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Determinacin

de Salmonella
en Huevos y
Pollo
Por

Guadalupe Reina Cohaila Gallegos


CURSO: Microbiologia de los Alimentos
DOCENTE: Ing. Amelia Castro Gamero

2012-36871

OBJETIVOS

Validar una estrategia de analisis de salmonella en el huevo y pollo que permita


garantizar la fiabilidad del producto con el fin de aplicarlo en granjas y mataderos
de pollos.
Disminuir la incidencia y prevalencia de infecciones mediante actuaciones de
control en toda la cadena alimentaria y el control de este patogeno en todas las
etapas de la cadena de procesamiento de estos alimentos.

FUNDAMENTO TEORICO
El gnero Salmonella est compuesto por bacilos Gram negativos aerobios facultativos.
Algunos de los cuales, son responsables de una enfermedad bacteriana denominada
salmonelosis. La salmonelosis humana es una de las principales zoonosis de transmisin
alimentaria tanto a nivel mundial como a nivel europeo y nacional y provoca graves
consecuencias econmicas, sociales y sanitarias.
Los huevos de gallina recin puestos no suelen estar contaminados, s bien algunos
microorganismos pueden ganar acceso a stos a travs del oviducto. Los microorganismos
presentes en el interior del huevo proceden principalmente del tracto intestinal de las aves,
el ponedero, el polvo, las cajas de embalaje y almacenamiento, etctera, y pueden penetrar
a travs de los poros del cascarn si ste se encuentra caliente y se contamina con materia
fecal fra, entonces los grmenes pasan al interior, conforme este territorio se va
enfriando.
Entre los microorganismos productores de infecciones alimentarias que pueden estar
presente en el huevo se encuentran Salmonella spp u otras Enterobacterias.(Viora S,
Barrios H, Ferraroti J, Anselmo RJ. Estudio de un brote familiar de origen alimentario
por Salmonella enteritidis. Memorias de la Conferencia Internacional sobre Ciencia y
Tecnologa de los Alimentos. La Habana, 1994).
En los ltimos aos en algunos pases se han incrementado los casos de infecciones
alimentarias por el consumo de huevo contaminado con Salmonella; en Espaa a partir de
1978 se han incrementado las infecciones debidas a Salmonella enteritidis asociada con
huevos o con productos elaborados a base de huevo como la mayonesa.En los Estados
Unidos huevos de gallinas infectados fueron responsables de varios informes de
infecciones en el humano por Salmonella enteritidis entre 1976 y 1986, y en Inglaterra
tambin ha sido implicada la Salmonella enteritidis PT4 y laSalmonella typhimurium en
brotes por medio del huevo.
Por todo lo antes expuesto y por ser la salmonelosis la segunda causa de infeccin
alimentaria en Cuba y la primera en el mundo,realizamos el presente trabajo para conocer
el grado de contaminacin del huevo por Salmonella y la calidad sanitaria de este
alimento.

huevo con
salmonella

MATERIAL Y METODO

3.1. Aparatos

y material

Asas de siembra estriles


Autoclave
Balanza de precisin 0.01g
Bolsa estril de masticador
Cabina de flujo laminar
Diluctor
Estufa de incubacin
Gradillas
Masticador
Mechero de alcohol
Mini-Vidas
Placas de petri
Pinzas y tijeras de acero inoxidable
Probeta de vidrio graduada
Pipetas y puntas estriles

3.2. Reactivos y productos

Agua desmineralizada
Agua de peptona tamponada APT Alcohol de 70
Galeras API 20E (Biomerieux) y reactivos
Kit Vidas Inmuno-Concentracin Salmonella II (ICS2) Medio de enriquecimiento
selectivo Selenito
Medios slidos selectivos en placa: Agar SM-ID, Agar Hecktoen (HE), Agar
xilosa lisina desoxicolato (XLD).
Parafina
Solucin salina estril

3.3. Muestras

4 muestras de pollo fresco troceado (pechuga de pollo,contramuslo del pollo,zanco


del pollo ala de pollo)
2 muestras de huevos de tamao medio (yema + clara y huevo completo)

