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Enrique Iez Pareja

Departamento de Microbiologa e Instituto de Biotecnologa
UNIVERSIDAD DE GRANADA
ndice:
1.

Clulas madre: conceptos bsicos

2.

Clulas madre humanas

2.1

Clulas madre embrionarias y germinales

2.2

Clulas madre de adulto

2.2.1

Biologa bsica de las clulas madre de adulto

2.2.2

Papel en la renovacin celular del organismo

2.2.3
(transdiferenciacin)
3.

La plasticidad de las clulas madre de adultos

Terapias con clulas madre

3.1

Terapias celulares y trasplantes

3.1.1

Perspectivas con las clulas madre embrionarias (ES)

3.1.2

Perspectivas con clulas madre de adultos

3.1.3

Reprogramacin directa de clulas somticas?

3.1.4
madre

Algunos ejemplos de terapias experimentales con clulas

3.2

Clulas madre para terapia gnica somtica

4.

Hacia la reconstruccin de rganos y tejidos?

1.

Clulas madre: conceptos bsicos

Definicin de clulas madre: son aquellas clulas dotadas

simultneamente de la capacidad de autorrenovacin (es decir, producir

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ms clulas madre) y de originar clulas hijas comprometidas en
determinadas rutas de desarrollo, que se convertirn finalmente por
diferenciacin en tipos celulares especializados.
En el contexto de la actual investigacin, se pretende obtener clulas
madre que se mantengan como tales en cultivo en el laboratorio, y que
bajo determinados estmulos puedan conducir a poblaciones de clulas
diferenciadas.
El zigoto (vulo fertilizado) es una clula totipotente, capaz de dar
origen a todo el organismo. Durante las primeras divisiones el embrin
es una esfera compacta (mrula), en la que todas las clulas son
totipotentes, y de hecho esto se refleja de modo natural en los gemelos
monozigticos. A los pocos das comienza una primera especializacin,
de modo que se produce un blastocisto, con una capa superficial que
dar origen al trofoblasto, del que deriva la placenta, y una cavidad
casi hueca (rellena de fluido) en la que est la masa celular interna
(m.c.i.). (Ir a fotos de estas primeras fases embrionarias humanas)
Las clulas de esta m.c.i. son pluritotentes, porque aunque por s solas
no pueden dar origen al feto completo (necesitan el trofoblasto), son el
origen de todos los tejidos y tipos celulares del adulto.
Hay que aclarar un punto: aunque las clulas de la masa celular interna
del blastocisto son pluripotentes, no son en s mismas clulas madre
dentro del embrin, porque no se mantienen indefinidamente como tales
in vivo, sino que se diferencian sucesivamente en los diversos tipos
celulares durante la fase intrauterina. Lo que ocurre es que cuando se
extraen del embrin y se cultivan in vitro bajo ciertas condiciones, se
convierten en clulas inmortales dotadas de esas dos propiedades de
las que hablbamos: autorrenovacin y pluripotencia.
Obtencin en ratn de clulas madre embrionarias: desde inicios de
los aos 80. Actualmente, en casi cualquier raza de ratn es posible
separar blastmeros de m.c.i. del blastocisto, y cultivarlos de modo que
las clulas resultantes (clulas madre o troncales, stem cells) presentan
dos notables propiedades: pluripotencia y capacidad de contribuir a la
lnea germinal:
Pluripotencia: Las clulas madre pueden diferenciarse in vivo e in vitro
en una gran diversidad de tipos celulares.
In vivo dicha multipotencia se manifiesta cuando al incorporar clulas
madre en blastocistos pueden dar origen a cualquier tejido u rgano,

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In vitro pueden contribuir igualmente, con las seales adecuadas, a
diferentes lneas celulares de las tres capas embrionarias (ecto-, meso- y
endodermo). Este es el campo donde ms se est investigando
actualmente, por su relevancia para la clonacin teraputica, como
veremos.
Contribucin a la lnea germinal: Las clulas madre embrionarias de
ratn pueden contribuir a la lnea germinal de ratones quimricos. Si
inyectamos clulas madre cultivadas de una raza de ratn en el interior
de un embrin normal (blastocisto) de otra raza, dichas clulas madre
pueden dar origen a cualquier tipo de tejido del adulto. Lo interesante
aqu es que en algunos casos sirven de fuente para las clulas
germinales (espermatozoides u vulos). Estos ratones en los que hay
tejidos procedentes de dos razas distintas se denominan quimeras, y en
algunas quimeras las clulas reproductivas proceden de las clulas
madres introducidas en el blastocisto, de modo que su constitucin
gentica se puede distinguir de la de las clulas somticas.
Si manipulamos clulas madre por ingeniera gentica, y las
transferimos a un blastocisto, podemos obtener ratones quimeras en los
que parte de los tejidos estn alterados genticamente. Si las clulas
madre manipuladas contribuyen a la lnea germinal, el rasgo gentico
modificado en el ratn quimera se transmite a la descendencia,
constituyndose entonces una lnea de ratones transgnicos. Los
ratones transgnicos, incluidos los denominados K.O. (noquedados
genticamente, es decir, con un gen mutante introducido por
recomibinacin homloga) son actualmente una herramienta valiossima
en biologa y en diseo de modelos de enfermedades humanas.
Otras clulas madre:
Clulas madre germinales (EG): se aislan de fetos, a partir de la cresta
germinal, donde se est produciendo la diferenciacin de la lnea
germinal.
Clulas madre de adulto (AS): El caso paradigmtico es la clula madre
hematopoytica (HSC), que genera todos los tipos de clulas sanguneas
y del sistema inmunitario, y que reside en la mdula sea (aunque en la
fase fetal se encuentra en hgago y bazo).
2. Clulas madre humanas
2.1

