Vous êtes sur la page 1sur 4

ARTIGO

TRITERPENOS DA RESINA DE PROTIUM HEPTAPHYLLUM MARCH (B0URSERACEAE): CARACTERIZAO


EM MISTURAS BINRIAS
Robinson Magalhes Maia, Pedro Rocha Barbosa, Frederico Guar Cruz, Ndia Franca Roque e Miguel Fascio
Instituto de Qumica - Universidade Federal da Bahia - 40170-290 - Salvador - BA
Recebido em 20/7/99; aceito em 8/1/00

TRITERPENES FROM THE RESIN OF PROTIUM HEPTAPHYLLUM MARCH (BURSERACEAE):


CHARACTERIZATION IN BINARY MIXTURES. Eight triterpenes, maniladiol, breine, ursa9(11):12-dien-3-ol, oleana-9(11):12-dien-3-ol, 3-hydroxy-tirucalla-8,24-dien-21-oic acid, 3-hydroxy-tirucalla-7,24-dien-21-oic, and amyrines were isolated as binary mixtures obtained from
the chloroform extract of the oil-resin of Protium heptaphyllum March. The identification of the
compounds was based mainly in 13C NMR data and mass spectra. The diene and the tetracyclic acid
triterpenes were not reported before in the literature as constituents of the studied resin.
Keywords: Protium heptaphyllum; triterpenes; Burseraceae.

INTRODUO
Muitas espcies vegetais se notabilizam pela gama variada
de substncias triterpenodicas, presentes nos seus rgos,
onde devem desempenhar diferentes papis. 1 Alguns gneros
da famlia Burseraceae (Elaphrium, Icica, Canarium e
Protium) so produtores de resinas oleosas. Estas resinas so
conhecidas genericamente como elemi e so constituidas de
triterpenos tetracclicos, como os cidos elemadienlico e
elemadiennico, e pentacclicos, como e amirinas, maniladiol e brena entre outros2 .
A espcie Protium heptaphyllum largamente encontrada
na regio amaznica e produz uma resina oleosa tambm conhecida como breu branco, almcega do Brasil, goma-limo,
etc. Sua utilizao amplamente difundida, sendo usada na
medicina popular, como analgsico, cicatrizante e expectorante;
na indstria de verniz; na calafetagem de embarcaes e em
rituais religiosos (incenso). Isto torna, sobremodo, importante
o conhecimento de sua constituio qumica para contribuir
com o aproveitamento e controle na medicina e na indstria. A
literatura revela a presena de e amirinas, taraxastano-3,
20-diol, taraxastan-3-oxo-20-ol, bem como de sitostenona na
resina de Protium heptaphyllum March, coletada na reserva da
Campina (Manaus-AM) 3 .
Triterpenos so facilmente encontrados na natureza e quando utilizam-se as tcnicas cromatogrficas usuais, raramente
consegue-se o isolamento destes triterpenos puros, sendo estes
portanto obtidos, quase sempre, em misturas de difcil resoluo. Esta dificuldade pode s vezes ser superada empregandose as tcnicas cromatogrficas especiais, como CLAE e CG de
alta resoluo. Na ausncia destas, possvel utilizar-se mtodos fsicos de anlise e identificar-se triterpenos em misturas.
Um exemplo a metodologia desenvolvida por Gallegos Olea
e Roque4 . O emprego desta metodologia, coadjuvada por dados espectrais de RMN de 1H, UV, IVTF e EM, tornou possvel a identificao de oito triterpenos presentes na resina de P.
heptaphyllum (Burseraceae), descrita neste trabalho.
PARTE EXPERIMENTAL
Procedimentos Experimentais: nas separaes em coluna
foi utilizada a tcnica de empacotamento a seco tendo como
adsorvente gel de silica 60 (0,063-0,200) da Merck. Nas cromatografias em camada delgada (0,3 mm) analticas, a fase
estacionria utilizada foi gel de silica GF-254 da Merck. As
QUMICA NOVA, 23(5) (2000)

