Los antibiticos y su guerra contra enterobacterias de

los alimentos.
RESUMEN
Esta investigacin se divide en dos partes; la primera consisti en el
aislamiento de coliformes fecales encontradas en los alimentos, y la segunda
tuvo como objetivo probar la resistencia de los coliformes a algunos antibiticos
para gram negativos.
Para llevar a cabo la primera etapa se realizaron tres muestreos de cuatro
alimentos en los que se elaboraron pruebas de aislamiento, primero de
coliformes totales, despus de coliformes fecales y posteriormente, de stos se
obtuvieron 10 cepas de la bacteria E. coli y 4 cepas de Klebsiella.
En la segunda etapa, de las cepas E. coli y Klebsiella obtenidas, se realizaron
pruebas de resistencia a antibiticos con un multidisco de 12 gram negativos.
El 100% de las cepas presentaron resistencia a la ampicilina y a la cefalotina y
en menor cantidad a otros antibiticos. A las cepas resistentes se les aplic la
prueba de resistencia con diferentes concentraciones (50, 10, 150, 250 y 500
g) de ampicilina, obteniendo nuevamente resistencia total por parte de E. coli;
sin embargo slo una cepa de Klibsiella present resistencia a dos
concentraciones (250 y 500 g).
Esta resistencia se debe a distintos factores como son: 1) el uso indiscriminado
de antibiticos, 2) las aguas contaminadas por los desechos de animales
engordados con antibiticos, dichas aguas son utilizadas para regar las
hortalizas de las cuales provienen los alimentos vendidos a las afueras de
Colegio de Ciencias y Humanidades Plantel Naucalpan.

4. INTRODUCCIN
4.1. Marco terico.
4.1.1. Bacterias Gram Negativas
Los tipos bacterianos se dividen en Gram positivas (cocos) y Gram negativas
(bacilos). Las bacterias Gram negativas son aquellas que no se tien de azul
oscuro o violeta por la tincin de Gram, pero s lo hacen de un color rosado
tenue, por lo que, se denominan Gram negativas. Esto es debido a que, en
medio de la membrana se localiza un espacio llamado periplsmico, relleno de
una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes
para la nutricin, que es donde esretenida la safranina, que le da el
caracterstico

color

rosado,(http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa, 2014).
4.1.2. Coliformes Totales
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn. Las
bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los
humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero
tambin estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, existiendo muchos
coliformes de vida libre, especialmente en suelos, semillas y vegetales (Merino
y Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).
Como mencionamos anteriormente, debido a que una gran cantidad de
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal; producto de
la contaminacin por heces fecales de humanos y de animales, por tanto son
indicadoras del grado de contaminacin del agua y los alimentos. (Merino y
Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).

Tabla 1.Clasificacin cientfica de las Coliformes

Reino:

Bacteria

Phyllum: Proteobacteria
Clase:

Gamma Proteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

El grupo coliforme est formado por los siguientes

gneros ms representativos:

es.wikipedia.org/wiki/Coliforme

Escherichia

(2013);

Klebsiella

Enterobacter

Citrobacter

Gal,

2010;Merino

Lssch, 2014.

Nota: No todos los autores incluyen al gnero

Citrobacter dentro del grupo coliforme.

4.1.3. Enterobacterias
Las enterobacterias forman parte de la familia
Enterobacteriaceae, bacterias Gram negativas que
contiene ms de 30 gneros (tabla 1) y ms de
100 especies. Los miembros de esta familia
presentan forma baciliar, recta o curva, con una
anchura

que

anchocolonizan
mucosas,

no

excede

los

habitualmente

especialmente

las

m de

0,5
las

diferentes
del

tracto

gastrointestinal y urinario, formando parte de la

microbiota, tanto de animales como del ser humano, por lo que tambin se
3

conocen como coliformes fecales, (Stanier, R. y col., 1992; Gal, 2010;

