Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
MANUAL DE PRCTICAS DE
BIOLOGA CELULAR
1/18
CONTENIDO
Pgina
I. PRESENTACIN
II. PRCTICAS
Prctica 1. Uso correcto del microscopio de campo claro, la iluminacin Koelher
Prctica 2. Estudio al microscopio de clulas vivas
Prctica 3. Conteo celular, uso de la cmara de Neubauer
III. BIBLIOGRAFA
IV. ACTUALIZACIN
2/18
Presentacin
En este manual de prcticas para el laboratorio de Biologa Celular se incluyen
experimentos y actividades bsicos que por principio debe conocer el estudiante de medicina
veterinaria y zootecnia, las cuales se complementan con el programa de estudios de la Unidad de
aprendizaje.
De esta manera, los experimentos incluidos estn diseados para realizarse en las
instalaciones y con equipos de laboratorio con que cuenta la facultad. Asimismo, la
metodologa incluida puede ser abordada por los estudiantes, permitindoles
desarrollar sus habilidades en la medida de su propio inters e iniciativa, permitiendo
el razonamiento, ya sea en trabajo individual o colectivo.
3/18
4/18
Material
Microscopio de campo claro
Laminilla con cortes histolgicos
Preparaciones citolgicas
Mtodo
Se utiliza un microscopio de campo claro, que ser previamente revisado por el
profesor para desajustar el sistema de iluminacin.
Se observarn preparaciones citolgicas (proporcionadas por el profesor) realizadas
en portaobjetos.
Secuencia de la tcnica de observacin
Antes de iniciar las observaciones revisar que el cable de conexin a la energa
elctrica se encuentre en buen estado; comprobar que el microscopio se encuentre
limpio y se encuentren fijas sus partes.
Conectar el cable a la alimentacin elctrica. Colocar la muestra en la platin a.
Poner la muestra a la distancia focal apropiada para el alumno; se logra observando
por los oculares y manipulando los tornillos macromtrico y micromtrico. Utilizar el
objetivo de 10X.
Identificar el ocular con el tornillo de ajuste de dioptras (en algunos modelos de
microscopios ambos oculares cuentan con tornillo de ajuste de dioptras).
Cubrir con un papel el ojo correspondiente al ocular con tornillo de ajuste y ajustar con
el tornillo micromtrico a la distancia focal del ojo descubierto.
Cubrir con un papel el ojo correspondiente al ocular sin tornillo de ajuste y ajustar la
distancia focal con el tornillo de ajuste de dioptras del ocular.
Cerrar completamente el diafragma de campo. Ajustar la altura con el tornillo del
condensador hasta observar ntidamente el contorno interno del diafragma de campo.
Centrar el haz de luz con ayuda de los tornillos del condensador; el rea iluminada
quedar al centro del campo visual.
Abrir lentamente el diafragma de campo hasta que el rea iluminada cubra el 100% del
campo visual.
Al cambiar de objetivo debe regularse la profundidad de campo. Esto se logra
regulando el diafragma del condensador.
Cada estudiante deber realizar el procedimiento descrito y en cada ocasin el
profesor responsable deber realizar desajustes a los microscopios.
Ciertos modelos de microscopio cuentan con un seguro que impide que la platina con
la muestra hagan contacto con los objetivos; sin embargo, otros modelos no cuentan
con tal dispositivo, por lo que la platina debe desplazar se hacia el objetivo procurando
evitar el contacto. Cuando ocurre contacto, se corre riesgo de que se rompan las
preparaciones y se rayen las lentes de los objetivos.
5/18
Precauciones
Al preparar frotis de sangre completa deben observarse medidas de bioseguridad
bsica como el uso de guantes de ltex.
Evitar cambio inadecuado de aumentos con los objetivos, para esta accin deber
realizar el movimiento usando el revlver del microscopio.
Evitar que el objetivo tenga contacto directo con la muestra
Mecanismos de evaluacin
Para evaluar el desempeo del estudiante se debe considerar el uso adecuado del
microscopio de campo claro, los resultados obtenidos, el respeto al reglamento de
laboratorio as como la realizacin de las siguientes actividades:
Reporte escrito de la prctica (individual), describir esquemticamente el centrado del
sistema de iluminacin en un microscopio de campo claro y complicaciones durante el
proceso.
Cuestionario.
Qu es lo que actualmente definimos como un microscopio?
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Qu es un microscopio simple?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Cul es la diferencia entre microscopio simple y uno compuesto?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Menciona las diferencias que observaste al utilizar los lentes de diferente aumento:
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Qu dificultades tendras si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de mayor aumento?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
6/18
Fuente: http://academic.uprm.edu/~jvelezg/lab4estudiantes.htm
7/18
8/18
9/18
Mtodo
1.- Colocar una gota de agua destilada en el centro de un portaobjetos. Con unas pinzas,
desprender la epidermis de la superficie cncava de una capa de la cebolla. La capa epidrmica
deber ser transparente.
2.- Colocar en el portaobjetos el trozo de epidermis de cebolla no mayor que el dimetro de la gota
de agua. Con agujas o con los palillos, extienda cualquier doblez de la epidermis sin romperla.
