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Integrantes:
Chagua Esteban, Jaime
Quispe Carlos, Antuanet
Vsquez Cueva, Jos Miguel
Zenteno Gora, Hans
PROFESOR: Erick Mercado

CONTENIDO

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15

2015

LABORATORIO DE BIQUMICA I

INTRODUCCIN

MARCO TERICO

PARTE EXPERIMENTAL
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RESULTADOS
9
DISCUSIONES
14
CONCLUSIONES
15
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
16

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

INTRODUCCIN

Los inhibidores sustancias qumicas que pueden afectar la interaccin del

sustrato y la enzima, ya sea aumentando la actividad enzimtica
(Inductores) o disminuyndola (Inhibidores).Puesto que los inhibidores
afectan en la velocidad de una enzima, son tiles en la bioqumica puesto
que ayudan a determinar la especificidad de la enzima por el sustrato, la
naturaleza de los grupos funcionales en el mantenimiento de la estructura
activa de la enzima. Estos compuestos no son alterados qumicamente por
la enzima.
Es fundamental para saber cmo trabajar en nuestro organismo, para
tener conocimiento de ella se deber de darle el medio adecuado a esta
enzima y el efecto que causa los inhibidores, aplicando el mtodo ms
clsico para medir la velocidad en que queda en la reaccin o tambin a
partir del producto formado.

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

MARCO TEORICO
FACTORES QUE REGULAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Los inhibidores enzimticos son agentes moleculares que interfieren en la
catlisis, haciendo ms lentas o deteniendo las reacciones. Los enzimas
catalizan virtualmente todos los procesos celulares, por lo que no es
sorprendente que los inhibidores enzimticos se encuentren entre los
agentes farmacuticos ms importantes. Por ejemplo, la aspirina
(acetilsaliclico) inhibe el enzima que cataliza el primer paso de la sntesis
de prostaglandinas, compuestos que intervienen en muchos procesos,
algunos de los cuales producen dolor. El estudio de los inhibidores
enzimticos tambin ha proporcionado informacin valiosa sobre
mecanismos enzimticos y ha ayudado a definir algunas rutas metablicas.
Hay dos amplias clases de inhibidores enzimticos: reversible e irreversible.
Inhibicin no competitiva
Este tipo de inhibicin se
produce por una sustancia que
es capaz de reaccionar con un
grupo qumico de la apoenzima
en un sitio diferente al sitio
activo, pero de tal manera que
est queda bloqueado y no
puede ya aceptar el sustrato.
Como consecuencia de este
modo
de
actuar,
aun
concentraciones muy elevadas
del sustrato no son capaces de desplazar al inhibidor de la enzima, por lo
que en este sentido la inhibicin es irreversible. Un ejemplo bien conocido
de un inhibidor no competitivo es el yodoacetato , que reacciona con los
grupos SH de las enzimas que tiene tales grupos en sus residuos de
cistena. Como resultado de esta reaccin, el sitio activo se modifica y el
sustrato ya no puede acomodarse sobre l. Este ejemplo indica que la
inhibicin de tipo no competitivo es relativamente poco especfica, puesto
que todas las enzimas que tengan grupos SH libres en posiciones
importante para preservar la estructura del sitio activo, se inhibirn no
competitivamente por el yodoacetato. En forma parecida, si el inhibidor
bloquea un grupo qumico de una coenzima es probable que todas o varias
de las enzimas que requieren de esa coenzima se inhiban no
competitivamente por el inhibidor.
4

El mecanismo de la inhibicin no competitiva implica que la velocidad de la

reaccin debe disminuir, pero que la Km de la enzima en relacin con el
sustrato no cambia. Esta es la manera como se identifica un inhibidor de
tipo no competitivo, ya que al medir la actividad de la enzima en presencia
del inhibidor, a diferentes concentraciones de sustrato, se altera la Vmax
pero no la Km.

Inhibicin competitiva

Como
su
nombre
lo
indica,en este tipo de
inhibicin
el
inhibidor
compite con el sustrato por
el sitio activo. Es decir, que
si se aumenta la S el
inhibidor es desplazado por
el sustrato.

