Validacion de tecnicas para deteccion de sangre, sangre humana y

grupo sanguineo ABO

INTRODUCCIN:El hallazgo de sangre en manchas obtenidas en las escenas

de las investigacionesforenses juega un papel fundamental en la resolucin
de los casos criminales. Adems de laidentificacin de sangre proveniente
de un ser humano se puede tipificar el grupo sanguneoal que pertenece y
posteriormente realizar anlisis de ADN [1].
Entre las tcnicas ms utiliza-das estn las de Luminol, Fenolftalena y
Piramidn, como indicadoras de la existencia de san-gre, Takayama para
confirmar su presencia, Inhibicin de la Aglutinacin para comprobar si
lasangre es humana y Absorcin-Elucin para determinar el grupo ABO de la
muestra [2].Aunque son ampliamente utilizadas es importante establecer su
sensibilidad y efectividadcuando las muestras han sido sometidas a
diferentes condiciones ambientales en diferentessoportes en vista que la
mayora de casos en criminalstica presentan evidencias biolgicas
dediversos orgenes [3].Con el fin de evaluar estas tcnicas y determinar la
capacidad de los procedimientos paraalcanzar un resultado confiable se
sometieron muestras conocidas a diferentes condiciones detemperatura,
clase de soporte, dilucin, ambiente y tiempo de exposicin.MATERIAL Y
MTODO:1.
Muestras, soportes y condiciones.
Se procedi a realizar manchas patrn con unamuestra conocida para
evaluar la efectividad de los procedimientos frente a diferentes
soportes,temperaturas, tiempo, contaminantes y diluciones para analizar la
sensibilidad de la tcnica. Se tom muestra de sangre por puncin venosa
en tubo con anticoagulante EDTA y posteriormente seprocedi a realizar
manchas sobre Algodn, Tela de Algodn, Seda, Lino, Satn, Jean delgado y
Jeangrueso. Se expuso a una temperatura de -20, 4, 37 y 60 C por
periodos de tiempo de 24 horas,una semana y un mes.2. Test de Piramidn,
Fenolftaleina, Luminol.Pretratamiento de las muestras. En tubos de ensayo
de 16 x 100 mm marcados con elnmero de radicacin del laboratorio y

nmero de muestra se coloc un fragmento de la manchade 0,5 x 0,5 cm y

se agreg 1 ml de solucin salina al 0.85%, dejando por el tiempo que
seanecesario para separar la mancha del soporte.Test de Piramidn. A 3
gotas de la muestra pretratada se le adicionaron 3 gotas de losreactivos de
Piramidn, cido actico y perhidrol evidenciando la reaccin por un cambio
decolor. (+) = coloracin violeta, (-) = sin cambio de color [2].Test de
Fenolftalena y Luminol. Estas tcnicas se realizaron con el mtodo descrito
porCox, M en 1991 [3] para Fenolftalena y Castello, A et al. en 2002 [4]
para Luminol.Interferencia de sustancias similares a la sangre. Con el fin de
evaluar la interferencia desustancias que puedan generar resultados falsos
positivos en la tcnica de Piramidn se hicieronmanchas sobre tela de
algodn de la siguientes Frutas: Banano, Cereza, Ciruela, Durazno,
Fresa,Limn, Mandarina, Manzana, Meln, Mora, Naranja, Pera, Pia y Uva
roja; Verduras: Cebolla,Rbano, Papa, Espinaca, Uva verde, Aguacate, Frjol
rojo, Repollo, Zanahoria, Coliflor, Maz, Apio,Pepino Cocohombro, Berenjena,
Ajo, Lechuga, Tomate, Remolacha y Pimentn; Otras sustancias:Vino tinto,
Salsa de tomate, Caf, Gelatina, Bebida carbonatada y xido; Fluidos
biolgicos comosaliva y orina.MR. Villegas et al.Cuad Med Forense, 11(42),
Octubre 2005268
Validacin de tcnicas para deteccin de sangre, sangre humana y grupo
sanguneo ABO en diferentes soportes y condiciones con fines
forenses.Manchas lavadas. Simultneamente se tom una muestra de
sangre por puncin venosaen tubo con anticoagulante de citrato de sodio y
se realizaron cuatro manchas sobre tela de algo-dn las cuales fueron
sometidas a un lavado con agua nicamente, con agua y jabn, agua y blanqueador y a la ltima se le adiciono aceite de cocina.Sensibilidad de las
pruebas. Se tomaron muestras de sangre por puncin venosa en tubocon
anticoagulante EDTA, a cuatro personas con hemoclasificacin A, B, AB y O,
a las que se leshizo diluciones seriadas base 10, a partir de una dilucin
1/10, as: 1/100, 1/500, 1/1.000, 1/ 5.000,1/10.000. De estas se hicieron
manchas sobre algodn para la prueba de Piramidn.
Ya obtenidaslas diluciones de cada grupo sanguneo se hicieron manchas
por triplicado sobre diferentes sopor-tes como: Algodn, Tela de algodn y
Papel Filtro. Para las pruebas de Piramidn, Fenolftaleina yLuminol. Para la
prueba de deteccin de sangre por quimioluminiscencia (Luminol) se
adicionaronotras diluciones adems de las ya mencionadas: 1/100.000,
1/500.000, 1/1.000.000.3. Test de Takayama.Muestras, soportes y
condiciones. Se tom muestra de sangre por puncin venosa entubo con
anticoagulante EDTA y posteriormente se procedi a realizar manchas sobre
Algodn, Telade Algodn, Seda, Lino, Satn, Jean delgado y Jean grueso. Se
expuso a una temperatura de -20,4, 37 y 60 C por periodos de tiempo
de 24 horas, una semana y un mes. A las manchas de 24horas se
sometieron a ambientes cerrados, abiertos y en un recipiente con tierra
negra.Sensibilidad de la prueba. Se tomaron muestras de sangre por
puncin venosa en tubocon anticoagulante EDTA, a personas con

