Los mecanismos de la divisi6n celular En este capitulo veremos los mecanismos de los acontecimientos de la fase M (0 division celular) del cielo celular, Esta fase, que incluye los diferentes estadios de la division nuclear (mitosis) y de la divisién citoplasmatica (citocinesis), es la cul- minacién del ciclo celular, En un perfodo relativamente breve, los contenidos de la célula madre, que se han duplicado mediante las actividades biosintéticas de la Interfase precedente, se segregan en dos células hijas (Figura 18-1), Anivel molecular la fase M se inicia mediante una cascada de fosforilacio- nes de proteinas desencadenada por la activacién de la proteina quinasa MPF ue induce la mitosis, y se termina mediante las desfosforilaciones que siguen a la inactivacién de MPF a través de la proteolisis de sus subunidades de ciclina (tratadas en el Capitulo 17). Las desfosforilaciones de proteina que ocurren du- ante la fase M son las causantes de la mayorfa de cambios morfoldgicos que acompafian a la mitosis: ls cromosomas se condensan, la envoltura riiclear se rompe, el reticulo endoplasmatico y el complejo de Golgi se fragmentan, la célu- la afloja sus adhesiones a otras células y a la matriz extracelular, y el eitoesquele- {ose transforma facilitando la complicada organizacién de movimientos que se- ‘gregardn los cromosomas y la divisién celular, Debido a que la fase M conlleva ‘una reorganizacién completa del interior celular, se cree que el nimero de pro- teinas que se fosforilan es muy amplio, y que practicamente todas las zonas de la élula quedan afectadas de alguna manera, Visi6n de conjunto de la fase M' Salvo pequefias vatiaciones, los procesos que tienen lugar en la fase M para divi dir una célula en dos siguen la misma secuencia en todos los eucariotas, Ditigi- das por la reorganizacién del citoesqueleto, las eélulas acoplan, utilizan y des- Montan los mecanismos necesatios para separar las series de cromosomas duplicados y dividir el citoplasma en dos mitades. ‘Tres caracterfsticas son exclusivas de la fase M: la condensacién cromosémica, el huso mit6tico y el anillo contractil La primera manifestacién apreciable de la fase M es la progresiva compactacién de la dispersa cromatina interfésica, formando unos cromosomas en forma de hilo. Esta condensacién cromosémiea es necesaria para la segregacin organi- zada de cromosomas en dos células hijas que tendré lugar a continuacién, y se lla on itera iicleo ‘anos oe cuts on intortane Figura 18-1 La fase M del cielo ‘celular. La fase M empieza al final de la fase G, ynaliza al comenzat la préxima fase G.. Incluye los cinco cestadios de la divislén nuclear (mitosis), ya diviston eitoplasmatica {cttocinesis).PROGRESION ATRAVES OF UAFASE M rmirotubulos do Fruro mistico, ve acompanada por la extensa fosforilacion de moléculas de histona H1 (hasta seis fosfatos por molécula), Se cree que la fosforilacién de la histona Hi, en el comienzo de la fase M, contribuye a la condensacién cromosémica, ya que su concentracién es de aproximadamente una molécula por nucleosoma y se sabe ue participa en la condensacion de los cromosomas. La condensacién cromosémica es el preludio de dos procesos mecénica- mente distintos: (1) mitosis ~1a segregacién de cromosomas y la formacién de dos nticleos en lugar de uno- y (2) citocinesis-ta divisién de la totalidad de la cé- lula en dos. Estos procesos se electtian por dos estructuras citoesqueléticas dife- rentes que aparecen fugazmente durante la fase M. La primera en formarse es tun huso mitético bipolar, compuesto por microtibulos y por sus proteina aso- ciadas. El huso mitdtico alinea los eromosomas replicados en un plano que sec- Ciona la célula en dos; entonces cada cromosoma se separa en dos cromosomas hijos, que son desplazados hacia los polos opuestos del mismo huso. La segunda estructura citoesquelética necesaria en la fase M de las céiulas animales es el anillo contréctil de fllamentos de actina y de miosina Il, que se forma ligera- ‘mente mas tarde justo debajo de la membrana plasmética, en un plano perpen: dicular al eje del huso (Figura 18-2); al mismo tiempo que se contrae el anillo se contrae Ja membrana hacia dentro dividiendo la célula en dos, asegurando asf que cada célula hija reciba no tan sélo un serie completa de cromosomas sino también la mitad de los constituyentes citoplasmaticos de la e¢tula madre. Las dos estructuras citoesqueléticas contienen diferentes series de proteinas y, en algunas células especializadas, se pueden formar de manera independiente. No obstante, su formacién normalmente esta estrechamente coordinada de forma que la divisién citoplasmética (citocinesis) tiene lugar justo después del final de la divisi6n nuclear (mitosis). En la cétulas vegetales ocurre la misma secuencia, ‘aunque sus paredes rigidas requieren un mecanismo diferente para la citocine- sis, tal como veremos mas adelante. La descripcidn de la fase M que acabamos de hacer s6lo es aplicable a las ccélulas eucariotas. Las células bacterianas no contienen filamentos de actina ni microtibulos, Normalmente poseen un solo cromosoma, cuyas copias replica das se segregan en las células hijas, sin ninguna condensaciGn especial, median- fe un mecanismo que implica la adherencia del cromosoma a Ja membrana plasmatica de la bacteria. Probablemente la necesidad de unos mecanismos mi: t6ticos complejos surge solamente con la evolucién de células que contienen ‘grandes cantidades de DNA empaquetado en un ntimero de cromosomas varia~ ble. La funcisn primordial de tales mecanismos es repartir los cromosomas re plicadas de forma precisa entre las dos células hijas: en las células de levadura, ‘en las que se ha determinado eon exactitud, se produce un error en la segrega- ign cromosémica tan sélo cada 10° divisiones celulares. Ladi Como se vio en el Capitulo 16 en la mayoria de células animales el centrosoma es el principal centro organizador de microuibulos (MTOC, de Microtubule Or- ganizing Center), una nube de material pericentriolar poco definido (la masriz del centrosoma) asociado con un par de centriolos (Figura 18-3). Durante la in- terfase la matriz del centrosoma nuclea una serie de microtiibulos citoplasma- ticos, que se proyectan hacia el exterior en direcci6n al perimetro celular con mn celular depende de la duplicacién del centrosoma” 978 Capitulo 18: Los mecanismos de la divisién celular Figura 18-2 Eleitoesqueleto en fase ‘M. El huso mitotico se ensambla y segrega los cromosomas. Flanillo. contractil se ensambla mds tarde y divide la célula en dos. 3 Un centrosoma. lectronmicrograffa de una seccién. sgruesa de centrosoma de una célula de ‘mamafero en cultivo. (Cortesfa de P. Witty G. Borisy.)t r a sus extremos “menos” adheridos al centrosoma. Antes de que la célula eucario- ta se divida, su centrosoma ha de duplicarse para que cada una de sus dos célu- las hijas tenga uno. De hecho, los centrosomas duplicados son necesarios para crear las dos células hijas, ya que los centrosomas forman los dos extremos del hhuso mitético, Los centrosomas de la mayorfa de las especies animales comparten una ca- racter(stica estructural notoria y distintiva: un par de centrfolos (tratados en el Capitulo 16), Los centriolos, sin embargo, que se asocian con la mattiz del cen- trosoma, no son necesarios para la nucleacién de los microttibulos: los centro- somas vegetales no tienen centriolos; los centriolos también faltan durante las primeras divisiones del huevo de ratén; ademas, células de mamifero en cultivo tratadas con drogas pueden crear husos mitoticos tripolares, en los que un polo del huso carece de centrfolos, y sin embargo parece funcionar con normalidad Por lo tanto, se cree que la matriz del centrosoma, que contiene una serie de protefnas espectficas del centrosoma, es la parte fundamental del centrosoma, Si estin presentes, los centrfolos asociados con la matriz se duplican segiin un or- den estricto, y su comportamiento puede ayudar a la creacién de los dos centro- somas mientras la célula entra en la fase M (Figura 18-4). Los procesos de la duplicacidn y separacién del centrosoma se conocen como ciclo del centrosoma. Durante la interfase de cada ciclo celular, los centrio- ies as wei Visidn de conjunto deta fase M Figura 18-4 Lareplicacién de los centrfolos. La pareja de centriolos se asocia ala matriz del centrosoma (en verde). En un cierto punto de la fase G, Jos dos centrfolos se separan tnos ccuantos micrémetras. Durante la fase S,cerca dela hase de cada centriolo empieza a crecer un centriolo hijo, en Angulo recto respecto-a él EL estiramiento del centrfolo hijo ‘acostumbra a completarse a lo largo de la fase Gy. Los dos pares de centriolos permanecen juntos, en un complejo centrosomico tinico, hasta el ccomienzo de la fase M, cuando el ceentrosoma se parte en dos y las dos imitades empiezan a separarse. La estructura del centriolo es ilustrada en la Figuras 16-45 y 16-47. Figura 18-5. El ciclo del centrosoma de una eélula animal. El centrosoma, dle una eélula en interfase se duplica formando los dos polos del huso mit6tico, En la mayorfa de las células animales el par de eentrosomas {ilustrado auf como un par de barras verde oscuro) se asocia con la matriz dl centrosoma (verde claro) que nnuclea los microtibulos. (En este diagrama el volumen de la matriz del. ‘centrosoma esté exagerado para facilitar su identficacién; en la Figura 18-4 se ilustra una representacién més ‘exacta ) La duplicacion del centriolo ‘empieza en G, y se completa en G, (véase Figura 18-4), Inicialmente, los dos pares de centrfolos yla matriz de ccentrosoma asociada permanecen juntos como un complejo tinico. En los Inicios de la fase M este complejo se separa en dos y cada centrosoma ‘nuclea una formacién de microtubulos radiales,Iamada aster. Los dos teres, {que inicialmente permanecen uno al lado del otro cerca de a envoltura ‘nuclear, se separan. Al final de la profase el haz de microtibulos polares {que interactian preferentemente entre Jos dos dsteres, se alarga mientras los ddos centros se separan siguiendo ‘caminos opuestos lo largo della parte exterior del nticleo, De esta forma se {forma répidamente el huso mitotico. En a metafase la envoltura nuclear se rompe, permitiendo que los micronibulos del huso interactien con Jos cromosomas; en la citocinesis la fenvoltura nuclear se forma de nuevo alrededor de los dos conjuntos de ‘cromosomas segregados, excluyendo los centrosomas. 