cerca de IR (NIR) y el mediados IR (MIR) la espectroscopia puede ser usado para la
glucosa, glutamate, fructose, glutamine, proline, el amonaco, y medidas CO2 en medios
de comunicacin bioprocess. Pero, este mtodo es ms costoso que sus alternativas y
las calibraciones pueden ser complicadas.
Los picos son normalmente amplios debido a la superposicin, que complica el anlisis.
Los mtodos de anlisis de datos de multivariante como el anlisis principal componente
o redes neuronales son a menudo necesarios para interpretar datos. Esto aumenta el
tiempo de anlisis total [19,20].
In situ IR la espectroscopia de onda(ola) evanescente con la fibra IR ptica
alumbran(encienden) a revisores ha sido descrito por Le Coq et al. [21].
NIR es ms fcil para aplicarse con la fibra ptica, y la instrumentacin es robusta y
barata comparando con MIR, que, de otra parte, ofrece espectros ms caractersticos (la
regin de huella digital), pero es ms complicado para usar debido a la absorcin fuerte
del agua. Rhiel et al. [22] supervis bioreactor
El ovario de hmster chino (CHO) la cultura de clulas que usa Fourier transforma
MIR espectroscopia acoplada con anlisis de datos de multivariante.
Ellos mostraron la viabilidad del mtodo para los usos de escala industriales. In situ MIR
la espectroscopia puede ser usado para supervisar de metabolites en culturas con la
viscosidad que limita el empleo de otros mtodos [23]. Cavinato et al. [24] us
shortwavelength espectroscopia (700-1100 nm) para descubrir etanol durante
fermentaciones. Las medidas fueron realizadas con un espectrmetro de serie de
fotodiodo equipado con una fibra la sonda ptica que fue colocada sobre el exterior del
navo de fermentacin de cristal amurallado. NIR la espectroscopia tambin ha sido
aplicado industrialmente para supervisin de biomasa en E. coli recombinant produccin
de protena [25]. Macalony et al. [26] us la espectroscopia NIR para el glicerol, el
amonio y la supervisin de acetato para el control y el anlisis de defecto(culpa) de una
alta densidad de clula industrial E. coli la cultivacin. Arnold et al. [27]
satisfactoriamente us NIR in situ la espectroscopia con guas de luz de fibra pticas
para supervisar de glutamine, amonaco, lactate y la glucosa en una alimentar-hornada
CHO la cultivacin de clulas con un cambio de temperaturas. El mtodo es la
temperatura independiente que es una ventaja significativa sobre otros mtodos, pero
esto todava requiere medios de comunicacin bastante transparentes.

Durante la produccin de cido lctico en la hornada, la alimentar-hornada y procesos de

