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Espectroscopia RMN

Facultad de qumica y Biologa


Laboratorio de RMN
Juan Guerrero

Instrumento RMN
Un instrumento de RMN es bsicamente un radio FM grade y caro
Magneto - Normalmente son
superconductores.

Bo

generador de Frequencias - genera las


corrientes alternantes ( o) que inducen B1.

Magnet

B1

Registrador

Generador
de
Frequencias
Detector

Detector - Resta la frecuencia baja (una


frecuencia constante muy cerca del wo) a la
frecuencia de la salida. Es una frecuencia
ms baja y mucho ms fcil de tratar.
Registrador - plotter XY, osciloscopio,
computador, etc., etc.

Novedades
Imanes Super blindados Ultrashielded Plus
disponible desde 400 MHz hasta 600 MHz

4.2K

~2K

Lnea de 5 Gauss reducida comparado a los imanes


blindados estndar. (Factor 4 menos volumen).
Mas eficiencia contra las perturbaciones exteriores.
Estabilidad del campo aumentada.
Mas facilidades de ubicacin de los equipos de RMN.

Sondas ATMA
Otras versiones disponibles

Sonda Triple Inversa


1H/13C/15N

Sonda de Banda Ancha


inversa (BBI)

NMRCASE con 24
posiciones

Sondas: partes interiores


3
2

Interior 3!

Esquema de bobinas!

Vista superior!

Conceptos bsicos

Conceptos bsicos
RAYOS GAMMA

RAYOS X

UV

VISIBLE

INFRARROJO

MICROONDAS

ONDAS DE RADIO

LONGITUD
DE ONDA ()

10 -13

10 -11

10 -9

10 -7

10 -5

10 -3 10 -2 10 -1 10 0

10 2

10 3 metros (m)

FRECUENCIA ()

10 21

10 19

10 17

10 15

10 13

10 11 10 10 10 9 10 8

10 6

10 5 Hertz (Hz)

UV

IR

Grupos funcionales

RMN
Ncleos individuales

Espin Nuclear
Los nucleos tienen spin (I). (Carga que gira)
El momentum angular p es un vector
paralelo al eje de rotacion.
La magnitud del momento angular es
dado por el numero cuantico de espin I:

p = h/2 * I(I+1)

= p

: constante giromagntica,
especifica para

cada nucleo.

I (I + 1) h/2

e I determinan la magnitud del momento magntico

Espin Nuclear
En ausencia de un
campo magntico los
espines nucleares no
tienen orientacion

Ubicados en un campo magntico,


los
espines nucleares
se alinean en la
direccin del eje del campo magntico
aplicado.
El nmero de
orientaciones
posibles es
determinado por
el Numero
Cuntico de
espin I.

N
N
N
N
N
N

N
N
N

S
S
S

S
S

Bo

La figura muestra un diagrama con las orientaciones para


espn I=1/2. que genera dos orientaciones (MI= y - )

Espin Nuclear
No todos los nucleos se alinean paralelamente
El numero de nucleos con orientaciones
paralelas y antiparalelas es descrita por la
ecuacion de Boltzmann :

N
S
S

N
N
N

N
N
N
N
N
S
S
S
S

Nm = No

-Em / kT

Bo

Diferencia entre espines paralelos y antiparalelos:

-Em / kT
Nm: nmero de espines en el estadop m
No: nmero total de espines
Em: energia del estado m
k : constante de Boltzmann
T: temperatura

N+ - N- = No E /2kT, para Bo = 1 Tesla (43MHz) y un total


de N0= 2000000 de nucleos N+ = 1000001
N- = 999999

Espin Nuclear
m=-1/2

N
S

E = h Bo

S
N

N
S

Bo

Bo

m=1/2

Los niveles de energia se llaman


niveles de Zeeman

N
S

INFLUENCIA DE UN CAMPO MAGNTICO EXTERNO

Energa

Bo

Frecuencia de Larmor

Campo Magntico (B0)

Figure 1.3. Dependence on magnetic field strength B o of the separation of nuclear


energy levels (DE) for spin I= 1/2 and the relative populations of the energy levels
assuming one has approximately two million protons in the sample (a ridiculously
low number in reality).