PROCEDIMIENTO

Para validar un mtodo de anlisis de Salmonella en huevo y pollo se siguen los


siguientes pasos:
1. Se analizan las muestras de pollo y los huevos para garantizar que no presentan
Salmonella.
2. Se preparan los inculos a nivel de lmite de deteccin y se verifican mediante
controles por triplicado.
3. Se inoculan las muestras con una cantidad de Salmonella conocida y se analizan
de nuevo tras su inoculacin.
4. Se realiza la mezcla de las muestras inoculadas y no inoculadas y se analizan para
comprobar si se detecta Salmonella al mezclar muestras positivas y negativas.
-

Debido a que el procedimiento es de deteccin, se autoclavan las muestras positivas


para eliminar la Salmonella presente en ellas antes de inocularlas con una cantidad
conocida.
A continuacin, se describe de manera detallada el procedimiento a seguir para
realizar la validacin del mtodo.
La investigacin de Salmonella spp. est estructurada en cuatro fases sucesivas: (ver
Anexos)
Preparacin de la muestra y preenriquecimiento en agua de peptona tamponada
durante 182 horas a 371C. Los microorganismos del gnero Salmonella pueden
encontrarse en pequea cantidad y mezclados con otros interferentes ms numerosos.
El preenriquecimiento es tambin necesario para recuperar microorganismos
lesionados.

Inmunoconcentracin. Tras la incubacin, se inocula en el material especfico (ICS) para


el proceso de inmunoconcentracin automtica con Mini-Vidas, que los asla de
interferentes. Nota: la inmunoconcentracin se compara con el procedimiento tradicional
mediante un enriquecimiento selectivo en selenito.
Aislamiento e identificacin. A partir del inmunoconcentrado obtenido se realiza la
siembra en dos medios selectivos slidos: placa con medio Agar Hektoen (HE) y placa
con medio Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato) o medio Agar SM (cromgenos con
sustrato glucuronato). Las placas se incuban a 37C y se examinan a las 24h para
comprobar si tienen colonias sospechosas de ser Salmonella spp.

Confirmacin: Si hay colonias sospechosas es necesaria confirmacin con pruebas


bioqumicas y serolgicas.

1. PREPARACIONDE LA MUESTRA Y PRE-ENRIQUECIMIENTO


Se debe trabajar en condiciones de asepsia. Para ello, se realizar la manipulacin de las
muestras siempre en cabina de flujo laminar o con el mechero de alcohol encendido.
Adems, todos los elementos que entren en contacto con la muestra deben ser estriles.
Preparacin previa de muestra
Productos crnicos:
Tomar una muestra representativa (25 gramos) y cortarla en trozos de 0,5 1 cm.
La fraccin de alimento destinada a su anlisis debe ser representativa de la totalidad de la
muestra. Si el alimento est integrado por distintos componentes se tomarn fracciones
representativas de cada uno de ellos, tanto en superficie como en profundidad.
Lavar con alcohol y flamear el material de trabajo necesario para la manipulacin entre
operacin y operacin y trabajar con el mechero de alcohol encendido.

Huevos:
El anlisis de los huevos puede realizarse con o sin esterilizacin de la cscara.
Para la deteccin de la flora total (cscara+yema+clara) no es necesario esterilizar los
huevos antes de abrirlos. Los huevos se abren utilizando tcnicas aspticas y se introduce
la cscara y su contenido en un recipiente estril.
Para la deteccin de la flora interna (yema+clara) es necesaria la esterilizacin. Para ello,
se quita cualquier suciedad de la cscara con un pao y agua. Utilizando una toallita
empapada en alcohol al 70% se limpia toda la superficie y se deja secar completamente
sin contaminacin. A continuacin, se rompe el huevo y se abre aspticamente
introduciendo el contenido en un recipiente estril.
Pesada de la muestra
Se pesan 25 gramos de cada muestra en bolsas estriles del masticador (previa tara) para
evitar contaminacin en su manipulacin.
La porcin de muestra a analizar se introduce en la bolsa del masticador utilizando
material de trabajo estril y flameado entre operacin y operacin.
Evitar manipular la muestra en el interior de la bolsa si la cantidad pesada no se ajusta
exactamente a la especificada (excepcionalmente hasta el 5%). Si la diferencia es mayor
manipular la muestra con el mayor cuidado posible.
Adicin del diluyente y preenriquecimiento