fermentacin continuos, NIR la espectroscopia satisfactoriamente fueron usados para la
medida en lnea el cido lctico, la glucosa y concentraciones de biomasa [28]. Eberl
andWilke [29] demostr un refractmetro de fibra que ha sido usado como un elemento
de sentir para
NIR espectrometra aplicada a la determinacin en vigor de azcares fermentables
durante el proceso que tritura en cerveceras.
El lmite de deteccin de espectroscopia NIR es ms alto que aquellos de biosensors,
pero est bien dentro de la gama necesaria para la supervisin de bioprocess.
Debido a la superposicin de picos de la absorcin en muestras de medios de
comunicacin complejas en la parte de MIR del espectro, mtodos avanzados
matemticos (el anlisis p.ej. principal componente) deben ser usados. Recomiendan al
nmero de normas necesarias para tal calibracin ser al menos seis veces el nmero de
componentes para ser analizados.
Esto hace la calibracin un tiempo consumiendo el proceso. La posibilidad de aplicar la
misma calibracin modela para el proceso repetido, que es el caso de los procesos de
produccin, hace estos mtodos ms atractivos por la industria. De otra parte, el
conocimiento anterior sobre el proceso, a saber un modelo desarrollado matemtico,
hace posible la correccin en tiempo real del modelo de calibracin as
considerablemente el reduciendo del nmero de normas necesarias [23]. Esto simplifica
el empleo de estos mtodos para la investigacin de laboratorio. Este acercamiento
puede ser aplicado a otros mtodos pticos que exponen la seal que superpone
tambin (p.ej. la fluorescencia y mtodos de espectroscopia Raman).
3.4.4. Fluorescencia
La transferencia de energa de resonancia de fluorescencia (el TRASTE) sensores basados
CO2 est basada en CO2 fluorescente tintes apagados incorporados a una membrana
CO2 permeable hidrfoba que contiene quaternary el catin de amonio. Estos sensores
son todo el estado slido y autoclavable [30,31]. CO2 sensores son repasados en [32].
Recientemente un sensor optochemical basado en el sistema descrito ha sido
comercializado (YSI 8500 de Analtico
Tecnologas, Farnborough, el Reino Unido). Fluorometrix la Corporacin, (Guardan,
La MAM) comercializa autoclavable no invasivo y los parches disponibles que pueden
ser conectados al lado interior de la pared transparente del reactor y supervisados
pticamente del exterior.
Este sistema es muy til para el frasco de sacudida bioprocesses, que comnmente no
son supervisados en todos [33-36]. El frasco de sacudida in situ medidas de pH ha sido
relatado en [37].
Ferguson et al. [38] supervis O2, pH, y CO2 en la fermentacin de cerveza con un
multianalito el sensor ptico basado en la deposicin espacialmente resuelta ptica de
analito matrices sensible en fibras de imagimtica pticas. Tres seales son distinguidas
por un detector CCD. O2 es medido por la extincin fluorescente de un [Ru (Ph2phen) 3]
2 + el complejo, el pH por la fluorescencia de pH acryloylfluorescein el tinte sensible,
mientras un sensor de pH con la membrana PTFE que cubre el hidrogel es usado

medidas forCO2.
O2 y sensores CO2 son ms exacto para concentraciones bajas, y el pH por lo general es
limitado con una cierta gama dependiendo(segn) el tinte escogido. Ellos han
reducido(obligado) el tiempo de operaciones debido al fotoblanqueo (Fluorometrix da
una garanta de 90 das).
Muchos biogenic importantes fluorophores pueden ser medidos por un no invasivo in situ
la clula de fluorescencia. Horvath et al. [39] biomasa moderada por fluorescencia
intracelular tryptophane.
La multilongitud de onda fluorimeters para in situ la fluorimetra est disponible sobre el
mercado (BioView, la Luz de DELTA y la ptica, Lyngby Dinamarca).
Primer fluorophore moderado para el proceso que supervisa es el NADPH por Duysens y
Amesz [40] y ha sido encontrado para estar en la correlacin buena con la densidad de
clula. La limitacin de este mtodo para medidas de biomasa es que la correlacin es
slo vlida si no hay ningn cambio del NAD (P) la concentracin de H dentro de las
clulas y ninguno de los compuestos del medio absorbe o emite en 360 o 450 nm. El
mtodo por lo tanto es limitado para procesos con la composicin bien definida media.
Otra tcnica, basada en medidas de vida de fluorescencia, es capaz de resolver
compuestos individuales de mezclas complejas. Medidas de la vida son menos sensibles
a la interferencia de fondo, fluctuaciones en la fuente luminosa o la sensibilidad de
detector, el doblamiento de las guas ligeras(de luz), cambios de la distancia de la fuente
luminosa, cambios de la turbiedad y la lixiviacin de tinte de indicador.
Zanzotto. describi un diseo de microbiorector con pO2 integrado y sensores de pH y
en situODmonitoring aspirado protegiendo de funcionamiento de tensiones de
microorganismo diferentes [14].
Presencia de fluorophores como vitaminas, NADH, NADPH,
EL MODA, FMN, aminocidos fluorescentes dan la informacin importante sobre el
proceso (el estado p.ej. fisiolgico de clulas). Las medidas simultneas de vario
fluorophores son posibles hoy da agradece al desarrollo de fluorimeters capaz de
absorcin/emisin de 2D de grabacin rpida a espectros fluorescentes. Esto toma
aproximadamente 1 minuto para completar la medida.
El tiempo necesario para la informtica podra limitar la calidad en tiempo real del
mtodo. Otra desventaja de esta tcnica es el efecto de temperatura, pH y otros
parmetros a espectros fluorescentes.
Por lo tanto, podran requerir la calibracin compleja apuntada para reducir
interferencias. Puede ser combinado con tcnicas de evaluacin chemometric para el
modelismo de chemometric, [41]. Ulber et al.
han descrito una 10,000 l indol y serine a tryptophane biotransformation supervisado por
la fluorimetra de 2D, y ha logrado aumentar las producciones hasta el 20 % as que
reduce gastos considerablemente ro abajo y contaminacin [42] .Wolf. redes neuronales
usadas para el anlisis no lineal de la 2D compleja absorbance/emission espectros para
la supervisin en lnea de cultura biofilm en un proceso de bioremediation [43].