Clulas madre embrionarias y germinales

En 1998 dos grupos informaron de la obtencin de clulas madre

humanas, reproduciendo lo que ya se haba logrado en ratones:

El trabajo de Thomson y colegas en la Universidad de Wisconsin,

financiado por Geron: aislamiento y cultivo de clulas madre
embrionarias (ES) a partir de blastocistos sobrantes procedentes de
programas de FIV.
El de Gearhart, en la Universidad John Hopkins obtuvo clulas madre
germinales embrionarias (EG) a partir de fetos abortadosLas posibles
aplicaciones de estas clulas madre embrionarias son:
Estudios bsicos
Diseo de nuevos medicamentos
El uso que ms ha llamado la atencin sera el empleo de las
clulas madre o sus derivados para terapias celulares o incluso
reparacin de tejidos daados.
Se ha calculado que se usaran embriones sobrantes de programas de
FIV, en unos cuantos aos se podran establecer unas 1000 lneas
distintas de clulas ES humanas. De los estudios realizados hasta ahora,
parece incluso que la frecuencia de derivacin de ES humanas es alta
(25-33%), superior a la de los ratones, especie en la que, adems, hay
variaciones en la eficiencias de derivacin dependiendo de las razas.
2.2

Clulas madre de adulto

En humanos se conoce desde hace aos, al igual que en ratones, la

clula madre hematopoytica de adultos, que reside en la mdula sea
y que da origen a toda las lneas de clulas sanguneas e inmunes.
Aunque se conocen desde hace tiempo clulas madre en tejidos que,
como la sangre o la epidermis, presentan gran tasa de proliferacin, solo
recientemente se han descubierto clulas madre en rganos que
normalmente tienen una baja tasa de renovacin, como es el caso del
cerebro.
As pues, la novedad ha consistido en reconocer la existencia de clulas
madre pluripotentes en otros tejidos y rganos, y an ms interesante,
que algunas de ellas presentan la suficiente flexibilidad como para
generar clulas especializadas de otros linajes.
Esto ha supuesto una sorpresa alentadora, ya que aumenta la
perpectiva de obtener a largo y medio plazo terapias celulares, sin los
problemas ticos asociados a destruir embriones para obtener clulas
madre.
2.2.1

Biologa bsica de las clulas madre de adulto

En modelos animales (mosca del vinagre, ratn)

Patrones de diferenciacin, con marcadores

patrones de molculas de superficie).

moleculares

(p.ej.

Seales
externas
e
internas:
mltiples
mecanismos
de
retroalimentacin y de interacciones recprocas entre clulas, dentro del
nicho o hbitat que ocupan en el organismo. Aqu la investigacin
bsica est desentraando las molculas que se envan unas clulas a
otras, y cmo estos mensajes desde el exterior ponen en marcha una
serie de factores de transcripcin para activar genes, cuyos productos
ejercen una serie de efectos: reorganizaciones de orgnulos y
macromolculas, divisiones simtricas y asimticas, diferenciaciones,
etc.
Controles intrnsecos: parece que las clulas disponen de relojes
internos que de alguna manera les indican el nmero de veces que
deben dividirse antes de diferenciarse totalmente. Sabemos an poco de
esta faceta, pero se piensa que estn implicados varios mecanimos:
Protenas promotoras e inhibidoras del ciclo celular
Longitud del telmero: se ha propuesto que conforme la clula se
especializa, va acortando sus telmeros, hasta que finalmente llega a la
senescencia. De hecho, en la mayor parte de los tejidos adultos no se
puede detectar actividad de telomerasa. Por el contrario, las clulas
madre poseen telmeros largos y actividad telomerasa constitutiva
(permanente).
Controles externos: un complejo juego de seales de corto y largo
alcance entre clulas madre, sus hijas, y las clulas vecinas:
Factores secretados: los que se conocen mejor son los factores de la
mdula sea, incluyendo numerosas citoquinas, que dirigen la
maduracin, proliferacin y diferenciacin a los linajes mieloides y
linfoides. Pero se estn estudiando otros sistemas como la diferenciacin
de la cresta neural.
Interacciones clula con clula, a travs de protenas integrales de
membrana.
Interacciones de las clulas con la matriz extracelular del tejido, por
medio de receptores de membrana, como las integrinas.
En muchos de estos casos, la seal externa que llega al receptor de
membrana se transduce (reemite) al interior mediante una cascada
de reacciones bioqumicas (con abundantes fosforilaciones y

