1.

METODOLOGA
1.1. Tratamiento de la muestra
La muestra de suelo se debe secar y homogenizar para
posteriormente ser analizada.
Procedimiento
Se esparce la muestra de suelo sobre un mesn cubierto
con una lmina de plstico.
Se elimina los residuos vegetales (races gruesas, hojas,
etc.).
Se seca la muestra al are (temperatura ambiente). Para
acelerar el proceso se seca las muestras en estufa a una
temperatura no superior a los 30C.
Una vez secada la muestra se tamiza con tamiz de 2 mm.
Los terrones que no pasan se desintegran utilizando el
mortero y se tamizan nuevamente. Los fragmentos o
piedras que permanecen en el tamiz se eliminan.
Las muestras secas y tamizadas se guardan en bolsas
plsticas para su posterior anlisis.

1.2. pH
Suspensin y determinacin potenciomtrica
Se prepara una suspensin de suelo con agua y se
determina el pH del sobrenadante.
Otra manera de determinar el pH, consiste en preparar
una suspensin de suelo con disolucin de CaCl2 y
determinar el pH del sobrenadante.
Disoluciones
Disolucin 0,01 mol/L de CaCl2. Se pesa 1,47 g de CaCl2, se
disuelve en agua y se diluye a 1000 mL.
Procedimiento
Se pesan aproximadamente 20 g de suelo seco en un
recipiente plstico.
Se agregan 50 mL de agua o de disolucin de
cloruro de calcio 0,01 mol/L con probeta.
La suspensin se agita durante 5 minutos y se deja
reposar por lo menos 2 horas. El medidor de pH se
calibra utilizando dos soluciones tampones (pH: 4,00
y 7,00).
El pH de las muestras se registra con dos decimales
una vez estabilizada la lectura.

1.3. Potasio
Se realiza la extraccin con disolucin de acetato de
amonio 1 mol/L a pH 7,0, para el posterior anlisis
por espectrofotometra de absorcin atmica (EAA).
La solucin de acetato de amonio 1 mol/L a pH 7,0
extrae del suelo los cationes solubles y los
intercambiables.
Disoluciones
Disolucin de acetato de amonio 1 mol/L. Se pesa
193,02 g de CH3COONH4, se disuelve en agua y se
diluye a 2500 mL.
Estndar de potasio 1000mg/L. Se pesan 1,91 g de
KCl, secado

previamente a 200C durante 24 h y

enfriado en un desecador. Se afora a 1000 mL.

Estndar de Potasio 100,0 mg/L.

Se hace una

dilucin tomando una alcuota de 10 mL del patrn

de 1000 mg/L y se afora a 100,0 mL.
Disolucin de sodio 1000 mg/L. Se pesa 7,63 g de
NaCl se disuelve con agua y se afora a 3000 mL.

Condiciones de trabajo del equipo de absorcin atmica:

Longitud de Pasabanda
Analto onda (nm)
(nm)
K

766.5

0,5

T llama Flujo
Llama
(C)
(L/min)
2100Are/acetileno 2400
1,1-1,3

Procedimiento
Se pesa 5,00 g de suelo seco en un envase plstico de
150 mL aproximadamente. Se agregan 50 mL de
disolucin de acetato de amonio 1 mol/L y se agita
durante 30 min en agitador reciproco a 20-25C.
Se filtra para separar el extracto del suelo, utilizando
filtros de celulosa de (Advantek N2, cualitativo, dimetro
110 mm, tamao de poro 0,011 mm).
Para las lecturas, se toma una alcuota de 2,00 mL de
muestra, se agregan 5,00 mL de disolucin de sodio 1000
mg/L y se completa a volumen de 50,00 mL con agua.
Medicin. Se construye una curva de calibracin de
estndares de potasio en el rango de 0,00 y 2,00 mg/L,
midiendo sus respectivas absorbancias con un equipo de
Absorcin Atmica a una longitud de onda de 767 nm con
llama de aire-acetileno.