El peso de la muestra en gramos se multiplica por 9 y el resultado indica el volumen de


diluyente en mililitros que es necesario aadir para obtener la dilucin 1:10 (suspensin
madre).
En nuestro caso, como hemos pesado 25g de muestra en cada bolsa, para preparar la
suspensin madre, se aaden 225ml del medio de preenriquecimiento (agua de peptona
tamponada).
Para evitar alteraciones de crecimiento de microorganismos por cambios bruscos de
temperatura, el diluyente debe estar a temperatura ambiente.
El diluyente se transfiere de modo asptico a la bolsa estril de masticador que contiene la
muestra.
Se homogenizar en el masticador durante 1-2 minutos (nunca ms de 2 minutos),
pudiendo variar ese tiempo en funcin de la textura y composicin de la muestra. Deben
tomarse precauciones especiales cuando exista riesgo de rotura de la bolsa (presencia de
partculas o componentes de la muestra con formas afiladas o duras) o de componentes de
difcil homogeneizacin.
Incubar la suspensin madre en la bolsa de masticador en recipiente que garantice su
estabilidad a 37 1C durante 18 2 horas.
En muestras cidas o acidificantes comprobar tras la incubacin que el pH es mayor a 4,5.
Para garantizar un correcto flujo de aire, las bolsas debern colocarse en grupos de 8-10
unidades como mximo, separados entre s y de las paredes del incubador por lo menos
25mm.
*Nota: El tiempo de preparacin desde la preparacin de la suspensin inicial hasta el
momento en que el inculo entra en contacto con el medio de cultivo nunca debe exceder
los 45 minutos.

2. ENRIQUECIMIENTO
Inmunoconcentracin en MiniVidas
Sacar los reactivos necesarios de la nevera (Vidas Inmuno-Concentracin Salmonella
ICS) y dejar atemperar 30 minutos. Utilizar un cartucho cdigo ICS y un cono ICS
para cada muestra.
Homogenizar mediante agitacin las muestras y el estndar a analizar y transferir
aspticamente mediante pipeta con punta estril 0.8ml del caldo de preenrequecimiento
(sustituir por el estndar cuando se efecte la calibracin) al pocillo 4 para realizar la
inmunoconcentracin. Las puntas de pipeta estriles son de un nico uso, cambiar entre
cada muestra.
Colocar en el sistema los conos y los cartuchos y programar las muestras. Iniciar el
anlisis (ejecucin automtica). La etapa de inmunoconcentracin se completa en 40
minutos aproximadamente.

*Nota: Las muestras inmunoconcentradas deben ser utilizadas en la media hora que sigue
a la finalizacin del test.
Enriquecimiento selectivo en Selenito
Homogenizar mediante agitacin las muestras y transferir mediante pipeta estril 1ml del
caldo de preenrequecimiento en un tubo con 9ml de Selenito.
Incubar los tubos a 43 1C durante 20 4 horas.

3. CULTIVO EN MEDIO SOLIDO


Siembra e incubacin de las placas
En cmara de flujo laminar, transferir una alcuota del inmunoconcentrado con un asa
estril calibrada de 01ml a dos placas de Petri, una con Agar Hektoen y otra con XLD o
SM. Sembrar con aislamiento permitiendo el desarrollo de colonias bien aisladas. Repetir
el proceso para cada una de las muestras.
Mantener las placas cerradas y sin invertir mientras el inculo no se absorbe (5-10
minutos). Si pasado este tiempo el inculo todava no se absorbe, colocar la placa en el
incubador e invertirla tras 10-20 minutos.
Incubar a 37 1C durante 20 4 horas.
Si es posible, la estufa de incubacin no se llenar completamente en una nica operacin,
para evitar tiempos prolongados de estabilizacin. Para garantizar un correcto flujo de
aire, las placas debern colocarse en pilas de 6 unidades como mximo, y separadas entre
s y de las paredes del incubador por lo menos 25mm.
Con las muestras en selenito se sigue el mismo proceso una vez se hallan incubado.

Examen de las placas


Despus de la incubacin las placas deber ser examinadas inmediatamente. Si no es
posible, se almacenarn un mximo de 24 horas en nevera. Se examinan las placas y se
identifica como presunta Salmonella spp. toda colonia sospechosa.

