PROCESOS DE SEPARACIN

Cintica y isoterma de adsorcin de C-ficocianina

de Spirulina platensis en resinas de intercambio inico
L. Sala

I;

FS Figueira

I;

GP Cerveira

I;

CC Moraes

II, *

; SJ Kalil

I, *

Universidade Federal do Rio Grande, Escuela de Qumica e Alimentos, PO 474,

96201-900, Rio Grande - RS, Brasil. Telfono: +55 (53) 32338754, Fax: +55 (53)
32338645, E-mail: dqmsjk@furg.br
II
Unipampa, Ingeniera de Alimentos, PO 07, 96412-420, Bag - RS, Brasil.Email: engcarolinemoraes@yahoo.com.br
Yo

RESUMEN
C-ficocianina es un colorante azul natural extrado de Spirulina platensis,que tiene
muchas aplicaciones en las industrias alimentarias y farmacuticas. En este trabajo se
investig el efecto del pH y la temperatura sobre la adsorcin de C-ficocianina en dos
diferentes resinas de intercambio inico (DEAE Streamline Streamline y Q XL) para la
cromatografa de adsorcin en lecho expandido. Adems, se evaluaron la cintica y la
isoterma de adsorcin. Se alcanz el equilibrio de la matriz Q XL despus de 60
minutos, mientras que para DEAE slo se alcanza despus de 140 min. C-ficocianina
mostr el coeficiente de particin ms alta a pH 7,5 para ambas resinas a 25 C. La
isoterma de adsorcin de C-ficocianina fue muy bien representado por el Langmuir,
Freundlich y modelos de Langmuir-Freundlich, donde los valores estimados
paraQ m y Kd obtenidos por la isoterma de Langmuir fueron, respectivamente, 33,92
mg.mL -1 y 0.123 mg. ml -1para DEAE, y 28,12 mg.mL -1 y 0.082 mg.mL -1 para la
matriz Q XL. A cooperatividad negativa se observ para la unin cuando se utiliz la
matriz Q XL C-ficocianina, mientras que la cooperatividad era puramente independiente
usando la matriz de DEAE.
Palabras clave: adsorcin; C-ficocianina; Isoterma de Freundlich; Los parmetros
cinticos; Isoterma de Langmuir.

INTRODUCCIN
Los ficobiliprotenas son pigmentos fotosintticos presentes en cianobacterias,
responsables de alrededor del 50% de la luz captada por estos microorganismos
(Santiago-Santos et al., 2004). Una de las ficobiliprotenas ms interesantes para la
comida (Yoshida et al., 1996) y cosmtico (Cohen, 1986) industrias es C-ficocianina, su
aplicabilidad se basa en el hecho de que se puede utilizar como un colorante azul
natural en estos sectores como un sustituto de colorantes sintticos, que son
generalmente txicos o de otra manera insegura (Moraes et al, 2011b;.. Minkova et
al, 2003; Arad y Yaron, 1992).

De las diversas fuentes existentes de este tinte natural, la cianobacteria Spirulina