1.4. Fsforo
Extraccin con disolucin de carbonatohidrgeno de
sodio 0,5 mol/L a pH 8,5 y determinacin colorimtrica de
azul de molibdeno.
La

extraccin

se

realiza

con

una

disolucin

de

carbonatohidrgeno de sodio 0,5 mol/L a pH 8,5 para

reducir la concentracin de los iones calcio (precipitacin
de

carbonato

de

calcio),

aluminio

hierro

(III)

(precipitacin de los hidrxidos correspondientes)y , de

este modo, liberar los iones fosfatos presentes en la
solucin.
El fsforo en el extracto se analiza por colorimetra
mediante el mtodo del azul de molibdeno usando cido
ascrbico como reductor. Este mtodo es aplicable a
todos los tipos de suelos (Mtodo de Olsen)
Disoluciones.
Disolucin de carbonato de hidrgeno de sodio 0,5 mol/L.
Se pesa 42,00 g de NaHCO 3 se disuelve en agua y se
afora a 1000 mL.

cido sulfrico 2,5 mol/L. Se agrega lentamente 35 mL de

cido sulfrico 96% a alrededor de 100 mL de agua bajo
agitacin constante. Una vez fro, se afora a 250 mL con
agua.
Disolucin de molibdato de amonio. Se disuelve 4,80 g de
heptamolibdato de amonio tetrahidratado en 100 mL de
agua.
Disolucin de tartrato de potasio y antimonio. Se pesa y
disuelve 0,30 g de tartrato de potasio y antimonio (III)
pentahidratado en 100 mL de agua.
Reactivo mezclado. Se mezcla 250 mL de cido sulfrico
2,5 mol/L con 250 mL de la solucin de molibdato de
amonio y 25 mL de la solucin de tartrato de potasio y
antimonio y se diluye con agua a 500 mL. Este reactivo se
guarda en botella de vidrio color mbar, en la oscuridad y
en un lugar fro.
Reactivo para desarrollo de color. Se pesa 1,00 g de cido
ascrbico y se disuelve en 200 mL de reactivo mezclado.
Disolucin estndar de fsforo 1000 mg/L. Se pesa 4,3902
g de KH2PO4, secado previamente a 105C durante 2
horas. Se disuelve en agua y se afora a 1000 mL.

Disolucin estndar de 100,0 mg/L de fsforo. Se diluye

10 mL de la solucin estndar de 1000 mg/L de fsforo a
100 mL con agua.
Disolucin estndar de 10 mg/L de fsforo. Se diluye 10
mL de la solucin estndar de 100 mg/L de fsforo, a 100
mL con agua.
Procedimiento
Se pesa 2,50 g de suelo seco, en un envase plstico de
150 mL,
Se agrega 1,00 g de carbn activado.
Se agrega 50 mL de disolucin de carbonatohidrgeno de
sodio 0,5 mol/L.
Se agita los envases con tapa durante 30 minutos a 2025C en un agitador reciproco. Una vez terminada la
agitacin, se filtra inmediatamente a travs de un filtro
libre de fsforo.
Se prepara un blanco conteniendo todos los reactivos
excepto la muestra, y se sigue el mismo procedimiento
que las muestras.

Medicin. Se construye una curva de calibracin de

fsforo en el rango de 0,00 y 1,50 mg/L.
Se transfiere 5,00 mL de la serie de estndares, del
blanco y de los extractos de la muestra a recipientes de
vidrio.
Se agrega 15,0 mL de agua, 5,00 mL de reactivo para el
desarrollo de color, agitando suavemente para liberar el
CO2. Se deja reposar durante 60 minutos.
Se lee la absorbancia contra agua como blanco a 880 nm.
El complejo formado de color azul alcanza su mxima
intensidad despus de 1 hora y es estable por lo menos
10 horas.