revelaes cromatogrficas foram feitas atravs da observao


direta das cromatoplacas em cmara com luz ultra-violeta modelo UVGL-58, UVP com comprimento de onda de 254 e 399 nm
e por borrifamento das cromatoplacas com o reativo de
Liebermann-Burchard. Os espectros na regio do infra-vermelho
foram obtidos em um espectrmetro III JASCO (Varian) com
transformada de Fourrier. Os espectros de RMN de 1H e de 13C
foram obtidos em espectrmetro Varian operando a 300 e a 75
MHz respectivamente. O CDCl3 (SIGMA 99,8%) foi usado como
solvente e como referncia secundria. Os espectros de massas
foram obtidos em espectrmetro Hewlett-Packard 5890 empregando a tcnica de impacto eletrnico a 70 eV. O espectro na
regio do ultra-violeta foi obtido em um espectrofotmetro modelo UVICON 941 PLUS da Kontron Instruments.
Material Vegetal: a resina exsudada do tronco da espcie
Protium heptaphyllum March, foi coletada em Tair, distrito da
ilha de Itaparica, Bahia, em dezembro de 1993 e foi identificada
pela botnica Maria Lenise da S. Guedes do Instituto de Biologia da UFBA atravs da comparao com a exsicata existente
no Herbrio Alexandre Leal Costa desta universidade.
Isolamento dos Constituintes: a resina (75,0 g) foi submetida a extrao com hexano temperatura ambiente, sendo o
solvente eliminado sob presso reduzida em evaporador
rotativo, obtendo-se um slido amarelo mbar (39,0 g). O resduo insolvel em hexano, foi solubilizado em clorofrmio,
obtendo-se cerca de 36,0 g do extrato clorofrmico .
O extrato solvel em clorofrmio impregnado em 3,0 g de
gel de slica, foi submetido a uma filtrao rpida em coluna de
gel slica 60 Merck (60,0 g), utilizando-se como eluente hexano
e misturas de acetato de etila em hexano, com gradiente crescente de polaridade. Duas fraes foram trabalhadas, as eludas
com 5% de acetato de etila (FA) e as eluidas com 20% de acetato
de etila (FB). FA (7,78g) foi purificada por cromatografia de
adsoro em coluna de gel de slica 60 (60,0 g), usando-se como
fase mvel hexano e misturas de acetato de etila em hexano. A
frao desta coluna que foi recolhida com 5% de acetato de etila
(5,0 g), foi analisada por CCD e apresentou uma nica mancha
de colorao rseo-avermelhada quando revelada pelo reativo
de Liebermann-Burchard. A anlise por IVTF, RMN de 1H e de
13
C permitiu identificar uma mistura constituda por e
amirinas (1 e 2). A frao FB (3,0 g), da coluna filtrante inicial,
apresentou-se como um slido branco de aspecto amorfo e foi
cromatografada em coluna de gel de slica 60 (60,0 g), usandose como eluente misturas de acetato de etila em hexano com
gradiente crescente de polaridade. Com hexano / AcOEt (9:1),
623

foram recolhidas sete fraes, uma das quais (0,062 g) apresentou


uma nica mancha, quando analisada por CCD (AcOEt/hexano
2:3), aps revelao com o reativo de Liebermann-Burchard. A
anlise desta frao por IVTF, EMIE, RMN de 1H e de 13C permitiu identific-la como sendo uma mistura dos diis 3 e 4. Com
hexano / AcOEt (8:2) foram recolhidas vrias fraes que foram
comparadas por CCD. Uma destas fraes (0,59 g) que apresentou-se quase pura foi recristalizada com acetona/hexano (3:7) fornecendo um material cristalino (0,036 g). Anlise dos dados
espctromtricos de UV, IVFT e RMN revelou tratar-se de mistura
das substncias 5 e 6 .A gua me foi concentrada e o resduo
obtido foi cromatografado, em coluna de slica gel 60 utilizandose os mesmos eluentes descritos anteriormente. As fraes
coletadas com hexano / AcOEt (95:5) forneceram um material
puro (0,033 g). A anlise dos dados espectrais de RMN de 13C e
1
H e IVTF deste material, permitiu identific-lo como sendo uma
mistura dos dois triterpenos tetracclicos 7 e 8.

RESULTADOS E DISCUSSO
O extrato clorofrmico da resina de P. heptaphyllum foi submetido separao cromatogrfica, originando misturas binrias