platensis merece una atencin especial, ya que C-ficocianina puede constituir hasta el
20% de la fraccin proteica (Vonshak, 1997). C-ficocianina est formado por
dos y subunidades de protenas diferentes de 17.000 y 19.500 Da,
respectivamente, con un cromforo bilin unido a la subunidad (a84) y dos a la
subunidad (b84, B155) (Turner et al., 1997). Patel et al. (2005) encontraron que la
masa molecular de esta biomolcula extrado deSpirulina sp. era 112 kDa.
Adems de su potencial para su uso en alimentos y cosmticos, los estudios han
demostrado que el C-ficocianina tiene antioxidante (Bhat y Madyasatha, 2001), antiinflamatorio y propiedades antitumorales (Reddyet al., 2003), as como actuar como
una estimulador del sistema inmune, aumentando el nmero total de leucocitos, cuya
funcin principal es mantener la salud de los rganos del cuerpo y proteger contra el
cncer y lceras (Madhyastha et al., 2006). Adems, esta protena se ha informado de
inducir la apoptosis en algunas clulas de carcinoma (Roy et al., 2007) y las clulas
mieloides crnicas humanas de leucemia (Subhashini, 2004).
La propiedad fitoteraputicos presentado por este producto requiere un alto nivel de
pureza, logrado a travs de diversas tcnicas de purificacin, que presentan un costo
elevado. Uno de los procesos aplicados en la purificacin de protenas se basa en
tcnicas cromatogrficas tales como cromatografa de intercambio inico de lecho
expandido (EBIEC). La adsorcin en lechos expandidos permite a las protenas pueden
recuperar directamente a partir de preparaciones de clulas disgregadas, sin la
necesidad de la eliminacin previa de los slidos en suspensin, que normalmente
resultar en la obstruccin de los lechos de relleno. La aplicacin de esta tcnica reduce
en gran medida la complejidad de procesamiento aguas abajo mediante la eliminacin
de ciertas etapas de centrifugacin, dilisis, precipitacin, sistema acuoso de dos fases
y filtracin en gel, resultando en la reduccin de costes y la simplificacin del proceso
de purificacin y recuperacin del bioproducto (Chase, 1994 ).
Sin embargo, hay algunos factores que son crticos para el xito del producto,
incluyendo la eleccin correcta de adsorbente, junto con un diseo cuidadoso del
aparato en el que se realiza la separacin.
El EBIEC hace uso de adsorbentes tales como resinas de intercambio de iones, que
adsorben protenas como resultado de interacciones inicas entre grupos cargados en
la superficie de la protena y los grupos inicos con cargas opuestas en el
intercambiador de iones (Chase, 1994). El pH es capaz de promover cambios en la
fuerza inica mientras que la temperatura afecta a la estructura espacial de la
protena, por lo que estos son parmetros importantes en el estudio de la cintica de
adsorcin de un compuesto interesante.
En un estudio de adsorcin, es esencial para determinar el modelo que describe la
isoterma de adsorcin en cuestin (Dotto et al., 2013). Las isotermas de adsorcin son
curvas que describen la adsorcin de un soluto por los slidos a una temperatura
constante. Una isoterma de adsorcin se muestra la cantidad de soluto adsorbido por
la superficie adsorbente como una funcin de la concentracin de equilibrio del
soluto. Las isotermas encontrado ms comnmente para la adsorcin de bioproductos
son los Freundlich, Langmuir, modelos lineales Langmuir-Freundlich y. La tcnica
utilizada para crear los datos de adsorcin es, en principio, muy simple, ya que una
cantidad conocida de soluto se aade a un sistema que contiene una cantidad conocida

de adsorbente.Se supone que la diferencia entre la cantidad aadida y que permanece

en solucin se adsorbi sobre la superficie adsorbente (Alleoni et al., 1998).
La seleccin de las condiciones de adsorcin C-ficocianina es un paso importante para
la purificacin adicional usando tcnicas EBIEC, ya que los aumentos en la adsorcin
del compuesto por el intercambiador de iones de plomo a reducciones en los costes del
proceso debido a la disminucin de las prdidas y el uso de volmenes reducidos de la
producto de destino y resina.
Hay una falta de estudios relacionados con el comportamiento de C-ficocianina durante
su adsorcin sobre resinas de intercambio inico en un lecho expandido. Silveira et
al. (2008) estudiaron los efectos del pH y la temperatura sobre el coeficiente de
particin, y determin la isoterma de adsorcin en las mejores condiciones evaluadas
para la adsorcin de C-ficocianina sobre la resina de intercambio inico Q-Sepharose
FF, una resina ampliamente utilizado y de gran xito aplica en lechos fijos. La adsorcin
en una resina de lecho expandido de Streamline DEAE fue estudiado por Bermejo et
al. (2006), Ramos et al. (2010), Ramos et al. (2011) y Bermejo y Ramos (2012), la
obtencin de las isotermas de adsorcin para el crudo C-ficocianina y / o un extracto
purificado para obtener el parmetro Q m. En estos estudios el comportamiento cintico
no se evalu y el pH y la temperatura no se optimizaron para una mejor adsorcin.
De acuerdo con los aspectos mencionados anteriormente, y teniendo en cuenta la
importancia de un anlisis de los datos de equilibrio en el desarrollo de las ecuaciones
que se pueden utilizar para el diseo de modelos de adsorcin y la eleccin de la mejor
adsorbente, el objetivo de este estudio fue investigar la efectos de los parmetros de
proceso - temperatura y pH - en la adsorcin de C-ficocianina en las resinas de
intercambio inico Streamline Q XL y DEAE Streamline para lechos expandidos, as
como la verificacin de las condiciones de equilibrio tpicos para la adsorcin de Cficocianina Onto intercambio inico resinas.