NIVELES DE ENERGIA Y POBLACION DE ELLOS

RMN
IR

UV

Que se observa en un experimento de RMN ?


Niveles de diferente energa tienen
diferentes poblaciones

A
p 0

Poblacin en equilibrio (A)


Cuando se aplica un pulso de
radiofrecuencias se altera el sistema:

Poblacin fuera del equilibrio (B)

p = 0

Lo que se observa es el regreso de las


poblaciones a su estado de equilibrio :
B A

V=dP/dt

Niveles de Energa y Magnetizacin macroscpica:


Modelo Vectorial

m=-1/2

m=+1/2
E

B0

Efecto de un campo magntico externo B1 (radiofrecuencias):


z

Bo

Bo

Mo

Mo

Bo

z
x

B1

Mo
Bo

B1
y

i
Transmitter coil (y)

z
x

B1 off

(fuera de resonancia) y

o
z

Mxy

Mo

equilibrio..

x
y

o
y

Mxy

Efecto de un campo magntico externo B1 (radiofrecuencias):

dM
= M B1
dt

Mz

Bo

Bo

Pulso de RF
B1
x

Relajacin

Mo
y

RELAJACIN DE ESPN
z

Mzo

Excitacin

Relajacin

Mxy

(Pulso 90)
y
x

Mzo

y
x

y
x

RELAJACIN DE ESPN
z

Mzo
Excitacin
y

Mxy

(Pulso 90)

Mzo

Relajacin
y Procesos no radiativos

y
x

dn/dt=(n0-n)/T1

RELAJACIN
Relajacin LONGITUDINAL (Mz) T1= relajacin spin-red
Relajacin TRANSVERSAL (Mxy) T 2= relajacin spin-spin.

(Fourier Transformation)
= c/


FT


- 0
x

(Quadrature Detection)
Channel A

FT

Channel A + B

Channel B

FT

FID
En una muestra real se tienen muchos sistemas de espn con diferentes frecuencias
de resonancia a un campo B1 determinado (or carrier frequency). Puesto que el pulso
usado excita efectivamente todas las frecuencias en una muestra, la combinacin de
todas ellas es recibida en conjunto FID (Free Induction Decay)):

t1

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

La FT de esta seal entrega el espectro de RMN

0.70

0.80

0.90

1.00
sec

Secuencias del pulso: Notacin para la secuencia ms simple para registrar un espectro
1D normal.

Fuerza del
Campo de RF

p1

Duracin del pulso


(1-10 s

Tiempo de
Adquisicin (1-10s)
aq

d0

pl1

un espectro 1D normal

90y

Delay (relajacin)
( 1-10 s)
ns

d1

Mo
y

z
x

90y
pulse
y

Mxy
acquisition

Otros Ncleos

Espin Nuclear
I representa el spin total del ncleo, es mltiplo de y sus valores van de 0 a 6.
Si el n de masa (A) es impar I = n/2 con n : impar
Si A es par y Z es impar I = n
Si A y Z son pares, I = 0
Si I = 0 el ncleo no tendr momento magntico y no ser observable
por RMN
Dos de los ncleos ms importantes en qumica orgnica, 12C y 16O
tienen I = 0
Los ncleos con I = son dipolos magnticos
Los ncleos con I > no presentan simetra esfrica de carga

Ncleos cuadrupolares

Presentan mayores dificultades para su observacin por RMN

Frente a un campo magntico los


niveles de Zeeman levels se
desdoblan de acuerdo a :

El tipo de nucleo
Fuerza del campoo magnetico

1H

desdoblamiento

13C

desdoblamiento

campo

13C = 6,728 rad / G


1H = 26,753 rad / G
1H

is ~ 64 mas sensible que el 13C a causa de


Considerando la abundacia natural, el 13C (~1%) resulta 6400 veces menos sensible