624

de triterpenos. Esta constatao foi feita atravs da contagem


dos sinais presentes nos espectros de RMN de 13C totalmente
desacoplado, e DEPT (90o e 135o). A identificao dos triterpenos foi conseguida, mediante a comparao desses dados com
os descritos na literatura indicada.
A ocorrncia da mistura de e amirinas (1 e 2) na
resina majoritria em relao aos outros triterpenos. A identificao destes triterpenos foi baseada na anlise, usando a
metodologia descrita por Olea e col 4 , usando dados de RMN
de 13C e comparao destes com os valores descritos na literatura5,6. Os dados de RMN de 13C esto indicados na Tabela 1 .
O espectro de RMN de 1 H da mistura de 3 e 4 apresentou
sinais simples na regio de 0,8 a 1,0 que revelou o carter
triterpnico de seus constituintes. Aps a identificao dos sinais de cada terpeno 4 presentes no espectro de RMN de 13C,
observaram-se os sinais de CH carbinlicos em 66,46 e 65,45,
alm dos demais sinais semelhantes aos das sries oleanano e
ursano. Esta anlise permitiu identificar uma mistura de triterpenos diidroxilados do tipo oleanano e ursano e colocar a segunda
hidroxila dos triterpenos na posio 16, em ambos esqueletos
carbnicos. Esta posio pde ser estabelecida mediante a
constatao da existncia de efeitos , e , exercidos pela
presena da hidroxila no carbono 16 nas molculas da -amirina
(1) e da -amirina (2), tomadas como padro de comparao5.
Para a brena (3) notam-se diferenas nos deslocamentos
qumicos em torno de 8 ppm (efeito ) para C-15, de 5 ppm
para C-17 (efeito ), de 40 ppm para C-16 (efeito ), de 6
ppm para C-22 (efeito ) e de 7 ppm para C-28 (efeito ),
quando comparados com os deslocamentos qumicos dos carbonos correspondentes da -amirina 1 (Tabela 1).
No tocante ao maniladiol (4), as interaes da hidroxila em
C-16 com os carbonos da vizinhana, atravs dos efeitos ,
e , foram verificadas por comparao com os deslocamentos
observados no seu anlogo mono-hidroxilado, a -amirina (2).
As diferenas aproximadas dos deslocamentos, foram observadas em cerca de 8 ppm para C-15 (efeito ), de 40 ppm para
C-16 (efeito ), de 5 ppm para C-17 (efeito ), de 8 ppm para
C-22 (efeito ) e de 7 ppm para C-28 (efeito ). A presena de
efeito (proteo) no carbono 28, o indicativo da configurao para a hidroxila do carbono 16 .Os deslocamentos qumicos destes e dos demais carbonos, com suas correspondentes
multiplicidades, tm valores concordantes com os da literatura
para o maniladiol6 . Na regio do infravermelho, alm de outras
absores presentes nas molculas das e amirinas (1 e 2),
observaram-se duas vibraes de deformao axial C-O (1029
e 1050 cm -1), que podem ser correlacionadas com as hidroxilas
em C-3 e C-16.
O espectro de massas da mistura obtido por injeo direta
e impacto eletrnico (EMIE) 70 eV, comprova a presena da
hidroxila no C-16 em ambas substncias atravs da fragmentao tpica por retro Diels-Alder ocorrida no anel C (m/z
442 m/z 234), caracterizando a presena de uma ligao
dupla em 12 nos respectivos esqueletos, bem como a presena dos grupos hidroxlicos no mesmo anel. A perda da metila
(C-28) do carbono 17, origina um ction formado por um
processo de fragmentao em etapa nica (m/z 234 m/z
219).7 Os esqueletos triterpnicos ursano e oleanano e seus
respectivos anlogos substitudos, por serem ismeros de posio, possuem diferenas apenas na intensidade de alguns
fragmentos. Deste modo, o espectro de massas da mistura
mostra a presena de picos comuns aos triterpenos 3 e 4.
O espectro de RMN de 1 H da mistura de 5 e 6 apresenta
quatro dubletos em 5,42 ; 5,48; 5,54 e 5,56 (J= 6,5 Hz) que
correspondem a hidrognios de ligaes duplas conjugadas.
A presena de um dieno homoanular nas substncias foi
verificada pelo comprimento de onda mximo da absoro na
regio do UV da mistura em metanol, mx. MeOH = 280 nm
(= 4.624).Este valor est de acordo com o clculo aproximado utilizando a regra de Woodward 8 para dienos cisides.

QUMICA NOVA, 23(5) (2000)

Tabela 1. Dados de RMN de

13

C de 1-8 (, CDCl 3, 75 MHz)a


deslocamento qumico (ppm)

C
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

1
38,27
26,78
78,54
38,11
54,70
17,86
32,17
39,17
47,23
36,44
22,89
123,95
139.10
41,26
27,68
26,49
33,26
58,63
39,15*
39,15*
31,82
41,05
27,89
15,17*
15,17*
16,39
23,20
28,25
16,39
20,89

2
38,27
26,49
78,54
38,14
54,75
17,96
30,78
39,34
47,28
36,46
23,04
121,26
144,68
41,62
27,64
26,16
31,99
47,18
46,37
30,57
33,26
36,68
27,89
15,12*
15,12*
16,34
25,56
27,64
32,83
22,78

3
38,33
26,74
78,44
38,27
54,75
17,82
32,45
39,59
46,53
36,36
22,88
124,60
137,53
43,57
35,51
66,46
38,05
60,29
39,05
39,01
30,05
34,71
27,63
15,08
15,15
16,39
24,01
21,44
17,01
21,44