MATERIAL Y MTODOS
Preparacin del extracto crudo y Cuantificacin
La Spirulina platensis cianobacteria fue cultivado y mantenido en exteriores
fotobiorreactores en condiciones no controladas en el sur de Brasil. Durante estos
cultivos, el agua fue suplementado con 20% medio sinttico Zarrouk (Costa et
al., 2000). Al final del cultivo, la biomasa se recuper por filtracin, y despus se sec,
congelado y se moli a un dimetro de partcula de entre 0,106 y 0,125 mm
(Moraes et al., 2010).
La extraccin de C-ficocianina de la biomasa se llev a cabo de acuerdo con Moraes et
al. (2010), que usa agua como disolvente extractor a una velocidad de 0,16 g: 1 ml
(biomasa en polvo: extractor disolvente). La concentracin de C-ficocianina (C - FC, la
ecuacin (1)) se calcul como se describe por Bennett y Bogorad (1973) con pocas
modificaciones en las densidades pticas.

Adsorbentes
Se estudiaron dos adsorbentes adecuados para su uso en lechos expandidos para la
adsorcin de C-ficocianina.Estos adsorbentes consistan en una matriz macroporosa de
agarosa con un ncleo de cuarzo. Uno de los adsorbentes, Streamline DEAE (GE
Healthcare) es un intercambiador aninico dbil, siendo el grupo funcional -OCH 2 CH 2 -N + (C 2 H 5) 2 H. El otro adsorbente, Streamline Q XL (GE Healthcare) es
un intercambiador aninico fuerte, con un amonio cuaternario como grupo funcional. El
rango de pH de trabajo de ambos intercambiadores es entre 2 y 13 (Amersham
Biosciences, 2002). Estas resinas pueden promover diferentes grados (2-3 veces) de
expansin del lecho.
Efecto del pH sobre el coeficiente de particin
Las pruebas se llevaron a cabo en un reactor de mezcla termosttica a 25 C, con
agitacin mecnica durante 200 min como se muestra en la Figura 1 .

En este sistema, se aadi 30 ml de extracto C-ficocianina con una concentracin de Cficocianina inicial fijo a 3 ml de resina de intercambio inico (Streamline Q XL o
Streamline DEAE) pre-equilibrada en tampn fosfato 0,025 M de sodio en el pH de la
estudio. El pH del extracto C-ficocianina se ajust a los siguientes valores de pH (5,0,
5,5, 6,0, 6,5, 7,0 y 7,5), de acuerdo con el rango donde el C-ficocianina se considera
estable (Silva et al.,2009). Un espacio en blanco se prepar para cada prueba, en la
que se aadi el C-ficocianina en el pH bajo estudio para el sistema sin la resina de
intercambio de iones. Se tomaron muestras a intervalos predeterminados de tiempo
(0, 2, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 60, 80, 100, 140, 180 y 200 min), el clculo de la
concentracin de C-ficocianina segn la ecuacin (1). Los experimentos se llevaron a
cabo por duplicado.

Basado en las concentraciones iniciales y finales de C-ficocianina libre (no adsorbido)

en la fase lquida (C *), la concentracin de equilibrio de C-ficocianina adsorbido sobre
la fase slida (q *) se puede calcular, obteniendo as la particin coeficiente (f), que
indica la fraccin de protena adsorbida en el equilibrio. El coeficiente de particin se
calcula de acuerdo con Harsha y Furusaki (1994) (Ecuacin (2)):