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desfosforilaciones de protenas), para finalmente originarse una orden
de activar o desactivar grupos de genes. Por lo tanto, la clula puede
cambiar su patrn de expresin, lo que en determinados casos significa
un paso ms en su ruta de diferenciacin, su proliferacin, o incluso
puede significar la muerte celular programada (apoptosis).
2.2.2

Papel en la renovacin celular del organismo

Se estn acumulando pruebas de que desde la vida perinatal a la adulta

van apareciendo clulas madre en los tejidos somticos, como parte de
la estrategia del organismo para su renovacin en condiciones
fisiolgicas o ante un dao. Esto nos lleva a la conclusin aparentemente
paradjica de que en realidad las clulas madre de adulto no son clulas
primitivas derivadas directamente del embrin temprano, sino que
seran clulas que aparecen tardamente, especializadas en
suministrar clulas de repuesto al organismo adulto.
Un descubrimiento de mediados de los 90 parece apoyar esto: existen
clulas madre neuronales en el cerebro anterior de mamferos, rodeando
al ventrculo lateral, y participan en la repoblacin de la subepndima
del ventrculo tras irradiacin, y en los roedores son la fuente de nuevas
neuronas que migran hasta el bulbo olfativo. Adems, en monos migran
por una ruta desconocida hasta la corteza cerebral asociaciativa (la que
contribuye a los mecanismos de memoria).
La identidad exacta de las clulas madre neuronales est sometida a
controversia, ya que algunos las localizan como clulas de la epndima
que rodean a los ventrculos, mientras que otros las hacen coincidir con
los astrocitos de la zona subventricular.
Las clulas madre del sistema nervioso central (SNC) pueden
generar los tres grandes tipos de clulas del cerebro adulto: neuronas,
astrocitos y oligodendrocitos. Pero desconocemos la importancia y
significado real de estas clulas madre. Puede ser que en verdad el SNC
del adulto mantenga una cierta capacidad de autorrenovacin, como
rasgo adaptativo segn las especies. Quiz en los animales superiores la
formacin local de nuevas neuronas en ciertas estructuras cerebrales
tenga algo que ver con los mecanismos de creacin e integracin de la
memoria. Adems, hace poco se han aportado pruebas de que los
estmulos ambientales pueden intervenir en la regulacin de la
formacin de neuronas.
Las clulas madre mesenquimales (MSC) humanas estn presentes en
el estroma de la mdula sea, constituyendo una poblacin totalmente
diferente de las clulas madre hematopoyticas, y su papel es contribuir
a la regeneracin de los tejidos mesenquimticos (hueso, cartlago,

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msculo, ligamento, tendn, tejido adiposo y estroma). Se han aislado y
cultivado MSC humanas, y lo que es mejor, se ha logrado su
diferenciacin controlada hasta clulas con rasgos tpicos de osteocitos,
condrocitos o adipocitos, respectivamente.
2.2.3
La plasticidad de las clulas madre de adultos
(transdiferenciacin)
En los ltimos aos se estn acumulando informes que parecen
confirmar una idea hasta ahora sorprendente: el que clulas madre o
precursoras de un linaje, cuando se trasplantan en individuos
receptores, puedan dar origen a clulas de otros linajes. Esto pone
en cuestin la imagen hasta ahora asentada de que el potencial de
desarrollo de las clulas madre de un tejido estaba restringido a las
clulas diferenciadas del tejido en el que residen.
Clulas cerebrales que dan lnea sangunea:
ratones
irradiados
subletalmente
(para
destruir
su
lnea
hematopoytica) fueron inyectados sistmicamente con clulas madre
neurales marcadas genticamente (gen lacZ). A partir de estos
trasplantes, los ratones produjeron clulas sanguneas de los dos
sublinajes: mieloide y linfoide, as como clulas hematopoyticas
inmaduras.
Clulas de la mdula sea contribuyeron a nuevas clulas de
microgla y astrogla en varias zonas del cerebro, cuando se inyectaron
en circulacin de ratones adultos irradiados.
Clulas madre neurales de ratones y de humanos pueden
convertirse en clulas musculares esquelticas.
Clulas de mdula sea como origen de clulas hepticas:
El grupo de Petersen (usando ratones) hizo transplantes de mdula sea
de machos a hembras singnicas (para seguir la pista usando el gen
sry del cromosoma Y como marcador), y da los hgados de los
receptores para estimular su regeneracin. Aparecieron clulas ovales
hepticas procedentes del donante, lo que sugera que en la mdula
sea existen clulas madre con potencialidad de generar clulas
epiteliales del hgado. Dando un paso ms, el grupo de Theise hizo
trasplantes parecidos, pero sin daar el hgado, y se detectaron
hepatocitos derivados del donante, lo que significa que en la mdula
sea existe alguna clula madre que en circunstancias normales puede