Espin Nuclear
Ncleo

Abundancia Natural

1H

99.985 %

1/2

2H

0.015 %

12C

98.9 %

13C

1.1 %

1/2

14N

99.63 %

15N

0.37 %

1/2

16O

99.76 %

17O

0.04 %

5/2

18O

0.2 %

31P

100 %

1/2

Basics of NMR Spectroscopy



Numero Cuantico de Espin 0
activos

nucleos magneticamente

e.g. 1H, 13C, 15N, 19F, 31P (I = 1/2)

Se observan a diferentes frecuencias (separadas )


detectar un nucleo a la vez
15N

13C

31P

19F

1H

Espectros tradicionales

1H

desdoblamiento

13C

desdoblamiento
campo

Reproducido de Volhardt, Organic Chemistry, 3 Ed, 1999

APANTALLAMIENTO NUCLEAR
Nube electrnica circulante
bajo la influencia de Bo

Ncleo

Bncleo = Bo Belectrones
Campo magntico externo, Bo

Campo local inducido, B


opuesto a Bo en el ncleo

B es proporcional a Bo ( B = Bo )
y del orden de 104-105 veces ms pequeo

B = Bo B
Por lo que:

B = Bo (1 )

Bo
2

(1 )

Sample: Strychnine
Solvent: CDCl3
Spectrometer: AVANCE 400
Probehead: Inverse Broadband with
z-Gradients
Experiment:
Conventional 1H spectrum
Pulse program: zg30 (
Pulse Diagram)
Experiment Time: 50 seconds
Details: AVANCE Tutorial
Acquisition: Advanced use

1.276
1.240

4.147
4.129
4.111
4.093

5.315

7.322

Muestra:1,RMN-1H, Lab RMN,FQyB, USACH

1.30

NAME
EXPNO
PROCNO
Date_
Time
INSTRUM
PROBHD
PULPROG
TD
SOLVENT
NS
DS
SWH
FIDRES
AQ
RG
DW
DE
TE
D1
TD0

1.25 ppm

ppm

4.1

=======
NUC1
P1
PL1
SFO1
SI
SF
WDW
SSB
LB
GB
PC

5.0

4.5

4.0

3.5

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

ppm

0.03

5.5

3.00

6.0

3.05

6.5

1.97

7.0

0.32

0.16

7.5

APANTALLAMIENTO NUCLEAR

!! B !!

Bo = 2.1 Teslas

(1H resuena a 90 MHz)

320 Hz
480 Hz

90.000.480 Hz
Reproducido de Volhardt, Organic Chemistry, 3 Ed, 1999

90.000.320 Hz

APANTALLAMIENTO NUCLEAR

Ej.: ClCH2OCH3

ClCH2OCH3
Bo (T)

90.000.480 Hz

90.000.320 Hz

Problema: nmeros enormes


Solucin:

trabajar con la diferencia


respecto a una referencia
(seal ref)

Para Bo = 2.1 T o = 90.000.000 Hz


480 / 90.000.000 = 5.33 x 10-6
Para Bo = 4.2 T
o = 180.000.000 Hz
960 /180.000.000 = 5.33 x 10-6

2.1

480 Hz

4.2

960 Hz

320 Hz
640 Hz

Problema: dependencia de de Bo
Solucin: dividir por o ( aparato)
(seal ref)
o
Problema: nmeros muy pequeos
Solucin: multiplicar por 106 (ppm)
(seal ref)
106
=
o

FACTORES QUE AFECTAN A



1

1 - Grado de sustitucin
2 - Electronegatividad del sustituyente
3 - Distancia del sustituyente
4 - Presencia de dobles y/o triples enlaces
5 - Formacin de puentes de hidrgeno
6 - Conjugacin
7 - Otros factores

3.0

1.06

1.81 3.47

ClCH2 CH2 CH2 CH3

Butano

Ej.: CH3CH2CH2Br

CH2
2.5

2.0

1.5

CH3
1.0

(ppm)