http://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacteriaceae, 2013).
4.1.4. Coliformes fecales
Los coliformes fecales son un grupo de bacilos con una estructura parecida a la
de una bacteria comn que se llama Escherichia coli, de ah su nombre: en
forma de coli. Este grupo incluyen bacterias en forma de bacilo cortos, gram
negativos, aerbicos o anaerbicos facultativos (viven en presencia del
oxgeno), son oxidasa negativo y tienen la capacidad de fermentar lactosa con
produccin de gas y cido lctico en 48 horas a una temperatura de
35C+2C,y dependiendo de la presencia de flagelos pueden ser mviles,
adems cuentan con la capacidad de producir toxinas. (Gal, 2010;Merino y
Lssch,2014).
La presencia de coliformes fecales es un indicador de contaminacin
bacteriana del agua y los alimentos, ya que se encuentran en gran nmero en
el tracto intestinal de humanos y animales, y permanecen por ms tiempo en el
agua y los alimentos que las bacterias patgenas (bacterias que causan
enfermedad) como Salmonella y Shigella, por lo que su presencia indica que
posiblemente

tambin

se

encuentren

organismos

patgenos.

Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en heces

fecales, estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella
(Cabrera y colaboradores, 2007).
4.1.5.Klebsiella
Klebsiella es una bacteria gram-negativa en forma de varilla y no mviles de la
familia Enterobacteriaceae.Esta se encuentra en la flora natural de los seres
humanos y animales,pero cuando estn fuera de su rea del intestino pueden
causar infecciones importantes en los seres humanos.
Entre todas las especies de Klebsiella, K. pneumoniae es una especie
ampliamente estudiada. Esta se puede encapsular, es decir, forma una capa de
polisacrido en la pared celular de la bacteria, adems de que puede sintetizar
ATP (trifosfato de adenosina) por respiracin aerbica, pero tambin puede
obtenerlo a partir de la fermentacin anaerbica. Por lo tanto, es un anaerobio
4

facultativo, puede ser tanto aerbica como anaerbica, dependiendo de la

situacin.

(http://microbiologia2a.blogspot.mx/2013/04/klebsiella-

pneumoniae.htmlMICROBIOOLOGIA Y PARACITOLOGIA, 2014).

4.1.6.Escherichia coli
La Escherichia coli o tambin llamada E. coli, es el principal organismoque se
encuentra en el intestino del ser humano y de los animales, por lo que, solo E.
coli tienen un origen especficamente fecal, pues estn siempre presentes en
grandes cantidades en las heces de los seres vivos de sangre caliente y rara
vez se encuentran en agua o suelo que no haya sufrido algn tipo de
contaminacin

fecal

(Goez,

Vzquez

Pea,

1999;http://es.wikipedia.org/?title=Escherichia_coli, 2014)
La E. coli se transmite a los seres humanos por medio del

consumo de

productos de carne picada cruda o poco cocida y alimentos contaminados con

heces fecales. En condiciones normales no causan ningn tipo de dao,
adems de ser necesaria para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo, debido a que, por ejemplo, aportan vitaminas del complejo B para el
ser humano. Sin embargo, algunas cepas por intercambio de material gentico,
han adquirido la capacidad de causar infecciones y provocar diarreas (Goez,
Vzquez y Pea, 1999;Armora. y Gmes,2012).
4.1.7. Resistencia a los antibiticos en coliformes fecales
El concepto de resistencia, indica que un medicamento disminuye su actividad
o efectividad en un individuo tras su uso prolongado. Cada vez que se utiliza un
antibitico aumenta la probabilidad de que cualquier individuo que no haya
tomado este antibitico, en el futuro pueda entrar en contacto con alguna
bacteria que presente resistencia
El proceso de seleccin natural que se presenta en bacterias, y especialmente
en Enterobacterias, es debido a que, estas al contener varios genes de
resistencia llamados plsmidos, provocan que al usar cualquier tipo de
antibitico, estos no puedan eliminar a los organismos(Trptico-Veterinario,
2007).

El problema de la contaminacin del agua y de los alimentos por parte de las

coliformes fecales, es su capacidad para desarrollar rpidamente resistencia a
los antibiticos. Se entiende por resistencia, el mecanismo mediante el cual la
bacteria puede disminuir la accin de los agentes antimicrobianos. Dicha
resistencia puede estar mediada por plsmidos o ser de origen cromosmico
(Fernndez y colaboradores, 2003).