A pesar de los aos de sensores de fluorescencia de investigacin para el anlisis de

concentracin de biomasa y el estado metablico raras veces son usados.
3.4.5. Raman espectroscopia
Raman la espectroscopia puede ser usado para in situ bioprocess la supervisin. Muy no
es desarrollado debido a la interferencia de algunas molculas biolgicas que fluoresce
en el Raman dispersan ing bands region.
Cambiado rest espectros Raman (tijeras) methodwas recientemente desarrollado para
reducir interferencias de fluorescencia y el ruido. En lnea in situ Raman la
espectroscopia fue usado para supervisar de produccin carotenoid por Cannizzaro et al.
[44].
Era posible obtener el mximo de 4 puntos experimentales en 15 minuto, que era
bastante una resolucin buena para el proceso supervisado con este trabajo. Ya que la
seal de carotenoid es bastante fuerte, no haba ninguna necesidad del anlisis de
multivariante complejo.
Sotavento et al. supervisin recientemente relatada simultnea de glucosa, acetato,
formate, lactate y fenilo-alanine en un E. coli fermentacin por espectroscopia Raman
[45]. Haba un error de medicin significativo, pero es atribuido al error sistemtico ms
bien que al ruido. Raman cambios(movimientos) espectrales fue diferente en normas de
calibracin y verdaderas muestras.} Requieren una comprensin ms detallada sobre los
fenmenos que influyen en Raman que dispersa la seal en verdaderas muestras. Por lo
tanto ser necesario ms lejos optimizar el mtodo y examinar las interacciones
complejas (y probablemente desarrollar un modelo matemtico de la funcin de
transferencia) que la influencia Raman espectros en caldos de fermentacin antes de
que es aplicable para la supervisin de bioprocess.
Enfadado et al., glucosa moderada, glutamine y lactate Raman espectroscopia durante la
cultivacin de clulas de cncer de prstata humanas [46]. Notingher. us la
espectroscopia Raman para in situ supervisar de proceso de diferenciacin de clula de
tallo embrionaria, pero este mtodo es ms apropiado por la investigacin que para la
supervisin de produccin porque la instrumentacin y el manejo son complicados, esto
toma aproximadamente 2 minuto para obtener un espectro lleno y slo singularizar la
clula es supervisado a la vez [47].
Microscopa
Un acercamiento interesante de tratar la supervisin es in situ la microscopa con el
anlisis de imagen posible como descrito en [48,49].
El microscopio fue capaz de tomar imgenes fijas para cuentas de densidad de clula y
el anlisis de morfologa. El tiempo total necesario para la adquisicin de una cuenta de
clula estadsticamente confiable es 10 minuto (300 imgenes), que limita el mtodo
para objetivos en lnea. Un ordenador ms rpido podra reducir el tiempo de anlisis de
imagen, y podran reducir(obligar) el nmero de repeticiones por punto en altas
concentraciones de clula porque las desviaciones estndar son inferiores.
El volumen de muestreo es definido por el foco del microscopio y fsicamente no es
limitado. Esto favorece la esterilidad y el mantenimiento.