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contribuir a la renovacin de los hepatocitos (siendo quiz las clulas
los intermediarios).
Clulas madre mesenquimticas (MSC) del estroma de la mdula
sea pueden originar clulas de linajes no mesenquimatosos:
cuando se inyectan en ventrculos laterales de ratones neonatos, se
diferencian en astrocitos.
Catherine Verfaillie est estudiando esta versatilidad de diferenciacin.
En nios, pero incluso en adultos (45-50 aos) pueden originar clulas
cerebrales, precursores de hepatocitos y las tres clases de msculo
(esqueltico, cardaco y liso). Aunque an no han encontrado un
marcador molecular, se sabe que presentan rasgos intermedios entre las
ES embrionarias y otras clulas madre de adulto:
A semejanza de las ES, se dividen repetidamente
aparentemente sin hacerse senescentes. Exhiben
moleculares similares a las ES.

en cultivo,
marcadores

A diferencia de las ES no se diferencian espontneamente, ni inducen

teratomas (mayor seguridad). Hay que aplicarles molculas para que se
diferencien. Y esto est muy bien de cara a posibles terapias.
Clulas satlite de msculo esqueltico de ratn pueden repoblar la
sangre y rescatar a ratones irradiados.
En otra vuelta de tuerca, las cosas parecen funcionar tambin en el
sentido inverso: clulas hematopoyticas que generan clulas
musculares.
La infusin de clulas madre de mdula sea a ratones distrficos cuya
mdula sea haba sido destruida conduca a clulas que migraban a
msculo, donde producan distrofina, restaurando parte de la funcin
muscular.
Como hemos visto, una clula madre neuronal (ectodermo) puede dar
lugar a linaje sanguneo (mesodermo); o clulas madre de la mdula
sea (mesodermo) pueden originar clulas hepticas (endodermo). Esto
ha sido otra autntica sorpresa porque pone en entredicho un dogma
asentado de la embriologa, el que dice que el destino de una clula
queda sellado cuando entra a formar parte de una de esas capas
embrionarias.
Hay que ser moderado a la hora de sacar conclusiones de todo estos
experimentos, especialmente de su relevancia en relacin a posibles
terapias. Puede que el microambiente del adulto, sobre todo en los

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casos de experimentos con ratones daados (irradiados, con
degeneracin muscular) sea especialmente apto para permitir a clulas
madre de la mdula sea la suficiente flexibilidad fenotpica, incluida su
diferenciacin en linajes relacionados con capas embrionarias distintas.
Pero hay que distinguir entre el microambiente en una situacin
fisiolgica, y el derivado de una patolgica, porque el primero puede que
no sea adecuado para inducir los grandes cambios fenotpicos que
vemos en el segundo. Por otro lado, el cultivo in vitro de clulas madre o
de precursores comprometidos en determinados linajes puede que
permita su desdiferenciacin y eventual re-diferenciacin hacia otros
linajes.
3.

Terapias con clulas madre

El retrato robot de una buena clula madre para terapias celulares

y trasplantes en humanos sera como sigue:
Debera ser efectivamente pluripotente, idealmente que se pudiera
generar cualquier tipo buscado de clula
Debera ser inmortal, es decir, tener la capacidad de proliferar
(autorrenovarse) indefinidamente
Debera poseer un fenotipo estable, bien caracterizado desde el punto
de vista molecular
Debera carecer de potencial tumorignico
Debera ser susceptible de manipulacin gentica, para permitir
modificaciones genmicas precisas, incluyendo la introduccin de genes
teraputicos.
3.1
Terapias celulares y trasplantes
La esperanza teraputica principal que se tiene en las clulas madre
es que se puedan emplear para terapias celulares y trasplantes de
tejidos, sin los problemas actuales ligados a los aloinjertos: escasez
de donantes histocompatibles, necesidad de administrar drogas
inmunosupresoras (ciclosporina, corticoides) con sus efectos secundarios
(riesgo de infecciones, de cncer, nefropatas, etc.). Lo ideal sera
derivar tejido con la identidad histolgica del propio paciente para
hacer autotrasplantes.
Se est abriendo el campo de la Ingeniera Celular, que en definicin
de Bernat Soria es un nuevo campo interdisciplinar que aplica los
principios de la ingeniera y de las ciencias de la vida a la obtencin de
sustitutos biolgicos para restaurar, mantener o mejorar la funcin
tisular.
3.1.1

Perspectivas con las clulas madre embrionarias (ES)