Efecto de la temperatura sobre el coeficiente de particin

Despus de establecido el tiempo de equilibrio y el mejor pH de adsorcin C-ficocianina
(fijada en 7,5), se estudi el efecto de la temperatura sobre los coeficientes de
particin (5, 15 y 25 C) en los reactores de mezcla con agitacin orbital (200
rpm). En este sistema, se aadi 30 ml de extracto C-ficocianina con una
concentracin de C-ficocianina inicial fijo a 3 ml de resina de intercambio inico
(Streamline Q XL o Streamline DEAE) pre-equilibrada en tampn fosfato 0,025 M de
sodio a pH 7,5. Un espacio en blanco se prepar para cada prueba, en la que se aadi
el C-ficocianina a la temperatura bajo estudio para el sistema sin la resina de
intercambio de iones. Se tomaron muestras a 0 y 200 min. Se calcularon las
concentraciones de C-ficocianina y los coeficientes de particin como se muestra en las
ecuaciones (1) y (2), respectivamente. Los experimentos se llevaron a cabo por
triplicado.
Isotermas de adsorcin
Los experimentos utilizados para determinar la isoterma de adsorcin en equilibrio se
llevaron a cabo en un sistema discontinuo con agitacin orbital que contiene resina
pre-equilibrada de intercambio inico (Streamline Q XL o Streamline DEAE) y el
extracto C-ficocianina con diferentes concentraciones iniciales a pH 7,5 y 25 C y se
incub a 200 rpm durante 200 min. Despus de este periodo se recogieron las
muestras para determinar la concentracin C-ficocianina. Los experimentos se llevaron
a cabo por triplicado.
Las isotermas de adsorcin se pueden describir en muchas formas matemticas,
algunos de los cuales se basan en un modelo fsico simplificado de adsorcin y
desorcin, mientras que otros son puramente emprica y destinado a correlacionar los
datos experimentales. Varios ecuaciones de isotermas, tales como los modelos de
Langmuir, Freundlich y Langmuir-Freundlich, se han utilizado para describir las
caractersticas de equilibrio de adsorcin. Si la adsorcin de C-ficocianina sigue el
modelo de Langmuir, el proceso de adsorcin se puede expresar como:

donde Q m representa la capacidad mxima de unin de la resina (mg.mL -1) y K d es la

constante de equilibrio Langmuir (mg.mL -1), que es la disociacin efectiva constante
que representa la relacin entre la desorcin y adsorcin. El modelo propuesto se basa
en una superficie ideal y predice que la superficie de adsorcin es energticamente
ideales (Barboza et al., 2002).

Por otro lado, si la adsorcin de C-ficocianina sigue el modelo de Freundlich, la

isoterma puede ser descrito como sigue:

donde K f y n son las constantes fsicas de Freundlich relacionados con la capacidad de

adsorcin y la intensidad de adsorcin del adsorbente, respectivamente.
Modelo de Langmuir-Freundlich (Ec. 5), propuesto por Sips (1948), es una forma
combinada de modelos de Langmuir y Freundlich y tiene tres parmetros: Q m es la
capacidad mxima de adsorcin de la monocapa; KdLF es la constante de disociacin
aparente; y n LF es el coeficiente de Langmuir-Freundlich que indica la presencia o
ausencia de cooperatividad.

El Freundlich, Langmuir y los modelos de Langmuir-Freundlich aplican utilizando un

mtodo de regresin no lineal se utiliza para ajustar los datos experimentales de
equilibrio, y el coeficiente de determinacin (R)utilizados para analizar el ajuste de
cada modelo. Los parmetros de los modelos se estimaron mediante el mtodo de
regresin no lineal de las expresiones modelo.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Efectos del pH en el Coeficiente de Particin
El coeficiente de particin se correlaciona la cantidad de compuesto de destino que
migra de una fase a otra. En el presente caso, el coeficiente de particin correlaciona la
cantidad de C-ficocianina presente en la fase slida, o se adsorbe sobre la resina, con
la cantidad de la misma bioproducto libre en la solucin en el equilibrio.
La Figura 2 muestra la variacin en la concentracin de C-ficocianina en la fase lquida
a los diferentes valores de pH durante el perodo de tiempo estudiado. Se puede
observar que se alcanz el equilibrio despus de 60 minutos para todos los valores de
pH estudiados usando la resina Streamline Q XL ( Figura 2b ), mientras que con la
resina DEAE Streamline ( Figura 2a ), el equilibrio se alcanza solamente despus de
140 minutos. Los ensayos llevados a cabo sin la adicin de cualquier resina mostraron
que no haba desnaturalizacin C-ficocianina durante el perodo de tiempo estudi en
cualquiera de los valores de pH de trabajo. El tiempo necesario para alcanzar el
equilibrio para la adsorcin de C-ficocianina en la resina DEAE Streamline en los
diferentes valores de pH fue muy similar a la encontrada por Silveira et al. (2008),
cuando se alcanz el equilibrio despus de 150 min para la adsorcin de C-ficocianina
en la resina de flujo rpido Q Sepharose utilizado para el lecho fijo.
La Figura 3 muestra el comportamiento del coeficiente de reparto con la variacin en el
pH para la adsorcin de C-ficocianina en las resinas DEAE Streamline Streamline y Q
XL. Los valores del coeficiente de particin ms bajos se obtuvieron en el valor ms
bajo de pH estudiado, es decir, a pH 5. La estructura de C-ficocianina incluye una parte