Figura 1. El material gentico bacteriano se encuentra en una regin nucleoide, o

bien en segmentos cortos, que mutan con facilidad y altamente replicativos llamados
plsmidos. Hay segmentos de resistencia a los antibiticos que se conocen como R

Ciertas cepas de bacterias de una misma especie son resistentes a algunas

familias de antibiticos, esta resistencia les permite tener ventajas competitivas
con respecto a otras cepas,pudiendo sobrevivir en caso que se emplee un
antibitico. La aparicin de la resistencia en una bacteria como E. coli se
produce a travs de mutaciones (cambios en la secuencia de bases de
cromosoma) y por la trasmisin de material gentico extracromosmico
procedente de otras bacterias (Gal, 2010).

En el primer caso, la resistencia se trasmite de forma vertical de generacin en

generacin (reproduccin asexual, biparticin). En el segundo, la trasferencia
de genes se realiza horizontalmente a travs de plsmidos (reproduccin
parasexual. Ver figura No. 2). Los plsmidos son unidades de ADN
extracromosmico

que

se

autorreplican y que transportan su

propia estructura de replicacin,los
plsmidos

fundamental

tienen
en

la

un

papel

resistencia

antibitica de las enterobacterias

(Gal, 2010).esto ltimo no solo
permite

la

trasmisin

otras

generaciones, sino tambin a otras

especies bacterianas.
De esta forma una bacteria puede
adquirir la resistencia a uno o varios
antibiticos sin necesidad de haber
estado en contacto con estos (Fernndez y colaboradores, 2003;Gal, 2010).

4.2. Objetivo de la investigacin

4.2.1. General
Probar el grado de resistencia de E. coli y Klebsiellaaisladas en los alimentos,a12
antibiticos para Gram negativo.
4.2.2. Particulares
Determinar la presencia de Coliformes fecales en muestra de alimentos que se
expenden en la va pblica: sndwich, torta, cocktel y ensalada
Aislar E. coli y Klebsiella en cuatro muestras de alimentos: sndwich, torta,
cocktel y ensalada.
Realizar prueba de resistencia y sensibilidad a las cepas de E. coli y Klebsiella a
12 antibiticos, con base al dimetro del halo de inhibicin.
7

 Aplicar cinco distintas concentraciones de ampicilina a las cepas de E. coli y

Klebsiella que presentaron resistencia a los antibiticos.

4.3. Problema
En la actualidad algunos antibiticos son utilizados de manera indiscriminada
por dos causas principales: la automedicacin para combatir una infeccin de
tipo gastrointestinal, y el suministro de estos medicamentos para la engorda de
animales en las granjas. Los antibiticos no son retenidos por mucho tiempo en
el cuerpo de personas y animales, sino que son desechados en las heces
fecales, y estas a su vez, vertidas a las aguas residuales las cuales sirven para
riego en los cultivos de frutas y hortalizas.
Debemos tomar en cuenta que la mitad del contenido de los excrementos
contiene coliformes fecales, bacterias del coln que al estar en contacto con los
antibiticos presentes en el ambiente, desarrollarn resistencia a estos.
La problemtica radica en que las frutas y hortalizas regadas con estas aguas
residuales y que contengan coliformes resistentes lleguen a los mercados
locales, en nuestro caso, frutas y hortalizas compradas en el mercado o en el
supermercado, con las cuales se preparan los alimentos que se venden en los
puestos a las afueras de CCH-Naucalpan, y que estos contengan coliformes
resistentes. Que si se ingieren en ciertas cantidades por los alumnos pueden
provocar una infeccin, que al ser tratada con antibiticos, prdra ser ineficaz o
muy lento, debido a la resistencia que presentan frente a ciertos antibiticos,
por lo que, cantidad que antes se utilizaba de este medicamento, no surtira
ningn efecto contra estas bacterias resistentes, y se requerirn de mayores
concentraciones para eliminarlas y el tiempo para matarlas sera mayor.
Por lo que es de nuestro inters aislar coliformes fecales antibiticos en
alimentos que se consumen a las afueras de Colegio de Ciencias y
Humanidades Plantel Naucalpan y determinar su resistencia frente a ciertos
antibiticos.