979© 0) los y otros componentes del centrosoma se duplican pero permanecen juntos como un tinico complejo en una cara del muicleo. Al iniciarse la mitosis, este complejo se divide en dos y cada pareja de centriolos forma parte de un centro organizador de microtdbulos distinto que nuclea una formacién de microtiibu- Jos radiales llamada aster. Los dos dsteres se desplazan a caras opuestas del nti- leo formando los dos extremos de huso mitético. Mientras finaliza la mitosis y la envoltura muctear se reconstituye alrededor de los cromosomas separados, cada célula hija recibe un centrosoma (el antiguo polo del huso) con sus eromo- somas asociados (Figura 18-5). HI ciclo del centrosoma puede actuar con un grado de independencia sor- prendente de los otros procesos del ciclo celular. Asi pues, si se extrae fisicamen te el niicleo de un huevo de erizo de mar, o si se bloquea la sintesis de DNA me: diante afidicolina, que inhibe la sintesis de DNA, los ciclos de duplicacién y divisién del centrosoma proceden casi con normalidad, primero produciendo dos centrosomas, Inego cuatro, después ocho, etc. En embriones tempranos de Drosophila tratados de forma parecida con afidicolina, los centrosomas prolife rantes del interior del embridn se disocian de su nucleo bloqueado y se despla zan a través del citoplasma hacia la membrana plasmética; cuando aleanzan esta membrana, mediante sus dsteres, pueden modificar la forma dle la membra: nay de su corteza subyacente, generando células que contienen centrosomas pero sin nicleo (Figura 18-6). Los huevos en divisién, con sus reservas de com: ponentes celulares que los liberan de la dependencia de la transcripeion génica, tienen un comportamiento marcadamente excepcional; en atras eélulas el ciclo del centrosoma depende de la presencia de un niicleo celular funcional, Bsté claro, sin embargo, que el ciclo de divisin de la célula en su globalidad depende de -0 al menos esté organizado en parte por- el dster microtubular, el cual a su: ver esté organizado por el centrosoma. Los centrosomas, y los centriolos que normalmente se hallan asociados a ellos han dejado perplejos y han obsesionado a los bidlogos celulares durante mas de cien afios. De qué estin hechos, cmo se replican, y cémo se origina- ron durante el curso de la evolucién? Estas cuestiones basicas contintian sin respuesta. ‘Tradicionalmente la fase M se divide en seis estadios Laestrategia de la divisién celular es extraordinariamente constante entre los or- ganismos eucariotas. Los cinco primeros estadios de la fase M constituyen la mi- tosis (definida inicialmente como el perfodo durante el cual los cromosomas se hallan condensados de manera visible); el sexto estadio, que se solapa con el fi- 980 Capitulo 18: Los mecanismos de la divi n celular Figura 18-6 Organlzaclén, itoplasmatica mediante los centrosomas y sus dsteres, Sise nyecta afidicolina en un embrién temprano de Drosophila para bloquear Ja divisidn nuclear, os centrosomas y Tos ésteres que nuclean se separan del nuicleo en esta célulasincitial y migran hacia la superficie celular. En el polo posterior, donde normalmente se forman las *células" germinales, los bbrotes de la membrana se organizan fgracias alos centrosomas desplazados, ‘obteniendo como resultado la formacidn de las “células” germinales sin nticleo. (A) Bsquema ilustrativo del proceso de yemas que provoca el aster. (B-D) Micrograffas luorescentes de “edlulas” getminales sin nicleo: (8) tineién para ver el DNA, mostrando {que no hay nucleo; (C) tincién con un anticuerpo para los centrosomas; (D) tincion para mostrar los ‘icrorubulos asociados eon los entrosomas. (B-D, cortesia de Jordan Ralf.)Figura 18-7 Cronologga normal de la mitosis y la eitocinesis de una célula de mamifero. Los pertodos varfan de unas clases de células a otras, son mucho mds cortos en los ciclos celulares embrionatios, Notese que la citocinesis empieza antes de la finalizactén de la mitosis. El comienzo de la profase oel Punto del ciclo celular en que los cromosomas condensados son visibles por primera vez -segtin un a condensacin de rtarse continuamente (por tanto de toda la fase M) se define con durante el final de G,. El comienzo de la prometafase sedefine como el momento en que la envoltura Sea) Ce Figura 16-8 El curso de la mitosis en una eélula de mamifero tipica, En estas mierografias de células en cultivo de pulmén de tritdn, se han visualizado los mierotibuilos me colorante azul fuorescente. Durante la interfa forma el foco necesario para las series de microwibulos de la interfase. En la profase temprana el in iante inmunofluorescencia indirecta, mientras que la eromatina se tie con un ‘.centrosoma, compuiesto por una matriz asociada con un par de centriolos, ico centrosoma contiene dos pares de centrfolos (no visibles); en la profase tardia el centrosoma se divide y los dos dsteres resultantes se separan. La envoltura nuclear se rompe en la prometafuse, permitiendo que los microtibulos del huso interacttien con los cromosomas. En la metafase Ja estructura bipolar del huso se cari ay todos los eromosomas se alinean en la mitad del huso, Ls parejas de cromosomas hijos, amados cromdtidas, se ran sincrSnicamente en la anafase temprana y, bajo la influencia de los microtsbulos, van desplazdndose hacia los polos. En ka anafase tardia los polos del huso se han desplazado atin mAs lejos, aumentando la separacion de Jos dos grupos de crome somas, En la felofase el nticleo hijo se recompone, y en la telofasetardia, la citocinesis es casi completa, con el cuerpo medio persistiendo entre las dos céulas hijas. (Fotografias cortesia de CL. Rieder, JC. Waters y R.W. Cole.) Vision de conjunto de la fase M 981toplasma senaraon ave smambranaplasmatca — polos dol huso rusia on aisprsion tinlaos ‘envokura nuclear Frat cromosome en condensaclén on dos eromaidas Unidas 1 centrémero ‘membrane plasmitica polos det nus ‘mirotibulo polar —_ ee foloeado al aza¢ fn movimento ricrotabulos sev etocorieos oviculsa dels ‘votre nucle polos dt huso ‘romosomas aineados Sietocsnce ~ misrotbuto pelos dol uso Tal como se ve al microscopio, la transicién do la fase Ga la fase M dol ciclo celular no es un proceso estrictamente definido. La cromatina, {que en fa interfaso so halla difusa, se condensa Jontamente formando cromesomas bien definidos, cuyo nimero exacto es earacteristico de Ia especie en cuestién. Cada cromosoma se ha duplicado durante la fase S precedente y ‘ahora consta de dos eromatidas hermanas, ‘cuales contiene una secuencia ‘conacida como un ‘entrémero, necesaria para la correcta ‘segregacién del cromosoma. Hacia el final dela profase los microtabulos citoplasméticos que ‘orman parte del citoesqueleto interfésico s= ddespolimerizan y emp principal componente del a hhuso mitética. Se tata de una estructura bipolar compuesta de microtibulos y proteins ‘asociadas. Inicialments, ol huso se ensambla fuera del nicieo entre los centrosomas en separacion. La prometafaso se inicia bruscamente con la desintegracién de le envolture nuclear, que se rompe originando vesicules de membrane indiferenciables de las vesiculas del reticulo vesiculas permanecaran ‘momento 8 hallaban fuera del nucleo, pueden ‘entrar en fa region nuclear. En cada contrémero llamados cinetocoros, y se unen a algunos de fos microtubuios del huso, que entoness tecibiran el nombre de miorotibulos cinetocdricos. Los microtibulos remanentes del huso se llaman mierotibulos poleres, miantcas son exteriores al huso ge liaman Los microtdbulos cinetacéricos ejereen tensién sobri ‘cromosomas, los cu! Finalmente los microtubulos cinetocéricos alinean los cromosomas en un plane situado ‘medio camino de los polos del huso. Cada ‘cromosoma ¢e mantiene en tension en esta placa motafésica por los cinetocoros apareados ‘y por sus mierotubulos asociados, los cuales ‘etn unidos a los polos opuestos del huso.reaparicién do meléoio anil contrécti que ‘onerael surco de ogmentaeion verpo madio: glen ‘de solapamiento de par de contiotos fe dente ta Fealecion do Imputsada por una sehal especitic, la ‘anatase ompioza bruscamente cuando los cinetocoros apareados de cada cromosoma, se separan, permitiendo que cada crométida (ahora denominada eromosoma) sea artastrada lentamente hacia un polo del huso, ‘Todos los cromosomas que se acaban de separar se desplazan ala misma volocidad, ‘que es de aproximadamente 1 ym por minuto. Se pueden distinguir dos categorias {de movimiento, Durante la anafase A, los ‘microtubulos cinetocdricos se acortan a ‘medida que los cromosomas se aproximan a 4os polos. Durante la anata ‘microtabulos polares 60 alargan y los dos polos del huso se soparan. Normaimente la ‘anafose s6lo dura unos minutos. fin) los eromosomas. 1 alos polos y los ‘microtubulos cinetocoricos desaparecen, Los microtibulos polares se alargan atin més Yy se vuelve a formar una, romatina condensada {os nucléolos —que la profase— empie hha llegado a sufi El citoplasma se divide mediante un proceso conocido como segmentacian, que por lo ‘membrane dela zona central de la célula, perpendicular al eje del huso y situada on medio de los dos niicleos hijos, se desplaza hhacia dentro originando el surco de ‘segmentacion que gradualmente se vuelve ‘més profundo, hasta que entra en contacto con los estrechos restos del huso mitético ‘que quodan entre los dos nicleos. Este estrecho puente, 0 cuerpo medio, puede persistir durante un cierto tiempo antes de ‘@strecharse atin més y llegar @ romperse por ‘cada extremo, produciondo asi dos células hijas completas y separadas.1) Ominutos Figura 18-9 Elproceso deta mitosis en una eélula vegetal tiplea. Estas mierograffas de una ‘célula viva de Haemanzhus (tio) fueron tomadas alos tiempos indicados, utilizando microscopia de contraste de fases interdiferencial, Habitualmente estas c¢lula presentan ‘cromosomas grandes, de manera que son féciles de ver. Al nivel ‘icrosc6pico mostrado aqui, las. principales fases de la divisién celular hace mas de 100 afios que se ccanocen. (A) Profase: 10s cromosomas estin condensados y son claramente visibles en el micleo ‘celular. (B) y (©) Prometafase la ‘envoltura nuclear se ha roto yos ‘cromosomas estén interactuando ‘con microtibulos que emergen de Jos dos polos del huso, Las plantas no tienen centefalos, pero los polos de sus husos contienen proteinas relacionadas con las que se fencuentran en la matriz centrosémica de as células, animales. Notese que entre los estadis ilustrados por (B) y (C) solo hhan transeurrido 2 minutos. (D) Metafase: los cromosomas se than alineado en la placa metafésiea ‘con sus cinetocores situados a medio camino entre los dos polos del huso. (F) Anafase: los eromosomas se han separado en. 18) 89 minutos (F124 minutos (G) 169 minutos (9199 minutos nal de la mitosis, es la citocinesis. Estos seis estadios forman una secuencia di- namica cuya complejidad y belleza son dificiles de apreciar en descripciones es- critas 0 a partirde un conjunto de fotografias estaticas. La descripcidn de la divisidn celular se basa en observaciones de dos fuen- tes: el estudio de animales vivos mediante el uso del microscopio éptico (a me- nudo combinado con la microcinematografia) y el estudio de células fijadas y te- ffidas tanto con el microscopio éptico como con el electr6nico. En el Panel 18-1 se resumen brevemente los diferentes estadios de la divisidn celular. Los cinco estadios de la mitosis -profase, prometafase, metafase, anafase y telofase- tienen Jugar en un orden secuencial estricto, mientras que la citocinesis empieza du- rante la anafase y continua hasta el fin de la fase M (Figura 18-7). En las Figuras 18-8 y 18-9 se muestran micrografias Spticas de divisiones celulares de una célula animal tipica y de una eélula vegetal tipica, respectivamente. Existen incontables sus cromatidas hermanas, las ‘cuales se desplazan hacia polos opuestos. () Telofase: tos cromosomas se descondensan formando los das miicleos que mas tarde sera visbles indicados con Nen (G)).