La ventaja principal es aquellos cambios de morfologa de clula no interfieren como en

medidas OD. Las desventajas del mtodo son exigencias(requisitos) de instrumentacin
caras y la operacin complicada.
Joeris. desarroll un in situ el sistema de microscopio que encaja en un estndar 25mm
bioreactor el puerto que ellos usaron para la supervisin de densidad de clula en lnea
en una cultura de clula CHO [50]. Es conveniente para la operacin a largo plazo y tiene
unALOJAMIENTO retractable, que permite para el microscopio ser limpiado sin
interrumpir el proceso. El volumen de muestreo puede ser ajustado por cambiando el
volumen de una zona de muestreo definida por dos superficies paralelas de cristal, que
ensanchan la gama de medicin. Por el perodo de 2 semanas, ninguna adherencia de
material fue notada sobre el in situ la sonda de microscopio. El mantenimiento de
esterilidad es algo ms complicado.
Este sistema no puede ser aplicado al pequeo volumen bioreactors. Actualmente est
siendo probado para el empleo industrial.

Supervisin de cambio de calor

Las medidas de cambio de calor entre un bioreactor y su entorno tambin han sido
usadas para el proceso que supervisa [51].
La generacin de calor directamente es relacionada con procesos metablicos dentro de
las clulas usadas en un bioprocess. La produccin de calor es usada para el proceso
declara la determinacin y siempre es acoplado con modelos matemticos. La
supervisin del cambio de calor muy es costada competitiva comparado a otras tcnicas
usadas para la supervisin de bioprocess.
Los problemas relacionados con medidas de transferencia trmica tienen que ver con
cambios de la morfologa de microorganismo, la viscosidad de caldo y la composicin, la
concentracin de biomasa, y en sistemas de alimentar-hornada el cambio no lineal de
volumen [52]. La disipacin de calor es tericamente ms fcil para controlar sobre
gracias de escala grande al volumen favorable para revestir la proporcin. El proceso de
transferencia trmica de escala grande que supervisa ha sido realizado por Voisard et al.
Sensores de capacitancia
Las medidas de capacitancia pueden ser usadas para la biomasa y medidas de viabilidad
[54,55]. Las clulas con la membrana intacta se comportan como condensadores; por lo
tanto, la capacitancia total del caldo de bulto es una medida de concentracin de clula
viable. Las sondas de capacitancia son disponibles en el comercio de Instrumentos Aber
Ltd.,
Aberystwyth, el Reino Unido. Noviembre y furgoneta Impe mtodo de capacitancia usado
para in situ Candida utilis biomasa que supervisa [56].
Cannizzaro. midi la densidad de clula CHO por la espectroscopia de capacitancia [57].
Este mtodo es limitado por la sensibilidad baja (aproximadamente 105 cell/ml). Zeiser.

us este mtodo para supervisar la cultura de clula de insecto durante el crecimiento y

la infeccin con la expresin baculovirus vector el sistema [58].
La espectroscopia de capacitancia mide picos de capacitative especficos sobre una
gama de frecuencias elctricas de campaa. Hauttmann
Muller el ngulo de fase moderado cambian una gama de frecuencias elctricas de
campaa para la determinacin de biomasa y hacen un promedio del tamao de clula
para cuatro culturas de clula diferentes (el animal, la levadura, la bacteria, y la
multicultura) [59]. Especfico polarisation picos son separados que que permite la clula
escriba medidas especficas. Ellos usaron un circuito de puente lleno para compensar
efectos de conductividad de temperaturas y de fondo