Las colonias tpicas de Salmonella cultivadas en Agar Hektoen (HE) son verdes con el
centro negro; verdes sin centro negro (no productoras de sulfhdrico) amarillas con
centro negro (lactosa positivas).
Las colonias tpicas de Salmonella en Agar XLD son de color de rosa a rojo con o sin
centro negro.
Las colonias tpicas de Salmonella en SM son de color de rosa a veces con un contorno
incoloro.

Nota. Deben de confirmarse las colonias tpicas y las dudosas, porque


independientemente de la experiencia, su aspecto puede variar no slo de una especie a
otra sino tambin de un lote de medio de cultivo a otro.

4. PRUEBAS BIOQUIMICAS
Es necesaria siempre la confirmacin de las colonias sospechosas.
Para realizar la confirmacin bioqumica vamos a utilizar un test bioqumico para
Enterobacteriaceae de la galera API 20E. (ver Anexos)
Este tipo de tests incluyen una batera de pruebas bioqumicas que nos permiten reducir el
tiempo y el trabajo necesario para la realizacin de cada uno de los anlisis.
Seleccionar una colonia considerada tpica o sospechosa (preferentemente con aspecto
morfolgico diferente) en cada placa.
Resuspender cada colonia en agua salina y realizar un test bioqumico para
Enterobacteriaceae de la galera API 20E para cada muestra.
Incubar a 36 2C durante 18-24 horas.

Muestras inoculadas con Salmonella


Los anlisis realizados en las muestras adquiridas en una cadena de distribucin indican
presencia de Salmonella en las 4 muestras de pollo. Para poder garantizar la validez del
estudio se autoclavan las muestras para eliminar la Salmonella y mantener el efecto matriz
en la medida de lo posible. La muestra de huevo completo se descarta (evitamos
problemas de procesamiento de muestra dado que en ocasiones la cscara perfora la bolsa
del masticador) y la muestra de contenido de huevo no necesita autoclavarse porque no
presenta salmonella.
Una vez autoclavadas se pesa 25 gr de cada muestra y se aade el agua de peptona
tamponada tal y como se indica en el apartado anterior. Cada muestra se hace por
duplicado.
Se aade el inculo en cada bolsa: en las muestras se aaden 0,08ml de la dilucin 10-5 y
en los duplicados 0,02ml de la dilucin 10-6.
Homogeneizar el contenido de las bolsas de masticador e incubar a 37
18

2 horas.

1C durante

Tras la incubacin se realiza la inmunoconcentracin en MiniVidas, siguiendo el


procedimiento descrito anteriormente, de las muestras y los duplicados.
Adems, dos de las muestras y sus duplicados se inoculan tambin en tubos con selenito y
se incuban a 37 1C durante 20 4 horas.

El inmunoconcentrado se siembra con asa de siembra de 0,1ml en placas con medio de


cultivo Agar Hektoen y XLD o SM y se incuba a 37 1C durante 20 4 horas.
Tras la incubacin de los tubos con selenito se siembran placas de Agar Hektoen y se
incuban a 37 1C durante 20 4 horas.
Realizar la comprobacin bioqumica de las colonias sospechosas mediante un test
bioqumico para Enterobacteriaceae de la galera API siguiendo las instrucciones
indicadas anteriormente e incubar a 36 2C durante 18-24 horas.
Muestras compuestas
Cada muestra compuesta est formada por cinco muestras individuales. (ver Anexos)
Para realizar el anlisis de las muestras compuestas se parte de la solucin madre de cada
muestra.
Descartamos realizar la combinacin de la muestra antes del preenriqueciminto pesando
5gr de cada muestra en una sola bolsa de masticador porque si la mezcla se hace tras el
enriquecimiento de 25 gramos de cada muestra por separado se consigue que la toma de
muestra sea ms representativa.
En 2 tubos se aaden 1ml de la solucin madre de 4 muestras antes de aadirle el inculo
y 1 ml de la solucin madre de una muestra tras aadirle el inculo.
En los otros 2 tubos se aaden 1ml de la solucin madre de 4 muestras antes de aadirle el
inculo y 1 ml de la solucin madre de un duplicado tras aadirle el inculo.
Se realiza la inmunoconcentracin en MiniVidas de los 4 tubos, siguiendo el
procedimiento descrito anteriormente.
Se inoculan tambin 4 tubos con Selenito y se incuban a 37 1C durante 20 4 horas.
El inmunoconcentrado se siembra con asa de siembra de 0,1ml en placas con medio de
cultivo Agar Hektoen y SM.
Tras la incubacin de los tubos con selenito se siembran placas de Agar Hektoen y se
incuban.
Realizar la comprobacin bioqumica de las colonias sospechosas mediante un test
bioqumico para Enterobacteriaceae de la galera API siguiendo las instrucciones
indicadas anteriormente e incubar a 36 2C durante 18-24 horas.
RESULTADOS

El anlisis microbiolgico de las muestras tomadas en una cadena de distribucin ha


determinado que las 4 muestras de pollo estn contaminadas con Salmonella.