5. DESARROLLO
El material que se utiliz para el proyecto de investigacin fue el siguiente:
Cristalera.

Equipo

-Agitadores

-Autoclave

-Cajas Petri

-Basculas

-Campanas Durham

-Incubadora

-Matraces

-Parrilla

-Morteros

-Estufa

-Pipeta
-Probeta
-Tubos de ensaye

Material
-Asas
bacteriolgicas
-Bolsas
-Cubre bocas
-Cuchillo
-Esptulas
-Encendedor

Medios de cultivo.
-Agua Peptonada
-Caldo Lauril
-Caldo Bilis Verde Brillante
-Agar EMB
-Agar Mac Conkey
-Agar Muller Hilton
-Agar Nutritivo

-Hisopos
-Guantes
-Gradillas
-Mecheros
-Pinzas
-Tapones

La preparacin y las diluciones de muestras de alimento para su anlisis

microbiolgico se realizaron de acuerdo a la Norma Oficial Mexicana. NOM110-SSA1-1994. Diario Oficial de la Federacin DV 11,16 de Octubre de 1995.
la cual consisti:

5.1. Obtencin de los diferentes tipos de alimentos.

La obtencin de las muestras de alimentos consisti en cuatro productos los
cuales fueron: torta, sndwich, cctel y ensalada. Estos productos se
compraron en los diversos puestos callejeros a las afueras del CCH Naucalpan.
Los alimentos se guardaron en bolsas de plstico para evitar la contaminacin
y para su traslado al SILADIN.
9

5.2. Macerado de los alimentos y obtencin de las diluciones.

Ya en el laboratorio, se tom una muestra de 10 g de cada alimento, tratando
de obtener la mayor cantidad de ingredientes
contenidos en los mismos. La muestra fue
colocada en un mortero y posteriormente
macerada a modo de que quedara lo ms
fragmentada posible.
El macerado se coloc en un matraz con 90 ml de agua peptonada, obteniendo
la primera dilucin 1x10-1. De esta primera
dilucin se tom 1 ml y se deposit en un tubo
de ensaye que contena 10 ml de agua
peptonada para obtener la segunda dilucin
10

1x10-2, de la cual se tom 1 ml y se agreg a otro tubo de ensaye que

contena 10 ml de agua peptonada, quedando as la tercera y ltima dilucin
1x10-3. Obtenidas las tres diluciones; 1x10-1, 1x10-2y 1x10-3,Estas fueron
introducidas a la incubadora por 48 horas a 37C.

5.3. Prueba presuntiva: Coliformes totales.

Tanto para la prueba presuntiva como para la prueba confirmatoria la
investigacin tomo como base la Norma Oficial Mexicana. NOM-112-SSA11994. Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del nmero ms
probable (NMP). Diario Oficial de la Federacin DV 14,19 de Octubre de 1995.
La cual consisti en lo siguiente:
Despus del tiempo transcurrido, de cada dilucin se tom 1 ml
de muestra y se coloc en 10 ml de caldo Lauril que contenan
una campanilla Durham, la cual sirvi para atrapar los gases que
se forman a partir de la actividad microbiana, siendo el principal
gas H2S. Por cada dilucin se realizaron dos repeticiones,
obteniendo un total de 24 tubos, que se colocaron a incubar por
24 horas a 37C.
Los tubos de caldo Lauril que presentaron formacin de gas (H2S), dentro de la
campanilla, nos indicaron que la muestra era positiva, y por lo tanto presentaba
coliformes totales.

5.4. Prueba confirmatoria: Coliformes fecales.

De los tubos que dieron positivo, se tomarontres asadas y se depositaron en
un tubo ensaye que contena caldo Bilis Verde Brillante y una campanilla de
Durham. Los tubos de ensaye fueron colocados en la incubadora por 24 horas
a 37C. Aquellos tubos en los que se observaron cambios de color, turbiedad y
formacin de gas H2S nos indicaron la presencia de coliformes fecales.

