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= 5.25 mL
=1.2 mL
= 2.1 mL.
Toma de muestra:
1. El Biorreactor (BR) ya tiene el tubo para la toma de muestra,
2. Colocar un mechero cerca para evitar contaminacin (no se quemen)
3. Abrir la llave del puerto de muestreo y tomar la muestra haciendo
vaco con la jeringa
4. Cerrar la lleve del puerto
5. Tener un segundo tubo estril listo
6. Sacar el tubo con cuidado y taparlo con el tapn del siguiente tubo
estril y colocar el tubo en el puerto para la siguiente muestra.
7. Tomar 1 ml para DO (600 nm) y Cuenta (para el blanco de D.O.
tomar medio de cultivo estril fresco)
8. Pasar 13 mL (exactos) de la muestra restante a un tubo Falcn,
centrifugar y separar sobrenadante para anlisis (guardar en otro
falcn limpio y en REFRIGERACIN bien etiquetado con numero de
muestra, hora, grupo etc etc ) Si no tienen tiempo o la centrifuga
guardar la muestra en refrigeracin y centrifugar a la hora de clase.
9. La pastilla celular se resuspende en 1 mL de sol salina y se pasa a la
charola y se lleva a secar a 60-70 C/24 h. Las charolas estn ya
marcadas con marcador (1,2,3 y pesadas) MANIPULAR con pinzas ,
NO tocar con las manos.
10. Si sobra cultivo de la muestra guardarlo en refrigeracin bien
etiquetado
11.
Del resto de la muestra determinar D.O en el mismo
espectrofotmetro que es el lambda que est junto (si hay que hacer
diluciones, se dejara medio de cultivo fresco)
12.
Determinar pH con las tiras y con potencimetro (en el
sobrenadante clarificado o en el cultivo).
TODO el material est en la gaveta o cerca del reactor.
NO DEJAR papeles, residuos o lo que sea en ningn momento
Cuando haya otra clase, solicitar permiso al maestro y hacer las
actividades en orden y hacer el mnimo ruido.
A la hora de clase, si no se pudo hacer, se realizara el centrifugado,
cuenta directa, cuenta en placa (de lo que se tenga), pH , etc.
Las muestras ya centrifugadas se guardaran en refrigeracin y el
lunes se determinar a cada una
Determinar al sobrenadante clarificado:
Protena (0.25 mL por triplicado .75 mL)
AE (.1 mL x 3= .3 mL)
DNS (.1 x 3= .3)
Por cada muestra tener tres tubos con 900 mL de sacarosa 30 g/L de buffer de
acetatos 0.025 m pH 5, y agregar 0.1 mL del sobrenadante del cultivo y dejar
reaccionar 3 min y pasar 0.1 mL a un tubo con 0.1 mL de DNS y determinar azcares
reductores.