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El uso que ms ha llamado la atencin sera el empleo de clulas
diferenciadas a partir de clulas madre embrionarias para terapias
celulares o incluso reparacin de tejidos daados.
Una posibilidad sera tipificar muchas lneas diferentes de ES, con
diferentes sistemas MHC (HLA), pero la diversidad de los haplotipos HLA
es enorme. Una alternativa sera manipular por ingeniera gentica las
ES para crear lneas con diferentes haplotipos del HLA, de manera que
se obtuvieran bancos de clulas apropiados para diferentes receptores
de trasplantes. De todas formas, aunque se lograran clulas con HLA
similar al paciente, quedaran otros sistemas minoritarios de
histocompatibilidad, cuya falta de concordancia con el paciente podra
llevar a problemas no siempre controlables.
En cambio, el potencial teraputico de las ES se pondra de manifiesto
sobre todo empleando ES derivadas del propio paciente, ya que no
habra problemas de rechazo de injertos: estaramos ante un
autotrasplante. Pero cmo es posible esto en un individuo ya nacido, si
por definicin estas clulas proceden de embriones? Aqu es donde
entrara el mtodo de transferencia de ncleo de clula somtica (la
llamada clonacin teraputica): el paciente suministra clulas
somticas, se transfiere ncleo a ovocito desnucleado, se crea un
embrin artificial (embrin somtico), hasta la fase de
blastocisto; se toman las clulas de su masa interna, se cultivan como
clulas madre, y finalmente se diferenciaran al tipo de clula o tejido
para la terapia celular o el injerto, sin los problemas del rechazo
(autotrasplante). Segn algunos, es muy probable que en las prximas
dcadas seamos capaces de derivar clulas madre autlogas para todos
los que las necesiten.
El 21 de noviembre de 2001, la empresa ACT (Robert Lanza, Michael
West en J. Regenerat. Med.) comunic que haba logrado la primera
clonacin de un embrin humano mediante este sistema. Muy debatido
cientficamente: 57 vulos maduros de 7 mujeres. Con la mitad,
partenognesis. Slo lograron mantener 6 durante 7 das, pero sin
clulas madre (NO es embrin). Otros 17 vulos fueron desnucleados, y
se les transfiri ncleos de adulto. Slo 6 se dividieron hasta 4 o 6
clulas, y no progresaron. Embriones de verdad?
Los cientficos del Instituto Roslin han propuesto a las autoridades
britnicas un proyecto consistente en obtener bancos de clulas
madre clonadas por transferencia de ncleos de clulas
pluripotentes de cordn umbilical de los recin nacidos. Cada
cultivo quedara conservado en previsin de la necesidad ulterior de

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diferenciarlo hacia tipos celulares requeridos para autotrasplantes del
individuo donante.
Pero los retos tcnicos de este enfoque son formidables, incluso
dejando aparte los derivados de la transferencia de ncleos a ovocitos.
Las clulas ES de ratn (y quiz las humanas) son tumorignicas: si se
inyectan a un animal adulto originan teratomas y teratocarcinomas. Por
lo tanto, un tema de seguridad ser asegurarse de que en un cultivo
diferenciado a partir de ES no quedan estas clulas troncales, o bien
disponer de mtodos fiables de separacin y purificacin de las
clulas diferenciadas de inters respecto de las ES.
Para ello habr que avanzar en estudios de marcadores (al estilo de
los CD de las clulas inmunes) para caracterizar todas las fases
intermedias de cada ruta de diferenciacin.
En general, la obtencin de poblaciones celulares puras exige el empleo
de tcnicas eficaces de seleccin clonal: p. ej., el uso del FACS
(citmetro de flujo activado por fluorescencia, que discrimina
poblaciones en funcin de marcadores de superficie). Alternativamente,
marcadores genticos fcilmente seleccionables en el cultivo.
Alternativamente, se puede introducir por ingeniera gentica en el
genoma donante un bloque de genes que permita simultneamente la
seleccin de las clulas diferenciadas y un sistema suicida que
garantice la autodestruccin de las clulas que no se hayan
diferenciado.
Podremos forzar a las clulas madre embrionarias a diferenciarse en
lneas celulares concretas? An tenemos una idea muy pobre de la
biologa bsica de las seales y factores implicados en el
desarrollo y diferenciacin del embrin humano, pero se espera que
este campo avance con rapidez.
Otras cuestiones de seguridad para asegurar la salud a largo plazo de
las clulas a trasplantar.
Hay que asegurar la no introduccin de mutaciones lesivas, que se
pueden haber acumulado en el ncleo somtico donante durante la vida
del individuo. Ser esencial garantizar que tales mutaciones no
aumentan el potencial cancergeno.
Igualmente est la muy debatida cuestin de la edad biolgica de
las clulas. Mientras algunos informes hablan de mayor edad, otros

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dicen que el propio proceso de transferencia de ncleo somtico
rejuvenece las clulas y estimula a la telomerasa.
Habr que aclarar la eventual implicacin de las alteraciones de la
impronta gentica (imprinting) sobre las clulas ES y sus derivadas,
logradas tras transferencia nuclear.
3.1.2