4
38,04
26,74
78,44
38,27
54,75
17,82
32,21
39,41
46,37
36,82
23,02
121,78
143,05
43,31
35,13
65,45
36,81
48,65
46,11
30,36
33,70
29,14
27,63
15,08
14,98
17,08
26,74
20,96
32,70
23,46

5
36,83
25,16
78,23
38,41
50,66
17,86
31,64
40,17
154,04
38,18
114,86
122,54
140,72
42,65
27,79
25,66
33,17
56,85
38,53
38,95
30,73
40,90
28,19
16,88
17,11
21,62
24,90
29,18
17,13
20,99

6
36,67
27,79
78.21
38,25
50,66
17,86
31,54
37,00
153,80
40,17
115,23
120,23
146,59
42,28
25,16
26,76
31,59
45,11
46,42
30,58
34,13
36,57
28,20
15,13
19,58
20,49
24,90
27,74
23,20
32,66

7
32,00
26,67
75,58
37,13
44,35
18,26
28,45
133,85
132,46
36,73
21,01
26,37
42,34
50,52
32,01
28,84
46,50
15,37
19,36
44,19
181,10
25,28
24,49
26,34
30,35
23,17
25,12
23,97
21,75
27,53

8
32,95
26,58
75,96
36,89
44,05
23,46
117,72
145,23
47,85
34,35
17,07
30,76
42,89
50,52
31,95
29,75
47,75
12,43
21,10
49,19
181,49
25,49
25,28
123,20
131,58
17,11
25,12
26,83
21,78
27,28

(*) indica que as respectivas atribuies podem ser revertidas. amultiplicidade deduzida com base nos espectros DEPT (90 o
e 135 o).
Os deslocamentos qumicos dos carbonos olefnicos no espectro de RMN de 13C em 154,04 (C-9), 140,72 (C-13),
122,58 (C-12) e 114,86 (C-11) so compatveis com o esqueleto ursa-9(11):12-dieno, e os sinais em 153,80 (C-9) 146,59
( C-13 ) 120,23, 115,23 (C-11) indicam o esqueleto oleana9(11):12-dieno. Os deslocamentos dos demais carbonos, com
suas correspondentes multiplicidades, foram obtidos atravs da
anlise de espectros DEPT (90 o e 135o) e so idnticos aos
divulgados na literatura para 3-hidroxi-ursa-9(11),12-dienol
(5) e 3-hidroxi-olea-9(11),12-dieno (6).
As absores na regio do infravermelho em 1631 e 832
cm -1, correspondentes ao dieno 9(11):12 presente nos esqueletos ursadieno e oleanadieno confirmam a identificao dos triterpenos 5 e 6 em mistura.
Os hidrognios carbinlicos presentes nas substncias 7 e 8
apresentam-se no espectro de RMN de 1 H como singletos largos (: 3,48 e 3,44), ao invs de duplos dubletos como observados nos espectros dos demais triterpenos e que foram atribudos ao H-3 . Atravs da medida da largura do pico a meia
altura W 1/2 (6,8 Hz), pde-se estabelecer a estereoqumica do
hidrognio carbinlico dos triterpenos 7 e 8 como sendo 3-
equatorial. Este fato est de acordo com os deslocamentos
qumicos para o carbono 3 de 75,58 (7) e 75,96 (8) indicando a configurao axial para a hidroxila a ele ligada nos
dois triterpenos. Observa-se ainda naquele espectro a presena
de um hidrognio vinlico (dubleto largo) em 5,23 (J= 3,3
Hz), caracterstico de ligao dupla em anel. Um outro hidrognio apresenta-se como um tripleto em dd 5,07 (J= 6,6 Hz)
podendo ser atribudo presena de uma ligao dupla na cadeia lateral 24 de triterpenos tetracclicos. Este sinal apresenta

QUMICA NOVA, 23(5) (2000)