Id

Placa HE

API 20E

M1

Colonias sospechosas

Presencia/25gr
M2

Colonias sospechosas

Presencia/25gr
M3

Colonias sospechosas

Presencia/25gr
M4

Colonias sospechosas

Presencia/25gr
M5

Ausencia de colonias

Ausencia/25gr

10

M6

Ausencia de colonias

Ausencia/25gr
Tabla1. Resultados de las muestras individuales.

Los resultados de las muestras de huevos indican que no estn contaminados con
Salmonella ni con otros microorganismos ya que en las placas tampoco han crecido otras
colonias.
Verificacin del inculo
Para verificar el inculo se siembran 3 placas de medio Hecktoen con 0,1ml de la dilucin
-6

10 . Tras la incubacin se hace el recuento de las colonias de cada placa y se obtienen los
siguientes resultados.

Placa HE

Recuento de colonias

22ufc/0,1ml
2

23ufc/0,1ml
3

15ufc/0,1ml
Tabla2. Recuento de las colonias de Salmonella

11

El inculo que hemos utilizado para realizar la validacin del mtodo de anlisis de
-6

Salmonella tiene una concentracin de 20 ufc/0,1ml de la dilucin 10 .

Muestras y duplicados inoculados con Salmonella

Las muestras y sus duplicados fueron sometidos a un proceso de esterilizacin y


posteriormente inoculados con una cantidad conocida de Salmonella.

-6

De acuerdo con la estandarizacin, para 0,3ml de la dilucin 10 el resultado esperado es


138ufc (terico) por lo tanto, en 0,1ml es de 46ufc. Sin embargo, este dato no es real, ya
que se ha comprobado que el inculo en realidad tiene 20ufc/0,1ml de la dilucin 10

-6

20ufc
0,1ml
20ufc
0,1ml
x
0,02ml
x
0,008ml
x = (20x0,02) / 0,1 = 4ufc
x = (20x0,008) / 0,1 = 1,6ufc

Segn los resultados obtenidos al ajustar la concentracin del inculo las muestras fueron
inoculadas con 4ufc y los duplicados con 1,6ufc.Las muestras y sus duplicados se
analizaron mediante una inmunoconcentracin y un mtodo tradicional de
enriquecimiento selectivo en Selenito.

Inmunoconcentracin

12

Id

Placa HE

Placa XLD

Placa SM

API E20

M1.1

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

13

M2.1

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

M3.1

14

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

M4.1

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

15

M5.1

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

16

M1.2

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

M2.2

17

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

M3.2

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

18

M4.2

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

19

M5.2

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

Tabla3. Resultados obtenidos por inmunoconcentracin

Enriquecimiento selectivo en Selenito

20

Id

Placa HE

API E20

M1.1

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

21

M5.1

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

M1.2

Colonias sospechosas

22

Presencia/25gr

M5.2

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

Tabla4. Resultados obtenidos por enriquecimiento selectivo.

Como era de esperar tras la inoculacin el resultado de todas las muestras ha sido positivo
para Salmonella.

23

Adems, no se aprecian diferencias en los resultados obtenidos. Independientemente del


mtodo utilizado para el anlisis (inmunoconcentracion o mtodo tradicional con
enriquecimiento selectivo en selenito) o del medio de cultivo empleado (HE, XLD, SM).

Muestras compuestas
Las muestras compuestas estn formadas por la combinacin de las muestras sin inocular
con las muestras y duplicados inoculados con Salmonella.
Se analizaron por inmunoconcentracion y por el mtodo tradicional con enriquecimiento
selectivo en selenito obteniendo los siguientes resultados:

Inmunoconcentracin

Id

Placa HE

Placa SM

API E20

24

T1

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

25

T2

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

T3

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

26

T4

Colonias sospechosas

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

Tabla5. Resultados obtenidos por inmunoconcentracin

Enriquecimiento selectivo en Selenito

27

Id

Placa HE

API E20

T1

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

28

T2

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

T3

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

29

T4

Colonias sospechosas

Presencia/25gr

Tabla6. Resultados obtenidos por enriquecimiento selectivo.