(G)y (H) Citocinesis:se ‘muestran dos estadios sucesivos en la formacién del plano celular, e1 cual aparece como una linea cuya dlireccion de crecimiento se indica ‘con flechas en (FH). (Cortesia de Andrew Bajer) variantes de todos los estadios de la divisién celular, mostrados esquematica- ‘mente en el Panel 18-1, tanto en el reino animal como en el vegetal. Mencionare- ‘mos algunas de ellas después de que hayamos visto més de cerca los mecanismos generales de la divisi6n celular. Los orgénulos citoplasmaticos grandes se fragmentan durante la fase M asegurando que se heredan correctamente? os procesos de la divisi6n celular tienen que asegurar que cada célula hija hereda todos los componentes celulares fundamentales. Como vimos en el Capitulo 12, Jos orgénulos como las mitocondrias y los cloroplastos, por ejemplo, no pueden ‘ensamblarse espontineamente a partir de sus componentes individuales; sélo ‘pueden formarse mediante el crecimiento y la iston del orgnulo correspondiente preexistente, de forma que la célula hija no podré contener ninguno @ menos que haya heredado uno o mas de ellos. De la misma forma, no es posible hacer nuevas, ccopias del complejo de Golgi y del reticulo endoplasmitico sin la presencia previa de al menos parte de la estructura correspondiente. Como se segregan los dife- rentes orgainulos adheridos a la membrana cuando una célula eucariota superior 984 Capitulo 18: Los mecanismos de la divisién celularse divide? Los organulos que se presenten en grandes cantidades se hered: con seguridad si, como media, sti mimero se duplica en cada generacidn celular Otros orginulos, tales como el complejo de Golgi y el reticulo endoplasmatico (ER), se fraccionan durante la mitosis en un conjunto de fragmentos y de vesicu las mas pequeitos, probablemente porque en esta forma altamente vesiculada se pueden distribuir de manera més equitativa cuando la célula se divida. Parece que las vesiculas del ER se asocian con los microttibulos del huso mitético, lo que puede ayudar a distribuirlos equitativamente entre las dos c¢tulas hijas. Resumen Los procesos de ta division celular (la fase M del ciclo celular) consisten en divisio- nes nucleares (mitosis) seguidas de divisiones citoplasmaticas (citocinesis). La divi sién nuclear se efechia mediante un huso mitético compuesto por microuibulos, ‘que separan (0s cromosomas, mientras que la division citoplasmdtica se efectiia ‘mediante un anilto contréctil compuesto por fllamentos de actina. La mitosis se or- ganiza fundamentalmente mediante el dster microtubular que se forma alrededor de cada uno de los dos centrosomas producidos por duplicacién de centrosoma. La duplicactén det centrosoma comlenza durante las fases § y G, del ciclo celular, yen el inicio de ta fase M tos centrosomas duplicadas se separan y se desplazan hacia caras opuestas del miicleo, formando los dos polos del huso mitotico. Los grandes orgdnulos membranosos, tales como et complejo de Golgi y el reticulo endoplasma- tico, se rompen en muchos fragmentos mds pequefios durante la fase M, lo que ase- ‘gura su distribucton equitativa entre las células hijas durante la citocinesis. La segregacién del eromosoma se lleva a cabo mediante una maquinaria com- Pej a Esta maquina, el huso mitético, esté ‘compuesta principalmente por microttibulos, que se utilizan tanto para empu- jar como para arrastrar: separa los polos del huso tirando de ellos, y empujando alos cromosomas los conduce hacia los polos. ‘Como hemos visto, el huso empieza a formarse fuera del nticleo mientras Jos cromosomas se condensan durante la profase. Cuando se rompe a envoltura nuclear, en Ia profase, los microtiibulos det huso son capaces de capturar los cromosomas, que finalmente se alinean en este punto medio, formando la lla ‘mada placa metafasica (véase Panel 18-1). En la anafase las crométidas herma. ras se separan bruscamente y son conducidas a Jos polos opuestos del huso, mientras que el alargamiento del huso aumenta la separacidn entre los polos. El huso continua alargandose durante la telofase mientras los cromosomas van lle- {pote dat uso) Mitosis Figura 18-10 Lastres clases de microtubulos de un huso mitético completamente formado. (A) Imagen confocal del huso mitstico en la ‘metafase de un embeién de Drosophila, con sus microttbulos marcados con fluorescencia (B) Diagrama esquemtico que identifica las tes clases de microtubulos del huso, En realidad, los ‘cromosomas son mucho mas grandes elo que aqui se muestra, ya cada cinetocoro se unen muchos ‘microttbulos. (A, cortesfa de William ‘Theurkaut) 985gando a los polos y se liberan de los microtabulos del huso; finalmente, en tomo acellos se reconstruye la envoltura nuclear. Elensamblaje del huso, la captura de cromosomas y su alineacién en la pla- a metaféisica, y el posterior alargamiento det huso con el desplazamiento de los cromosomas a los polos, dependen criticamente de una serie de procesos que curren en o cerca de los extremos de los microttibulos: los microttibulos no son tan solo el lugar donde se localiza el ensamblaje y cesensamblaje de los microti- bulos sino también donde se produce la fuerza, Veremos que se pueden distin- ‘guir tres tipos de microtibulos del huso: los microttibulos polares, que se sola- pan en la linea media del uso y son los responsables de empujar a los polos del hhuso causando su separacién; los microtabulos cinetocdricos, que se adhieren al cinetocoro especializado que forma el centromero de cada cromosoma dupli- cado y conduce los cromosomas en el huso; y los microtuibulos astrales, que parten en todas direcciones desde los centrosomas y se cree que contribuyen a generar las fuerzas que separan los polos y los sitvian en relacién al resto de la célula (Figura 18-10). El comportamiento de cada una de estas clases de micro- tribulos es distinto debido a las diferentes estructuras con las que entran en con- tacto sus extremos y, por tanto, a los diferentes procesos que alli tienen lugar. La formacién del huso mitético en una célula en fase M se acompaiia de cambios sorprendentes en las propiedades dindmicas de los microtibulos* El conjunto de micronibuos interfésicos que parten del centrosoma en todas i recciones se halla en un estado de inestabilidad dindmica, en la que los microti bbulos se polimerizan y despolimerizan sin cesar y continuamente se nuclean ‘nuevos microtibulos para equilibrar las pérdidas de los que desaparecen por completo mediante la despolimerizaci6n (se trata en el Capitulo 16). Durante la profase tardia el ritmo de estos procesos cambia draméticamente, La vida media de un microtibulo corriente decrece aproximadamente veinte veces (de 5 minu- {os a tan s6lo 15 segundos) (Figura 18-11), y se cree que esto refleja un aumento brusco de la probabilidad de que un microtibulo tipico en crecimiento se con- vierta en un micronibulo que se encoge, debido a alguna variacidn en su extremo “mas” (véase pg. 868). Al mismo tiempo se produce un gran aumento del niime- ro de microtiibulos que parten del centrosoma, aparentemente debido a una alteracién del propio centrosoma, acelerando el ritmo al que se nuclean microrti- bulos muevos: se puede demostrar mediante un cultivo in vitro que los centroso- ‘mas profisicos presentan un ineremento notable en su capacidad para nuclear el crecimiento de mictotuibulos. Estos dos cambios son suficientes para explicar por ‘qué el inicio de la fase M se caracteriza por una répida transicién desde unos ‘cuantos microtibulos largos que se extienden desde el centrosoma a la periferia celular (la formacién de microtibulos interfésicos) hasta una gran cantidad de pequenos microtibulos que rodean cada centrosoma (los microttbulos astrales). En algunas células también puede actuar un tercer mecanismo: la descomposi- cidn de los microtubulos interfésicos puede ser acelerada por unas proteinas que los dividen. La base molecular de estos cambios en la dinamica de los microtibu- los es incierta, pero parece probable que implique la fosforilacién por MPF de luna o mas proteinas que interacttian con los microtiibulos. Los microtibulos que crecen y se encogen rapidamente emanan en todas direcciones a partir los centrosomas profisicos. Subformaciones de estos micro- tuibulos astrales se estabilizan selectivamente de diferentes modos, formando ast ‘un huso mit6tico organizado. Las interacciones entre microtubulos orientados en direcciones opuestas conducen el ensamblaje del huso® Durante la profase, mientras la envoltura nuclear esté todavia intacta, parece que algunos de los microtibulos que se salen de cada centrosoma entran en 986 Capftulo 18: Los mecanismos de la divisién celular PO METARASE fis +18 seaundos yg 3 minutos 6 10 erp minstos) Figura 18-11. Ena fase M los micronuibulos son mucho més dindmicos, por término medio, que ‘en a interfase. Se inyecta tubulin, lunida de forma covalente aun colorante fluorescente, acélulns de ‘mamifero mantenidas en cultivo, Después de que la tubulina uorescente se incozpore a los microuubulos celulares, se blanquea toda la fluorescencia de una pequena region mediante un rayo laser intenso. Se estudia la recuperacion dela fluorescencia en la regién blanqueada dde microtubulos en funcion det tiempo, la cual se produce por recambio por microtibulos formados por tubulina fluorescente no 6 blanqueada procedente de la solucién. Secree que el tiempo necesatio para {que se produzca el 50% de la recuperacién de la fluorescencia (.,) es igual al tiempo necesario para que la mitad de los microtibulos dela regién se despolimericen y se vuelvan a formar. (Resultados de W.M. Saxton etal, J Cell Biol 9:2175-2187,1984, permiso de copyright de The Rockefeller University Press.)Figura 19-12 Modelo de cémo se podrfa formar un huso mitético bipolar ‘mediante la estabilizacién selectiva de microtubulos que interactiian entre ‘(Los nuevos microtubulos erecen hacia afuera, en direcciones aleatorias, partir de dos centrosomas cercanos. Se hallan anclados a los centrosomas por sus extremos "menos", Sus extremos “mas” son “dindmicamente inestables” y pueden pasar de repente de un crecimiento uniforme (flechas ‘jas orientadas al exterior) a un acortamiento répido (flechas rojas orientadas hacia et interior) durante el cual, a menudo, se despolimeriza todo el mierotibulo. i dos microtibulos de centrosomas opuestos interactian en luna zona de solapamiento, las proteinas asociadas alos microusbulos centrecruzan los microttibulos (puntos negros), cubriendo sus extremos “mas” yestabllizindolos, con lo que disminuye la probabilidad de que despolimeticen. Existen pruebas de que las proteinas entrecruzadoras son mokéculas motoras de microtibulos orientadas hacia el extremo “més”, que tienden a conducir los micronibulos en direccién de separar los ppolos det huso. contacto con micronibulos de polaridad opuesta que erecen desde el otro cen- trosoma (Figura 18-12). Se cree que en la regién en que estos microttibulos se solapan, a medio camino entre los dos centrosomas, se forman enlaces cruzados que estabilizardn los extremos de estos micronébulos polares tmpidiendo ast su. | desensamblaje, uniendo entre si los das conjuntos de orientacién opuesta y micrtibules misrotibulos ettrosoma constituyendo el armazén basico del huso bipolar caracteristico. Se cree que las 791% Belts (Pola del huso) protefnas que establecen enlaces cruzados con los microtubulos polares son moléculas motoras de microttibulos orientadas hacia el polo positivo, que no s6lo estabilizan el uso bipolar sino que también actiian empujando los micro- ttibulos antiparalelos en una direccién que tiende a separar entre sf los dos po- los. Asf pues, aunque los microtibulos polares estén estabilizados frente a un. desensamblaje catastrofico, no son estaticos; veremos mas tarde que, incluso en el huso metafésico (Figura 18-13), que da la apariencia de estabilidad, los micro- {uibulos polares