Coloque un cubreobjetos sobre esa epidermis. NO aplique presin alguna sobre el cubreobjetos.
3.- Con un trozo de papel absorbente, seque el agua que aparezca fuera del cubreobjetos.
Nota: La parte superior del cubreobjetos y las lentes del microscopio debern estar, siempre, libres
de agua.
4.- Coloque la preparacin sobre la platina del microscopio de campo claro y observarla con
objetivos 4X, 10X, 40X y 100X
En los espacios de abajo, dibuja como se observa su preparacin en los diferentes objetivos.
4X
10X
5.- Realice otra preparacin hmeda de epidermis de cebolla. Pero ahora coloque en el
portaobjetos una gota de solucin colorante, como solucin de lugol o azul de metileno en lugar de
la gota de agua. Examine las preparaciones, por separado, obsrvelas con los objetivos 4X, 10X,
40X y 100X y dibuja lo que se observ.
100X
40X
10/18
10X
4X
Notas:
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
100X
_______________________________________________________________________________
40X
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
11/18
Modo de evaluacin
4X
10X
12/18
100X
Cuestionario:
En cul de las preparaciones se observan ms detalles de la estructura celular?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Por qu se usan colorantes en las preparaciones celulares?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Por qu la pared celular es ms fcil de observar que las estructuras de las reas internas de la
clula?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Cmo puede distinguirse el citoplasma granular de las vacuolas celulares?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
13/18
14/18
Habilidades y destrezas
Uso correcto de la cmara de Neubauer
Calculo correcto del nmero de clulas presentes en distintas diluciones de una suspensin celular
Material
Microscopio de campo claro
Cmara deNeubauer
Cubreobjetos
Agua destilada
Micropipeta 250 l
Mtodo
Diluir en 100 mL de agua destilada un gramo de levadura seca comercial. Agitar hasta que la
muestra se vea homognea.
Pipetear 100 l de la muestra celular con una micropipeta y colocar en una muesca de la cmara
de Neubauer y permitir que la suspensin ingrese a la cmara por capilaridad. Evitar que se
formen burbujas.
Colocar la cmara en la platina de un microscopio de campo claro con iluminacin Kohler y utilizar
el objetivo de 10X para localizar el cuadro central de la cmara. La cuadrcula que se utiliza como
gua para el conteo es la e 0,2 X 0,2 mm. Tener cuidado de no contar dos veces la misma clula.
Para conocer el nmero de clulas en la muestra original realizar el siguiente clculo: A X B X C
Donde A= Clulas en la cmara
B= Factor de dilucin
C= Factor de correccin (proporcionado por el fabricante de la cmara)
Considerar:
Que el rea central de la cmara es de 1mm2. Esta rea est subdividida en 25 cuadrados
pequeos (1/25 mm2); cada uno de los cuales est delimitado por lneas triples y con una
subdivisin de 16 (1/400 mm2).
Que generalmente la cmara tiene una profundidad de 0,1 mm.
El factor de correccin de 104 convierte 0,1 mm3 a 1 mL (0,1 mm3 = 1 mm2 X 0,1).
Mecanismos de evaluacin
Para evaluar el desempeo del estudiante se debe considerar el uso adecuado del equipo de
laboratorio, los resultados obtenidos, el respeto al reglamento de laboratorio as como la
realizacin de las siguientes actividades:
1) Reporte escritos de la prctica
2) Bsqueda de dos artculos cientficos en donde se utilice la cmara de Neubauer
3) Problema: en una cmara de Neubauer se contaron 167 y 186 espermatozoides de una
suspensin celular diluida 1:25. Pregunta: Cul es el nmero de espermatozoides/mL en
la suspensin original?
15/18
Nota 1. La altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos puede cambiar en funcin del fabricante;
por lo tanto, tambin puede variar el volumen de la muestra contenida en los compartimientos de la
cmara. Lo anterior tiene dos implicaciones: 1) los clculos que deben realizar para conocer el
nmero de clulas presentes en una muestra sern distintos en funcin del fabricante de la
cmara, y 2) siempre se deber citar al fabricante de la cmara y de ser posible tambin el
modelo, con objeto de dar a conocer las condiciones exactas del trabajo realizado.
Bibliografa
Jimnez L F y Merchant H.: Biologa Celular y Molecular. Prentice Hall. 2003. Mxico
Karp G.: Biologa Celular y Molecular. McGraw-Hill Interamericana. 1996. Mxico
16/18
17/18
IV. ANEXOS
Sin anexos
V. ACTUALIZACIN
Manual de Prcticas de Laboratorio de Biologa Celular. Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad Autnoma del Estado de Mxico. Toluca, estado de Mxico; 27 de
mayo de 2013.
Primera Edicin
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
Director:
Dr. en C. Jos Mauro Victoria Mora
Elabor:
M en C. Luis Fernando Vega Castillo
Dr. Csar Ortega Santana
Revis:
Dr. Rafael Cano Torres
Dr. Ral Cuauhtmoc Fajardo Muoz
18/18