hemoclasificacin de los cuatro grupos sanguneos del sis-tema ABO (A, B,

AB, O), a las que se les hizo diluciones seriadas a partir de 1/10, as: 1/100,
1/500,1/1.000, 1/ 5.000, 1/10.000.Test de Takayama. Con una hoja de bistur
se hizo un raspado de la mancha con el fin deobtener pequeas escamas,
las cuales se colocaron entre lmina y laminilla. Luego se agreg
porcapilaridad una gota del reactivo de Takayama dejando en reposo de 10
a 20 minutos. Se observal microscopio con objetivo de 10X y 40X
incluyendo controles positivos y negativos.4. Determinacin de sangre
humana en manchas. Inhibicin de la aglutinacin.Muestras, soportes y
condiciones. Las mismas del mtodo de Takayama.Sensibilidad de la
prueba. Igual que en el test de Piramidn.Prueba de Inhibicin de la
aglutinacin. Se titul el suero de Coombs y se seleccionaronlas 2 diluciones
que demostraron mejor lectura. La muestra pretratada (Ver test de
Piramidn) sepuso en contacto con las diluciones escogidas y glbulos rojos
sensibilizados al 2%. Se realizaroncontroles con sangre humana, sangre
animal y solucin salina al 0.85%.5. Absorcin - Elucin.Muestras, soportes y
condiciones. Igual al test de Piramidn.Mtodo de absorcin-elucin. Esta
prueba se llev acabo siguiendo el descrito por Nishi,K en 1985
[5].RESULTADOS:Los resultados se muestran en las tablas 1 a 9.Cuad Med
Forense, 11(42), Octubre 2005269
MR. Villegas et al.Cuad Med Forense, 11(42), Octubre 2005270Tabla 1.
Resultado de la prueba de Piramidn. + = Test positivo, la mancha puede
corresponder a sangre, - = Testnegativo, +* = El test fue positivo pero con
reaccin retardada, N.P.= No Procesado. rea cerrada, abierta o enterra-do
se refiere a que la muestra fue dejada en esa condicin durante 24 horas
antes de ser procesada.Tabla 2. Anlisis de muestras con los test de
Piramidn, Luminol y Fenolftaleina sometidas a diferentes procedimien-tos
de limpieza. N.P = No se proces.Tabla 3. Sensibilidad de los test de
Piramidn, Fenolftaleina y Luminol en diferentes soportes. + = Test positivo,= Test negativo y N.P. = No se proces.
Validacin de tcnicas para deteccin de sangre, sangre humana y grupo
sanguneo ABO en diferentes soportes y condiciones con fines
forenses.Cuad Med Forense, 11(42), Octubre 2005271Tabla 4. Resultado del
Test de Takayama. + = Test positivo, la mancha corresponde a sangre, - =
Test negativo,N.P.= No Procesado.Tabla 5. Tabla 5. Sensibilidad del test de
Takayama en diferentes soportes. + = Test positivo, - = Test negativo yN.P.
= No se proces.
MR. Villegas et al.Cuad Med Forense, 11(42), Octubre 2005272Tabla 6.
Resultado de la Inhibicin de la aglutinacin para determinar sangre
humana en manchas. -/-: Indica quecorresponde a sangre humana. +/+
Indica que no corresponde a sangre humana.Tabla 7. Sensibilidad de la
tcnica de Inhibicin de la aglutinacin. -/-: Indica sangre humana, +/-:
Dudoso, +/+: Nocorresponde a sangre humana.Tabla 8. Absorcin-elucin
para determinacindel grupo sanguneo ABO. La mancha utilizadaperteneca

