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Aportes y discusiones a los seminarios:

Fundamentos de Cultivos Celulares


Medios Libres de Suero: Los medios de cultivo juegan un papel
importante en el estudio de clulas en condiciones in vitro, en la actualidad los
medios se han estudiado hasta el punto de conocer con
exactitud la
composicin, de esta manera evitando la necesidad de suplementarlo con
suero.
Estos medios son base para el estudio de clulas madre neuronales, dado que
en ausencia de este suplemento se facilita el desarrollo, la proliferacin y la
diferenciacin celular. La necesidad de conocer especficamente el desarrollo
de las clulas madres impulso el desarrollo de nuevos medios de cultivo con
una composicin nutricional ms definida.
El suero animal contiene hormonas, protenas, factores estimulantes e
inhibidores del crecimiento, los cuales pueden tener un efecto no deseado en
las clulas, adems la composicin del suero vara entre los lotes de donde se
obtiene lo que impide la estandarizacin de su uso en el laboratorio. Sin
embargo existen y se usan frecuentemente medios de cultivo como el medio
basal de Eagle suplementado con suero para favorecer la proliferacin y
supervivencia celular, usados con el objetivo de obtener un crecimiento rpido
de las clulas y no de evaluar otros aspectos biolgicos que podran estar
alterados.
Es otro problema de los medios con suero, el hecho de que los cultivos estn
propensos no solo al crecimiento de las clulas animales, sino tambin
favorece la proliferacin bacteriana, de hongos, parsitos incluso virus, por lo
que adems hace que estos medios sean un riesgo de transmisin de
enfermedades, por lo que est prohibido su uso para fines teraputicos en
humanos. Adems tiene implicaciones ticas, de su obtencin a partir del
sacrificio de animales.
Es ventajoso el uso de medios libre de suero en la medida que se conoce o est
completamente definida su composicin, de esta manera es eficaz analizar y
realizar estudios con clulas sin temor a llegar a obtener interferencias de
compuestos desconocidos, adems facilita enormemente la compresin de
muchas funciones biolgicas de las clulas de inters cultivadas, aunque las
clulas en estos medios crecen con menor velocidad y el establecimiento de
una lnea celular en estas condiciones es ms lento.
La preparacin de estos medios libre de suero para un tipo de clulas en
especial, requiere el uso de reactivos ultra puros y equipos especializados para
su preparacin lo que hace que sean ms costosos.

Para la realizacin de un medio libre se suero especifico a un tipo de clulas, se


debe conocer a fondo todas las propiedades y caractersticas de esta, para
lograr adecuar un medio libre de suero que satisfaga las necesidades bsicas
de la clula. Actualmente en vez de suero, se usan suplementos 100%
caracterizados como poli-L.-lisina (pll) y formulas la N2 compuesta por
transferina humana, insulina, progesterona, putrescina y selenito
y otras
como la G-5 Y LA B-27.
Se espera que en el futuro cada vez ms se avance en el desarrollo de medios
completamente caracterizados para poder obtener resultados confiables,
verdicos, que no estn vulnerables a interferencias que puedan ser causados
por la suplementacin con sueros.

Caracterizacin : Cualquier investigacin de la cual se obtengan resultados,


se debe realizar despus de previamente haber caracterizado muy bien la
lnea celular, conocer con certeza de quien se trata y tener esta informacin
respaldada por ensayos o pruebas reconocidas ya estandarizadas.
Las tcnicas moleculares
de secuenciacin masiva son la opcin ms
inmediata, proporcionan un efectivo y verdico resultado, que posteriormente
con un buen anlisis bioinformtico la caracterizacin de un tipo de clulas es
resuelta, sin tener que realizar aparatosas tcnicas que demandan de mayores
costos y tiempo. Sin embargo, no sobra realizar, previamente observaciones al
microscopio para evaluar morfologa y descartar falsos positivos a caracterizar.
Por otro lado, es necesaria la estandarizacin de tcnicas acopladas de
caracterizacin de lneas celulares, para as no tener discrepancias entre lneas
celulares que hayan requerido un protocolo ms o menos especifico que se vea
influenciado en el coste de la misma.
Se debe tratar que la caracterizacin de clulas no sea un limitante para la
publicacin de resultados obtenidos a partir de investigaciones desarrolladas
usando lneas celulares, es decir, se debe realizar la determinacin exhaustiva
del tipo de clula tratada no solo para cumplir con los requerimientos de
autenticidad si no tambin esto puede ayudar posteriormente al mejor
entendimiento y anlisis de los resultados obtenidos.
En el desarrollo de una investigacin con clulas, es clave caracterizarlas
inmediatamente cuando se detectan anomalas relacionadas a su crecimiento,
desarrollo, incluso morfologa y no se est seguro de lo que pueda tener, ya
que los resultados de la caracterizacin darn razn de lo ocurrido,
posiblemente tratndose de contaminacin cruzada difcil de ser detectada
visualmente, como lo es la infeccin por micrococos, micoplasma o incluso
virus.