Todas las muestras compuestas fueron positivas para Salmonella y adems, se obtuvieron
los mismos resultados por inmunoconcentracin y por el mtodo tradicional.

30

CONCLUSIONES

Hemos validado una estrategia de analisis de salmonella en el huevo y pollo que permita
garantizar la fiabilidad del producto con el fin de aplicarlo en granjas y mataderos de
pollos ya que los huevos y los productos derivados del huevo constituyen el principal
vehculo de las salmonelosis humanas aunque la venta de alimentos con presencia de de
Salmonella est prohibida es muy importante extremar las precauciones a la hora de
manipular los alimentos en casa porque, como se ha comprobado en este estudio, puede
haber productos de venta al pblico con Salmonella.

Disminuir la incidencia y prevalencia de infecciones mediante actuaciones de control


en toda la cadena alimentaria y el control de este patgeno en todas las etapas de la
cadena de procesamiento de estos alimentos y controles microbiolgicos son
imprescindibles para reducir el riesgo de contaminacin de los consumidores por eso,
es muy importante investigar mtodos ms eficaces.

Los resultados obtenidos en el estudio confirman que nuestro mtodo es suficientemente


sensible y especfico para evitar que el efecto de la dilucin tras la combinacin de las
muestras afecte a la deteccin del microorganismo.

Se logra aislar la Salmonella incluso cuando se combinan 4 muestras negativas con una
muestra positiva inoculada con <2ufc/ml (5 veces por debajo del lmite de deteccin
utilizado en la validacin habitual de las tcnicas de deteccin).

La combinacin de muestras supondr un considerable ahorro econmico de manera que


se podrn ampliar los puntos de muestreo, reducir la frecuencia de muestreo, etc. para
lograr un control ms eficaz.

La reduccin an ser mayor si el mtodo se aplica en las granjas o mataderos de pollos


donde el nmero de muestras que requieren anlisis de deteccin de Salmonella es muy
elevado. Adems, este mtodo tambin se podra emplear en otras matrices como heces,
calzas, aguas, piensos, etc En relacin a la comparacin efectuada entre la
inmunoconcentracin y el mtodo tradicional de enriquecimiento selectivo en selenito
podemos afirmar que cualquiera de los mtodos es vlido para detectar Salmonella en las
muestras compuestas.

31

BIBLIOGRAFIA

Cansian RL; Floriani STR; Valduga E Microbiological analysis of critical points


in
the chicken industry. BRAZILIAN ARCHIVES OF BIOLOGY AND
TECHNOLOGY Volume: 48 Issue: 3 Pages: 403-406 Published: MAY 2005
Frances Pouch Downes, Keith Ito. Compendium of methods for the
microbiological examination of foods. American Public Health Asssociation, 2001
Validacin de un mtodo de deteccin de Salmonella en huevos y pollo
http://ruc.udc.es/bitstream/2183/9967/2/SanchezCanedo_Sonia_TFM_2012.pdf
ANEXOS

32

Cdigo de

33

identificacin

Descripcin
M1
Pechuga de pollo

M2
Contramuslo de pollo

M3
Zanco de pollo

M4
Ala de pollo

34

M5
Huevo (yema + clara)

M6
Huevo completo

35

36

37

38

Cdigo de

identificacin

Muestra
Inculo

39

M1.1
M1
<5ufc

M2.1
M2
<5ufc

M3.1
M3
<5ufc

40

M4.1
M4
<5ufc

M5.1
M5
<5ufc

M1.2
M1
<2ufc

M2.2

41

M2
<2ufc

M3.2
M3
<2ufc

M4.2
M4
<2ufc

M5.2
M5

42

<2ufc

43

Cdigo de

identificacin

44

Muestras combinadas

T1
M1 + M2 + M5 + M3 + M1.1

T2
M5 + M2 + M4 + M3 + M5.1

T3

45

M2 + M1 + M4 + M5 + M1.2

T4
M1 + M3 + M5 + M4 + M5.2

46

Esquema de deteccin de Salmonella

47