en todos los casos al grupo O.O = Concuerda con el resultado esperado,INC

= Inconcluyente.
Validacin de tcnicas para deteccin de sangre, sangre humana y grupo
sanguneo ABO en diferentes soportes y condiciones con fines forenses.
DISCUSIN:El test de Piramidn demostr ser una excelente prueba
presuntiva en diferentes soportesy condiciones. Los resultados indican que
hay que ser cuidadoso en su interpretacin cuando lasmuestras han sido
enterradas. No se observaron resultados falsos positivos al analizar
sustancias conapariencia similar a la sangre. Para manchas que han sido
sometidas a lavado con agua o detergentesel Luminol se muestra superior
en su deteccin al Piramidn.Cuando se compara la sensibilidad de los 3
test presuntivos se observa que el ms sensi-ble es el Luminol (Hasta
1/500.000) seguido de Fenolftaleina (Hasta 1/5.000). Estos resultados
sonsimilares a los descritos por Cox, M. en 1991 para Fenolftalena.El test de
Takayama se ve afectado cuando la muestra ha sido expuesta a
temperaturas altassin importar el tiempo de exposicin.
La inhibicin de la aglutinacin se vio alterada cuando lasmuestras fueron
enterradas y su soporte era Seda o Satn. La sensibilidad de las dos pruebas
ante-riores es muy baja, detectando presencia de sangre y sangre humana
en muestras diluidas hasta1/100. Se confirma que se requiere abundante
cantidad de muestra para obtener un resultadoconfiable.La tcnica de
Absorcin-elucin para determinar el grupo sanguneo se vio afectada
princi-palmente por el soporte de tela Jean delgada o gruesa. La
temperatura de almacenamiento elevada(60C) solo alter el algodn luego
de un mes de recogida la muestra. Katsuji, N. et al. report quelos antgenos
son termoestables inclusive cuando han sido purificados. El tiempo de
almacenamientono afect los resultados confirmndose lo referido por el
mismo artculo. La sensibilidad de estaprueba se ve afectada cuando las
muestras son diluidas en concordancia con otros reportes dondese
encuentran resultados discrepantes cuando se trabaja con muestras
hmedas [12].CONCLUSIONES:Las pruebas presuntivas y confirmatorias son
una herramienta til en el estudio de manchasde sangre en casos de
investigacin judicial.El Luminol se constituye como la prueba ms
apropiada en el estudio de posibles manchasde sangre sobre los test de
Piramidn y Fenolftaleina.Las pruebas confirmatorias no se ven afectadas
por las condiciones de exposicin de lasmuestras o el soporte pero su
sensibilidad es baja.AGRADECIMIENTOS:A la empresa VERITAS Qumica
Forense por el suministro de los reactivos para los test deLuminol y
Fenolftaleina. Cuad Med Forense, 11(42), Octubre 2005273Tabla 9.
Sensibilidad de la tcnica de Absorcin-elucin para determinacin del
grupo sanguneo ABO.A, B, AB u O = Concordancia con el resultado
esperado segn cada grupo evaluado, INC = Inconcluyente.
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http://www.geradts.com/anil/ij/vol_006_no_002/papers/paper001.htmlMR.
Villegas et al.Cuad Med Forense, 11(42), Octubre 2005274
Por Mauricio
Fuente:
http://74.125.155.132/search?q=cache:8eJRGg2nk4J:scielo.isciii.es/pdf/cmf/n42/original1.pdf+Validacion+de+tecnica
s+para+deteccion+de+sangre,
+sangre+humana+y+grupo+sanguineo+ABO&cd=1&hl=es&ct=clnk&gl=m
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