11

5.5. Aislamiento de enterobacterias: Klibsiellay E. coli.

Posteriormente,de las muestras positivas de coliformes fecales, se tomaron dos
asadas y se sembraron por el mtodo de estriado, para el aislamiento de
colonias en los agares EMB y Mac Conkey a 37C por 24 horas. (Bioxon,
1996)
Transcurrido el tiempo, y teniendo el desarrollo colonial,

se procedi a su

identificacin por medio de las caractersticas morfolgicas y de color que

presentaron las colonias aisladas (Ver tabla1 y 2).

Tabla 1. Caractersticas coloniales presentadas por Escherichia coliy Klebsiella en

medio EMB (Eosin Metil Blue).
MICROORGANISMOS
Escherichiacol

CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS

Elevadas o ligeramente convexas. De 2 a 3 mm de
dimetro. Presentando a la luz transmitida un centro azulnegro, a la luz reflejada con brillo verde metlico. Algunas
cepas no muestran brillo metlico. Poca tendencia de
desarrollo confluente.

Klebsiellasp

Colonias grandes de 4 a 6 mm de dimetro, elevadas y

mucoides con tendencia a unirse. Usualmente no presentan
brillo metlico. A la luz transmitida muestran un centro
grisceo caf y bordes claros.

Tabla 2. Caractersticas coloniales presentadas por Escherichia coli y Klebsiella en

medio Mac Conkey.
MICROORGANISMO
Escherichia coli

CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS

De rojas a rosadas. No son mucoides. Pueden rodearse de
un precipitado opaco de sales biliares.

Klebsiellasp

Grandes, rosadas, mucoides.

12

Una vez que se identificaron las colonias de E. coli y Klebsiella sp, se

preservaron en Agar Nutritivo para su posterior prueba de resistencia a 12
antibiticos para bacterias Gram-negativas

5.6. Pruebas de resistencia a 12 antibioticos para Gramnegativas

A las cepas de E. coli y Klibsiella sp que se preservaron en agar nutritivo se les
aplico un antibiograma (multidiscos) para determinar su resistencia o
sensibilidad a 12 antibiticos para bacterias Gram-negativas (ver tabla No 3).

Tabla 3. Concentracin mnima inhibitoria en microgramos (g), de 12 antibiticos

que se aplic a las cepas aisladas de E. coli y Klebsiella sp.

Antibitico

Concentracin

Antibitico

Concentracin

Amikacina (AK)

30

Gentamicina (GE)

10

Ampicilina (AM)

10

Netilmicina (NET)

30

Carbenicilina (CB)

100

Nitrofurantona (NF)

300

Cefalotina (CF)

30

Pefloxacina (PEF)

Cefotaxima (CTX)

30

Trimetoprim- (SXT)

25

Sulfametoxazol
Ceftriaxona (CROM)

30

Cloranfenicol (CL)

30

13

6. RESULTADOS
Los resultados obtenidos fueron los siguientes.

6.3. Prueba presuntiva: Coliformes totales.

Al

pasar

48

horas

una

temperatura 37 C se observ un
crecimiento

bacteriano

que

nos

indica la presencia de coliformes

totales, el cual se pudo constatar
por el enturbiamiento de las tres
diluciones

formacin

de

una

burbuja de gas (H2S) producida por

la fermentacin bacteriana en caldo lauril.
De las muestras positivas se determin a continuacin las coliformes fecales.

6.4. Prueba confirmatoria: Coliformes fecales.

A las coliformes totales se les
aplic pruebas con caldo Verde
Bilis Brillante para la confirmacin
de la presencia de coliformes
fecales a una temperatura de 37
por 48 horas.
Despus de este tiempo, aquellos
tubos que presentaron formacin
de gas en las campanas Durham, nos confirmaron la presencia de coliformes
fecales en los alimentos.
Los resultados obtenidos de las pruebas de coliformes totales y los coliformes
fecales, se vaciaron en una tabla para su fcil comprensin (ver tabla 4).