1.5. Carbono orgnico y materia orgnica

El mtodo consiste en una combustin hmeda de la materia
orgnica con una mezcla de dicromato de potasio y cido
sulfrico. Despus de la reaccin se mide colorimtricamente
el cromo (III) formado.
Disoluciones
Disolucin de dicromato de potasio 0,500 mol/L. Se pesa
73,55 g de la sal y se afora a 500 mL con agua.
Solucin patrn de 100,0 mg/mL de carbono. Se pesa
59,50 g de sacarosa, se disuelve en agua y se afora a 250,0
mL. A partir de ste patrn se preparan los estndares para la
curva de calibracin.
Procedimiento
Se pesa entre 1-2 g aproximadamente de suelo seco y se
lleva a matraces Erlenmeyer de 250 mL, adems, se
transfiere 1,00 mL de la serie de estndares de sacarosa a
matraces Erlenmeyer de 250 mL. A todos los matraces se
agrega 10,0 mL de disolucin de dicromato de potasio 0,500
mol/L, 20 mL de cido sulfrico 95-97%. Se agita y deja
reposar bajo campana durante 30 minutos. Finalmente, se
agrega 70 mL de agua, luego se mezcla y se deja reposar
durante toda la noche.
La absorbancia del sobrenadante se lee a 600 nm.

1.6. Nitrgeno extrable desde el suelo

1.6.1.
Determinacin colorimtrica de nitrato
Se extrae el nitrato presente en el suelo utilizando agua y
luego por colorimetra se determina el contenido de nitrato.
Disoluciones
Disolucin de NaOH 4M. Se pesa 160,00g de NaOH, se
disuelve en agua y se afora a 1000 mL.
Reactivo sulfosaliclico. Se pesa 5,00 g de C7H6O3 y se
disuelve en 100 mL de H2SO4 95-97%.
Disolucin patrn de N-NO3 1000 mg/L. Se pesa 7,29 g de
KNO3 y se disuelve en agua y se afora a 1000 mL.

Procedimiento
Se pesa aproximadamente 5,00 g de suelo seco en un
envase plstico, se agrega una punta de esptula de carbn
activado y con probeta se agregaron 25 mL de agua. Luego
se agit por 1 hora, se deja reposar durante 30 minutos.
Posteriormente se filtra utilizando papel filtro. El extracto se
guarda bajo refrigeracin hasta su anlisis.
Medicin. En un tubo plstico se aade 0,5 mL del filtrado de
muestra con micropipeta, 1 mL del reactivo sulfosaliclico,
inmediatamente se agita en un vortex, se deja reposar 20
minutos, y bajo agitacin se adiciona 10 mL de NaOH 4 M. Se

deja enfriar a temperatura ambiente (90 min aprox). El mismo

procedimiento se realiza con los estndares de N-NO3 en el
rango de 0,00 y 25,00 mg/L.
Las lecturas de absorbancia se realizan a una longitud de
onda de 410 nm en un espectrofotmetro de absorcin
molecular.

1.6.2.

Determinacin colorimtrica de Nitrito.

Utilizando agua, se extrae el nitrito presente en el suelo y por

colorimetra se determina el contenido de nitrito.
Disoluciones
Disolucin estndar de N-NO2 100 mg/L. Se pesa 497,5 mg
de NaNO2, se disuelve en agua y se afora a 1000 mL.
Reactivo de color. Se pesa 1,25 g de cido sulfanlico, 62,50
g de acetato de sodio y 0,125 g de -naftilamina y se disuelve
en agua, luego se agrega 6,25 mL de cido actico glacial y
se completa a volumen de 250,0 mL.

Procedimiento
Se

utiliza

la

misma

muestra

extrada

para

nitrato.

Medicin. En un tubo plstico se agrega 10,0 mL del filtrado

de muestra, 0,5 mL de reactivo de color y 2,5 mL de cido
actico glacial, se agita en un agitador de vortex, se espera
alrededor de 30 minutos. El mismo procedimiento se hace
con los estndares de la curva de calibracin de N-NO 2 (en el
rango de 0,00 y 0,60 mg/L). Se lee la absorbancia a 530 nm.
1.6.3.