Es claro que si el inhibidor puede acomodarse en el sitio activo y as

bloquearlo, debe tener cierto parecido estructural con el sustrato, pues ya
hemos estudiado que de otra manera no le sera posible llegar a l. Este
requisito confiere a los inhibidores competitivos un gran inters, pues los
hace especficos sobre las enzimas que usan el sustrato al cual se parecen.
Un ejemplo clsico de inhibidor competitivo, que adems es un ejemplo
la aplicacin de un inhibidor enzimtico a la teraputica, que adems es
ejemplo de la aplicacin de un inhibidor enzimatido a la teraputica es el
las sulfonamidas. En efecto, las sulfonaminas son anlogos estructurales
cido p-aminobenzoico:

de
un
de
de

Este
parecido
estructural
permite
a
las
sulfonamidas
inhibir
competitivamente la enzima que usa el cido p-aminobenzoico como
sustrato para sintetizar cido flico en un gran nmero de bacterias. Como
el cido flico se requiere durante la sntesis de nucletidos, los cuales a su
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LABORATORIO DE BIQUMICA I

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LABORATORIO DE BIQUMICA I
vez forman los cidos nucleicos, las sulfonamidas impiden el crecimiento de
las bacterias.
Anteriormente se ha mencionado la enzima succinato deshidrogenasa. Esta
proporciona orto buen ejemplo de inhibicin competitiva, ya que es inhibida
por un anlogo estructural muy parecido a su sustrato.

La cintica de la inhibicin competitiva se muestra tambin en la figura.

Puesto que al aumentar S se desplaza al inhibidor, la velocidad mxima no
se altera. Sin embargo, la Km cambia, en virtud de que el inhibidor esta
combinndose con el sitio activo.

Figura: modificacin de la
grfica
de
dobles
reciprocas
por
la
presencia de un inhibidor
no competitivo y uno
competitivo. En el primer
caso se altera el valor
Vmax, pero no cambia el
de Km; en el segundo, se
modifican la Km, y la
Vmax
se
mantiene
normal. En ambos casos
se
modifica
la
pendiente,puesto
que
sta se define como
Km/Vmax.

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

PARTE EXPERIMENTAL
Materiales y reactivos:
1. Solucin Sustrato almidn 500 mg/L, en buffer 0.01 M
Acetato de sodio y CaCl2 0.003 M (pH 5.6)
2. Reactivo de yodo 0.01 eq/L de Yodo en HCl 0.02M
3. Enzima amilasa
4. Tubos de prueba y pipetas
5. Polifenoles 1%
6. NaCl 5%
7. CaCl2 10%
8.

Centrfuga clnica

9.

Espectrofotmetro o fotocolormetro

Reactivos
Sustrato (ml)almidn
Enzima (uL)

B1

B2

B3

B4

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

---

50

--

50

--

50

--

50
7

Inhibidor (uL)

50

50

Polifenoles 1
%

50

50

50

Agua

50

50

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

50

Ac. Ascrbico

NaCl
5%

Incubar a 37C por 7,5 min

Solucin de yodo
(mL)
Enzima (uL)

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

50

--

50

--

50

2,5
--

2,5

2,5

50

--

10. Bao de mara a 37C.

Ensayo para la determinacin del efecto de inhibidores

sobre la velocidad enzimtica:
Primero en ocho tubos de ensayo se marco y se aadi las cantidades indicadas en
la tabla siguiendo el orden el tiempo y temperatura para los blancos y muestras.

Una vez que se agregaron los 4 inhibidores seguida de una

incubacin de 37C por un tiempo adecuado t agregarle la
solucin para que se desarrolle la reaccin pues examinamos el
color en cata uno de los tubos con sus respectivas muestras 1, 2,
3 y 4. Para una mayor cuantificacin de reaccin del efecto de
los inhibidores lo llevamos al espectrofotmetro UV-Vis y se lee a
640nm.

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

RESULTADOS
Efecto de Inhibidores
Grupo 1
Hay que tener en cuenta que la concentracin de la solucin de sustrato
almidn es de 0.5 mg/ml. Por lo tanto se tiene el siguiente cuadro

Tubo
1

1
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LABORATORIO DE BIQUMICA I
2

Por medio de la curva de calibrado realizado en el laboratorio de cintica

enzimticas se tiene el valor de la absortividad del sustrato:

Se sabe que la ley de Beer relaciona la concentracin y la absorvancia de la

siguiente manera:

En este caso la longitud de la cubeta empleada para la lectura es de:

Por lo tanto se tiene:

Adems la velocidad de reaccin se halla de la siguiente manera:

El tiempo es de 7.5 min, reemplazando valores y operando se tiene la

siguiente tabla:

Tubo

Velocidad de
reaccin

Absorvan
cia

(mg mL-1 min)

0.026

0.1577

0.1122

0.079

0.4793

0.0694

0.035

0.2123

0.105

0.13

0.7889

0.0281
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LABORATORIO DE BIQUMICA I

Tenemos la siguiente tabla resumen:

Tubo

Velocidad
de
reaccin

Inhibidor

(mg mL-1
min)
1

Polifenoles 1%

0.1122

Agua destilada

0.0694

NaCl 5%

0.105

Acido ctrico 1M

0.0281

Grupo 2
Hay que tener en cuenta que la concentracin de la solucin de sustrato
almidn es de 0.5 mg/ml. Por lo tanto se tiene el siguiente cuadro

Tubo
1

Por medio de la curva de calibrado realizado en el laboratorio de cintica

enzimticas se tiene el valor de la absortividad del sustrato:

Se sabe que la ley de Beer relaciona la concentracin y la absorvancia de la

siguiente manera:

En este caso la longitud de la cubeta empleada para la lectura es de:

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LABORATORIO DE BIQUMICA I
Por lo tanto se tiene:

Adems la velocidad de reaccin se halla de la siguiente manera:

El tiempo es de 7.5 min, reemplazando valores y operando se tiene la

siguiente tabla:

Tubo

Velocidad de
reaccin

Absorvan
cia

(mg mL-1 min)

0.061

0.3701

0.0839

0.054

0.3276

0.0896

0.051

0.3094

0.092

0.247

1.4987

-0.0665

Tenemos la siguiente tabla resumen:

Tubo

Inhibidor

Velocidad
de
reaccin
(mg mL-1
min)

Polifenoles 1%

0.0839

Agua destilada

0.0896

NaCl 5%

0.092

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LABORATORIO DE BIQUMICA I
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Acido ctrico 1M

-0.0665

Resultados del grupo 1

Velocidad de reaccin

Tubo

Absorvan
cia

0.026

0.1577

0.1122

0.079

0.4793

0.0694

0.035

0.2123

0.105

0.13

0.7889

0.0281

(mg mL-1 min)

La grafica velocidad de reaccin versus inhibidor es el siguiente:

Resultados del grupo 2

Tubo

Inhibidor

Velocidad de
reaccin
(mg mL-1 min)

Polifenoles 1%

0.0839

Agua destilada

0.0896

NaCl 5%

0.092
13

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LABORATORIO DE BIQUMICA I
4

Acido ctrico 1M

-0.0665

La grafica velocidad de reaccin versus inhibidor es el siguiente:

DISCUSIN DE RESULTADOS

Las enzimas son inhibidas por ciertos agentes qumicos. La mayora de las
enzimas son inhibidas o aun destruidas por ciertos agentes qumicos. La
inhibicin de la enzima puede ser reversible o irreversible. La inhibicin
reversible ocurre cuando un inhibidor forma enlaces qumicos dbiles con la
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enzima. La inhibicin reversible puede ser competitiva o no competitiva. En

la inhibicin competitiva, el inhibidor compite con el sustrato normal por
unirse al sitio activo de la enzima .Un inhibidor competitivo es
estructuralmente similar al sustrato normal y se ajusta en el sitio activo y se
combina con la enzima. Sin embargo, no es lo suficientemente similar para
sustituir por completo al sustrato normal en la reaccin qumica, y entonces
la enzima no puede convertirlo a molculas del producto. En la inhibicin no
competitiva, el inhibidor se une a la enzima en un sitio distinto al sitio
activo. El inhibidor desactiva la enzima alterando su configuracin para que
el sitio activo no pueda unirse con el sustrato. Muchos importantes
inhibidores no competitivos son sustancias metablicas que regulan la
actividad enzimtica al combinarse reversiblemente con la enzima.

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LABORATORIO DE BIQUMICA I

En ambos grupos coinciden que el mejor inhibidor es el acido ctrico, pero

para el primer grupo, el que causa menos inhibicin son los polifenoles, para
el segundo grupo, el que causa menos inhibicin es el cloruro de sodio.

CONCLUSIONES

Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo

por

semejanza

estructural

con

el

sustrato

original

(inhibidor

competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima,

impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no competitivo).
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LABORATORIO DE BIQUMICA I
La interaccin de un inhibidor y una enzima vara dependiendo de la
naturaleza qumica del inhibidor y de la reaccin qumica que cataliza
la enzima.
Los inhibidores pueden encontrarse de manera natural en las clulas
para controlar la velocidad de una reaccin metablica, o bien
pueden ser compuestos sintticos que se utilizan como herramientas
experimentales para el estudio de las reacciones enzimticas.
La medicin del cambio de color normalizado nos permite seguir las
reacciones de pardeamiento en matrices alimentarias reales.

BIBLIOGRAFIA

lehninger.(2005).Enzimas.En principios de bioqumica(209211).editorial:omega.

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pea-arroyo-gomez-tapia. (2004). las enzimas: aceleradores de las

reacciones qumicas. En bioqumica (202-204). Mxico: limusa.

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