experimentan continuamente la adicién neta de monémeros en. sus extremos “més” y la pérdida neta en sus extremos “menos” en los polos. Probablemente los microttibulos polares separan los centrosomas mientras se forma el huso durante la profase. Mas tarde dirigirdn el alargamiento del huso en la anafase, No obstante, durante los estadios intermedios del alargamiento mit6tico del huso, éste se mantiene controlado; mientras que los microtabulos polates empujan, manteniendo los polos del huso separados, los microttibu- Jos cinetocéricos que unen los polos del huso a los cromosomas, estiran contra- rrestando la fuerza de los microtabulos polares, tal como veremos ahora. Figura 18-13 Huso mitético. Huso metafasico aislado, visualizado con tres técnicas de microscopia éptica (A) microscopia de contraste de fases interferencial,(B) microscopia de ‘contrast de fases, y (C) microscopia de luz polarizada. (Comtesfa de ED. Salmon y RR. Segall, Cell Biol {86:355-365, 1980, con permiso de ‘copyright de The Rockefeller University Press) 987Electronmicrografia de barrido ‘de un cromosoma mitotico humano, constituido por dos ‘cromiitidas hermanas unidas por su plano horizontal. La regién constrenida es el ‘centromero. (Cortesfa de Terry D. Allen.) Los cromosomas replicados se unen alos microttibulos por sus cinetocoros” Alinicio de la fase M cada cromosoma esté replicado y se compone de dos cromd- tidas hermanas a todo to largo, con una constriccion en una unica regién llamada el centrémero, donde la cromatina parece estar especialmente condensada (Figu ra 16-14). Durante la profase tardia en cada centrémero se ensamblan complejos de proteinas especializados conocidos como einetocoros, dle forma que los dos ci- netocoros de cada cromosoma (uno en cada crométida hermana), se hallan dis Puestos en direcciones opuestas. A través de sus cinetocoros los eromosomas re- plicados se unirdn a un subgrupo distinto de microtsbulos del huso mit6tico ura 18-15), Estos microtubulos cinetocéricos se utilizardn finalmente, en la anafase, para arrastrar las dos eromitidas hermanas hacia los polos opuestos del hhuso, Pero antes de este estadio, mientras las eromitidas hermanas todavia estén Unidas, ya existe una tensién generada en los microttibulos cinetocéricos, sepa- rando los cromosomas y acereando los polos del huso. En la mayoria de organismos el cinetocoro es un gran complejo multiproteico que se puede observar al microscopio electrénico como una estructura multilami- har en forma de placa (Figura 18-16). Veremos que no se trata simplemente de una localizacién pasiva de anclaje para los microtabulos, sino que juega tn papel central ‘en el control del ensamblaje y desensamblaje de los microtibulos cinetocéricos, ge- nerando tensidn en ellos inalmente, drigiendo el movimiento cromosémico. cas a ee, @ : Los mecanismos de la divisi6n celular reaién dol contromer| ‘al oromozoma crombida Figura 18-15 Mierottibulos cinetoe6ricos. Dibujo esquemitico de lun cromosoma metafisico que ‘muestra sus dos eromdtidas hermanas unidas a microtubulos cinetocéricos, Cada cinetocoro forma tna placa en la superficie del eentrémero. Los fexiremos “mas” delos microtibulos se lunen a los cinetocoros (no se muestra) Figura 18-16 Eleinetocoro, (A) Un ‘cromosoma metafésico tehido con ‘un fuorocromo de us (B) Une ‘con anticuerpos humanas que reaccionan con proteinas especificas del cinetocoro, mostrando la presencia de dos cinetoco asociado a una cromitida, (© Plectronmicrografia de una ‘romatida en anafase con mierotibulos adheridosa su cinetocoro. La mayoria delos cinetocoros tienen una estructura trlaminar; el que se muestra (de un alga verde) tiene una estructura ‘apasadicionales. (AB, corte Bill Brinkley; C, de J.D. Picket-Heaps y LC. Fowke, Aust, J. Biol. St 23:71-92, 1970, reproducido con permiso de CSIRO)18-17 Secuencia de DNA de uun centrémero earactertstica: levadura Saccharomyces cerevisiae. La secuencia de DNA mostrada es suficiente para originar una segregacidn cromosémica completa; din, actiia ensamblando las proteinas del ‘inetocoro que atraen a un NA ilerottbulo (en verde) al cinetocoro. IMERO DE LEVADURA i nde ONA de fot wt En los cromosomas de la levadura los complejos proteico: cinetocoricos se ensamblan siguiendo secuencias especificas de DNA centromérico* La informacién que determina la construccién de un cinetocoro en una local zaci6n espectfica de un eromosoma se hala en la secuencia de DNA del centr6- | mero, En las levaduras de fisién el DNA centromérico puede ser identificado mediante su efecto en la propagacién de plasmidos que lo contienen: un plés- mido que contenga DNA centromérico se puede heredat de forma estable en la mitosis y la meiosis, como si fuera un cromosoma, mientras que un plésinido que carezca de dicho DNA {y esté presente en bajas cantidades) se segreyara en las eélulashijas de forma irregular y se perderd al cabo de unas cuantas divisio- _[q)y qo conuonen eletramente nes celulares. (En el Capitulo 7 vimos cémo se ha wilizado esta propiedad de los pocos eromosomnasy se encuentran en centrémeros en Ia construccién de vectores para DNA clonado,) Experimentos faye, en (4), donde existe un genéticos moleculares muestran que cada | dua S. cerevisiae contiene una secuencia centromérica distinta de una longitud _cromosoma, en fase G, en (B) donde de unos 110 pares de bases (Figura 18-17). Aunque cada secuencia es tinica, to- _existen dos cinetocoros tentidos por das contienen regiones homdlogas sustanciales y pueden ser invertidas o inter- cada cromosoma. Los anticuerpos cambiadas de cromosoma a cromosoma sin perder su funcién. utilizados para marcar los cinetocoros Sehan dentifcado algunas de as proteinas que forman elcinetocoro de ale- 2 Ws misnos que os leads vadura por su capacidad de nirse l DNA centromérco. El elemento del cen- {ira #.160, th) se mae trdmero de levadura (véase Figura 18-17), por ejemplo, se une aun complejo de PO derentede culo, quese tres proteinas. Se cree que este complejo proteicoinicia la formacién ce um cine- _Syrweaen metlae: 0s eto tocoro sencillo que se une al extremo de un s6lo microtdbulo. Una de las protel- Pepper -grune moraton de nas purificadas que unen centrémeros es un motor de microttbulos dirigida hacia {inetocoro,y el DN sc ha endo con el extremo “menos", Io cual parece suficiente para propulsar el cinetacoro de lale-umcolorante rojo (Cortesta de Figura 18-18 ‘Tinelén inmunofluorescente de cinetocoros cen eétulas en cultivo. Las células de ‘marsupial (células PtK) mostradas en ino de los 17 cromosomas dela leva-_cinetocoro teaide por cada vadura a lo largo de su microtibulo adherido hacia el polo mitético. Otras protef-_B.R, Brinkley yD. He.) | | eo Oo EJ “Wy iB) i is 989polo del huso nas se unen a otras secuencias del centromero y estabilizan su interaccién con el microtibulo, Los centrémeros de mamifero se componen de distintas secuencias de DNA ‘mucho mas largas y forman cinetocoros mucho mas grandes que legan a unit 30 040 microtiibulos. Se cree que la mayor parte de la secuencia repet satélite) de los centrémeros de mamifero es imprescindible para la organi especial de cromatina en el centrémero. Pero parece ser que existen seciencias de DNA, comprendidas en este DNA estructural, que unen complejos proteicos pare- cidos a los de los centrimeros de las levaduras Elhecho de que los enfermos que padecen ciertos tipos de escleroderma (una enfermedad de causa desconocicla que se asocia con una fibrosis progresiva del tejido conjuntivo de la piel y de otros 6rganos) produzcan anticuerpos que reaccio- nan espeefficamente con los cinetocoros, ha facilitado el estudio ce las proteinas de cinetocoro cle mamifero. Si utilizamos estos anticuerpos para marcar células en divisin mediante inmunofluorescencia, se observa un patrén de puntos fluores- centes en el que cada punto indica la posicién de un cinetocoro. Sorprendente- ‘mente, si se marcan células que no estén en divisidn se obtiene un patrén similar, de forma que el nimero de puntos por célula se corresponde con el niimero de ctomosomas, lo cual sugiere que los precursores de cinetocoros se unen a cada centrémero incluso en el nticleo interfasico (Figura 18-18). Los autoanticuerpos de Ja escleroderma también permiten el clonaje de los genes que codifican muchas de las proteinas asociadas con los cinetocoros de mamifero, de manera que ahora ‘estas protefnas pueden fabricarse en grandes cantidacies mediante las tecnologias del DNA recombinante. Asi pues empiezan a caracterizarse las interaeciones de ‘unas protefnas con otras, con el DNA y con los microtituulos. Los cinetocoros capturan los microttibulos nucleados en los polos del huso’ Durante la profase, mientras se forman los microttibulos polares y se alarga el hhuso, encontramos muchos microtibulos todavia en crecimiento y que se retraen répidamente desde el centrosoma de cada polo, con sus extremos “més” explo- rando al azar toda la célula. La profase termina y comienza la prometafase cuando la répida fosforilacién de la Kamina nuclear desencadena la descomposi- cidn de la envoltura nuclear y los microtuibulos consiguen acceder a los cromo- somas. Mediante un procedimiento que se puede comparar al de un pescador lanzando el sedal, un microtdbulo a la caza pasa a menudo Jo suficientemente cerca de un cinetocoro como para capturar el cromosoma. En las células de tri {6n, en las cuales se puede observar la captura inicial, primero se observa cémo el cinetocoro se adhiere al costado del microttibulo y entonees se desliza con ra- pidez a lo largo del mismo hacia el polo del huso (Figura 18-19). Probablemente la adhesién lateral al microtibulo y el deslizamiento posterior hacia el polo son debidas a la actuacién de la dinefna (tratada en el Capitulo 16), una proteina motor de microttibulos orientada hacia el extremo “menos”, que se puede k lizar en el cinetocoro mediante el marcaje con anticuerpos antidineina. 