Perspectivas con clulas madre de adultos

Ya anteriormente hemos repasado algunos casos recientes que

demuestran la flexibilidad inesperada de clulas madre de adultos para
diferenciarse incluso en lneas que no son las suyas originales.
Obviamente, si se confirman estos datos, y se avanza en esta lnea,
tendramos una nueva posibilidad de terapias celulares y
autotrasplantes, sin el problema tico de manipular y destruir
embriones humanos, aunque sean artificiales (por transferencia de
ncleo somtico a ovocitos).
(Ir a artculo sobre los aspectos ticos del uso de embriones humanos en
experimentacin)
3.1.3

Reprogramacin directa de clulas somticas?

Una de las grandes aspiraciones de los estudios sobre el desarrollo

embrionario y las clulas madre es la de desprogramar y
reprogramar a placer clulas somticas, sin necesidad de acudir
a la transferencia de ncleos a ovocitos (con la consiguiente
destruccin de embriones). Quiz una vez que conozcamos en detalle lo
que ocurre in vivo, seamos capaces de convencer a ciertas clulas
somticas de comportarse como clulas pluripotentes y despus
encarrilarlas hacia los tipos celulares deseados.
3.1.4
Algunos ejemplos de terapias experimentales con
clulas madre
Cerebro
Como dijimos, an tenemos que aclarar el debate sobre la identidad y
localizacin de las clulas madre neuronales.
Neuronas funcionales
partir de ES de ratn.

dopaminrgicas

serotoninrgicas

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Se ha logrrado el trasplante de clulas pluripotentes del mesencfalo en
ratas parkinsonianas, que experimentaron una recuperacin transitoria.
A partir del telencfalo de fetos se han aislado clones de clulas
madre neuronales, que se han logrado diferenciar en los principales
linajes neurales. Se han trasplantado en zonas germinales de ratones
neonatos, y all participaron en desarrollo normal, incluyendo migracin
por rutas establecidas para diseminarse a regiones del SNC.
En 2001, un equipo del Medical College de Nueva York logr en ratones
infartados la reparacin del 68% del tejido cardiaco, con una
recuperacin funcional parcial. Se originaron clulas de varios tipos
esenciales: msculo esqueltico, endotelio y msculo liso.
Pncreas:
Estudios de Bernat Soria (Universidad Miguel Hernndez de Elche):
clulas secretoras de insulina a partir de clulas ES de ratn. Curacin
tras ms de un ao de ratones diabticos.
Grupo de Amon Peck (Universidad de Florida): reversin de diabetes
en ratones NOD (diabticos no obesos) por trasplante de islotes de
Langerhans generados a partir de clulas madre del pncreas. En junio
de 2000 un grupo de la Universidad de California en San Diego anunci
que haba reactivado la produccin de insulina en clulas beta crecidas a
partir de lneas inmortales.
Equipo de Susan Bonner-Weir: cultivo de clulas de islotes humanos a
partir de clulas del ducto pancretico.
Hgado:
Ya aludimos a las clulas madre de hepatocitos que parecen residir en la
mdula sea. Un reciente informe en ratones logr usar con xito
trasplantes de mdula sea para corregir tirosinemia, como
modelo de enfermedad heptica.
Hay ejemplos de clulas pancreticas que se diferencian a hepatocitos.
Corazn:
La empresa Geron ha comprobado que clulas madre
embrionarias humanas pueden originar cardiomiocitos. Pero todava
no se han encontrado clulas madre en el propio corazn.

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En 2001 un equipo del Medical College de Nueva York comunic en ratn
la reparacin del 68% del tejido cardiaco de corazones infartados,
inyectando directamente clulas madre de la mdula sea. Se regener
msculo estriado, y vasos (endotelio y musculatura lisa). Recuperacin
de parte de la funcin cardiaca.
Otros ejemplos:
Un equipo de la Universidad John Hopkins demostr que una sola clula
madre hematopoytica de ratn poda desarrollarse en clulas
epiteliales de diferentes rganos, incluyendo intestinos, pulmn y piel. A
los 11 meses de los trasplantes el pulmn tena un 20% de clulas
diferenciadas a partir de la clula madre.
Estos ejemplos son alentadores, pero no eliminan totalmente la cuestin
del uso de las clulas embrionarias:
No se han aislado clulas pluripotentes de ciertos rganos, como es el
caso del corazn. Puede que haya tejidos y rganos de los que no
podamos disponer de clulas madre, por lo que tcnicamente
tendramos que volver a pensar en las ES por clonacin teraputica.
Las clulas madre embrionarias son ideales para realizar terapia gnica,
que ser necesaria para curar ciertas patologas. Lo veremos a
continuacin.
3.2
Clulas madre para terapia gnica somtica
En algunas enfermedades no bastar con realizar autotrasplantes, sino
que habr que corregir defectos genticos. Las clulas madre
embrionarias de ratn (y quiz las humanas), son excelentes para
manipulacin gentica, y pueden realizar recombinacin homloga, por
lo que se podra ensayar incluso terapia gnica sustitutiva,
reemplazando genes anmalos por versiones correctas.
Imaginemos el caso de un paciente aquejado de anemia falciforme o
talasemia (enfermedades genticas que afectan a la hemoglobina). Se
realiza la transferencia de ncleo somtico a vulos, se desarrolla el
blastocisto artificial, se aislan las clulas madre y se manipulan por
ingeniera gentica para corregir el defecto. Una vez asegurados de que
el gen se ha insertado correctamente (por recombinacin homloga) y
se puede expresar, se induce la diferenciacin de las ES hasta clulas
sanguneas o sus precursores pluripotentes, que podran recolonizar la
mdula sea, y se curara la enfermedad de modo permante.
Tambin se puede intentar la manipulacin gentica de clulas madre no
embrionarias: clulas madre neuronales de fetos humanos fueron