El efecto del sustituyente disminuye


rpidamente con la distancia

FACTORES QUE AFECTAN A



Efecto de las corrientes paramagnticas de
los electrones

alquenos

alquinos

alcanos



Blocal

Blocal

Blocal

Blocal

Blocal

Blocal

Blocal

Blocal

ALQUENOS

ALQUINOS
Campo externo, B0

Campo externo, B0

FACTORES QUE AFECTAN A



Ejemplo

5.9

5.9

H 9.3

7.3
-2.9

Ciclohexa1,3-dieno

Benceno
[18]-Anuleno

DESPLAZAMIENTO QUMICO

COOH
ArOH

ROH
RNH
RCHO
ArH
C=CH

CCH

COCHn

ArCHn

C=CHCHn
OCHn

10

Aromtico

5
Olefnico

HalCHn
NCHn

TMS
CCHn
2

Aliftico

Multiplicidad de Spin

Ejemplo:

OH
OAc

a
b

c
Acido acetilsalcilico (AAS)
8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

7.0

(ppm)

8.2

8.0

7.8

7.6

/ppm

7.4

7.2

7.0

ACOPLAMIENTO ESCALAR

Consideremos dos protones (A y X)


qumicamente diferentes
y cercanos en la molcula (n de
enlaces entre ambos 3).

HA HX

AX
AX

AX

AX

A2

A1

R1

HA HX
R1

R2

R3

R4

R2

R3

R4

HA HX
R1

R2

R3

X2

R4

X1

HA HX

El espectro sera:

JAX = JXA

JAX

J = constante de acoplamiento.
Se mide en (Hz)

(frecuencia)

Doblete

R1

R2

R3

JXA

Doblete

J es independiente del campo magntico aplicado


(mismo valor en cualquier aparato)

R4

PATRONES DE ACOPLAMIENTO
FRAGMENTOS MOLECULARES TPICOS
1

X
A
CH CH2

Sistema AX2

X
3

X
A
CH CH3

Sistema AX3

Sistema A2X3

A
CH2

X
CH3

Sistema AX6

X
A
CH (CH3)2

Qu ocurre en el espectro de carbono 13 1H-13C?


Ej.: Anin formiato

99%

O
12
1

No produce seal

(12C presenta I = 0)

O
1

JH,C

Espectro 1H-RMN

13
1

1%
Acoplamiento 1H -13C

JC,H

Espectro 13C-RMN

Experimentos Multipulso

13

Inversion recovery
T1 nos indica la relajacin de diferentes ncleos en una molcula, informando sobre su movilidad local. No

podemos medirla directamente en la seal del FID debido a que afecta la magnetizacion que no se detecta. We
use the following pulse sequence:
180y (or x)

90y

tD
si se analiza despus del pulso en :
z

180y (or x)

tD

Decaimiento de la seal bajo efecto de la relajacin longitudinal (T1), Efecto de diversos tD sobre la intensidad
del FID y de la seal despus de FT.

Inversion recovery (continued)


tD = 0

z
x

90y

tD > 0

FT

FT

90y

z
x

FT

tD >> 0

90y
y

Dependiendo del tD (delay) se puede obtener seales con la intensidad variable, que depende del tiempo de relajacin T1 del
ncleo (pico) que observamos.

Eco de Espin
la secuencia de pulso es:
90y

180y (or x)
tD

tD

Anlisis despus del pulso 90y :


z

tD

y
y

Desfase

tD

reenfoque

180y (or x)

Informacin obtenida

13

COSY

-C-C--

H H

C- C - C - N - C

HSQC

HMBC

H H H

C-C-C-N-C-C-

Resumen
Los nucleos poseen un espin que genera un campo
magnetico.
Debido al momento magntico el nucleo puede orientarse
frente a un campo magnetico generando un magnetizacion
llamada magnetizacin macroscopica (en z).
Esta magnetizacin puede ser perturbada por pulsos de
radiofrecuencias, creando un vector magnetizacion en el
plano x, y.
La magnetizacion rota en el plano x,y, induciendo un
voltage en el receiver coil!.
La seal inducida es procesada por FT (Fourier
transformation)