990 Capitulo 18: Los mecanismos de la divisién celular Pigura 18-19 Captura de cinetocoros porlos microtsibulos. El cinetocoro se lune aun costado del microtibulo en crecimiento y se desliza alo largo det mismo hacia el polo det huso. En las figuras de la izquierda la flecha roja sefiala la direccién en que erece el m ras que la flecha ‘gris senala la direecién de deslizamiento del cromosoma. En la figura de la derecha se presenta una reconstruccién tridimensional por ordenador de un cromosoma de tritén n prometafase, a partir de varias ones finas. Este cromosoma (azul) no ha hecho mas que iniciar su desplazamiento hacia el polo del huso tras la unién de su ein (naranja) a un microtibulo (blanco) (De CAL. Riedery SP. Alexander, J. Cell Biol. 110:81-95,1990, con permiso de copyright de The Rockefeller University Press.)Cada cinetocoro captura cada vez mas microttibulos, a medida que se des za hacia el polo del huso, donde la densidad de microtiibulos es més alta. Dt rante este proceso las interacciones iniciales de los microttibulos que se produ- cfan en los costados se convierten en interacciones en los extremos, con el inetocoro adherido al polo “mas” de cada microtiibulo, Finalmente, el cineto- coro contrario, situado en la otra cromatida hermana, sera capturado por el ex- tremo libre de un microtubulo procedente del polo contrario del huso, colocan- do alas crométidas para su segregacién y tensando el sistema de microtiibulos cinetocéricos. Dichas tensiones se deben a las propiedades especiales de los acoplamientos entre microtiibulos y cinetocoros, que veremos a con Los extremos “més” de los microtibulos cinetocéricos pueden afiadir y perder subunidades de tubulina mientras estan adheridos al cinetocoro" Como los microtabulos polares, que después de establecer los conexiones cru- das en el ecuador del huso contintan afiadiendo subunidades a uno de sus extremos y perdiéndolas en el otro, los microttbulos cinetocéricos también mantienen un estado de flujo dindmico. Si se inyecta tubulina marcada qui camente en cé jticas durante la metafase, se observa que se incorpora Continuamente a dichos microtibulos cerca de su punto de unién al cinetocoro Figura 18-20). Veremos brevemente que durante la anafase ocurre la reaccién inversa, y que se pierden moléculas de tubulina de estos microti ricos a medida que se desplaza hacia el polo del huso. Este h que tanto la adicién como la pérdida de moléculas de tubulina se produzca mientras el cinetocoro conserva una unién mecénica firme con los microtibu- Jos, Dicha unién continuard siempre bajo presién, tanto si las moléculas de tu- bulina se ariaden como si se pierden. Ast pues, parece que el cinetocoro act como un collar corredizo, que mantiene una asociacién lateral con las subuni- dades de tubulina polimerizada cerca del extremo del microtiibulo mientras permite la adicién o la pérdida de moléculas de tubulina en dicho extremo (véa se Figura 18-28, mas adelante. Cuando se aftaden moléculas de tubulina, el co- llar se mantiene en el extremo del microtibulo deslizandose hacia atras; si se pierden dichas moléculas el collar se mantiene en el extremo desplazaindose ha- cia adelante. Los polos del huso repelen los cromosomas" Mientras que los microtuibulos cinetocéricos tienden a empujar a los cromoso- mas hacia el polo, otra fuerza mas misteriosa acta en direccién contraria, re- chazando cualquier objeto grande que se acerque demasiado a los polos. Esto se Mitosis Figura 18-20 Experimento que demuestra que los microtuibulos cinetocéricos metafisieos afiaden subunidades por su extremo “mas” tunido al cinetocoro. En est experimento se inyect6 tubuaina ‘marcada con fluoresceneia a una célula viva, en la que acabé \corpordndose alos microtubulos del Jnuso (verde). Entonces se introdujo tubulina mareada con rodamina auna cclula en metafase, en la que Ineorporé a unos microtbulos netoc6ricos, concretamente en el ‘extremo “més (naranja) por el. que se tunen al cinetocoro. También se ‘observa una cierta incorporacién en el ‘centrosoma, (Cortesia de G. Borisy.) 991Figura 18-28 El comportamiento dinamico de los microtibulos en el huso ‘metafisico se estudia mediante lafotoactivacién. |huso metafisico formado tn vitro partir de un extracto de huevos de Xenopus, se le incorporan tres marcadores fluorescentes: tubulina marcada juibulos, un colorante azul ina (roja) para marcar todos los mi ue se une a DNA y marca los cromosomas, y una fluorescencia empaquetada, que también se incorpora a todos los microtibulos pero que permanece invisible (porque no es fluorescente} hhasta que se activa con luz ultravioleta, En (A) se ol Jos cromosomas y delos microtibulos ene! hus. Iu ultravioleta para visualizar la tubulina fluorescente empaquetada, localizada prineipalmente en la banda izquierda de la placa metafasica, Durante los minutos siguientes (tras 11/2 minutos en D) se observa como la senal de la tubulina fluor se desplaza hacia el polo izquierdo del huso, lo cual indica que la tubulina se desplaza continuamente hacia el polo aunque el h ‘ala tubulina mareada con rodamina fluorescente) durante largos perfodos. La senal de disminuye de intensidad, lo cual indica que los mi despolimerizan y se substituyen sin parar. (De KE. Cell Biol 12:941-954,1991, permiso de copy University Press.) ‘que empezarén en la anafase. Todos los microtibulos del huso, pese a su aparente estabilidad, estén intercambiando continuamente subunidades con el acervo de que bloquea el ensamblaje de la tubulina en los microtiibulos, provoca que todo el huso se descomponga r4pidamente. El comportamiento dinémico de los microtulbulos polares y cin sndo que los microttibulos incor- tubulina soluble libre: un tratamiento con colchic toc6ricos se ha estudiado directamente permi que se ha conjugado covalentemente a tada’ fotoactivable (véase pag. 197). Si dichos microtuibulos del huso metafésico jante su exposi se marcan con una franja fluorescente (me observa que los microttibulos marcados se desplazan, polo (Fi Muorescencla empaquetada también ght de The Rockefeller de la fluoreseencia. A un tubulina marcada con bserva la distribucién de En (B) se utiliza un haz.de en C, y tras 2 1/2 mi rescente desempaquetada 1uso (visible en rojo gracias permanezca inalterado crottibulos individual Sawin y TJ. Mitchison, Muoresceina “ npaque- n a rayos laser), se continuamente hacia el, ura 18-23). Este experimento demuestra que tanto en los microtbulos polares como en los cinetocéricos las subunidades de tubulina se desplazan continuamente hacia los polos -un proceso que conocemos como intercambio rotatorio (Figura 18-24, y véase pg. 884). Las marcas se hacen més débiles con el tiempo, lo cual indica que muchos microtiibulos individuales se despolimerizan ‘ieccin de a tubulin 6 mie i. / 994 Capitulo 18: Los mecanismos de la division celular ‘delmirotdbulo. dal merotaoule Pigura 18-24 Diagrama simplifteado del huso mitdtico en la metafase. E1 hhuso esta formado pot dos medios hhusos (verdey naranja), cada uno de los euales estd compuesto por ‘microttibulos polares, microttbulos cinetocoricos y microtabulos astrales. Lapolaridad de los mictotibulos se Indica medianee las puntas de las flechas, que sefialan hacia el extremo ‘mas Los microtubulos polares que parten de polos opuestos del huso se solapan en una regién (sombreada en aris), en la que las proteinas asociadas amicrotubulos pueden entrecruzarse con ellos, Notese la colocacién antiparalela de los microtbulos en la zona de solapamiento,susteaceiin adiion eno ustsccén tants pia sutraeisn BReIDOIO dey ogo oreo naaans ee be anisndes Sp be subunidas” ‘marcades Ne 5 em > tensibn microtubule cinetoedrico ee seort 1 microtubulo cinetosérco mantone bido als despolimeracion on w Tong eon ©) Smboe extromoe por completo y son reemplazados. Debido a que los microtibulos polares y ci- netocdricos del huso metafésico mantienen el mismo tamafio, tiene que existir un equilibrio perfecto entre la aportacidn de subunidades de tubulina en los po- Jos “mas” en el ecuador del huso y la pérdida de subunidades de tubulina en los extremos “menos” unidos a los polos (Figura 18-25A), El desplazamiento continuo de las subunidades de tubulina hacia los polos del huso metafésico tiene profundas implicaciones en la construccién del huso. Se cree que muchos de los enlaces existentes entre los microtibulos polares del huso, y entre los microtdbulos y otras estructuras tales como los cinetocoros y los centrosomas, son producidos por protefnas motoras de microtubulos. Debi- do a que las protesnas motoras se asocian y disocian del microtiibulo continua- mente mientras avanzan por su ciclo cataltico, su disento es ideal para continuar tunidas sobre microtibulos cuyas subunidades no dejan de desplazarse. Pueden. mantener una tensién incluso si el microtiibulo se esté alargando, mediante la adicion de subunidades, e igualmente pueden mantener una compresién cuan- do el microtubulo se encoge debido a la pérdida de subunidades. Las cromatidas hermanas se separan repentinamente en laanafase'* ‘Como vimos en el Capitulo 17, la anafase se desencadena debido a la degrada- cién de la ciclina y la consiguiente inactivacién del MPB, Ello conduce brusca- mente a la divisisn sincrénica de cada cromosoma en sus cromatidas hermanas, Figura 18-25 Comportamiento de los ‘microtibulos cinetocéricos en la ‘metafase y en la anafase. (A) Durante la metafase, se afiaden subunidades al exiremo “mis” del microcubulo, en el cinetocoro,y se eliminan del extremo menos’, en el polo del huso. Ast se produce un flujo constante de subuinidades de tubulina hacia el polo, ‘al mismo tiempo que los microtubulos mantienen una longitud constante y permanecen bajo tensién. (B) En la ‘anafase la eromtida se ibera de la unién de su cromatida hermana en la placa metafésica y el cinetocoro se esplaza ripidamente microulbulo arriba, desplazando en su camino subunidades de su extremo “més, Por Jo tanto, la cromatida unida es transportada hacia el polo del huso, Parte del movimiento de la cromatida se debe a la pérdida simulcénea de subunidades del extrema “menos” de os microttbulos en el polo. Figura 18-26 Separacién de las ‘crométidas en la anafase. Durante la Uvansicién de la metafase (A) ala anatase (B), os microriibulos del huso separan las cromatidas hermanas como se observa en estas células de cendosperma de Haemanthus (rio) tefiidas con anticuerpos contra tubulina marcados con oro, (Cortesia de Andrew Bojer)‘cada una de elas con un cinetocoro. La separacién de las crométidas hermanas las libera de la fijacién que las mantiene en la placa metafsica, y los cinetocoros pueden empezar a desplazarse hacia el polo del huso al que se adheriran me- diante sus microtiibulos cinetocéricos (Figura 18-258), Se cree que las cromiéti- das se mantienen unidas a lo largo de su longitud mediante protefnas cromos6- ricas que se alteran bruscamente de alguna manera al comienzo de la anafase, permitiendo que las crométidas se separen ¢ inicien su trayecto hacia los polos (Figura 18-26), La anafase se retrasa hasta que los todos los cromosomas se posicionan en la placa metafésica'® La metafase ocupa una parte importante del periodo mitético (véase Figura 18-7), en parte porque las células se detienen en ella hasta que todos sus cromosomas se alinean de forma adecuada en la placa metafésica. Si el huso mitético esta des- ensamblado debido a un tratamiento con colchicina, las células se detienen en Ja metafase durante horas o dias. (Este método de detencién del ciclo celular se utiliza normalmente para recoger grandes cantidades de células en mitosis, 1o ‘cual permite analizar sus cromosomas condensados.) Mientras el huso se halle desensamblado debido a este tratamiento, también se bloquea la inactivacién del MPF, que habitualmente seftaliza la transici6n de la metafase a la anafase. Parece que cualquier cinetocoro que no esté unido a los microtibulos genera una sefial difusible que de alguna manera estabiliza el MPF, lo cual normalmen- te garantiza que todos los cromosomas estén alineados antes de que se autorice la progresion a la anafase. Por Jo tanto se espera que al desmontar el huso me: diante drogas se provoque una sefial {uerte que prolongue la metafase de mane- ranotable. Dos procesos diferentes separan las cromatidas en la anafase"” Cuando cada cromosoma se ha dividido como respuesta a la puesta en marcha de la anafase, sus dos cromatidas se desplazan a polos opuestos del huso, donde se ensamblan dentro del nticleo de una nueva eélula. Su desplazamiento es con- secuencia cle dos procesos independientes relacionados con el huso. El primero, al que se denomina anafase A, consiste en el desplazamiento de las cromiatida hacia el polo, acompafiado del acortamiento de los microtibulos cinetocéricos (véase Figura 18-258). El segundo, al que se denomina anafase B, consiste en la separacién de los polos, acompanado de la elongacién de los microtubulos pola