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manipuladas genticamente, y demostraron su capacidad de secretar
productos teraputicos, por lo que muestran un potencial para corregir
defectos metablicos en neuronas y gla.
4.

Hacia la reconstruccin de rganos y tejidos?

Como vimos anteriormente, la terapia en principio ms inmediata de los

cultivos de clulas madre ser el trasplante de poblaciones clulares al
propio individuo donante. Pero para conseguir el autntico potencial
teraputico de esta tecnologa habra que lograr reconstruir tejidos ms
complejos e incluso rganos o algunas de sus partes, con plena
funcionalidad. Aqu se presentan nuevos problemas de otro tipo, que
podramos englobar bajo el epgrafe de ingeniera de tejidos y
rganos, pero que an quedan relativamente lejos de las posibilidades
actuales. De todas formas, repasaremos algunos avances recientes que
en un futuro podran combinarse con las estrategias de las clulas
madre.
En una situacin relativamente sencilla de este enfoque se
encuentran las tecnologas de clulas encapsuladas, por la que las
clulas teraputicas se separan del resto del organismo por una
membrana sinttica con permeabilidad selectiva, de modo que
suministra proteccin al trasplante, al tiempo que permite el intercambio
de nutrientes, oxgeno y seales moleculares, y la liberacin de las
sustancias teraputicas. Las clulas se pueden manipular genticamente
previamente para garantizar la secrecin de la sustancia teraputica. Se
est intentando con clulas secretoras de insulina (para la diabetes), con
clulas cromafines (tratamiento del dolor crnico), con clulas secretoras
de hormona de crecimiento (para enanismo), etc. Igualmente existen
intentos de expresar protenas antiangiognicas contra el cncer
(endostatina) en clulas inmovilizadas en matrices de alginato.
En cuanto a regeneracin de rganos, uno de los puntos clave es
lograr estructuras organizadas tridimensionalmente, donde las distintas
clulas adquieran posiciones adecuadas para intercomunicarse entre s y
con otras partes del organismo. Para ello se intenta disponer de
andamios tridimensionales que sirvan para dar forma y consistencia, y
para alojar adecuadamente a las clulas:
Prtesis seas biolgicas, a base de combinaciones de clulas,
sustancias bioactivas y matrices tridimensionales de soporte que imitan
el hueso natural:
Un grupo ha demostrado la importancia de las interacciones
celulares tridimensionales y de la densidad celular para producir tejidos
de tipo seo. Se logr la agregacin de precursores seos sometiendo a