Determinacin colorimtrica de amonio

El amonio se extrae utilizando una disolucin de cloruro de

potasio 1,0 mol/L, y se determina colorimtricamente el
contenido de amonio en suelo.
Disoluciones
Disolucin de KCl 1 mol/L. Se pesa 75,57 g de KCl, se
disuelve en agua y se afora a 1000 mL.
Disolucin de NaOH 3 mol/L. Se pesa 120 g de NaOH, se
disuelve en agua y se afora a 1000 mL.
Reactivo de Nessler. Se pesa 4,50 de HgI2, 6,00g de KI. La
mezcla se disuelve en agua y se afora a 250 mL. La solucin
se guarda en oscuridad.
Por otro lado, se pesa 1,75 g de goma ghatti y se disuelve en
700 mL de agua y deja en bao mara por 1 hora. Se deja

enfriar y se filtra. Posteriormente se agrega la solucin de

goma ghatti a la solucin de yoduros, se afora con agua a
1000 mL. El reactivo se guarda en oscuridad por 24 horas.
Disolucin estndar de 1000 mg/L N-NH4. Se pesa 4,74 g de
(NH4)2SO4 se disuelve en agua y afora a 1000 mL.

Procedimiento
Se pesa aproximadamente 5,00 g de suelo y se lleva a un
envase plstico con tapa, se agrega una punta de esptula de
carbn activado y 25 mL de disolucin de KCl 1 mol/L. Se
agita por 1 hora y deja reposar por 30 minutos, se filtra y
guarda refrigerado hasta su anlisis.
Medicin. En un tubo plstico se agrega 1mL de extracto
filtrado, 1 mL de agua, 2 mL de reactivo de Nessler y 3 mL de
NaOH 3 mol/L, se mezcla utilizando un agitador vortex, se
deja reposar por unos 20 minutos. El mismo procedimiento se
realiza con los estndares de curva de calibracin (0,00 a 40
mg/L). En un espectrofotmetro de absorcin molecular se
leen las absorbancias, tanto de las muestras y su respectivo
blanco, como las de la curva de calibracin a una longitud de
onda de 490 nm.

pH en agua, suspensin y determinacin potenciomtrica:

Menor o igual a 4.5

4.6 - 5.0
5.1 - 5.5
5.6 - 5.9
6.0 - 6.5
6.6 7.3
7.4 7.8
7.9 8.4
8.5 9.0
Mayor a 9.0

Extremadamente cido
Muy Fuertemente cido
Fuertemente cido
Moderadamente cido
Ligeramente cido
Neutro
Ligeramente alcalino
Moderadamente alcalino
Fuertemente alcalino
Muy fuertemente alcalino

pH en CaCl2 suspensin y determinacin potenciomtrica:

Menor o igual a 3.8
3.9 - 4.3
4.4 - 4.8
4.9 - 5.2
5.3

Extremadamente cido
Muy Fuertemente cido
Fuertemente cido
Moderadamente cido
Ligeramente cido

Potasio disponible mg/Kg, extraccin con Acetato de amonio 1,0 M y

determinacin EEA:
Menor o igual a 50
50.1 - 100
100.1 - 180
180.1 - 250
Igual o mayor a 250

Muy Bajo
Bajo
Medio
Alto
Muy Alto

Fsforo Olsen mg/Kg, extraccin con carbonato hidrgeno de sodio 0,5M pH

8,5, determinacin colorimtrica:

Menor o 5.0
5.1 - 10.0
10.1 20.0
20.1 30.0
Igual o mayor a 30.1

Muy Bajo
Bajo
Medio
Alto
Muy Alto

Materia Orgnica (%).Combustin hmeda y determinacin colorimtrica del

cromato reducido:
Menor o igual a 5.0
5.1 - 10.0
Igual o mayor a 10.1

Bajo
Medio
Alto

Nitrgeno disponible en suelo en mg/kg

Menor a 10
10-20

Muy bajo
Bajo

CURVAS DE CALIBRACIN

Fig. 6. Curva de calibracin de Potasio

Fig. 7. Curva de calibracin de Fsforo

Fig. 8. Curva de calibracin de Carbono Orgnico

Fig.9. Curva de calibracin de N-NO3

Fig. 10. Curva de calibracin de N-NO2

Fig. 11. Curva de calibracin de N-NH4