NMR
NMR es una tcnica establecida para obtener la informacin sobre reacciones enzymatic.
Esto recientemente ha sido usado para la supervisin no invasiva de clulas mammalian
en el entorno(el medio ambiente) simulado ingrvido [60]. La ventaja principal de
supervisin de NMR consiste en que es completamente no invasivo (bioreactor entero
puede ser colocado dentro de la cmara magntica) y que esto puede dar la
perspicacia(idea) en el estado de bioprocess sobre el nivel de metabolismo de clula.
Este mtodo principalmente es usado para la investigacin fisiolgica y bioqumica
fundamental y no para la supervisin de bioprocess. Desventajas principales son el
tiempo tuvo que registrar un espectro NMR y la alta densidad de clula que requieren
para medidas suficientemente exactas.
Adems, la poblacin de clula debe ser sincronizada (los estados metablicos y
fisiolgicos de las clulas deben ser los mismos). NMR espectrmetros son el equipo
costoso. Castro et al. Investigado diseo de bioreactor ptimo y condiciones de NMR
[61]. Aproximadamente, 7 minuto es necesario para registrar un espectro para el 3-4 %
(la v/v) S. cerevisiae la cultura, o 1 minuto para la cultura del 16 %.
Alfarero et al. mostr que NMR puede ser usado para medidas de biomasa, aunque el
mtodo sea complicado comparado a tcnicas ms establecidas [62]. Brecker. supervis
formate, glucosa, succinate, pyruvate, el acetato, lactate y el etanol simultneamente en
un E. coli la fermentacin y determin un interruptor metablico del citrato al
metabolismo de glucosa [63]. Espera que NMR para el proceso industrial que supervisa
ser desarrollado [64].
In situ biosensors
In situ biosensors para la supervisin de bioprocess extensamente han sido investigados
con el xito limitado. Hasta ahora, slo la glucosa in situ biosensors ha sido descrita.
Ellos estn basados en la glucosa que se aparea oxidase la enzima a un oxgeno de Clark
amperometric el electrodo.
La dificultad principal en el desarrollo un in situ biosensor es la estabilidad termal de
biomaterial inmovilizado, p. ej. inactivation durante la esterilizacin. Otro problema es
limitado la gama lineal inherente con sensores enzymatic (por lo general es por orden de
la magnitud de 1-100 mm). Mientras en la operacin, in situ biosensor constantemente

la catlisis una reaccin especfica, que consume el analito y molesta el proceso y de

otra parte reduce el tiempo de operaciones del sensor (sobre todo si el producto es
txico tal cual con frecuencia el caso, por ejemplo con oxidases aquellos productos
H2O2).
Para hacer posible para el sensor de ser autoclaved, el compuesto termalmente
inestable biolgico (la enzima) est contenido en un depsito juntos con el sistema de
sentir (el electrodo de Clark). El depsito es separado del caldo de bulto por una
membrana semi permeable que puede ser esterilizada y sirve como la barrera estril.
Despus de la esterilizacin, la enzima (por lo general inmovilizado sobre un portador
conveniente como el polvo de carbn) es aadida al depsito. El analito difunde por la
membrana, acta recprocamente con la enzima y el producto de reaccin moderado por
el electrodo potentiometric. Las ventajas de este concepto son: (a) el portador de enzima
recarga son posible;
(b) la gama lineal es aumentada y las interferencias son reducidas; pero las desventajas
son el tiempo de respuesta considerablemente aumentado (hasta 10 minuto) y el
ensuciamiento de la membrana semi permeable.
Bradley y Schmid describieron una glucosa tan autoclavable in situ biosensor con la
medicin (no lineal) la gama hasta 20 g/l, y 90 tiempo de respuesta de s [65]. Est
basado en Clark escriben el sistema potentiometric con la glucosa oxidase inmovilizado
sobre la superficie del electrodo de grafito. Los electrodos son colocados en
unALOJAMIENTO y separados del caldo por una membrana de policarbonato. Una
solucin parachoques difunde de nuevo en el lumen interior del alojamiento, as el
permiso in situ la calibracin por normas de glucosa de inyeccin en la corriente
parachoques, y ms lejos el aumento el electrodo que mide la gama. El sensor ha sido
usado para la supervisin de cultivacin de levadura de panaderos. Despus de 4 das de
empleo constante redujeron(obligaron) la seal de sensor en el 15 % as que limita el
tiempo operacional.
3.9. Marcadores de gene de reportero
La tecnologa de gene de reportero es una tcnica para supervisar la expresin gnica en
clulas recombinant, y proporciona la informacin de alta importancia biolgica. Est
basado en la insercin de la secuencia de gene de reportero despus de la secuencia de
protena heterloga. Cuando inducen a la expresin de protena, el marcador es
secretado tambin.
Otro uso es la deteccin de tensin de clula. Si el gene es insertado despus de que el
promotor de tensin sonda una clula comenzar a fluoresce cuando expuesto a la
tensin de oxidative [66].
El marcador el ms extensamente usado es la protena verde fluorescente (GFP) aunque
los otros hayan sido probados tambin, por ejemplo luciferase el gene [67], y la protena
azul fluorescente (BFP) [68].
Los problemas relacionados con este mtodo son: (a) la sntesis del marcador presenta
una carga fisiolgica para la clula de anfitrin as que influye en el metabolismo total;
(b) hay un retraso de un 95 minuto de l seala.