res (Figura 18-27). Anteriormente estos dos procesos se distingufan mediante sus distintas sensibilidades a los tratamientos con drogas, pero ahora esté claro que se deben a mecanismos distintos. Las contribuciones relativas de la anafase A y la anafase B a la separacién nal de los cromosomas varfa considerablemente segiin el otganismo. En las ¢é- lulas de mamiffero la anafase B comienza poco después de que las crométidas hayan iniciado su viaje hacia los polos y se detiene cuando el huso tiene un ta- matio de cerca 1,5-2 veces st longitud metafésica. En otras células, tales como las levaduras y algunos protozoos, predomina la anafase B y el huso se alarga hasta 15 veces su longitud metafasica El desensamblaje de los microttibulos cinetocéricos se produce durante la anafase A® Una fuerza sorprendentemente potente actia sobre los cromosomas mientras se desplazan desde la placa metafsica hasta el polo del huso. Mediciones efec- tuadas calculando la desviacién de unas agujas de cristal delgadas dan unas esti- ‘mas de 10 dinas por cromosoma, una fuerza 10 000 veces mayor de la que ne- cesitan los cromosomas para desplazarse a su velocidad habitual por el citoplasma, Obviamente, se necesitan unos motores muy poderosos para des- 996 Capftuto 1 1s mecanismos de la divisién celular —THe | ‘REL Dan 2 “Fe Go os mictotubulos: Sesplasamionto de lag ‘romatidas hoe polos: fuerza generac ‘una fuera destzanto (1) 9 genera tentre ls microtibulos polates 4 polos opuestos, empuiindolos Y separandolos; una fuerza do Uroecion (2) act dractamente {los polos, separandolos ROK SEX plazar a los cromosomas, y la velocidad de desplazamiento de los cromosomas debe de estar limitada por algo mas que por la viscosidad. Como hemos diseuti- do anteriormente, los mismos motores pueden generar la tensiGn sobre los cro- mosomas en la placa metatfsia. Mientras cada cromosoma se desplaza hacia el polo, sus microtibulos cine- tocéricos se despolimerizan, de modo que en la telofase casi ya han desapareci- do. La pérdida de subunidades se puede determinar marcando los microttibulos cinetocéricos mediante subunicades de tubulina fluorescente y rayos léser, como hemos descrita antes. En experimentos de este tipo se puede observar que Jos mictotuibulos cinetocéricos se despolimerizan por ambos extremos durante Ja anafase, y que la mayor parte de la despolimerizacién se produce en los cine- tocoros, donde se habfan polimerizado previamente. En una célula de tritén en cultivo, por ejemplo, el movimiento en la anafase A sucede a una velocidad de 2 micras por minuto, lo que equivale a una despolimerizacién de microtibulos de 50 subunidades por segundo. F1 60-80% de esta despolimerizacién tiene lugar en los cinetocoros, y el resto en los polos, a la misma velocidad que observamos en Ja anatase (véase Figura 18-25). EI hecho de que el cinetocoro es el lugar princi- pal de despolimerizacion de microtabulos sugiere que al mismo tiempo es el lu- gar principal donde se genera la fuerza que desplaza los cromosomas. ‘Sin embargo, el mecanismo por el que se desplaza el cinetocoro, y por lo tanto el cromosoma, hacia el polo del huuso durante la anfase A, es desconocido.. En la Figura 16-28 se muestran esquemdticamente dos modelos posibles. En el primero, una proteina motor de microtuibulos orientada hacia el extremo “me- nos” en el cinetocoro hidroliza ATP para desplazarse a lo largo de su microttibu- Jo unido; y a medida que queda al descubierto, el extremo “més” del microtabu- lo se va despolimerizando. En el segundo modelo de despolimerizacién de microtibulos el cinetocoro se desplaza pasivamente ya que el cinetocoro per- ‘manece unido al extremo del microtuibulo mientras éste se despolimeriza. El re- ciente descubrimiento de protefnas motoras orientadas hacia el polo negativo ha provocada una corriente de opinién en favor del primer modelo, aunque es muy probable que la despolimerizacién contribuya al desplazamiento, quizé ac- tuando como un “director” que limita la velocidad de migracion hacia los polos. Mitosis — eresimionto del merotibuto fn lor extras “mae” do 08 ‘merotubulos plares Figura 18-27 Los dos procesos que separan las crométidas hermanas en In anafase, En la anafase Alas ‘crométidas son arrastradas hacia polos opuestos por fuerzas asociadas al acortamiento de sus mieroulbulos cinetocdricos, Se cree que la fuerza que conduce este movimiento se genera principalmente en el cinetocoro. En la anafase Bos dos polos del huso se separan. Parece ser ue las fuerzas que conducen la anafase B son similares alas que provocan la division y separacién del ‘eentrosoma en los dos polos del huso cen la profase (vase Figura 18-5). Existen evidencias de que dos fuerzas diferentes son las responsables de la anafase B: por un lado la elongacién y cl destizamiento de los microtibuilos polares, uno sobre otro, separaios dos polos; por otro lado, unas fuerzas exteriores ejetcidas porlos :microutbulos astrales en cada polo del bhuso atraen los polos hacia la superficie celular, alejéndolos el uno del otro. 997liewocion det accion det Gosplazamionto ‘esplazamiento protoina motors de os com alta ania Imerotubulos digida porate a porta tabu polimerizade Seer eel Ty Cee ee aaa wi wanna Solkcercamonma * oni vm ent aa Dos fuerzas distintas podrfan contribuir a la anafase B” La anafase B aumenta la distancia entre los dos polos del huso, a diferencia de la anafase A, y se acompafia de la elongacién de microtibulos. Se cree que el mis- ‘mo mecanismo que separa los centrosomas en la prometafase controla los mo- Vimientos en la anafase B. Mientras los dos polos se separan, los microtibulos polares se alargan, parece que por polimerizacién en sus extremos distales 0 ex- ‘remos “mas” Tanto la magnitud de ta separacién del polo del huso en la anafase como el grado de superposici6n de los microtuibulos polares en la zona media, varian de forma considerable de unas especies a otras. En muchas diatomeas, que se ca- racterizan porque en ellas la mitosis ocurre dentro de la envoltura nuclear, las zonas de superposicion de microtiibulos son especialmente prominentes (Figu- +a 16-29), Estudios de reconstruccion de la arquitectura tridimensional del huso completo de una diatomea a partir de centenares de secciones finas seriadas ‘examinadas al microscopio electrdnico muestran que los microttibulos polares de cada medio huso se superponen en una regisn central cerca del ecuador del hhuso y que los microtubulos de polaridad opuesta se distribuyen ordenadamen- te dejando espacios entre ellos. Segiin parece durante la anafase estos dos gru- gin conta de icrotibulos polo rmicrotubulos solapacos polo polars del hueo a Bo dl ei 998 Capitulo 18 : Los mecanismos de la divisién celular Figura 18-28 Dos modelos alternativos de edmo el cinetocoro puede generar una fuerza hacia los polos sobre su cromosoma, durante la anafase. (A) Las proteinas motoras de microtibulos forman parte del cinetocoro y utlizan la energia dela bhidrélisis del ATP para arrastear el cromosoma allo largo delos ‘microttibulos.alos que dicho ‘cromosoma esta unio. (B) El desplazamiento de los cromosomas std dirigido por el desensamblaje de los microtabulos: cuando las ssubunidades de tubulina se disocian, cel inetocoro ha de deslizarse hacia el polo para mantenerse unido alas paredes del microtubulo, Figura 18-29 Deslizamiento de :microtibulos solapados en la anatase. Electronmicrografias que muestran el alargamiento y la reduceldn del grado de solapamiento de los microtuibulos polares durante la ‘mitosis en una diatomea. (A) Metafase,(B) Anafase tarda. (Cortesia de Jeremy D. Pickett-Heaps,) solapamiento 2m ftwy enn LOS POLS DEL HUSO SON EMPULADOS PARA SEPARARSE. cortezs celular aS oo = =» ~~ Los poLos peL Huse son ———~ ESTIRADOS DESDE EL EXTERIOR pos de microtibulos polares antiparalelos se deslizan y separan uno de otro en la regién de superposicisn. Los movimientos de la anafase también se pueden estudiar en células lisadas de diatomea. En este modelo el prominente huso mitético es libremente accesi- ble a las macromoléculas, de forma que se pueden estudiar los efectos de varias sondas macromoleculares (ineluyendo anticuerpos especiticos). EI movimiento de la anafase A en las diatomeas se puede bloquear mediante un anticuerpo que reconoce las proteinas motoras de microtiibulos de la familia quinesina, lo cual sugiere que los movimientos pueden estar dirigidas por una proteina motor de esta familia. Parece que esta protefna motor se localiza en la zona de superpos ci6n, donde puede separar los medios husos (Figura 18-304). Se eree que los microtibulos astrales, que se alargan en todas direcciones durante la anafase, juegan un papel adicional en los movimientos de la anafase B, Tanto en los hongos como en los animales, cortando el centro del huso no se bloquea la separacién de los polos det huuso, sino que de hecho la acelera. Esto sugiere que los microtiibulos astrales que apuntan hacia fuera del huso generan tuna fuerza que arrastra los polos participando en su separacién durante la ana- fase B, posiblemente interactuando junto con proteinas motoras otientadas al extremo “menos” que se hallan unidas a la corteza celular 0 a otras estructuras citoplasméticas (Figura 18-30B). De acuerdo con esta suposicién, la inyeccién de anticuerpos contra la dineina, una proteina motor dirigida hacia el extremo “menos”, provoca el colapso del huso de células en cultivo. Parece que esta fuer- za de arrastre también acta durante el ensamblaje del huso en la profase, y que unas fuerzas similares a ella guian la distribucién especifica de los husos, previa alas escisiones celulares asimétricas, como veremos mas adelante, En la telofase se recompone la envoltura nuclear alrededor de los grupos de cromosomas” Al final de la anafase los cromosomas se han separado en dos grupos iguales, uno en cada polo del huso. En la telofase, el estadio final de la mitosis, se recom. Mitosis Figura 18-30 Modelo probable de actuacién de las proteinas motoras de ‘microtiblos en la anafase. Ein (A) las protefnas motoras drigidas al extremo ‘mas, dela familia de las quinesinas de entrecruzamiento contiguo, entrecruzan microtibulos polares ntiparalelos y hacen deslizar estas ‘microtibulos unos respecto a otros, empujando la separacién de los dos polos del huso. Las lechas negras indican la direecién de deslizamiento de los microtibulos. (B) Protefnas ‘motoras de microttibulos del extremo ‘menos’ se unen a la corteza celular y alos microtubulos astrales que apuntan al exterior del huso y atraen los polos del uso alefindolos entre sipone una envoltura nuclear alrededor dle cada grupo de cromosomas, formando Jos dos niicleos hijos de Ia interfase. Hay que considerar al menos tres partes del complejo de la envoltura nuclear (discutido en el Capitulo 12) durante su desaparicién y recomposicién en la mi- tosis: (1) las membranas nucleares exterior e interior, que son continuas con el reticulo endoplasmatico; (2) la ldmina nuclear subyacente (una fina red de fila- ‘mentos intermedios en forma de hoja formada a partir de liminas nucleares), {que interactia con la membrana nuclear interior, la cromatina, y los poros nu- cleares; y 3) los poras nucleares formados por grandes complejos proteicos. En la profase la fosforilacién de las liminas nucleares tiene lugar en varias localiza- ciones distintas de cada cadena potipeptidica, provocando su desensamblaje, y por lo tanto la rotura