de la protena, y por lo tanto la carga neta de la biomolcula superficie pueden variar

de acuerdo con el valor del pH circundante. Cuando por encima de su pI (punto
isoelctrico) la biomolcula se carga negativamente. Por otra parte, cuando el pH est
por debajo de su pI la biomolcula se carga positivamente. El punto de C-ficocianina
isoelctrico es de alrededor de 4.6 a 5.2 (Santiago-Santos et al, 2004;.. Abalde et
al, 1998), y por lo tanto el extracto utilizado en este estudio fue cargado
negativamente y los adsorbentes eran aninico. Por lo tanto, cuando C-ficocianina se
puso en contacto con el adsorbente, el enlace buffer-adsorbente formado era ms dbil
que el enlace C-ficocianina-adsorbente, lo que resulta en un proceso de
adsorcin. Cuanto mayor sea el valor de pH, mayor es la carga negativa neta en la
biomolcula, resultando en altos coeficientes de particin, como se muestra en la
Figura 3 .

La variacin de los coeficientes de particin en la resina Streamline DEAE fue modesto

en comparacin con el que en la resina Streamline Q XL, mostrando que el pH tena
slo una ligera influencia sobre la adsorcin sobre esta resina. En el estudio llevado a
cabo por Silveira et al. (2008), tambin se midi la influencia del pH sobre el
coeficiente de reparto a un pH de 8,0 y 9,0 y, aunque el coeficiente de particin fue
ligeramente mayor a pH 8,0 que a pH 7,5, los autores informaron que C-ficocianina no
era muy estable a un pH de 8.0. Es de inters limitado para llevar a cabo estudios de
adsorcin donde hay una prdida de actividad biolgica de la protena.Silva et
al. (2009) reportaron que la concentracin de C-ficocianina disminuy a 70% de su
valor inicial a pH 8,0 a temperatura ambiente y, por esta razn, los valores de pH por
encima de 7,5 no fueron incluidos en el presente estudio. Los mayores coeficientes de

reparto se obtuvieron a pH 7,5 para ambas resinas y por lo tanto este pH fue elegido
para seguir trabajando.
Efecto de la temperatura sobre el coeficiente de particin
Los coeficientes de particin que se encuentran en el intervalo de temperatura
evaluados se muestran en laTabla 1 .

La adsorcin ms bajo C-ficocianina se produjo a la temperatura ms baja (5 C) para

ambas resinas, mientras que las adsorciones C-ficocianina en 15 y 25 C para
ambas resinas eran iguales. Por lo tanto, la temperatura de 25 C fue elegida para los
siguientes experimentos con dos adsorbentes, ya que la eleccin de esta temperatura
reducira los costes de refrigeracin durante la purificacin en una escala mayor en una
columna de lecho expandido. Adems, segn Sarada et al. (1999) y Silva et al. (2009),
C-ficocianina es estable a esta temperatura y pH.
Isoterma de adsorcin
Un anlisis de los datos de equilibrio es importante para desarrollar una ecuacin que
puede ser utilizado para propsitos de diseo. En este estudio, tres modelos de
adsorcin no lineales clsicos, Langmuir, Freundlich y Langmuir- Freundlich, fueron
empleados para describir la adsorcin de equilibrio C-ficocianina.
El modelo de Langmuir se refiere a la sorcin monocapa sobre superficies que
contienen un nmero finito de sitios idnticos, lo que significa que los sitios de unin
de los adsorbentes son idnticos, y la protena molcula diana slo se une a los sitios
de unin (Rozie et al., 1991). Otros supuestos tambin se hacen para el modelo de
Langmuir, es decir, reaccin reversible y no hay interaccin entre las especies
adsorbidas (Nie et al., 2007). Por esta razn el modelo de Langmuir presume de
adsorcin homognea.
La ecuacin de Freundlich es una relacin emprica, mediante el cual se supone que la
energa de adsorcin de una protena cuando la unin a un sitio sobre un adsorbente
depende de si o no los sitios adyacentes ya estn ocupadas.
La isoterma de Langmuir-Freundlich es un simple generalizacin de las dos isotermas
(Sips, 1948). Por analoga con la protena - mltiples interacciones de ligando, se ha
sugerido que este isoterma sirve para modelar cooperatividad de adsorcin. Como la
ecuacin tiene tres trminos de ajuste, es mucho mejor para la aproximacin de
adsorcin de una naturaleza heterognea y explicar cooperatividad de adsorcin. Para