14

Tabla 4. de resultados que muestra los tubos positivos y negativos de coliformes

totales y coliformes fecales.
Tubos positivos.

Tubos negativos.

Caldo Lauril

26

Caldo Bilis Verde

23

Brillante

De acuerdo con los resultados que se muestran en la tabla de los tres

muestreos, se puede observar que en Caldo Lauril 26 tubos fueron positivos
para coliformes totales, y 3 tubos fueron negativos para estas bacterias(Ver
tabla 4).
Con respecto al Caldo Bilis Verde Brillante, tenemos 23 tubos dieron positivos a
coliformes fecales, mientras que 2 tubos no presentaron coliformes fecales (Ver
tabla 4).

6.5. Aislamiento de enterobacterias: Klibsiella y E. coli.

A las pruebas positivas de coliformes fecales se les coloc en Agar EMB y Mac
Conkey, con el fin de aislar a E. coli y a Klebsiella sp, las bacterias ms
representativas de las heces fecales.
De las 23 muestras que se colocaron en dichos Agares, 10 dieron para E.coli y
solamente 4 para Klebsiella sp, en Agar EMB y Mac Conkey, como lo podemos
ver en las imgenes siguientes.

Imgenes obtenidas de los medios de cultivo, donde se pueden observar las

colonias de E.coli y Klibsiella sp, en Agar EMB y Mac Conkey

15

Aislamiento por estriado de colonias de

Colonias de E.coli aisladas en Agar EMB,

E. coli en Agar EMB

con su caracterstico brillo verde brillante

Colonias de Klibsiella sp aisladas en Agar

EMB con en donde se puede observar el
color vino de las colonias.

Aislamiento por estriado de colonias de

Klebsiella en Agar Mac Conkey en donde
se observa su color rosado en este
medio

6.6. Pruebas de resistencia a 12 antibioticos para Gramnegativas

A continuacin a los aislamientos de E.coli y Klebsiella sp, se les aplic
pruebas de resistencia a 12 antibiticos, siendo los resultados presentados en
la tabla nmero 5.

16

Tabla 5.Rresultados que muestran los promedios de las medidas en centmetros (cm)
de los halos de inhibicin a 12 antibiticos para Gram-negativas
AK

AM

CB

CF CTX CRO CL

GE

NET NF

PEF SXT

1.91 R

0.58 R

2.17

2.51

2.37 1.66 2.01

2.22 2.18 1.80

Klebsiellasp 2.24 R

1.44 R

2.16

2.42

2.10 2.08 2.14

2.12 2.56 3.14

E. coli

En el caso de E.coli, esta present halos de sensibilidad mnimos de 0,58cm de

dimetro, siendo el halo de inhibicin mediano de 1,55 cm de dimetro,
mientras la sensibilidad ms alta present un halo de inhibicin de 2.51cm de
dimetro de sensibilidad, siendo en su totalidad las cepas resistentes a la
ampicilina y cefalotina ver imgenes.

17

En el caso de Klibsiella sp, el halo de inhibicin mnima fue de 1,44 cm de

dimetro, seguido de un dimetro de 2,29cm para un halo de tamao mediano.
Por ltimo, el halo en el que se obtuvo mayor sensibilidad fue de 3.14cm de
dimetro. Encontrando con esto, que E. coli present menores dimetros de
halos de inhibicin en comparacin con Klibsiella sp.
Con los resultados obtenidos de la resistencia que presentaron, tanto E. coli y
Klibsiella sp, a la ampicilina, se procedi a preparar concentraciones de sta,
para determinar hasta qu punto son resistentes a dicho antibitico. Tomando
en consideracin que la concentracin mnima inhibitoria es de 10g
(microgramos) y la mxima concentracin que se suministra a las personas es
de 500 miligramos. A continuacin se detallan las concentraciones que se
prepararon: 10g, 50 g, 100g, 250g, 500g
Es importante resaltar que la ampicilina vena en tabletas de 500 miligramos, por
ello, para hacer las diluciones, se coloc y se macer en un mortero con 10ml de
agua destilada, y posteriormente se realizaron las diluciones para obtener stas
concentraciones, tomando en cuenta la frmula c2=v1xc1/v2.
Los resultados obtenidos de esta prueba, se tiene que las cepas de E. coli fueron
resistentes a todas las concentraciones del antibitico ampicilina, mientras que slo
una cepa de Klibsiella sp present sensibilidad a 250 y 500g de ampicilina,
siendo las otras cepas resistentes a este antibitico. Como se puede ver en la imagen
inferior y en la tabla nmero 6.