de la lémina nuclear, En consecuencia, quizés como res- puesta a una sefial diferente, las membranas de la envoltura nuclear se disgregas ‘en pequenas vesiculas de membrana. La repentina transicién desde la metafase a la anafase inicia la desfosforila ci6n de las muchas proteinas que se fostorilaron en la profase: aunque las fosfa: tasas pertinentes permanecen activas durante la mitosis, no pueden actuar sin, oposicién hasta que se desactiva el MP. Poco después de esto, en la telofase, las vesiculas de la membrana nuclear se asocian con la superficie de cromosomas individualizados y se fusionan entre sf, recomponiendo las membranas nuclea- res, envolviendo parcialmente grupos de cromosomas, antes de coalescer y re- componer la envoltura nuclear completa (véase Figura 12-18). Durante este pro- ‘ceso los poros nucleares se desensamblan y las liminas desfosforiladas se reasocian formando la limina nuclear; una de las proteinas de la lamina (lémina B) permanece a lo largo de toda la mitosis con los fragmentos de la membrana nuclear y es posible que participe en la reconstruccién del nticleo. Tras la nueva construccién del nticleo, los poros bombean proteinas nucleares hacia el inte rior del micleo, los cromosomas se descondensan, y se reanuda la sintesis del RNA, todo lo cul provoca la reaparicién de los nucléolos. Se cree que la descon- densacién de la cromatina puede ser provocada en parte, por la desfosforilacion de las moléculas de la histona Hl. En extractos crudos de huevos de Xenopus se produce tanto el ensamblaje como el desensamblaje nuclear siempre y cuando estos extractos provengan de Ccélulas que se encuentren en el estadio apropiado del ciclo celular (células mit6~ ticas para el desensamblaje y células interfisicas para el ensamblaje). En estos extractos el proceso completo que implica la kimina, los polos nucleares, y las, ‘membranas nucleares parece progresar con normalidad en respuesta a ciclos de fosforilacién y desfostorilacién. Sistemas in vitro de este tipo proporcionan un sistema de ensayo para la identificaci6n y la purificacién de proteinas que cata zan el ensamblaje y el desensamblaje de la envoltura nuclear en la eélula, inclu: ‘yendo las proteinas (como el MPF) que regulan dichos procesos. Mientras que para ensamblar un micleo hay que suministrar DNA a estos extractos, se forma r4 una envoltura nuclear completa alrededor de moléculas de DNA purificado procedentes de pricticamente cualquier organismo, incluyendo virus bacteria- nos. Por lo tanto, mientras que las protesnas que se unen al DNA han estar impli cadas en este proceso, es poco probable que durante el reensamblaje nuclear se produzca un reconocimiento de secuencias especificas de DNA. Sorprendentemente, la rotura de la envoltura nuclear no es un requerimien- {o para la mitosis. De hecho, veremos a continuacién que en los eucariotas infe- riotes la envoltura nuclear no se desensambla durante la mitosis. Se dice que el hhuso de estos organismos es abierto en lugar de cerrado. Resumen La mitosis comienza con la profase, que se manifiesta mediante un incremento en a fosforilacién de proteinas especificas, y se desencadena por ta actividad de una protetna quinasa inductora de la mitosis, MPF. Una consecuencia de esta fosforila- ‘cidn es una estructura microtubular extraordinariamente dindmica, nucleada en 1000 Capitulo 18 : Los mecanismos de la divisién celular{0s centrosomas duplicados que forman tos polos de huso. Un subconjunto de los ‘micronibulos de cada centrosoma se estabiliza, parece ser que estableciendo lazos cruzados con microtubulos del centrosoma contrario, formando los micronibulos olares, los cuales se supone que son responsables de la separactén de los polos. Tras la rotura de ta envoltura nuclear en la prometafase, los cinetocoros de cromo- somas condensados pueden capturar y estabilicar otras subformaciones de micro- Libulos de tos muchos que crecen constantemente en cada polo del huso. Los cineto- cores de polos opuesto del huso tiran en direcciones contrarias de los dos cinetocoros dé cada cromosoma duplicado, creando una tension que estabitiza la uni6n de los cinetocoros. Fuerzas equilibradas sobre los cinetocoros también Hevan 4 los cromosomas al ecuador del huso, formando la placa metafasica. Las subunt- dades de tubulina de los microtiibulos del huso sufren continuos desplazamientos desde el ecuador hacia los polos del huso. En la anafase, las cromdtidas hermanas se separan una de la otra de repente y son atratdas hacia polos opuestos (el movi- ‘miento de ta anafase A). Mientras, ls dos polos del luso se separan (el movimiento de la anafase B). En ta telofase, el estadio final de la mitosis, se reconstruye [a en- voltura nuclear en la superficie de cada grupo de cromosomas separados al desfos- Jorilarse las protetnas que se fosforilaron al comienzo de ta fase M. Citocinesis” Durante la eitocinesis el citoplasma se divide mediante un proceso denominado segmentacin. Aunque normalmente la divisin nuclear y la divisién citoplasma- tica estan relacionadas, son acontecimientos que se pueden separar; en algunas circunstancias normales la divisién celular no va seguida de Ia citocinesis. Por ejemplo el embridn temprano de Drosophila experimenta 13 procesos de divi- sién celular sin que se produzca ninguna division citoplasmatica, formandose tuna sola eélula grande que contiene 6000 niicleos dispuestos como una mono- capa cerca de a superficie. Posteriormente se generan células mononucleadas por segmentacin citoplasmatica alrededor de todos estos nuicleos (véase Figura 21-51). No obstante en una célula normal cada mitosis viene acompanada de tuna citocinesis, que comienza en la anafase, continua en la telofase, y aleanza su culminacién al comenzar la interfase siguiente. El huso mitético determina el lugar de la segmentacién del citoplasma durante la citocinesis® Normalmente el huso mit6tico determina dénde y cuando ocurre la segmenta- cin. En las células animales la primera muestra visible de segmentacidn es la formacién de un estrangulamiento y un surco de la membrana plasmatica du- ante la anafase (Figura 18-31), La formacién del surco ocurre invariablemente Citocinesis| Figura 18-31 Electronmicrografias de barrido dela segmentacién. temprana de un huevo de rana. El ssureo de la membrana celular se forma porlaactividad de un anitto contrdcril, situade debajo de ella. El surco de ssegmentacion en esta celula gigante y cesférica es extraordinariamente obvio y bien detinido. (A) Imagen a poco ‘aumento de la superficie del hueve. (@) Superficie del surco a mayor aumento. (De H.W. Beams y RG. Kessel, Am. Sci. 64:279-290, 1976 Reproducido con permiso de American Scientist, revista de SigmaXi.) 1001ceontrosoma bolita de viii cla huevo on arco se forma ‘sien presionada Sole an un Iago do olla cesptaze {edu produciendo uso! ‘un huovo bincleado cd a segmentacion acute entre controsomas unos por husos mittics vente los des cenrosem: fue simplamante son advacentes, formancose titre Pies ambos ncleos en el plano de la placa metafésica, en dngulo recto con el eje mayor del huso mi- {6tico, Esto asegura que el surco de segmentacién pasa entre los dos grupos de cromiétidas, y de esta manera las dos células hijas reciban copias idénticas del material genético. Si mediante micromanipulacién se cambia el huso precisa- mente en la anafase temprana, el surco ineipiente desaparece y se desarrolla otro surco de acuerdo con la nueva localizacién del huso. Ingeniosos experi- ‘mentos efectuados con huevos fecundados de erizo de mar demuestran que el surco de segmentacidn se forma a medio camino entre los dsteres que parten de los dos centrosomas incluso aunque ambos centrosomas no estén conectados ‘mediante el huso mitotico (Figura 18-32). Asf pues, lo que sefaliza a la corteza para que inicie el surco de segmentacién no son los cromosomas sino los ésteres microtubulares. Mas tarde, cuando el proceso de formacién del surco ya esta bien encarrilado, se produce la segmentaci6n aunque el huso y los dsteres sean alterados por succién o se destruyen con colchicina. ‘No conocemos el mecanismo mediante el cual un par de microttibulos indi ‘can la localizacién de la segmentacion en la corteza, pero sin duda constituye un ejemplo clésico de comunicacidn entre los microtuibulos y los sistemas de fila- mentos de actina del citoesqueleto. Una hipstesis serfa que las dos formaciones, de microtubulos astrales conectan con la corteza celular y establecen la futura localizacién de la segmentacién, posiblemente mediante el desplazamiento de filamentos de actina, También podrfa ocurrir que la corteza percibiese un gra- diente de Ca’, que se establece mediante de vesiculas secuestradoras de Ca"* que sabemos que existen en los polos de huso. Cualquiera que sea la sefial esta claro que la corteza esta preparada para detectarla y amplificarla. Toda Ia corte za se encuentra bajo tensién (véase Figura 16-80), y sila tension aumenta local- ‘mente en la localizacién del inicio del surco o decrece en los polos, los filamen- tos de actina se alinearén localmente y atraerdn nuevos fllamentos, junto con iosina-II, procedentes de la corteza circundante. Asf pues, el surco puede ser un sistema de autoamplificacion, que se autoorganiza sobre la base de una sutil indicacién inicial El huso se reposiciona especificamente creando divisiones celulares asimétricas™ La mayoria de células se divide de forma simétrica, El surco de segmentacién se forma alrededor del ecuador de la célula madre, de modo que las dos eétulas hijas resultantes son del mismo tamano y tienen propiedades similares. Tal simetria cen la segmentacidn es el resultado de una colocacién previa del huso, el cual tien de a centrarse en el citoplasma, de forma que el eje del huso quede alineado a lo 1002 Capitulo 18 Los mecanismos dela divisi6n celular Pigura 18-82 Experimento que ‘muestra la influencia de la posicion, de los dsteres microtubulares en el posicionamiente del plano de ‘Segmentacién, Sise empujael huso mitético de una célula de forma ‘mecéinica hacia un lado de la célula, la ‘membrana del surco resultard Incompleta, ya que no se producird en la cara opuesta de la célula, Las segmentaciones siguientes se produciran no s6lo en la retacion. convencional respecto a cada uno de los husos mit6ticos (lechas amarillas) sino también entre los dos dsteres adyacentes que no estan unidos por ‘un huso mitotico (pero que en esta ccélula anormal comparten el mismo ‘ltoplasma) (fechas rojas). Al parecer, elhaz contrécti de flamentos de actina que produce el surco de Ssegmentacién siempre se forma en la rogidn intermedia entre los dos 4steres, lo cual implica que los dos ‘teres modifican de alguna manera la regidn adyacentea la corteza celular |motores de merotibuos + a Jargo de un eje determinado de la célula Se cree que dicha posicién se establece mediante fuerzas de atraccién sobre los microttibulos astrales, ejercidas por pro- teinas motor citoplasmaticas dirigidas al extremo menos (véase Figura 18-308). Sin embargo, existen muchas situaciones durante el desarrollo embrionario en las que las células se dividen asimétricamente. En estos casos el surco crea dos células de diferente tamano y destinadas a desarrollarse por caminos diver gentes. A menudo las divisiones de este tipo se definen espacialmente de forma exacta. Por ejemplo, pueden guardar una relacion precisa con la superficie de tuna Lamina epitelial o segregar regiones del citoplasma que contengan un con- junto de organulos distinto. La colocacién asimétrica del huso mitético anticipa siempre la posicién asimétrica del surco. El huso gira de forma controlada adop- tando una posicién adecuada dentro de la célula y orientando asi el plano de la division. Parece probable que estos movimientos del huso se dirijan mediante cambios programados en regiones localizadas de la corteza celulary que enton. ces la corteza desplace los polos del huso a través de sus microtuibulos astrale (Figura 18-33), Parece que en las células polarizadas el centrosoma se posiciona mediante un mecanismo similar a éste (véase pag, 848) La divisi6n celular asimétrica es especialmente importante en las células ve- getales, debido a que estas células no pueden desplazarse tras la division; por lo tanto la morfologia de los tejidos viene determinada por los planos de division celular. Las pla necanisino distinto para establecer su plano de segmentacién, que ve delant. La actina y la miosina generan las fuerzas necesarias para la segmentaci6n®* La segmentacién se consigue mediante la contraccién de un fino anillo com- puesto principalmente por una formacién superpuesta de filamentos de actina y Citocines Figura 18-38 Rotacién del huso, (A) Diagrama que muestra un ‘mecanismo que posiblemente subyace ala rotacion controlada del huso. La ranja roja representa una region especializada dela corteza hacia la que Jos microtabulos astrales empujan un polo del huso.