Conocer la tcnica de cromatografa de capa delgada como criterio para la
separacin de pigmentos de una planta.
MARCO TEORICO
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar
molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos, nucletidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste de una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia de inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una placa de vidrio, aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida puede ser rgida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento depender del tipo de molculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla de ambos. Podemos distinguir 3 tipos de cromatografa dependiendo si la fase estacionaria/fase mvil es slido/lquido, lquido/lquido o lquido/gas: Si es slido/lquido, cabe distinguir entre: Cromatografa de adsorcin: El slido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase mvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals). Cromatografa de cambio inico: el slido es un cambiador de iones (fuerzas electrostticas). Cromatografa de exclusin (o de geles): el slido es un gel formado por polmeros no inicos porosos que retienen a las molculas de soluto segn su tamao. Cromatografa de afinidad: es un tipo especial de cromatografa de adsorcin, utilizada especialmente en bioqumica, en la que un slido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un indicador enzimtico o un anticuerpo. Si es lquido/lquido, cabe distinguir: Cromatografa de particin: el soluto se reparte entra la fase mvil (lquido o gas) y la fase estacionaria. Si es lquido/gas, cabe distinguir entre: Cromatografa gas-liquido (CGL), que es una cromatografa de particin. Cromatografa gas-slido (CGS), que es una cromatografa de adsorcin.
Si es un fluido supercrtico, (fluido calentado a una temperatura superior a la
temperatura crtica, pero simultneamente comprimido a una presin mayor que su presin critica), se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos (CFS), que puede ser de particin o de adsorcin. Las tcnicas cromatografas, segn el dispositivo utilizado para conseguir la separacin entre la fase mvil y la estacionaria, pueden ser: en columna y plana. Cromatografa en columna: Se utiliza un tubo cilndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su travs se hace pasar la fase mvil. El flujo de la fase mvil (lquido o gas) a travs de la estacionaria se consigue: 1) por presin, 2) por capilaridad, 3) por gravedad. Cromatografa plana: La fase estacionaria est colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse bidimensional. Se divide en dos tipos generales: 1. -Cromatografa en papel: en la que el papel absorbente acta como soporte de la fase estacionaria (cromatografa de particin). Una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel absorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares especficos. Cromatografa en capa fina: en la que un slido acta como fase estacionaria (cromatografa de particin), se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio. El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.