que no interactan, sitios puramente independientes, el valor de n =

1 LF. Cuando n LF> 1, se sugiere cooperatividad positiva, mientras que cuando
0 <n LF <1 cooperatividad negativa en el proceso de unin se indica. El valor den LF por
lo tanto se puede emplear como una ciente coef emprica, que representa el tipo y el
grado de cooperatividad presente en la interaccin de unin (Sharma y Agarwal,
2001).
La Figura 4 muestra los ajustes a los modelos de Langmuir, Freundlich y LangmuirFreundlich de las isotermas de adsorcin C-ficocianina obtenidos en las resinas DEAE
Streamline Streamline y Q XL.
Tabla 2 muestra las constantes de adsorcin de Langmuir, Freundlich y LangmuirFreundlich, con sus respectivos coeficientes de determinacin, obtenidos para las
isotermas de C-ficocianina a pH 7,5 y la temperatura ambiente (25 C), cuando
adsorbido sobre las resinas DEAE Streamline Streamline y Q XL .

Analizando el modelo de Langmuir, K d es el coeficiente de disociacin del soluto complejo adsorbente, que representa la afinidad entre el soluto y los adsorbentes
(Lan et al., 2001). La evaluacin de las constantes de isoterma de Langmuir ( Tabla 2 )
se puede concluir que la matriz Q XL muestra ms afinidad para la adsorcin de Cficocianina de la matriz de DEAE. El valor de Q m para el adsorbente Q XL (28,12
0,10 mg.mL -1) fue menor que para el adsorbente DEAE (33,92 0,27 mg.mL -1), lo que
probablemente se deba a que otros compuestos cargados negativamente vinculados a
primera el grupo funcional antes de C-ficocianina.
Silveira et al. (2008) estudiaron la adsorcin de la C-ficocianina de Spirulina
platensis sobre la resina de intercambio de iones Q Sepharose Fast Flow en un lecho
fijo y los valores obtenidos para Q y m K d de 22,67 mg.mL -1 y 0.031 mg.mL 1,
respectivamente. Los valores de Q m del mismo apoyo y la orientacin de producto Streamline DEAE y C-ficocianina, respectivamente - para diferentes cianobacterias son
variables y valores para Q m de 0,8 mg.mL -1, 1.6 (Bermejo et al., 2006) mg.mL 1
(Bermejo y Ramos, 2012), 1,74 mg.mL-1 (Ramos et al., 2010) y el 5,2 mg.mL 1
(Ramos et al., 2011) se puede encontrar en la literatura. As, la resina DEAE
Streamline mostr mximo de adsorcin 7 veces mayor que el valor mximo

mencionado anteriormente, lo que refleja la importancia de estudiar las condiciones de