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clulas osteognicas, procedentes de cultivo, al factor TGF-b1, lo que a
su vez desencaden la produccin de protenas especficas del hueso y
la formacin de microespculas cristalinas maduras con tejido seo
humano organizado.
Otro grupo ha usado una combinacin de trozos de coral (una
cermica natural de carbonato clcico) con clulas madre
mesenquimales para generar implantes ortopdicos que lograron
curacin al menos parcial de lesiones seas en ovejas. Al cabo de varios
meses tras la implantacin, estos composites de coral se haban
remodelado como huesos maduros, e incluso haban logrado su fusin
completa con el hueso nativo. Parece ser que parte del xito se debe a
que el coral suministra una matriz porosa tridimensional reabsorbible,
que permite la infiltracin y organizacin de las clulas repobladoras.
La ventaja de usar clulas madre mesenquimales es que son
fciles de aislar de la mdula sea, y puede inducirse su diferenciacin
en osteoblastos tratndolas con factores como dexametasona, BPM
(protenas morfogenticas seas) o vitamina C.
Anteriormente las aproximaciones se haban basado en matrices
tridimensionales de polisteres degradables o de cermicas de
hidroxiapatita, que se repoblaban con clulas de mdula sea o tejido
del periostio, y se mantenan en cultivo durante varios das antes de
su implantacin.
Reconstruccin de vejiga urinaria de perros: se aislaron clulas de
msculo liso del exterior y clulas uroteliales del interior de la pared de
la vejiga, se multiplicaron in vitro, y se sembraron respectivamente en la
superficie exterior e interior de un tejido de polister con forma de
vejiga; la construccin resultante se nutri durante 7 das en un medio
estril, y se implant en perros que carecan de la mayor parte de su
vejiga. Esta neo-vejiga funcion de modo notablemente similar a la
natural al menos durante un ao, demostrando estabilidad en el
volumen de orina y resistencia adecuada. A los tres meses del trasplante
los polmeros haban desaparecido, y la vejiga haba desarrollado vasos
sanguneos y alguna inervacin. A microscopio, la histologa de la
neovejiga era notablemente parecida a la natural, con capas de msculo
liso y urotelio patentes.
Este trabajo supone un avance respecto de anteriores en los que se
intentaba trasplantar solo clulas de musculatura lisa sobre matrices de
colgeno, y en los que al cabo del tiempo las clulas se transformaban
en miofibroblastos. Quiz el xito se deba de nuevo a que en este caso
las clulas musculares pueden dialogar (con xido ntrico?) con otras
clulas, sobre todo las uroteliales, al estilo de lo que pasa en la
intercomunicacin
entre
clulas
musculares
lisas
y
clulas
endoteliales.

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Un equipo del MIT ha obtenido arterias funcionales artificiales, usando
como andamiaje un polmero de poligliclico. El polmero, con forma de
tubo, serva para cebar el anclaje de clulas de musculatura lisa de
vacas, y se conect a un sistema de perfusin pulstil que imitaba la
frecuencia de pulso de la arteria embrionaria (165 pulsos/min). Tras 8
semanas, se cubri el interior con clulas endoteliales. El pulso
favoreca la produccin de colgeno, de modo que las paredes del vaso
eran relativamente gruesas (aunque no tanto como en los vasos
naturales) y resistentes. Resistan fuerzas de ruptura, aguantaban
suturas,
y
mostraban
respuestas
contrctiles
ante
agentes
farmacolgicos. Adems, se comprob que contenan
clulas de
musculatura lisa. Estas arterias artificiales se implantaron en cerdos
(sustituyendo a porciones de arterias de las patas), y aguantaron ms
de tres semanas sin obstruirse.
Lograr rganos macizos como el rin y el hgado, constituye el Santo
Grial de la bioingeniera. Est claro que an estamos en la primera
infancia de la ingeniera de tejidos y rganos. El reto futuro ser no solo
derivar clulas diferenciadas a partir de clulas madre, sino lograr
estructuras funcionales, con su vasculatura y su inervacin. De nuevo en
el MIT ha habido un avance hacia algo parecido a un hgado artificial:
usando una tcnica de impresin en tres dimensiones (3DP)
originalmente pensada para piezas metlicas, este equipo logr
estructuras compuestas de varias lminas de polmero (polilctido y
poligliclido) que contenan canales internos de 300 micrometros. Los
investigadores sembraron esta matriz con clulas endoteliales y de
hgado de rata, y perfundieron medio nutritivo durante 5 semanas, con
lo que lograron que las clulas se organizaran en estructuras
microscpicas semejantes a las del hgado, y que produjeran
albmina.
Los primeros tejidos artificiales aprobados en los EEUU para uso clnico
son derivados de piel y de cartlago.
El TransCyte de la empresa Advanced Tissue Sciences es un
sustituto de piel hecho con clulas de la dermis sobre un polmero
biodegradable, y que se puede usar como cubierta protectora temporal
en quemaduras de 2 y 3 grado.
La misma empresa tiene en fase de ensayos clnicos otro producto,
el Dermagraft, previsto para el tratamiento de las lceras en los pies de
los diabticos. Se fabrica sembrando fibroblastos de dermis humana
sobre un andamio sinttico de material bioabsorbible. Las clulas se
estimulan y producen colgeno, protenas estructurales y factores de
crecimiento.
El Apligraf de la empresa Organogenesis consta de dermis y
epidermis, y se ha aprobado para tratar lceras de piernas que no curan

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espontneamente, como las de los diabticos. Consta de una capa de
clulas drmicas y epidrmicas obtenidas a partir del prepucio en la
circuncisin. Carticel, de Genzyme Corporation, se ha aprobado
para reemplazar cartlago daado de la rodilla. La empresa toma
condrocitos a partir del paciente y los hace crecer en una matriz
biodegradable, implantndose en la rodilla del enfermo.
Otra empresa, Curis, est desarrollando el Chondrogel, que es una
mezcla inyectable de condrocitos autlogos y de polmero de hidrogel.
Su indicacin sera el tratamiento del reflujo vesicouretral, un defecto
congnito de la vejiga urinaria de nios, y la incontinencia por estrs en
las mujeres.
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