18

Tabla 6. Resultados que muestran los promedios de las medidas (cm) de los halos de
inhibicin en las concentraciones de ampicilina.

No. de Muestra y

Concentracin de ampicilina en

Dimetro de los halos en

g (microgramos)

cm (centmetros)

35.Klebsiella

250

1.2

35 Klebsiella

500

2.4

Gnero

7. ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS

En las cuatro muestras de alimentos; Cocktel, sndwich, torta y ensalada, se
encontraron coliformes fecales, lo cual, como habamos hecho referencia en el
marco terico y problema, puede deberse a que estas hortalizas se regaron
con aguas residuales, por ejemplo, en una investigacin realizada por Vega y
colaboradores (2005), se encontraron altos niveles de contaminacin por
bacterias fecales en distintas hortalizas regadas con aguas residuales en la
delegacin de Xochimilco. Estos niveles sobrepasan los lmites permitidos para
cada tipo de hortaliza. En otro estudio que se llevo a cabo por Cabrera y
colaboradores en el 2007, en la presa Manuel Avila Camacho, se utiliz esta
agua para riego de los cultivos en el valle de Tecamachalco importante sitio
productor de verduras que surten al mercado poblano. En esta se encontr una
gran cantidad de residuos fecales humanos y animales, detectndose
coliformes fecales, siendo la Escherichia sp, la bacteria dominante de estas
aguas residuales, que son fuente potencial de una amplia variedad de
enfermedades gastrointestinales bacterianas, que pueden llegar a impactar en
la salud de la poblacin consumidora de estos productos agrcolas si no son
desinfectados eficientemente.
Las coliformes fecales que ms se aislaron en las muestras de alimento, fueron
Escherichia coli y en menor cantidad Klebsiella sp., lo que indica, y volvemos a
19

reiterarlo, contaminacin por heces fecales. El por qu, E. coli se encontr en

mayor cantidad en los aislamientos es debido a que esta bacteria tienen un
origen especficamente fecal, est se encuentra siempre presentes en grandes
cantidades en las heces de los seres vivos de sangre caliente, y por lo tanto
tambin es la bacteria ms importante presente en el coln, tal como lo
mencionan tambin Lpez (1999) y Lsch (2006), por lo que se considera que
la deteccin de esta coliforme fecal constituye una informacin suficiente como
para estimar la naturaleza fecal de dicha contaminacin.
De acuerdo con nuestra investigacin las cepas aisladas de Klebsiella sp y de
E. coli al aplicarles la prueba de resistencia a 12 antibiticos. Estas dos
bacterias presentaron en todas las cepas aisladas resistencia a la ampicilina
(AM) y a la cefalotina (CF), y solo algunas cepas de estos organismos
presentaron resistencia a carbenicilina y Trimetoprim-Sulfametoxazol (SXT).
Esto posiblemente se debe de acuerdo a Leggett (2014), a que la membrana
exterior de esta bacteria resiste los efectos de muchos tipos de antibiticos ya
que es impermeable a stos. Esta caracterstica es dada por plsmidos, que
como