adsorcin mejor, por ejemplo la influencia del pH y la temperatura. Adems, en el
presente estudio, se utiliz un extracto con una concentracin inicial mayor de Cficocianina, lo que conduce a un aumento en la capacidad de adsorcin del colorante
en la resina. Esto es debido al aumento en la fuerza motriz del gradiente de
concentracin, causado por el aumento de la concentracin de colorante inicial (Chiou
y Li, 2002).
Los valores para las constantes de Freundlich mostraron una absorcin relativamente
fcil de C-ficocianina en las resinas con alta capacidad de adsorcin. En particular
( Tabla 2 ), el valor de n, que est relacionada con la distribucin de las molculas
unidas sobre la superficie adsorbente, era mayor que la unidad, lo que indica que Cficocianina se adsorbe favorablemente en las condiciones experimentales examinados
para ambas resinas.
Para la isoterma de Langmuir-Freundlich, los valores m Q fueron 33,08 3,04 mg.mL 1
y 34,75 0,40 mg.mL-1 para DEAE y Q XL resinas, respectivamente. Para Q XL, el
valor Q m fue mayor que la obtenida cuando se utiliza el modelo de Langmuir (28,12
0,10 mg.mL -1). Por lo tanto, ambas resinas muestran capacidad similar para la unin
C-ficocianina. Otro parmetro importante de este modelo es n LF, que representa la
cooperatividad. Para Q XL haba cooperatividad negativa (0,66 0,01), mientras que
para DEAE adsorcin era puramente independiente (1,04 0,04). La cooperatividad
negativa implica la adsorcin heterognea debido a la interaccin lateral negativa entre
molculas adsorbidas C-ficocianina, donde la adsorcin de una molcula de Cficocianina desfavorece la adsorcin de otras molculas de Cficocianina. Cooperatividad depende de la naturaleza de la macromolcula y los
mltiples grupos funcionales, que por lo general producen mltiples interacciones
(Bresolin et al, 2010;. Sharma y Agarwal, 2001).
Las isotermas de adsorcin obtenidas para la captacin de C-ficocianina por Streamline
Q XL y Streamline DEAE, se encontr que de seguir las predicciones hechas por el
Freundlich, Langmuir y Langmuir-Freundlich modelos de manera satisfactoria dentro
del rango de concentracin estudiado. Esta observacin implica que tanto monocapa
bio-sorcin y condiciones de la superficie heterogneos pueden coexistir en las
condiciones experimentales aplicadas. Por lo tanto, la adsorcin general de Cficocianina sobre la resina de intercambio inico es un proceso complejo, que implica
ms de un mecanismo, tal como intercambio inico, complejacin superficie y la
atraccin electrosttica.
Los coeficientes de determinacin para los modelos de Langmuir, Freundlich y
Langmuir-Freudlich para la regresin no lineal, eran R> 0,94 ( Tabla 2 ),
caracterizando as el comportamiento de adsorcin como no lineal, como se explica por
los modelos. Es bien sabido que la isoterma de adsorcin de Freundlich da una
excelente representacin de muchos conjuntos de datos para concentraciones
moderadas, mientras que la ecuacin de Langmuir es mejor para bajas
concentraciones (Redlich y Peterson, 1959). Adems, Nie et al.(2007) informaron de
que una limitacin del modelo de Freundlich es que aumenta la cantidad de soluto
adsorbidos indefinidamente con la concentracin de soluto en la solucin.
En la literatura algunos autores, es decir, Silveira et al. (2008), Bermejo et al. (2006) y
Ramos et al. (2010), expresa sus resultados para la adsorcin de C-ficocianina con
este modelo, utilizando el modelo de Langmuir ms para fines de diseo. El modelo de

Langmuir tambin se utiliz para las isotermas de adsorcin llevadas a cabo en varios
tipos de resinas de intercambio inico para diferentes protenas de inters, tales como
la adsorcin de cido clavulnico en Amberlite IRA (Barboza et al., 2002) o de
amiloglucosidasa sobre celulosa DEAE ( Manera et al., 2008). Bresolin et al. (2011)
utilizaron el modelo de Langmuir para la cromatografa negativa por geles de agarosa
con ligandos basados en aminas inmovilizado (poli-L-lisina) para adsorbida albmina de
suero humano y el modelo de Langmuir-Freundlich para describir la isoterma de
adsorcin de inmunoglobulina G en el mismo adsorbente.
No se encontraron estudios que determinaron las isotermas en una matriz Q XL, a
excepcin de uno que estudi el uso de esta matriz para la adsorcin de C-ficocianina
por EBIEC de un extracto crudo en presencia de las clulas (Moraes et al., 2011a) .
La eleccin apropiada entre las dos resinas (Streamline DEAE o Streamline Q XL) para
la adsorcin de C-ficocianina usando la cromatografa de lecho expandido depender
del tiempo de equilibrio necesario, la selectividad adsorbente, el costo y re-uso de la
matriz y otros factores que deben ser evaluados. En este caso, los prximos pasos de
este trabajo evaluar la reutilizacin de estas resinas.

AGRADECIMIENTOS
Este trabajo fue apoyado por la Coordinacin de Perfeccionamiento de Personal de
Nivel Superior - CAPES, el e Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico
Tecnolgico - CNPq y la Fundao de Amparo Pesquisa do Estado do Rio Grande do
Sul - FAPERGS.

NOMENCLATURA

Referencias
Abalde, J., Betancourt, L., Torres, E., Cid, A. y Barwell, C., Purificacin y caracterizacin
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Enviado: 10 de diciembre 2012
Revisado: 28 de agosto 2013
Aceptado: 30 de enero 2014