Algn newvariants de GFP ha sido desarrollado que maturate ms rpidamente as el

reduciendo del retraso de seal [69]. GFP mutantes han sido relatados que es ms
estable, soluble y tiene la produccin fluorescente sobre de 100 pliegues ms alto que el
tipo salvaje [70]. Un tal mutante produjo la seal con slo retraso de 8 minuto en el
sistema probado. Este trabajo aumentado(empujado) in situ las medidas de datos
fisiolgicamente importantes. El Mutante GFP ampliamente fue investigado y usado
desde entonces. Reischer. us a este mutante para en tiempo diferido supervisar de
estado metablico de E. coli y demostr el empleo de protenas de reportero
fluorescentes convenientes para la supervisin en lnea de bioprocesses [68].
Ha sido sugerido por Cannizzaro. que desde hay slo 3 genes necesarios para las sntesis
del lycopene en Candida utilis y puede ser identificado en concentraciones tan bajo
como 0.4 mg/l as que presentan una carga inferior fisiolgica para la clula de anfitrin,
y a diferencia de GFP es ms especfico, esto podra ser usado como el marcador de
induccin, en vez del GFP [44].
Conclusin
La biotecnologa es una ciencia rpidamente creciente y la industria. Esto se desarrolla
en una de industrias de tratamiento principales con la gran importancia econmica. An,
la supervisin de proceso y el control son todava sobre el nivel bastante primitivo
debido a la complejidad de fenmenos bioprocess (tanto del punto de vista de
composicin de la muestra como de la no linealidad del bioprocesses). El control de
procedimiento es esencial para el control de calidad y la garanta de calidad, para la
optimizacin de productividad de proceso y eficacia, y para la caracterizacin de
proceso. Esto puede reducir laINVERSIN y costes de produccin.
Los peligros para la salud y otros riesgos relacionados con procesos de biotecnologa son
reducidos en un proceso bien controlado.
Hay dos accesos principales a la supervisin de bioprocess:
el desarrollo de sensores capaces de los anlisis exactos y en tiempo real qumicos de
los analitos de inters y desarrollo de los modelos matemticos que relacionan
propiedades mensurables con parmetros de proceso importantes. Ambos accesos
sufren de dificultades inherentes, y probablemente seguirn siendo desarrollados juntos
como complementos el uno al otro.
In situ los sensores tratan de encontrar las exigencias(los requisitos) para la adquisicin
de datos en tiempo real bioprocess. Ellos son expuestos a condiciones bastante difciles
(el agente de esterilizacin, fuerzas transversales, la composicin de medios de
comunicacin de cultura compleja) durante los perodos prolongados de tiempo, y tienen
que aguantarlos sin el flujo de base y/o el ensuciamiento. Estas exigencias(requisitos)
fuerte limitan la aplicabilidad de un sensor en un in situ la estructuracin.
A pesar de este contratiempo, un nmero de soluciones han sido descritas en la
literatura, un poco de cual ya es comercializada, y otros todava siendo desarrollados,
pero con posibilidades buenas para aparecer sobre el mercado.
De las soluciones propuestas, mtodos pticos parecen los ms factibles debido a su
versatilidad y robustez. El acercamiento de lengua electrnico es muy prometedor y

probablemente ms lejos se desarrollar con el desarrollo de mtodos de anlisis no

lineales matemticos y el poder de ordenador, y cruzar sensores sensibles.
La aplicabilidad de in situ la microscopa se mejorar con el desarrollo de poder
calculador y algoritmos de anlisis de imagen. Las medidas de capacitancia son baratas,
simples y rpidas, aunque no tan sensibles como otros mtodos, y probablemente
aumentarn en el empleo industrial. Otros mtodos descritos son muy atractivos por un
objetivo especfico y un sistema especfico, y en algunos casos ya son puestos en
prctica sobre un nivel de laboratorio.
Considerando la necesidad y la importancia de control de bioprocess, y su impacto
econmico, in situ los sensores seguirn siendo desarrollados.
Uno podra esperar un gran aumento del nmero de productos para bioprocess la
supervisin sobre el mercado en los aos siguientes.