(B) Micrografias 6pticas ‘que muestran la rotacién programada, ‘exacta del huso mitotico de un gusano nemitodo C. elegans en el estadio de dos células, preparandose para la segmentacidn que producira cuatro células siguiendo un patron espectic, Elhuso de a célula de la derecha gira ‘casi 90° en el sentido de las agujas det reloj.(Cortesfa de Tony Hyman y John White.) 1003X ssueodo Segmantacior anilo contest ormaco por filmentos de ay bnay sina de filamentos bipolares de miosina-II. Este anillo contréctil define el surco de segmentacién, Consiste en filamentos orientados en circunferencia, unidos a la cara citoplasmética de la membrana plasmdtica mediante proteinas de anclaje no caracterizadas (Figura 18-34). EI anillo contréctil se ensambla en la anafase temprana. Una vez ensamblado, desarrolla una fuerza suficientemente grande como para doblar una delgada aguja de vidrio insertada en la célula. Existen evi- dencias convincentes dle que lo que genera esta fuerza es el deslizamiento de los filamentos de actina y de miosina del anillo contrécti, de una forma muy similar a como se produce en un miisculo. Por ejemplo, en células mitéticas lisadas, la segmentacidn se detiene cuando se afiacien subfragmentos dle miosina ina dda que bloquea los lugares de actina que normalmente se unen a la mi forma parecida, una inyeccién de anticuerpos antimiosina en huevos de erizo de mar fecundados provoca la relajaciGn del surco de segmentacién sin que ello, afecte la divisin nuclear. En cada punto de su circunferencia el anillo contractil contiene un haz de unos 20 filamentos de actina, Durante una divisién celular normal el anillo no se va haciendo mas grueso a medida que el surco se invagina, lo cual sugiere que se produce una pérdida continua de filamentos, reduciéndose asf el volumen del anillo. As{ pues, como otras estructuras citoesqueléticas y a diferencia del miisculo esquelético, el surco es dinémico, Ei anillo contractil se elimina por completo al terminar la segmentaci6n, cuando la membrana plasmética del sur- co de segmentacién se estrecha formando el cuerpo medio, que permanece ‘como un puente entre las dos céhulas hijas. El cuerpo medio contiene los restos de los dos conjuntos de microtiibulos polares, que se hallan fuertemente empa- quetados por material denso de la matriz (Figura 18-35) El proceso de citocinesis requiere la reorganizacién completa de los fila mentos de actina y miosina en la corteza para conseguir que se produzca el en- samblaje del anillo contréctil. Durante la fase M se ven afectadas otras funciones de la corteza, especialmente la adhesién celular. Por ejemplo, células cultivadas de tejidos que durante la interfase se mantienen adheridas a un substrato debi- do a fuertes contactos con moléculas extracelulares de la matriz, al entrar en la fase M se redondean; mas adelante, todavia en la citocinesis, las células se apla- nan de nuevo. Se cree que durante la fase M las actividades de las proteinas de adhesién transmembrana, como las integrinas (se discute en el Capitulo 19), se encuentran de alguna forma sometidas a retroinhibicién, o bien que se modifi- can las proteinas de adhesin que unen estas proteinas con los filamentos de a tina de la corteza. Como ocurre con otras manifestaciones de la fase M, es pro- bable que estos cambios estén mediados por la fosforilacién de proteinas. 1004 Capitulo 18 : Los mecanismos de la divisién celular © Figura 18-34 El anillo contréctil, (A) Bsquema de un surco de segmentacién de tna céhala division, (B) Electronmicrografia del borde que ctece hacia el interior de un surco de segmentacion de una célula animal en divisi6n. (C) Una ameba del moho en la que se ha tefido la aetina [de rojo) y la miosina-tI (de verde). La miosina teida en el anillo contréctil fenmaseara de alguna manera a actina ‘Que tambien esté presente. (B, de H.W. Beams y RG. Kessel, Am. Sci. 64:279- 10, 1976, reprodueida eon autorlenei6n de Amerlean Sclentst, revista de Sigma Xi;C, cartesia de Yoshio Fukui.)2 A ee 808 especiales, determinados componentes celulares se pueden segregar a una sola célula hija Mientras que la mayoria de divisiones celulares producen dos células hijas pare- cidas, algunas divisiones producen células hijas manifiestamente desiguales, fenémeno se da principalmente en las primeras segmentaciones en las que un huevo fecundado grande se subdivide en células mas pequenias destinadas a formar diferentes partes del cuerpo. Ya hemos visto que la colocacién asimétrica del huso durante la divisién celular puede producir dos células de tamatio des- igual, pero la génesis de células hijas bioquimicamente diferentes es un proble- ma distinto, Elcomportamiento de una formacidn earacteristica de granulos en el huevo de un gusano nemétodo C. elegans proporciona un extraordinario ejemplo de este proceso. Estos “grinulos-P" se distribuyen de modo uniforme por todo el citoplasma de un huevo no fecundado, pero se desplazan hacia el extremo pos- terior de la célula justo antes de la primera segmentacién y consecuentemente son heredados tinicamente por una de las dos células hijas. La misma clase de proceso de segregacién se repite en varias divisiones celulares posteriores, de for- ‘ma que, al final, los grénulos se encuentran solamente en las células germinales primordiales, a partir de las cuales se producen los huevos y los espermatozoides, (Figura 18-36). Es posible que los grdnulos jueguen parte importante en el con- trol de los destinos particulares de estas células. Los grimulos-P se desplazan al extremo posterior de cada célula incluso en Jas cétulas mutantes en las que el huso mitético se descoloca y se le localiza en an- gulos rectos respecto a su posicién normal, Ademds, la segregacién de granulos se bloquea mediante la droga citocalasina D, que inhibe la polimerizacion de los, filamentos de actina, pero no mediante la colchicina, lo cual sugiere que el des- Citocinesis Figura 18-35 Chtocinesis. (A) Blectronmicrogratia de barri lode ‘una célula animal en cultive durante su proceso de division; el cuerpo hijas.(B) Electronmicrogratia del todavia une las dos eélulas ‘cuerpo medio de una célula animal en division, La segimentacion es casi ‘completa, pero las dos ella hijas permanecen unidas a esta delgad: franja de citoplasma, (A, cortesia Guenter Albrecht-Buehler; B, cor de).M. Mallins) de estaplazamiento orientado de los granulos-P depende de los filamentos de actina pero no de los microtuibulos. Aunque la segregacién desigual de estos compo- nentes parece basarse en alguna propiedad asimétrica del eitoesqueleto basado en actina, el mecanismo molecular que genera su desplazamiento orientado to- davfa es desconocido. En las células de las plantas superiores, la citocinesis ‘ocurre mediante un mecanismo especial?* La mayorfa de las eélulas de plantas superiores estén encerradas en una pared celular rigida, y en estas células el mecanismo de la citocinesis es distinto al de Jas células animales que acabamos de describir. En vez de pinzar las dos célula hijas mediante un anillo contract en la superficie celular, el citoplasma de la cé lula vegetal se parte por la construccidn de una nueva pared celular en el interior de la célula (Figura 18-37). Esta particién determina de forma precisa la ubica~ ccién de las dos células hijas respecto a las eélulas vecinas, De aqui se deduce que los planos de la divisidn celular, junto con los de crecimiento celular, determi- nan la forma de la planta. La nueva pared transversal, 0 placa celular, empieza a ensamblarse en un plano situado entre los dos micleos hijos y en asociacién con los microtubulos polares del huso, que forman una estructura cilindrica llamada fragmoplasto. El fragmoplasto, que corresponde a los microuibulos del cuerpo medio de las célu: Jas animales, contiene dos conjuntos de microtibulos que se entrelazan en sus extremos “mas” en crecimiento (Figura 18-38). Los microttibulos tienen sus ex- tremos “més” englobados en un disco electrondenso del plano ecuatorial. ‘Tal ‘como se resume en la Figura 18-39, parece que pequefias vesiculas rodeadas de membrana, principalmente derivadas del complejo de Golgi y repletas de pre- cursores de la pared celular, contactan con los microtibulos en cada cara del fragmoplasto y se dejan transportar por ellos hasta aleanzar la region ecuatorial Alli se fusionan entre sf formando una estructura discoidal rodeada de membra- na, la placa celular precoz. Las moléculas de polisacérido liberadas por estas siculas se ensamblan en la placa celular precoz formando la matriz de la pared celular primaria, Este disco tiene ahora que expandirse lateralmente hasta al- canzar la pared celular progenitora. Para que esto sea posible, los micronibulos del fragmoplasto temprano se reorganizan sin parar en la periferia de la placa celular precoz, donde atraen mas vesiculas que se fusionan en el ecuador exte: diendo el borde de la placa. Este proceso se repite hasta que la placa celular en crecimiento alcanza la membrana plasmatica de la célula progenitora. La mem- brana plasmatica y la membrana que envuelve la placa celular se fusionan, sepa rando las dos nuevas células hijas por completo (véase Figura 18-37). Los fila- 1006 Capitulo 18: Los mecanismos de la division celular 20am Figura 18-36 Segregacién asimétrica, [Estas micrografias muestran la segregacion asimétrica controlada de ‘un componente citoplasmatico a una clu hija que ocurre en todas las primeras divisiones de un huevo fecundado del nematode C. elegans. En la parte superior de la figura se presentan eélulas vistas con miroscopia de contraste de fase interferencial y tefidas con un fluorocromo azul especifico para DNA; enlaparte inferior dela figura se lobservan las mismas células pero {ehidas con un anticuerpo cont grinulos-P, Estos grénulos (0,5-1 yim de dismetro), de accicn desconocid se distribuyen al azar por el citoplasma del huevo no fecundado. (Cortesia de Susan Strome.)