se

menciono

en

el

marco

terico,

son

unidades

de

ADN

extracromosmico que tienen una serie de genes (30 genes) que se

denominan R, y que tienen un papel fundamental en la resistencia antibitica
(Gal, 2010).
Las cepas de E. coli que presentaron resistencia a los antibiticos puede
deberse, como se haba mencionado anteriormente, a que se usan
indiscriminadamente en tratamientos de personas, y para la engorda de
animales de granja. As lo observ Merino y colaboradores (2006), quienes
sealaron que las bacterias resistentes se dan en aquellos pases donde hay
una excesiva prescripcin y/o uso indiscriminado de estos antibiticos por parte
del personal del Sistema de Salud Pblica, o bien, de los antibiticos
suministrados en la medicina veterinaria con fines variados. (Lsch, L.S.,
Merino, L. A., - Alonso, J. M., 2006). Es importante resaltar que en
investigaciones realizadas en los ltimos aos, se ha demostrado la posible
relacin entre el consumo de antibiticos por animales y la aparicin de
bacterias resistentes. El uso veterinario de antibiticos, especialmente los
empleados como promotores de crecimiento y engorda animal, podran ser los
20

causantes directos del incremento de casos de resistencia a los antibiticos, tal

como lo menciona Cancho y colaboradores en el 2000.
En resumen, los desechos de personas y animales de granja, que contienen
grandes concentraciones de antibiticos, van a parar al drenaje y stos a su
vez llegarn a los ros y por ende, sern contaminados los lagos y las presas,
es decir es proceso lineal, que se demuestra en los aislamientos de coliformes
fecales que se realizaron en los alimentos que se comercializan a las afueras
del Colegio.
Aunado a lo anterior, debe resaltarse que E. coli y Klebsiella sp presentaron
cien por ciento de resistencia a la ampicilina y cefalotina a las concentraciones
mnimas inhibitorias. Resultados similares se obtuvieron en el estudio realizado
por Tzoc y colaboradores en el 2004, en donde un 72 % presento resistencia a
Cefalotina. Sin embargo en estudios realizados por Nuez y
colaboradores,2012, se encontr que la mayor prevalencia de resistencia est
dada por los coliformes frente a ampicilina (34%) y cefalotina (17%).
Por otra parte, al aplicar slo diferentes concentraciones de Ampicilina (10, 50,
100, 250 y 500 g) a las cepas aisladas de Klebsiella, se comprob que
nicamente una cepa fue sensible a dos concentraciones de este antibitico
(250 y 500 g), no encontrndose ninguna referencia sobre la resistencia de
Klebsiella a la ampicilina, por lo tanto se puede suponer que las frutas y
hortalizas que sirvieron para la preparacin de los alimentos que se
muestrearon posiblemente estn contaminados por Klibsiellas resistentes a la
ampicilina.
Se debe sealar que para las cepas de E. coli aisladas, se obtuvieron
resultados de resistencia en un 100% en la concentracin mnima inhibitoria de
ampicilina (10 g) y cefalotina (30g) como en el estudio elaborado por Lsch,
L.S., Merino, L. A., - Alonso, J. M., en el 2006, en el cual se evidenci que el
mayor porcentaje de resistencia a los antibiticos ensayados fue E. coli, la cual
present un porcentaje de resistencia hacia ampicilina del 44,1%, no
encontrando datos de comparacin con respecto a la Cefalotina.

21

8. CONCLUSIONES
Podemos concluir que los alimentos adquiridos por los alumnos en los puestos
ubicados a las afueras del CCH-Naucalpan, presentan un alto grado de
contaminacin por coliformes fecales, siendo las principales coliformes fecales,
E.coli y Klebsiella sp.
Estas cepas presentaron resistencia a dos antibiticos; Ampicilina y Cefalotina.
Esta resistencia pudo ser desarrollada por el uso indiscriminado de estos,
producto de la

automedicacin y la engorda de animales para consumo

humano; las heces fecales de humanos y animales que son desechadas

contienen coliformes fecales resistentes, los cuales van a parar a las aguas
residuales y estas servirn para el riego de hortalizas con las que se preparan
alimentos que son comercializados a las afueras del colegio
De las coliformes fecales aisladas de los alimentos, solo E.coli fue la que
presento una gran resistencia a la ampicilina, lo que nos indica que esta
bacteria puede ser un peligro potencial para la poblacin estudiantil del colegio.
Es as que el inadecuado uso de los antibiticos provoca que continuamente
aparezcan cepas, las cuales requieren concentraciones cada vez mayores del
antibitico o nuevos antibiticos ms potentes para ser eliminadas.

9. FUENTES DE INFORMACIN
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