integrao aproximadamente duas vezes maior que o sinal em


5,23, sugerindo que o prton vinlico endocclico est presente em apenas uma das substncias. Esses dados, assim
como a presena das absores no espectro de infravermelho
correspondentes a grupos carboxlicos (1702 cm 1),e os sinais em 181,1 e 181,4 presentes no espectro de RHN de 13C
so compatveis com uma mistura constituda por cidos
triterpnicos tetracclicos.
A anlise dos dados mencionados sugere que a substncia
mais abundante na mistura, seja o cido 3--hidroxi-tirucala7,24-dien-21-ico (8), anteriormente isolado de resinas elemi
extradas de plantas do gnero Canarium 11. Os dados de RMN
de 13C deste cido s foram descritos quando ele foi isolado de
outra espcie de Burseraceae, a Aucoumea klaineana12. Uma
comparao desses dados com os obtidos da mistura, identificou
os deslocamentos qumicos da substncia 8, e desse modo por
excluso, deixou evidente os deslocamentos qumicos de 7 (Tabela 1). Os dados de RMN de 13C desta ltima substncia, no
foram encontrados na literatura, embora o triterpeno j tenha
sido isolado anteriormente de outras resinas oleosas11,13. Uma
anlise detalhada dos espectros totalmente desacoplados, DEPT
(90o e 135o), bem como pela comparao dos mesmos com os
de substncias anlogas descritas na literatura11,14,15, permitiu
atribuir os deslocamentos qumicos aos carbonos de 7.
O espectro de massas da mistura, forneceu um pico em e/m
456 (25%), seguido da perda de um grupo metlico (15%) e de
uma molcula de gua, resultando no pico base. Estes dados
esto de acordo com as estruturas dos cidos 3-hidroxitirucala-8,24-dien-21-ico e 3-hidroxi-tirucala-7,24-dien-21ico respectivamente para 7 e 8.

625

CONCLUSO
Este trabalho mostra que utilizando-se, principalmente, os dados de RMN de 13C, com auxlio de outras tcnicas, possvel
identificarem-se substncias triterpnicas em misturas. A dificuldade de separao destas muitas vezes no justifica, quando o
objetivo for apenas registrar a composio qumica da mistura,o
gasto de tempo e o de material na obteno das substncias puras.
Embora no exista trabalho publicado anteriormente relatando a
composio qumica da resina oleosa de P. heptaphyllum, h uma
comunicaco 3 que relata a presena de e amirinas, assim
como de taraxastan-3,20-diol, 20-hidroxi- taraxastan-3-ona e sitostenona, em resina de uma planta da mesma espcie, coletada
na Amaznia. A diferena na composio qumica das duas resinas evidencia, mais uma vez, que uma espcie em ambientes diferentes pode elaborar metablitos secundrios diferentes. O cido 3--tirucalalan-21-ico e derivados parecem ser caractersticos
dessas resinas, no tendo sido encontrados em outras partes de
plantas da famlia Burseraceae ou em outras espcies vegetais.
REFERNCIAS
1. Silva, M.; Bittner, M.; Hoeneisen, M.; Becerra, J.; Campos, V.; Gonzalez, F.; Cespedes, C.; Marambio O. ; Qumica de los Triterpenos, Secretara General de la Organizacin
de los Estados Amaricanos, Washington, D.C., 1992 p.74

626

2. Costa, A. F.; Farmacognosia, Fundao CalousteGulbenkian, 4a ed. 1988, p. 840.


3. Susunaga, G.; Siani, A. C.; Pizzolatti, M.; Zoghbi, M. G.
B.; Resumos da 18 a Reunio Anual da SBQ PN 087,
Caxambu (MG), 1995.
4. Olea-Gallegos, R.; Roque, N. F.; Quim. Nova 1990, 13, 278.
5. Seo, S.; Tomita, Y.; Tori, K.; Tetrahedron Lett. 1975, 1, 7.
6. Mahato, S. B.; Kundu, A P.; Phytochemistry 1994, 37, 1517.
7. Budzikiewicz, H.; Wilson, J. M.; Djerassi, C.; J. Am.
Chem. Soc. 1963, 85, 3688.
8. Silverstein, R. M.; Bassler, G. C.; Morrill, T. C.; Identificao Espectromtrica de Substncias Orgnicas, 3a ed.
Guanabara Dois, Rio de Janeiro, 1979.
9. Matsunaga, S.; Tanaka, R.; Akagi, M.; Phytochemistry
1988, 27, 535.
10. Shimizu, K.; Amagaya, S. Ogihara, Y.; Chem. Pharm.
Bull. 1985, 33, 3349.
11. Sawadago, M.; Vidal-Tessier, A-M.; Delaveau, P.; Ann.
Pharmaceutique Franaise 1985, 43, 89.
12. Guang-Yi, L.; Gray, A. I.; Watermann P. G.; Phytochemistry 1988, 27, 2283.
13. Pardhy, R. S.; Bhattacharya, S. C.; Indian J. Chem. 1978,
16B, 174.
14. Knight, S. A.; Org. Mag. Res. 1974, 6, 603.
15. Lin, L-J.; Shiao, M-S.; Yeh, S-F.;Phytochemistry 1988,
27, 2269.

QUMICA NOVA, 23(5) (2000)